豬流行性腹瀉疫病診斷及治療措施

豬流行性腹瀉是比較常見(jiàn)的生豬疫病，由流行性腹瀉病毒引發(fā)，屬于腸道傳染疾病，若不及時(shí)治療會(huì)危害豬的生命，進(jìn)而影響?zhàn)B殖效益。在養(yǎng)殖過(guò)程中，應(yīng)該采取有效的預(yù)防措施，保障診斷的準(zhǔn)確性，然后采取對(duì)應(yīng)的治療措施。本文闡述了豬流行性腹瀉疫病的診斷方式，主要根據(jù)病因、流行特點(diǎn)和臨床癥狀進(jìn)行診斷，可以采用實(shí)驗(yàn)室診斷的方式，根據(jù)診斷結(jié)果采取對(duì)應(yīng)的治療措施?；加胸i流行性腹瀉疫病的生豬，臨床表現(xiàn)比較明顯，包括糞便、嘔吐、脫水等癥狀，最早在20世紀(jì)70年代出現(xiàn)，目前已經(jīng)有了相對(duì)成熟的診治和預(yù)防手段。任何年齡段的豬都會(huì)感染，哺乳仔豬癥狀比較嚴(yán)重，死亡率相對(duì)較高。通常在寒冷季節(jié)流行，年齡越小的豬，病癥越嚴(yán)重。若1周齡小豬患病，死亡率可以達(dá)到50%～100%。若發(fā)生病變，很難與TGE區(qū)分，檢驗(yàn)會(huì)發(fā)現(xiàn)腸絨毛萎縮，腸壁變薄并且出現(xiàn)腫脹的情況，腸壁和腸腺窩比例變?yōu)?：1。為了降低疫病發(fā)生概率，養(yǎng)殖戶應(yīng)該認(rèn)識(shí)到疫病預(yù)防的重要性，并且掌握豬流行性腹瀉疫病的診斷和治療方式。

1豬流行性腹瀉病毒分析

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）最早在英國(guó)被報(bào)道，報(bào)道時(shí)間為1971年，在1995年被列入為冠狀病毒屬。PEDV只會(huì)在豬中傳染，傳染模式為接觸式傳染，是造成豬流行性腹瀉（PED）的主要病原體，一旦豬感染此病毒，就會(huì)有很高的發(fā)病率。這種病毒會(huì)導(dǎo)致水樣性腹瀉，若仔豬患病，會(huì)出現(xiàn)嘔吐、體內(nèi)脫水、食欲不振等癥狀，臨床表現(xiàn)較為明顯[1]。在該病毒感染后，會(huì)有較高的死亡率，在不同年齡的豬群中，死亡率也存在差異，哺乳期仔豬發(fā)病率最高。初期感染病毒的豬群缺少有效的防治，病毒會(huì)大范圍傳播，主要通過(guò)直接和間接接觸的方式進(jìn)行傳播，也可以通過(guò)食物傳播。研究表明，在生豬運(yùn)輸過(guò)程中，病毒可能會(huì)循環(huán)傳播，造成病毒在世界范圍內(nèi)出現(xiàn)。該病毒會(huì)導(dǎo)致大量豬死亡，一些地區(qū)采用掩埋處理的方式，導(dǎo)致病毒隨著地下水傳播，會(huì)嚴(yán)重污染地下水，嚴(yán)重危害生態(tài)環(huán)境。PEDV基因組屬于單股正鏈，具有一定的感染性，組成部分包括5’端非編碼區(qū)、3’端編碼區(qū)、7個(gè)以上開(kāi)放的閱讀框，長(zhǎng)度譽(yù)為28 kb。根據(jù)PEDV基因端到端的排列方式，包括S、M、E、N 4種基因。從外觀分析，PEDV呈現(xiàn)為球形狀，直徑通常在95～190 nm，存在囊膜且表面有纖突，長(zhǎng)度約為12～24 nm。纖突外端與球形接近，排列比較規(guī)則[2]。根據(jù)S基因序列分析，可以將PEDV毒株分為2個(gè)基因亞型，分別是G1和G2。目前，全球范圍內(nèi)都在研究PEDV的致病原因，同時(shí)也對(duì)疫苗進(jìn)行配置研究，已經(jīng)取得一定成果，但PEDV的傳染性較強(qiáng)，依舊在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展有很大影響，若沒(méi)有采取有效的防治措施，會(huì)給養(yǎng)豬場(chǎng)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2豬流行性腹瀉疫病診斷

