土壤改良措施對(duì)參田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響

摘要：為探究土壤改良措施對(duì)參田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響，篩選老參田土壤改良最優(yōu)方案，進(jìn)行大田種植土壤改良試驗(yàn)，設(shè)置3個(gè)處理組，即棉隆土壤熏蒸組（A）、高錳酸鉀化學(xué)消毒組（B）、微生物菌肥組（C），并以未改良土壤為空白對(duì)照組（CK）。通過高通量測(cè)序技術(shù)分析不同處理方式下土壤微生物群落結(jié)構(gòu)變化，綜合評(píng)價(jià)不同參田土壤改良措施。結(jié)果表明，在12個(gè)改良參田土壤中共檢測(cè)537 766個(gè)細(xì)菌有效序列，701 028個(gè)真菌有效序列；土壤細(xì)菌在門分類水平上，改良組放線菌門、綠彎菌門、厚壁菌門等的相對(duì)豐度均大于空白對(duì)照組，土壤真菌在門分類水平上，被孢霉門的相對(duì)豐度明顯高于空白對(duì)照組。在微生物屬分類水平上，處理組有益菌芽孢桿菌屬、鞘氨醇單胞菌屬、熱酸菌屬、青霉菌、毛殼菌屬的相對(duì)豐度明顯高于空白對(duì)照組，而引起植物病害的鐮刀菌屬、芽枝霉屬在處理組中的相對(duì)豐度呈下降趨勢(shì)?？瞻讓?duì)照組土壤中鞘氨醇單胞菌屬、熱酸菌屬的相對(duì)豐度高于處理組，在西洋參短期連作體系中，預(yù)測(cè)土壤中微生物可產(chǎn)生抵御病害的生防菌，維持植物正常生長(zhǎng)?？傊?，在土壤改良措施中，3種處理方法都有利于有益菌和生防菌豐度的增加，土壤修復(fù)以C組最好，A組次之，B組效果較差。

關(guān)鍵詞：西洋參；高通量測(cè)序；土壤改良；連作障礙；微生物

中圖分類號(hào)：S567.5+30.61 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）12-0261-08

西洋參（Panax quinquefolium L.），為五加科人參屬多年生草本植物，原產(chǎn)于北美洲，我國(guó)自1970年引種成功后，開始規(guī)?；N植。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)展，我國(guó)已形成三大西洋參種植基地，主要分布在東北、華北、西北等地區(qū)［1］。連作的集約化、現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)模式是最常見的耕作制度，人參屬植物在種植過程中易產(chǎn)生嚴(yán)重的連作障礙，這極大地制約了西洋參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展［2］。

目前，引起西洋參連作障礙的發(fā)生機(jī)制已基本明確。老參田土壤微生物群落失衡是導(dǎo)致西洋參再植過程中土傳病害發(fā)生的直接原因，而土壤微生物群落的結(jié)構(gòu)組成是衡量參田土壤健康情況的重要指標(biāo)［3］。研究表明，在西洋參連續(xù)種植土壤中，假單胞菌（Pseudomonas spp.）、芽孢桿菌（Bacillus）顯著減少，而引起植物根腐病的主要病原菌鐮刀菌（Fusarium）呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)［4-6］。土壤微生物群落結(jié)構(gòu)與土壤理化性質(zhì)、施肥方式、土壤質(zhì)地等有關(guān)［7］。本研究通過高通量測(cè)序技術(shù)分析不同改良措施對(duì)老參田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響，以期篩選出最佳改良方法以及土壤中抵抗連作障礙的優(yōu)勢(shì)菌群，為西洋參連作障礙防治提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)在山東省威海市文登區(qū)大水泊鎮(zhèn)大水泊村西洋參種植基地（37°10′N，122°13′E）進(jìn)行，該地處于山東半島東部，年平均氣溫13 ℃，年平均降水量767.8 mm，種植方式主要以一年兩作（冬小麥、夏玉米）為主。供試土壤類型為沙質(zhì)壤土。試驗(yàn)用地為2020年10月收獲后的西洋參參田。

1.2 材料與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

供試西洋參種質(zhì)由威海市文登傳福參業(yè)有限公司提供。供試藥劑98%棉隆微粒劑（土壤熏蒸劑）、高錳酸鉀（化學(xué)消毒）、微生物菌肥（有效活菌數(shù)≥2.0 億個(gè)/mL EM濃縮菌）均購自濟(jì)南兆龍科技發(fā)展有限公司。

