枸杞活性物質(zhì)的提取工藝優(yōu)化及活性測(cè)定

摘要：采用水提法提取枸杞中的活性成分，并選取料液比、酶解溫度、酶解pH 3個(gè)單因素，在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上利用響應(yīng)面法對(duì)多糖和蛋白質(zhì)的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到的最佳提取工藝為料液比1∶25.29、酶解溫度59.29 ℃、酶解pH 5.94，多糖和蛋白質(zhì)的理論含量為79.36%，在最佳提取工藝下提取3次，平均含量為79.05%，可見響應(yīng)面法得到的提取工藝的穩(wěn)定性與可靠性高。對(duì)提取物進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定，結(jié)果表明，枸杞提取物對(duì)超氧陰離子自由基有一定的清除作用，但清除作用不明顯；對(duì)羥基自由基有較好的清除作用，在低濃度時(shí)與VC相當(dāng)；在DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)中，在較小質(zhì)量濃度時(shí)其清除能力弱于VC，但在較高質(zhì)量濃度時(shí)其清除能力逐漸接近VC，表明枸杞具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：多糖；工藝優(yōu)化；抗氧化

中圖分類號(hào)：TS201.1""""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A"""" 文章編號(hào)：1000-9973（2024）09-0114-06

Optimization of Extraction Process of Active Substances from

Lycium barbarum and Determination of Activity

SHU Yu-zhu， YAO Wen-bo*

（Shaanxi University of Science and Technology， Xi'an 710021， China）

Abstract： The active components in Lycium barbarum are extracted by water extraction method， and solid-liquid ratio， enzymatic hydrolysis temperature and enzymatic hydrolysis pH are selected as the three single factors， the extraction process of polysaccharides and proteins is optimized by response surface method on the basis of single factor experimental results， and the best extraction process is obtained as follows： solid-liquid ratio is 1∶25.29， enzymatic hydrolysis temperature is 59.29 ℃， and enzymatic hydrolysis pH is 5.94. The theoretical content of polysaccharides and proteins is 79.36%， and the average content is 79.05% after three times of extraction under the optimal extraction process. It can be seen that the extraction process obtained by response surface method has high stability and reliability. The antioxidant activity of the extracts is determined， and the results show that the extracts of Lycium barbarum have a certain scavenging effect on superoxide anion radical， but the scavenging effect is not obvious; they have a good scavenging effect on hydroxyl radical， which is equivalent to VC at low concentration; in the DPPH radical scavenging experiment， their scavenging capacity is weaker than VC at low mass concentration， but gradually close to VC at high mass concentration， indicating that Lycium barbarum has strong antioxidant ability.

Key words： polysaccharides; process optimization; antioxidation

收稿日期：2024-03-16

基金項(xiàng)目：陜西省科技廳科技計(jì)劃-農(nóng)業(yè)領(lǐng)域項(xiàng)目（2022NY-035）；陜西省西安市科技計(jì)劃項(xiàng)目（20NYYF0022，22NYYF048）；陜西省西安市未央?yún)^(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（202040）;陜西科技大學(xué)博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目（2022BJ-29）；陜西省教育廳2023年度一般專項(xiàng)科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（23JK0352）