2.1病因

豬流行性腹瀉疫病由PEDV引起，是常見(jiàn)的冠狀病毒。這種疾病和傳染性胃腸炎比較相似，通常在第一年12月到第二年1～2月發(fā)生，冬季發(fā)病率較高，夏季也有發(fā)病但發(fā)病率相對(duì)較低。豬感染PEDV后，病毒會(huì)在小腸內(nèi)層的上皮細(xì)胞中復(fù)制，造成感染細(xì)胞壞死[3]。病毒可以在豬體中潛伏3～6 d，然后病豬會(huì)出現(xiàn)腹瀉、嘔吐等癥狀，持續(xù)5～10 d。感染后的12～24 h內(nèi)，可以在病豬的十二指腸、回腸中檢測(cè)出病毒。感染后的1～3 d內(nèi)，病豬糞便會(huì)有病毒脫落。造成該疾病發(fā)生的主要原因是飼養(yǎng)管理不當(dāng)，新生仔豬抗病力較弱，極易被感染。

2.2流行特點(diǎn)

任何年齡段的豬都會(huì)感染流行性腹瀉疫病，育肥豬和哺乳豬患病率較高，感染PEDV的仔豬有較高的發(fā)病率和死亡率。日齡10 d的哺乳仔豬在感染PEDV后的2～4 d出現(xiàn)死亡，死亡率最高可以達(dá)到100%。育成豬也有較高的患病率，最高可以達(dá)到100%。成年豬的免疫力、抵抗力相對(duì)較強(qiáng)，部分成年豬患病1周之后可以康復(fù)，治療難度也相對(duì)較低，死亡率不高。若豬場(chǎng)中有多窩仔豬出生或斷奶，失去母源抗體的斷奶仔豬很容易被連續(xù)感染，疫病會(huì)呈現(xiàn)出地方流行性特征。在繁殖場(chǎng)中，該病會(huì)導(dǎo)致5～8周齡仔豬出現(xiàn)比較頑固、頻繁的腹瀉。通常在冬季發(fā)生，因?yàn)闅鉁叵陆担魶](méi)有采取有效的保暖措施，很容易導(dǎo)致生豬受涼，導(dǎo)致生豬抗病能力下降，容易感染病毒。

2.3臨床癥狀

任何生豬都有可能患病，不論是懷孕母豬，還是成年公豬、保育豬，在患病后都會(huì)出現(xiàn)腹瀉癥狀，同時(shí)伴隨食欲不振、精神萎靡等癥狀。很多病豬在患病1周左右就可以康復(fù)，哺乳仔豬的抵抗力較低，患病后會(huì)出現(xiàn)脫水、腹瀉、食欲不振、嘔吐等癥狀。日齡約為7 d的哺乳豬，則腹瀉1～4 d就會(huì)出現(xiàn)脫水癥狀，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成死亡，病死率通常超過(guò)60%，最高可以達(dá)到100%。

2.4診斷技術(shù)