選取當(dāng)年收獲西洋參的土壤作為試驗(yàn)用地，在種植西洋參之前對(duì)土壤進(jìn)行處理。試驗(yàn)共設(shè)計(jì)4組，即棉隆土壤熏蒸組（A組）、高錳酸鉀化學(xué)消毒組（B組）、微生物菌肥組（C組）、采參后未作處理的土壤為空白對(duì)照組（CK）。A組藥劑施用量為30 g/m2，熏蒸劑施用完成后立即覆蓋塑料薄膜，密閉熏蒸 30 d 后，揭膜晾曬30 d。B組使用噴霧器將0.1%高錳酸鉀均勻噴于土壤表面，然后立即用塑料薄膜覆蓋密封，曝曬7 d。C組施用菌肥用量為 6 mL/m2，一次性施入西洋參種植壟內(nèi)。每個(gè)處理3次重復(fù)，共12個(gè)小區(qū)，小區(qū)面積50 m2，每個(gè)小區(qū)間隔1 m緩沖區(qū)。除處理方式不同外，田間管理參照西洋參山東地區(qū)種植時(shí)間結(jié)合西洋參生長(zhǎng)習(xí)性進(jìn)行統(tǒng)一管理。

1.3 土壤樣品采集

土壤樣品于2021年10月，按照隨機(jī)、同質(zhì)、多點(diǎn)混合的原則，用不銹鋼采樣器從耕作層（0～20 cm）采集，過2 mm網(wǎng)格后，去除土壤中石頭等雜質(zhì)。每個(gè)處理組采集9份土壤樣品，混勻后，分別裝在3個(gè)無菌袋中，放在液氮中，-80 ℃ 保存。

1.4 土壤微生物PCR擴(kuò)增與高通量測(cè)序

對(duì)土壤樣品基因組DNA進(jìn)行抽提，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)抽提DNA，檢測(cè)DNA完整性后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增（TransStart Fastpfu DNA Polymerase），每個(gè)樣本3個(gè)重復(fù)，將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后，利用2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒（AXYGEN公司）切膠回收PCR產(chǎn)物，并利用Tris-HCl進(jìn)行洗脫；將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，使用熒光定量計(jì)檢測(cè)提取的DNA濃度，當(dāng)濃度檢測(cè)合格后，進(jìn)入下一步基因文庫的構(gòu)建。

以特異性引物338F（5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′）和806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）對(duì)土壤細(xì)菌16S V3～V4區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；選擇PCR擴(kuò)增通用引物ITS1F和ITS2R（ITS1F：5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′；ITS2R：5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）對(duì)土壤真菌ITS區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增。DNA片段的一端與引物堿基互補(bǔ)，以DNA片段為模板進(jìn)行PCR合成；經(jīng)過變性、退火，DNA片段的另一端隨機(jī)與附近的另外一個(gè)引物互補(bǔ)，形成“橋（bridge）”；經(jīng)過PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生DNA簇；DNA擴(kuò)增子線性化成為單鏈。加入改造過的DNA聚合酶和帶有4種熒光標(biāo)記的dNTP，每次循環(huán)只合成1個(gè)堿基；用激光掃描反應(yīng)板表面，讀取每條模板序列第1輪反應(yīng)所聚合上去的核苷酸種類；將“熒光基團(tuán)”和“終止基團(tuán)”進(jìn)行化學(xué)切割，恢復(fù)3′端黏性，繼續(xù)聚合第2個(gè)核苷酸；統(tǒng)計(jì)每輪收集到的熒光信號(hào)結(jié)果，獲知模板DNA片段的序列。構(gòu)建MiSeq文庫將其用于Illumina MiSeq PE300平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.5 數(shù)據(jù)分析

通過高通量測(cè)序得到的雙端序列經(jīng)拼接與質(zhì)控抽平得到優(yōu)化序列，采用Usearch（http：//www.drive5.com/usearch/）對(duì)優(yōu)化序列進(jìn)行OTU統(tǒng)計(jì)，對(duì)97%相似水平的用uparse（http：//www.drive5.com/uparse/）與RDP Classifier（https：//sourceforge.net/projects/）進(jìn)行OTU聚類、序列分類注釋；采用Mothur（https：//www.mothur.org/wiki/Down）進(jìn)行α多樣性分析［8］；采用Qiime計(jì)算β多樣性距離矩陣，然后用R語言（version 3.3.1）繪制可視化樹狀圖。運(yùn)用R語言配合vegan包進(jìn)行數(shù)據(jù)多樣性分析；用PICRUST軟件進(jìn)行土壤細(xì)菌功能預(yù)測(cè)［9］。