作者簡(jiǎn)介：舒雨竹（2000—），女，碩士研究生，研究方向：食用菌多糖。

*通信作者：姚文博（1989—），男，講師，博士，研究方向：食品安全毒理學(xué)。

枸杞的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常高，屬于藥食同源性食品[1-5]。枸杞中蘊(yùn)含許多含量豐富的活性物質(zhì)，如多糖、活性肽等[6]。據(jù)研究報(bào)道，枸杞多糖不僅有增強(qiáng)機(jī)體免疫力[7]、防衰老[8]、增強(qiáng)造血功能、防止遺傳損傷、抗癌[9]、抑制腫瘤生長(zhǎng)和細(xì)胞突變等作用，而且對(duì)高血脂患者的血脂也具有非常明顯的影響，能顯著降低血清膽固醇和三酰甘油的含量，具有抗氧化功能[10-12]。而枸杞中的蛋白質(zhì)含量也很多，其中含有20種人體所需氨基酸，且含有人體必需的8種氨基酸（異亮氨酸、色氨酸等）[13-15]。蛋白的來(lái)源主要分為動(dòng)物來(lái)源和植物來(lái)源。動(dòng)物性蛋白更利于人類攝取，但是成本過(guò)高。植物性蛋白是世界上最大的可再生蛋白資源之一，其來(lái)源廣，具有抗氧化、抗菌、降血糖、降血脂、降血壓和增強(qiáng)免疫力等功能。近年來(lái)，由于肽可以維護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)人體生理功能，利用植物性蛋白制備生物肽用于保健品、醫(yī)療等領(lǐng)域逐漸增加。有研究發(fā)現(xiàn)，生物活性肽具有抗氧化、抗癌、抗突變等活性。將枸杞進(jìn)行深加工，利用枸杞蛋白制備生物活性肽可提高其經(jīng)濟(jì)效益。因此，提取枸杞活性物質(zhì)、提高其提取率對(duì)開發(fā)枸杞資源具有重要意義。枸杞富含營(yíng)養(yǎng)成分，其中枸杞多糖是其主要的活性成分，如何實(shí)現(xiàn)枸杞多糖的高效提取是本課題擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題，不同的酶能夠作用于枸杞的不同部位，比如纖維素酶可以促進(jìn)細(xì)胞壁的破裂，從而加速細(xì)胞內(nèi)容物的釋放，因此，考察酶的作用對(duì)枸杞活性物質(zhì)提取率的影響具有一定的研究意義。

枸杞屬于枸杞科，主要生長(zhǎng)在堿性土壤和砂質(zhì)土壤中，屬于茄科灌木。枸杞果實(shí)作為中藥已經(jīng)有2 000多年的歷史。近年來(lái)，枸杞果實(shí)因具有明顯的健康保護(hù)功能，在許多國(guó)家作為一種健康食品被普遍食用。據(jù)報(bào)道，枸杞果實(shí)對(duì)肝炎、糖尿病、高脂血癥、血栓形成和免疫缺陷具有多種生物活性和藥理活性。枸杞果實(shí)的活性成分復(fù)雜，含有18種氨基酸、21種微量礦物質(zhì)、黃酮擬桿菌、蛋白質(zhì)、多糖和類胡蘿卜素。多糖是枸杞果實(shí)中最重要的活性成分之一[16-19]，具有降血脂[20]、抗氧化[21-22]、調(diào)節(jié)免疫力、抗衰老和抗疲勞等多種生物活性。多糖的生物活性主要受其理化性質(zhì)和化學(xué)結(jié)構(gòu)的影響，并受其提取和純化方法的影響[23-24]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

枸杞：安徽松鹿堂生物科技有限公司；無(wú)水乙醇（分析純）、正丁醇（色譜純）、氯仿（分析純）：天津市天力化學(xué)試劑有限公司；糖肽標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）：上海源葉生物科技有限公司。

TU-1810紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；10N-50A立式真空冷凍干燥機(jī) 上海爭(zhēng)巧科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取方式

分別考察纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶對(duì)枸杞中多糖和蛋白質(zhì)含量的影響。精密稱取干燥枸杞粉末1 g，分別置于3個(gè)小燒杯中，加入25 mL蒸餾水，分別在數(shù)顯恒溫水浴鍋中50 ℃提取120 min，將提取液放入微沸水中滅酶3～5 min，置于抽濾瓶中抽濾后置于旋蒸儀中直至旋蒸完全，加入10 mL蒸餾水復(fù)溶后倒入燒杯中，加入體積比為1∶5的95%乙醇溶液進(jìn)行醇沉，置于4 ℃冰箱中，24 h后取出，離心，將沉淀物復(fù)溶后置于凍干機(jī)中凍干72 h后取出，稱量其凍干后提取物的質(zhì)量，密封保存，備用，采用苯酚硫酸法和考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)在不同酶情況下提取物中多糖和蛋白質(zhì)的含量。確定提取率最高的兩種酶，再將兩種酶調(diào)整為總量不變、比例不同的情況按照上述方法操作后測(cè)定含量，確定最適酶比例后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 料液比對(duì)枸杞活性物質(zhì)提取含量的影響

