蟲類中藥蠐螬的酚性成分

王 靜，晏永明，譚 睿，程永現(xiàn)*

1西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，成都 610031，2中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，昆明 650204

蟲類中藥蠐螬的酚性成分

王 靜1，2，晏永明2，譚 睿1*，程永現(xiàn)2*

1西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，成都 610031，2中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，昆明 650204

從蟲類中藥蠐螬的乙酸乙酯提取物中分離得到6個化合物，其結(jié)構(gòu)經(jīng)波譜鑒定為3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸(1)，水楊酸(2)，對羥基苯甲酸(3)，香草酸(4)，對羥基苯丙酸(5)和對羥基苯丙酸甲酯(6)?；衔?～6均為首次從該種動物藥中分離得到。

蟲類中藥;蠐螬;金龜子科;酚性成分

蠐螬為節(jié)肢動物門昆蟲綱鞘翅目金龜子科昆蟲朝鮮黑金龜子Holotrichia diomphalia Bates等同屬近緣昆蟲的干燥幼體［1］，又稱地蠶、白地蠶、應(yīng)條、乳齊、土蠶、白土蠶、大頭蟲、老母蟲、核桃蟲等。具有破血逐淤，明目退翳的功效，對婦女經(jīng)閉、癥瘕尤著，外用可治丹毒、癰疽、痔漏、跌打損傷等［2］。蠐螬治療目疾，自《神農(nóng)本草經(jīng)》即有記載。臨床上將蠐螬制成滴眼液，用于治療白內(nèi)障、眼角膜翳等有較好的療效［3］。現(xiàn)代藥理研究證明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、抗菌等作用［4］，如蠐螬石油醚提取物對人宮頸癌Hela細胞具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用［5］，韓國學(xué)者Oh WY等以水飛薊素作陽性對照，發(fā)現(xiàn)蠐螬的保肝作用要強于水飛薊素，在一定程度上可降低對肝臟細胞的損害［6］。

有關(guān)蠐螬化學(xué)成分，國內(nèi)外研究相對較少，主要有脂肪酸類［7，8］，陽長明等對蠐螬化學(xué)成分進行了預(yù)試表明其主要含有氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)、糖類、生物堿、有機酸鹽、甾體化合物等［9］。王玉亮等通過GC-MS分析了蠐螬石油醚提取物的化學(xué)成分，主要為揮發(fā)油類，如反油酸、十六酸，硬脂酸等［10］。此外，國外學(xué)者報道了蠐螬含有兩種酚氧化酶原(Propo-Ⅰ和 Propo-Ⅱ)和三種酚氧化酶原活化因子(PPAF-Ⅰ、PPAF-Ⅱ和PPAF-Ⅲ)［4］。我們?yōu)榱私沂鞠擉┧幱玫幕瘜W(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，從中尋找有生物活性及藥用前景的天然產(chǎn)物，對該中藥進行了研究，從其乙酸乙酯提取物中分離得到6個化合物，經(jīng)波譜學(xué)方法鑒定其結(jié)構(gòu)為3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸，水楊酸，對羥基苯甲酸，香草酸，對羥基苯丙酸和對羥基苯丙酸甲酯。

1 儀器與材料

核磁共振波譜用Bruker AM-400核磁共振儀測定，TMS作為內(nèi)標(biāo)。薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠(200～300目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品;Sephadex LH-20和反相硅膠RP-18分別為Pharmacia公司和日本Daiso公司生產(chǎn)。