可以采用病毒分離鑒定和檢測(cè)病毒抗原的方式進(jìn)行診斷分析，具體包括免疫熒光法、雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELSA），可以對(duì)抗體進(jìn)行血清中核試驗(yàn)檢測(cè)，也可以采用簡(jiǎn)潔ELI‐SA試驗(yàn)技術(shù)。在病毒分離和鑒定過(guò)程中，應(yīng)該先準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)材料，包括倒置顯微鏡、微孔濾器、冷凍離心機(jī)、蓋玻片等器材，還需要配置磷酸鹽緩沖液（PBS）、細(xì)胞培養(yǎng)液、病毒培養(yǎng)液等培養(yǎng)基和溶液[4]。在病毒分離方面，首先進(jìn)行病毒采集，選擇仔豬空腸內(nèi)容物、小腸內(nèi)容物進(jìn)行病毒分離采集，然后采用冷凍保存的方式。將采集到的小段空腸和內(nèi)部容物與各個(gè)溶液混合，配置5倍懸液，溶液包括1 000 IU/mL青霉素、1 000μg/mL鏈霉素、PBS液。進(jìn)行離心處理，溫度控制為4℃，轉(zhuǎn)速為每分鐘3 000 r，離心時(shí)間為30 min，將上清液取出，采用微孔濾膜過(guò)濾并分裝，保存在-20℃的環(huán)境中。過(guò)濾液在Vero細(xì)胞單層上接種，并且加入含50%過(guò)濾液的病毒培養(yǎng)液，在37℃條件下進(jìn)行1 h吸附，根據(jù)組織培養(yǎng)管容量，添加病毒培養(yǎng)液，然后控制溫度進(jìn)行培養(yǎng)，觀察3～4 d，根據(jù)細(xì)胞病變情況分析，通?？梢悦?～3代。細(xì)胞病變后，細(xì)胞面會(huì)變得粗糙，顆粒數(shù)也會(huì)隨之增加，會(huì)出現(xiàn)多核細(xì)胞，有空斑樣小區(qū)，細(xì)胞會(huì)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間會(huì)脫落，與傳染性胃腸炎病毒有一定的特征差異。細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加蓋玻片，收毒后可以采用熒光鑒定的方式。若條件允許，也可以采用電鏡觀察的方式，使用負(fù)染法在陽(yáng)性樣品中進(jìn)行電鏡觀察，通過(guò)觀察可以發(fā)現(xiàn)冠狀病毒粒子。

采用直接熒光抗體法需要準(zhǔn)備熒光顯微鏡、溫箱、冷凍切片機(jī)、滴灌等器材。還要配置磷酸鹽緩沖液、0.1%伊文斯蘭原液等溶液。需要制作組織標(biāo)本，采用蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞，在24～48 h的蓋玻片中培養(yǎng)分離細(xì)胞病毒，再要多次沖洗陽(yáng)性和陰性對(duì)照片，在丙酮中放入并且固定10 min，然后在PBS中浸泡10～15 min，取出后需要風(fēng)干。采用0.02%依文思藍(lán)溶液稀釋FA，離心轉(zhuǎn)速為每分鐘4 000 r，離心時(shí)間為10 min，將上清液取出并且在標(biāo)本中滴入。保持37℃恒溫，然后進(jìn)行30 min染色，使用PBS進(jìn)行3次沖洗，最初沖洗3 min，逐次增加1 min，然后進(jìn)行風(fēng)干處理。在上面滴加磷酸鹽緩沖甘油，然后使用蓋玻片進(jìn)行封固，最后使用熒光顯微鏡進(jìn)行檢查。檢查發(fā)現(xiàn)，標(biāo)本細(xì)胞結(jié)構(gòu)比較清晰且完整，在陰性和陽(yáng)性對(duì)照都成立時(shí)判定。在胞漿中會(huì)發(fā)現(xiàn)異性蘋(píng)果綠色熒光，此時(shí)為陽(yáng)性；如果沒(méi)有熒光，則判定為陰性。

若為簡(jiǎn)單的病例剖檢，則通常會(huì)發(fā)現(xiàn)豬小腸部位出現(xiàn)病變，腸管會(huì)因此擴(kuò)張。中腸管中會(huì)有薄膜狀黃色液體，腸系膜也會(huì)出現(xiàn)充血的情況，腸壁會(huì)慢慢變薄，彈性也會(huì)逐漸消失，小腸內(nèi)部會(huì)有黏膜絨毛。胃底部黏膜會(huì)出現(xiàn)血跡，仔細(xì)觀察可以看到黏液，也可能出現(xiàn)點(diǎn)狀出血、斑塊等情況。胃部的內(nèi)容物普遍為鮮黃色，一部分會(huì)出現(xiàn)乳白色凝乳塊，在幽門(mén)出現(xiàn)壞死的情況。病死生豬皮膚會(huì)呈現(xiàn)為暗灰色，身形也比較消瘦。