精密稱取過(guò)篩后的干燥枸杞粉末1 g，分別置于5個(gè)小燒杯中，分別加入10，15，20，25，30 mL蒸餾水配成料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的溶液，加入0.45%纖維素酶∶果膠酶為3∶1的酶后將提取液的pH調(diào)至6，用保鮮膜封住燒杯口，在50 ℃溫度下水浴提取120 min，將提取液放入微沸水中滅酶3～5 min，置于抽濾瓶中抽濾后置于旋蒸儀中旋蒸完全，加入10 mL蒸餾水復(fù)溶后倒入燒杯中，加入體積比1∶5的95%乙醇溶液進(jìn)行醇沉，置于4 ℃冰箱中，24 h后取出，放入臺(tái)式離心機(jī)中在8 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心15 min，將沉淀物復(fù)溶后置于凍干機(jī)中凍干72 h后取出，稱量其凍干后提取物的質(zhì)量，密封保存，備用，采用苯酚硫酸法和考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)在不同料液比下提取物中多糖和蛋白質(zhì)的含量。

1.2.2.2 酶解溫度對(duì)枸杞活性物質(zhì)提取含量的影響

精密稱取過(guò)篩后的干燥枸杞粉末1 g，分別置于5個(gè)小燒杯中，加入20 mL蒸餾水配制成料液比為1∶20的溶液，加入0.45%纖維素酶∶果膠酶為3∶1的酶后將提取液的pH調(diào)至6，用保鮮膜封住燒杯口，分別在30，40，50，60，70 ℃溫度下水浴提取120 min，提取液按照1.2.2.1的方式處理。

1.2.2.3 酶解pH對(duì)枸杞活性物質(zhì)提取含量的影響

精密稱取過(guò)篩后的干燥枸杞粉末1 g，分別置于5個(gè)小燒杯中，加入20 mL蒸餾水配制成料液比為1∶20的溶液，加入0.45%纖維素酶∶果膠酶為3∶1的酶后分別將pH調(diào)至4，5，6，7，8，用保鮮膜封住燒杯口，在50 ℃溫度下水浴提取120 min，提取液按照1.2.2.1的方式處理。

1.2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素和水平

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用Design-Expert V8.0.6軟件中心組合設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)三因素三水平響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，以枸杞活性成分含量為響應(yīng)值，響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素和水平見表1。

1.2.3.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

在響應(yīng)面模型預(yù)測(cè)得到的最佳提取工藝的基礎(chǔ)上進(jìn)行3次重復(fù)性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，判斷模型的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

1.2.4 枸杞中多糖和蛋白質(zhì)含量的計(jì)算

采用苯酚硫酸法和考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定多糖和蛋白質(zhì)的含量。

1.2.5 抗氧化活性的測(cè)定

1.2.5.1 DPPH自由基清除能力的測(cè)定

a.實(shí)驗(yàn)試劑

100 mL 0.05 mg/mL DPPH溶液：稱取5 mg DPPH，用100 mL無(wú)水乙醇溶解，用錫紙包裹，于4 ℃避光備用。

分別配制枸杞提取物樣品溶液、VC溶液，濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 mg/mL。

b.實(shí)驗(yàn)步驟

取上述各濃度梯度的溶液各2 mL，加入DPPH溶液2 mL，渦旋混勻，記作A樣品。以無(wú)水乙醇代替DPPH溶液，渦旋混勻，記作A對(duì)照。以無(wú)水乙醇代替樣品溶液，渦旋混勻，記作A空白，以VC為陽(yáng)性對(duì)照。將上述溶液在25 ℃下避光反應(yīng)30 min后，于517 nm處測(cè)定吸光值。按下列公式計(jì)算清除率，每組實(shí)驗(yàn)平行3次，取平均值。