2 提取與分離

蠐螬(18 kg)購自安徽省亳州藥材交易中心，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室周小江副教授鑒定為朝鮮黑金龜子(Holotrichia diomphalia Bates)的干燥幼蟲，將藥材粉碎后用95%乙醇冷浸提取三次，每次3 d，減壓回收溶劑得浸膏2 kg，加水混懸，以乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取物55 g經(jīng)硅膠柱層析(600 g，氯仿∶甲醇10∶0～1∶1)，分為四段Fr.1-Fr.4。Fr2和Fr.3分別進行反復(fù)硅膠柱層析、反相柱層析和Sephadex LH-20柱層析得化合物1(21 mg)、3 (40 mg)、4(5 mg)和5(32 mg)。Fr.2-2經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱色譜和反相RP-18(甲醇-水:30%、40%、50%、60%)洗脫后在甲醇中反復(fù)重結(jié)晶，得化合物2(70 mg)。Fr.3-4經(jīng)反相柱層析和Sephadex LH-20柱層析后，硅膠制備薄層(石油醚∶丙酮2∶1)純化得化合物6(20 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸(1) 白色固體;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.32(2H，s，H-2，6)，3.87(6H，s，2×OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:122.1(s，C-1)，108.2(d，C-2，6)，148.8(s，C-3，5)，141.6(s，C-4)，170.2(s，COOH)，56.7(q，OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻數(shù)值相符［11］。

水楊酸(2) 無色針狀結(jié)晶;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6.82(1H，dd，J=8.0，1.7 Hz，H-3)，7.39(1H，d，J=1.7 Hz，H-4)，6.87(1H，brd，J=7.6 Hz，H-5)，7.81(1H，brd，J=7.6 Hz，H-6);13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:113.9(s，C-1)，163.2(s，C-2)，118.1(d，C-3)，136.6(d，C-4)，120.1(d，C-5)，131.6(d，C-6)，173.6(s，COOH)。以上數(shù)值與文獻數(shù)值相符［11］。

對羥基苯甲酸(3) 白色固體;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.93(2H，brd，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.92(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，7.44 (1H，brs，OH);13C NMR(CD3COCD3，100 MHz)δ: 122.4(s，C-1)，132.8(d，C-2，6)，116.0(d，C-3，5)，162.7(s，C-4)，168.6(s，COOH)。以上數(shù)值與文獻數(shù)值相符［12］。

香草酸(4) 白色固體;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.55(1H，brs，H-2)，6.83(1H，brd，J=8.2 Hz，H-5)，7.54(1H，brd，J=8.2 Hz，H-6)，3.89 (3H，s，OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ: 123.6(s，C-1)，113.8(d，C-2)，152.4(s，C-3)，148.6(s，C-4)，115.8(d，C-5)，125.2(d，C-6)，171.2(s，CO)，56.4(q，OCH3)。以上數(shù)值與文獻數(shù)值相符［13］。

對羥基苯丙酸(5) 白色固體;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.01(2H，brd，J=8.2 Hz，H-2，6)，6.68(2H，brd，J=8.2 Hz，H-3，5)，2.79(2H，t，J=7.8 Hz，H-1')，2.49(2H，d，J=7.8 Hz，H-2');13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:133.4(s，C-1)，130.2(d，C-2，6)，116.2(d，C-3，5)，156.6(s，C-4)，38.3(t，C-1')，31.7(t，C-2')，178.4(s，C-3')。以上數(shù)值與文獻數(shù)值相符［14］。

對羥基苯丙酸甲酯(6) 白色固體;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.04(2H，brd，J=8.2 Hz，H-2，6)，6.77(2H，brd，J=8.2 Hz，H-3，5)，2.90(2H，t，J=7.8 Hz，H-1')，2.62(2H，d，J=7.8 Hz，H-2')，3.69(3H，s，OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ: 132.1(s，C-1)，129.3(d，C-2，6)，115.3(d，C-3，5)，154.4 (s，C-4)，36.1(t，C-1')，30.1(t，C-2')，174.1(s，C-3')，51.8(q，OCH3)。以上數(shù)值與文獻數(shù)值相符［14］。

蠐螬臨床上對眼部疾患和口腔潰瘍有良效，本研究獲得的水楊酸以及苯甲酸衍生物是否分別從抗炎和抗菌方面對上述疾病起作用，值得進一步研究。

1 Pharmacopoeia Commission(藥典委員會).A Chinese Pharmacopoeia(《中國藥典》一部)2010 Ed.Beijing:China Medical Science and Technology Press，2010.Appendix 26.