3豬流行性腹瀉疫病治療措施

3.1疫苗研究

為了降低豬流行性腹瀉疫病的發(fā)生概率，各個(gè)國(guó)家都在努力研究防疫疫苗，主要分為活疫苗、轉(zhuǎn)基因疫苗和滅活苗3種。中國(guó)早在2004年就已經(jīng)開(kāi)始廣泛研究，并且成功研制PEDV和TGEV二聯(lián)活疫苗。這兩種活疫苗不僅具有預(yù)防作用，也可以降低患病豬死亡率，妊娠階段母豬也可以注射，對(duì)各個(gè)年齡段生豬都有較好的預(yù)防作用。

3.2疫病預(yù)防

為有效預(yù)防流行性腹瀉疫病，首先要接種疫苗。通常，妊娠期母豬需要在產(chǎn)前20～30 d內(nèi)接種疫苗，仔豬則在斷奶前后接種疫苗。其他成年豬可以根據(jù)飼養(yǎng)情況和防疫需求進(jìn)行接種，要嚴(yán)格遵守疫苗接種的規(guī)范要求，確保防疫效果；其次，要采取科學(xué)飼養(yǎng)管理措施。日常應(yīng)該做好豬舍清潔和消毒工作，降低病毒、細(xì)菌滋生概率。對(duì)飼料進(jìn)行嚴(yán)格檢查，若出現(xiàn)過(guò)期、變質(zhì)、污染等情況，要及時(shí)淘汰，避免生豬使用劣質(zhì)飼料。為提升免疫力，可以適當(dāng)在飼料中添加復(fù)合酶制劑、抗氧化復(fù)合維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，保障飼料營(yíng)養(yǎng)均衡。尤其要做好冬季預(yù)防工作，因?yàn)闅鉁叵陆岛苋菀滓l(fā)流行性腹瀉疫病。所以要控制生豬飲食，嚴(yán)禁食用生冷飼料。采取有效的飼料保溫措施，若溫度較低，則應(yīng)該適當(dāng)增溫。可以選擇干粉料，也可以使用溫水?dāng)嚢璧姆绞?；最后，做好仔豬管理工作。因?yàn)樽胸i抵抗力較低，很容易感染疫病，且發(fā)病率、死亡率較高。所以，一定要采取有效的管理措施，確保仔豬營(yíng)養(yǎng)攝入充足，提升仔豬抗病能力，降低仔豬患病概率。

3.3疫病治療

若發(fā)生疫病，可以根據(jù)患病程度和癥狀采取不同的治療措施。通常采用西醫(yī)治療的方式，見(jiàn)效較快。若仔豬患病且病情比較嚴(yán)重，可以采用1 gVc和0.5 g氨芐青霉素，同時(shí)混合10 mL碳酸氫銨針劑、40 mL鹽水，采用靜脈補(bǔ)液的方式。若病豬出現(xiàn)體溫升高的癥狀，可以肌肉注射安乃近或安痛定，成年豬可以注射20 mL，仔豬只需要注射5 mL，每天注射1次即可，連續(xù)注射2 d。如果是母豬腹瀉，則可以肌肉注射1 mL硫酸阿托品。如果生豬重量超過(guò)25 kg，則計(jì)量增加為2 mL。也可以采用中醫(yī)治療的方式，中醫(yī)治療見(jiàn)效慢，但沒(méi)有副作用，更有益于生豬健康。藥方中包含黨參、白術(shù)、茯苓、煨木香、藿香、炮姜、炙甘草幾種中藥。前3種藥物各50 g，后4種藥物各30 g，然后加水熬制成汁，在藥汁中加入200 g白糖，拌入到飼料之中。在中醫(yī)治療的過(guò)程中，堅(jiān)持祛邪扶正的原則，側(cè)重補(bǔ)充生豬機(jī)體正氣，以提升免疫力為主。所以，通常采用二苓平胃散（包括蒼術(shù)、陳皮、云木香、獲苓等藥物）治療，有明顯的治療效果。

參考文獻(xiàn)

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（河北省廊坊市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合檢測(cè)中心崔繼良）