c.計(jì)算公式

清除率（%）=［1—（A空白—A樣品）］/A對(duì)照×100%。

1.2.5.2 O2-自由基清除能力的測(cè)定

a.實(shí)驗(yàn)試劑

Tris溶液的配制：準(zhǔn)確稱取 Tris 0.605 6 g，加水定容至50 mL待用；用移液管準(zhǔn)確移取濃HCl 0.415 mL，加水定容至50 mL待用；將上述兩種溶液按照Tris∶濃HCl為50∶23的比例混合均勻后，加水定容至100 mL，即配制成pH 8.2的Tris-HCl溶液。

焦性沒食子酸溶液的配制：準(zhǔn)確稱取焦性沒食子酸 0.063 4 g，加適量水溶解后定容至100 mL待用。

分別配制枸杞提取物樣品溶液、VC溶液，濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 mg/mL。

b.實(shí)驗(yàn)步驟

取0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 mg/mL樣品溶液、1 mL VC溶液于具塞試管中，隨后加入 Tris-HCl（pH 8.2）緩沖液3 mL，于30 ℃水浴20 min，放置至室溫后加入3 mL 5 mmol/L焦性沒食子酸溶液，混勻后放置3 min，加入1 mL濃鹽酸終止反應(yīng)，在320 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)1，以水作為空白對(duì)照，抗壞血酸作為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)樣品進(jìn)行 3次平行實(shí)驗(yàn)，取其平均值。A樣品為待測(cè)液在320 nm處的吸光值；A試樣為以H2O代替鄰苯三酚在320 nm處的吸光值；A空白為以H2O代替待測(cè)液在320 nm處的吸光值。

c.計(jì)算公式

清除率（%）=［A空白—（A樣品—A試樣）］/A空白×100%。

1.2.5.3 OH-自由基清除能力的測(cè)定

a.實(shí)驗(yàn)試劑

100 mL 9 mmol/L H2O2的配制：吸取90 μL 30% H2O2溶液加水定容至100 mL；

100 mL 9 mmol/L FeSO4的配制：稱取0.25 g FeSO4·7H2O，加水定容至100 mL；

100 mL 9 mmol/L水楊酸-無(wú)水乙醇溶液：稱取0.124 2 g水楊酸，用無(wú)水乙醇定容至100 mL。

分別配制枸杞提取物樣品溶液、VC溶液，濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 mg/mL。

b.實(shí)驗(yàn)步驟

取上述各濃度梯度的溶液各1 mL，加入9 mmol/L H2O2、9 mmol/L FeSO4、9 mmol/L水楊酸-無(wú)水乙醇溶液和蒸餾水各1 mL，渦旋混勻，在37 ℃水浴35 min。于510 nm處測(cè)定吸光值，記作A樣品。以蒸餾水代替提取液，記作A空白，H2O2溶液用蒸餾水替代，記作A試樣，按下列公式計(jì)算清除率。以VC溶液作為陽(yáng)性對(duì)照。每組實(shí)驗(yàn)平行3次，取平均值。

c.計(jì)算公式

清除率（%）=［A空白—（A樣品—A試樣）］/A空白×100%。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，采用GraphPad Prism 8.0.2和Design-Expert V8.0.6進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和繪圖分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取工藝優(yōu)化

2.1.1 最適酶的確定

由表2可知，在纖維素酶和果膠酶的提取條件下，枸杞活性成分的含量較高，因此確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取的酶為纖維素酶和果膠酶。