2 Yang CL(楊倉良)，Qi JY(齊杰英).Herbal Animals(動物本草)1st Ed.Beijing:Chinese Ancient Books Publishing House，2001.915-916.

3 Yang CM(陽長明)，Hou SX(侯世祥).Study on preparation procedure of grub eye drops.Chin Trad Patent Med(中成藥)，2001，23:235-237.

4 Dong QF(董慶風(fēng))，Zhang CX(張崇禧).The chemical constituents fromHolotrichia diomphaand its pharmacological research progress.J Pharmaceut Prac(藥學(xué)實踐雜志)，2008，26:14-16.

5 Li D(李丹)，Song LL(宋蓮蓮)，Yang WS(楊萬山).Inducing apoptosis effects and mechanism on hela human cervical carcinoma cells by grub extract.Cancer Res Prev Treat(腫瘤防治研究)，2008，35:91-494.

6 Oh WY，Pyo S，Lee KR，et al.Effect ofHolotrichia diomphalialarvae on liver fibrosis and hepatotoxicity in rats.J Ethnopharmacol，2003，87(2-3):175.

7 Dong QF，Wang JL，Zhang SF，et al.Chemical constituents of the petroleum ether extract ofHolotrichia diomphalialarvae.Chem Nat Compds，2009，45:79-80.

8 Dong QF，Zhang SF，Wang YL，et al.The fat-soluble constituents ofHolotrichia diomphalialarvae.Chem Nat Compds，2009，45:530-531.

9 Yang CM(陽長明)，Hou SX(侯世祥)，Wang XC(王新春)，et al.Chemical constituents of grub and grub eye drops.J Chin Med Mat(中藥材)，2000，23:769-771.

10 Wang YL(王玉亮)，Dong QF(董慶峰)，Zhang L(張磊)，et al.Chemical constituents inHolotrichia diomphaliaby GCMS.Central South Pharmacy(中南藥學(xué))，2007，5:522-524.11 Jia L(賈陸).Study on chemical constituents ofUrena lobataL.Ⅱ.Phenolic acid constituents.Chin J Pharm(中國醫(yī)藥工業(yè)雜志)，2009，40:746-749.

12 Giang PM，Son PT，Matsunami K，Otsuka H.New megastigmane glucosides fromExcoecaria cochinchinensisLour.var.cochinchinensis.Chem Pharm Bull，2005，12:1600-1603.

13 Yang XZ(楊新洲)，Liu LG(林理根)，Tang CP(唐春萍)，et al.Non-alkaloid constituents fromStemona sessilifolia.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2008，20:56-59.

14 Liu DL(劉岱林)，Pang FG(龐發(fā)根)，Zhang JX(張家欣)，et al.Studies on the chemical constituents ofBulbophyllum odoratissimumLindl.Chin J Med Chem(中國藥物化學(xué)雜志)，2005，2:103-107.

Phenolic Compounds from Holotrichia diomphalia Bates

WANG Jing1，2，YAN Yong-ming2，TAN Rui1*，CHENG Yong-xian2*

1Institute of Life Science and Engineering，Southwest JiaoTong University，Chengdu，610031;2State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China，Kunming Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650204，China

Six compounds were isolated from the ethyl acetate extract of a medicinal insect，Holotrichia diomphaliaBates.They were identified as 3，5-dimethoxy-4-hydroxylbenzoic acid(1)，salicylic acid(2)，4-hydroxybenzoic acid (3)，3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid(4)，4-hydroxyphenylpropionic acid(5)，and 4-hydroxyphenylpropionic methyl ester(6)，by using spectroscopic methods.All these compounds were isolated from this species for the first time.

medicinal insects;Holotrichia diomphaliaBates;Scarabaeoidea;phenolic compounds

Q284.2

A

1001-6880(2012)05-0622-03

2010-11-04 接受日期:2011-03-22

云南省中青年學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人與后備人才基金項目(2007PY01-48);云南省科技強省中德國際合作項目(2009AC011)

*通訊作者 Tel:86-28-87600993，E-mail:ruirui_tan@yahoo.com.cn; yxcheng@mail.kib.ac.cn