2.1.2 最適酶比例的確定

由表3可知，在纖維素酶∶果膠酶為3∶1的條件下，枸杞活性成分的含量較高，因此確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取的酶比例為3∶1。

2.1.3 料液比對(duì)提取含量的影響

由圖1可知，料液比為1∶25時(shí)，枸杞活性成分的含量達(dá)到最高，因此選擇1∶25作為實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)條件，為響應(yīng)面優(yōu)化工藝提供了參考。

2.1.4 酶解溫度對(duì)提取含量的影響

由圖2可知，酶解溫度為60 ℃時(shí)，枸杞活性成分的含量達(dá)到最高，因此選擇酶解溫度60 ℃作為實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)條件，為響應(yīng)面優(yōu)化工藝提供了參考。

2.1.5 酶解pH對(duì)提取含量的影響

由圖3可知，酶解pH為6時(shí)，枸杞活性成分的含量達(dá)到最高，因此選擇酶解pH 6作為實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)條件，為響應(yīng)面優(yōu)化工藝提供了參考。

2.1.6 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝

按照表1設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，共得到17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)，其中分析的實(shí)驗(yàn)點(diǎn)有12個(gè)，中心點(diǎn)有5個(gè)。采用響應(yīng)面法分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以枸杞活性成分含量為響應(yīng)值，最終得到的回歸方程為含量=77.93+0.92A-2.09B-1.28C-9.05AB+1.39AC-4.61BC-12.01A2-16.13B2-7.17C2。

由表4可知，響應(yīng)面模型的P=0.007 7＜0.01，說(shuō)明響應(yīng)面模型差異極顯著，失擬項(xiàng)的P=0.089 5＞0.05，說(shuō)明響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型擬合良好，可以使用該模型推測(cè)枸杞活性成分含量最大時(shí)的最優(yōu)提取條件。各因素對(duì)枸杞活性成分含量的影響由大到小為酶解溫度＞酶解pH＞料液比。兩兩因素交互作用的等高線和響應(yīng)面見圖4。

在圖4中X，Y軸為影響因素，Z軸為枸杞中活性成分的含量，由圖4可以明顯看出料液比與酶取溫度的交互作用、料液比與酶解pH的交互作用以及酶解溫度與酶解pH的交互作用。且每?jī)蓚€(gè)因素的交互作用都明顯存在最高點(diǎn)。根據(jù)響應(yīng)面法建立模型，最終得到最佳的提取條件為料液比1∶25.29、酶解溫度59.29 ℃、酶解pH 5.94，此條件下枸杞中活性成分含量為79.36%。

2.1.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

在理論條件下提取的枸杞活性成分含量為79.36%。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行3次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5?？梢婎A(yù)測(cè)值與實(shí)際提取值的吻合度較好，模型具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

2.2 抗氧化活性測(cè)定

2.2.1 DPPH自由基清除能力測(cè)定

按照1.2.5中的試劑配制方法配制溶液，并按照實(shí)驗(yàn)步驟加入試劑，檢測(cè)提取物的活性。枸杞提取物、VC對(duì)DPPH自由基的清除效果見圖5。

由圖5可知，在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)VC對(duì)DPPH自由基的清除率基本上沒有變化，均大于80%，隨著質(zhì)量濃度的上升，枸杞提取物對(duì)DPPH自由基的清除率增大，逐漸靠近VC。

2.2.2 O2-自由基清除能力測(cè)定

該體系中的鄰苯三酚在堿性條件下自氧化形成中間產(chǎn)物超氧陰離子自由基，此自由基能促進(jìn)鄰苯三酚自氧化，因此通過(guò)測(cè)定某物質(zhì)對(duì)鄰苯三酚自氧化的抑制作用，即可表征其對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6。

由圖6可知，在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的升高，VC的清除率略有上升，而枸杞提取物的清除率變化不明顯，均低于30%，說(shuō)明枸杞提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用不明顯。

2.2.3 OH-自由基清除能力測(cè)定

枸杞提取物、VC對(duì)羥基自由基的清除效果見圖7。

由圖7可知，在所選質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的增大，VC、枸杞提取物清除羥基自由基的能力顯著增大，清除率達(dá)到50%時(shí)所需枸杞提取物、VC的質(zhì)量濃度大約都在0.25 mg/mL，說(shuō)明在此濃度范圍內(nèi)枸杞提取物清除羥基自由基的能力與VC相當(dāng)。

3 結(jié)論

本研究考察了提取酶的種類和酶比例對(duì)枸杞多糖和蛋白質(zhì)含量的影響，發(fā)現(xiàn)最適酶為纖維素酶和果膠酶，最適的酶比例為3∶1?？疾炝肆弦罕?、酶解溫度、酶解pH 3個(gè)單因素對(duì)枸杞多糖和蛋白質(zhì)含量的影響，然后采用Design-Expert V8.0.6軟件中心組合設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)并建立了模型，得到了預(yù)測(cè)的最優(yōu)工藝，在預(yù)測(cè)的最優(yōu)工藝基礎(chǔ)上，進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)理論含量與實(shí)際含量的吻合度達(dá)到99.61%，最終確定了最佳提取工藝為料液比1∶25.29、酶解溫度59.29 ℃、酶解pH 5.94。在此條件下提取的枸杞多糖和蛋白質(zhì)的理論含量為79.36%，實(shí)際含量為79.05%。

利用3種不同的活性檢測(cè)方法對(duì)枸杞進(jìn)行抗氧化活性檢測(cè)。通過(guò)測(cè)定枸杞對(duì)不同自由基的清除率來(lái)判斷枸杞的抗氧化能力。分別設(shè)置了5個(gè)不同的濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，枸杞提取物對(duì)超氧陰離子自由基有一定的清除作用，但清除作用不明顯；對(duì)羥基自由基有較好的清除作用，在低濃度時(shí)與VC相當(dāng)；在DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)中，在較小質(zhì)量濃度時(shí)其清除能力弱于VC，但在較高質(zhì)量濃度時(shí)其清除能力逐漸接近VC，可見枸杞有較強(qiáng)的抗氧化能力。

參考文獻(xiàn)：

[1]VIDOVI B B， MILINI D D， MARETI M D， et al.Health benefits and applications of Goji berries in functional food products development： a review[J].Antioxidants，2022，11（2）：248.

[2]GONCALVES G， ZHAO L， PATEL B， et al.Effect of Goji berry consumption on physiological， biochemical and traditional Chinese medicine （TCM） outcomes[J].Proceedings of the Nutrition Society，2018，77：205.

[3]KULCZYNSKI B， GRAMZA-MICHALOWSKA A. Goji berry （Lycium barbarum）： composition and health effects－a review[J].Polish Journal of Food and Nutrition Sciences，2016，66（2）：67-75.

[4]TEIXEIRA F， SILVA A M， DELERUE-MATOS C， et al. Lycium barbarum berries （Solanaceae） as source of bioactive compounds for healthy purposes： a review[J].International Journal of Molecular Sciences，2023，24（5）：4777.

[5]MASCI A， SIMONE C， MARIA-ANTONIETTA C， et al. Lycium barbarum polysaccharides： extraction， purification， structural characterisation and evidence about hypoglycaemic and hypolipidaemic effects.A review[J].Food Chemistry，2018，254：377-389.

[6]JI H X， MA J X， GUO L J， et al. Amino acid sequence identification of Goji berry cyclic peptides and anticervical carcinoma activity detection[J].Journal of Peptide Science，2021，27（8）：3326.

[7]MA Z F， ZHANG H X， TEH S S， et al. Goji berries as a potential natural antioxidant medicine： an insight into their molecular mechanisms of action[J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2019，2019（1）：1-9.

[8]LIU J F， MENG J， DU J H， et al.Preparative separation of flavonoids from Goji berries by mixed-mode macroporous adsorption resins and effect on Aβ-expressing and anti-aging genes[J].Molecules，2020，25（15）：3511.

[9]WAWRUSZAKA， CZERWONKA A， OKA K， et al. Anticancer effect of ethanol Lycium barbarum （Goji berry） extract on human breast cancer T47D cell line[J].Natural Product Research，2016，30（17）：1993-1996.

[10]LIU B，XU Q Q，SUN Y J.Black Goji berry （Lycium ruthenicum） tea has higher phytochemical contents and in vitro antioxidant properties than red Goji berry （Lycium barbarum） tea[J].Food Quality and Safety，2020，4（4）：193-201.

[11]ISLAM T， XU X M， BADWAL T S， et al.Comparative studies on phenolic profiles， antioxidant capacities and carotenoid contents of red Goji berry （Lycium barbarum） and black Goji berry （Lycium ruthenicum）[J].Chemistry Central Journal，2017，11（1）：59.

[12]REEVE V E， ALLANSON M， ARUN S J， et al.Mice drinking Goji berry juice （Lycium barbarum） are protected from UV radiation-induced skin damage via antioxidant pathways[J].Photochemical amp; Photobiological Sciences，2010，9（4）：601-607.

[13]TEIXEIRA S， LUIS I M， OLIVEIRA M， et al. Goji berries superfood—contributions for the characterisation of proteome and IgE-binding proteins[J].Food and Agricultural Immunology，2019，30（1）：262-280.

[14]UASUF C G.Identification of immunoreactive protein bands in Goji berries superfood by proteomic analysis[J].Allergy，2020，75：521.

[15]D'AMATO A， ESTEVE C， FASOLI E， et al. Proteomic analysis of Lycium barbarum （Goji） fruit via combinatorial peptide ligand libraries[J].Electrophoresis，2013，34（12）： 1729-1736.

[16]MENABREAZ T， DORSAZ M， BOCQUEL D， et al. Goji berry and whey protein concentrate enriched rice extrudates—physical properties and accessibility of bioactives[J].Polish Journal of Food and Nutrition Sciences，2021，71（1）：29-37.

[17]YU C X， XU X X， AHMADI S， et al. Structure and in vitro fermentation characteristics of polysaccharides sequentially extracted from Goji berry （Lycium barbarum） leaves[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2022，70（24）：7535-7546.

[18]SKENDERIDIS P， MITSAGGA C， LAMPAKIS D， et al. The effect of encapsulated powder of Goji berry （Lycium barbarum） on growth and survival of probiotic bacteria[J].Microorganisms，2020，8（1）：57.

[19]PENG J J， WANG L， WANG M G， et al.Yeast synthetic biology for the production of Lycium barbarum polysaccharides[J]. Molecules，2021，26（6）：1641.

[20]ZHOU B J， XIA H， YANG L G， et al.The effect of Lycium barbarum polysaccharide on the glucose and lipid metabolism： a systematic review and meta-analysis[J].Journal of the American Nutrition Association，2022，41（6）：618-626.

[21]GEORGIEV K D， SLAVOV I J， ILIEV I A.Antioxidant activity and antiproliferative effects of Lycium barbarum's （Goji berry） fractions on breast cancer cell lines[J].Folia Medica，2019，61（1）：104-112.

[22]ZHANG Q Y， CHEN W W， ZHAO J H， et al.Functional constituents and antioxidant activities of eight Chinese native Goji genotypes[J].Food Chemistry，2016，200：230-236.

[23]ZHOU S Y， RAHMAN A， LI J H， et al. Extraction methods affect the structure of Goji （Lycium barbarum） polysaccharides[J].Molecules，2020，25（4）：936.

[24]AHMADI S， YU C X， ZAEIM D， et al. Increasing RG-I content and lipase inhibitory activity of pectic polysaccharides extracted from Goji berry and raspberry by high-pressure processing[J].Food Hydrocolloids，2022，126（14）：107477.