2 結(jié)果與分析

2.1 參田土壤細(xì)菌的組成及多樣性分析

運(yùn)用16S RNA、ITS對(duì)改良土壤中的細(xì)菌、真菌進(jìn)行測(cè)序，從12個(gè)土壤樣品中共獲得537 766個(gè)有效序列，平均長(zhǎng)度為414 bp。在97%的高通量序列相似性水平上進(jìn)行聚類，共檢測(cè)到2 759個(gè)OTU，其中C組的OTU數(shù)量高于其他3組（圖1-Ⅰ）。通過繪制土壤細(xì)菌稀釋曲線［10］發(fā)現(xiàn)，每個(gè)樣品的OTU稀釋曲線隨著讀取樣本量的增加趨近平緩，測(cè)序數(shù)據(jù)逐漸達(dá)到飽和（圖1-Ⅱ）。目前的測(cè)序量能夠覆蓋樣本中的絕大多數(shù)物種，測(cè)序數(shù)據(jù)可用于后續(xù)土壤細(xì)菌多樣性分析。由表1可知，3個(gè)處理組參田Shannon指數(shù)與CK相比數(shù)值均降低，C組的Simpson指數(shù)高于其他3組。與其他處理相比，CK組的Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)較高，但B組處理土壤Chao指數(shù)和ACE指數(shù)較低。

基于Bray-Curtis距離進(jìn)行分層聚類分析［11］，結(jié)果（圖1-Ⅲ）顯示，樣品可劃分為4個(gè)高度聚集群，說明不同改良處理土壤樣品中的細(xì)菌群落比較相似。此外，A組、B組、CK組的細(xì)菌群落基本聚集，而C組的土壤樣品與其他組分離?；贠TU豐度的非度量多維尺度分析（NMDS）［12］（stress=0.112）結(jié)果（圖1-Ⅳ）表明，A組、B組、CK組樣品高度相似并聚集，與C組的樣品明顯分離，與層次聚類分析的結(jié)果相似。

在97%的相似度水平上對(duì)測(cè)序土壤樣品OTU代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，參田土壤在細(xì)菌序列中共分出34門、104綱、230目、365科、643屬、1 189 種。在門水平上，將相對(duì)豐度小于1%的土壤細(xì)菌歸于其他（others），共得到34個(gè)類群，在相對(duì)豐度排名前10的物種中，各組群落結(jié)構(gòu)的豐富度差異明顯（圖2-Ⅰ），其中放線菌門（Actinobacteriota，26.23%～39.06%）為4組土壤中的優(yōu)勢(shì)菌門，其他優(yōu)勢(shì)菌門依次為變形菌門（Proteobacteria，10.62%～2.83%）、綠彎菌門（Chloroflexi，10.45%～17.08%）、酸桿菌門（Acidobacteriota，9.17%～15.48%）、厚壁菌門（Firmicutes，3.53%～13.92%）、芽單胞菌門（Gemmatimonadota，1.99%～4.56%）、Patescibacteria（1.48%～6.55%）、擬桿菌門（Bacteroidota，0.66%～4.98%）、WPS-2（0.56%～1.79%）、黏球菌門（Myxococcota，0.62%～1.09%），占各組序列的90%以上。其中3個(gè)土壤改良組的放線菌門、綠彎菌門、厚壁菌門的相對(duì)豐度均大于空白對(duì)照組，而變形菌門、Patescibacteria、擬桿菌門、WPS-2、黏球菌門的相對(duì)豐度在空白對(duì)照組土壤中高于其他3個(gè)處理組。

在屬水平上，共檢測(cè)到21個(gè)細(xì)菌屬（圖2-Ⅱ），平均相對(duì)豐度高于2%。由表2可知，CK組中norank_f__JG30-KF-AS9（3.96%）、Rhodanobacter（5.36%）、Candidatus_Solibacter（2.38%）、norank_f__norank_o__Saccharimonadales（2.37%）、norank_f__LWQ8（2.63%）、黏液桿菌屬（Mucilaginibacter，2.69%）等6個(gè)屬的相對(duì)豐度高于A、B、C組。A組中unclassified_o__Acidobacteriales（3.54%）、苔蘚桿菌屬（Bryobacter，2.23%）、Chujaibacter（3.32%）、orank_f__norank_o__Subgroup_2（2.05%）等4個(gè)屬的相對(duì)豐度較高。B組中norank_f__norank_o__Gaiellales（11.24%）、熱酸菌屬（Acidothermus，4.83%）、norank_f__Gemmatimonadacea（3.62%）、norank_f__SC-I-84（2.22%）、norank_f__norank_o__Elsterales（2.17%）、鏈霉菌屬（Streptomyces，2.01%）等6個(gè)屬的相對(duì)豐度較高。C組中節(jié)桿菌屬（Arthrobacter，11.80%）、芽孢桿菌屬（Bacillus，4.22%）、norank_f__norank_o__norank_c__KD4-96（2.73%）、鞘氨醇單胞菌（Sphingomonas，2.16%）、八疊球菌屬（Sporosarcina，2.88%）等5個(gè)屬的相對(duì)豐度較高。

2.2 改良參田土壤真菌的組成及多樣性分析

12個(gè)土壤樣品經(jīng)過質(zhì)量過濾后，共獲得 701 028 個(gè)真菌有效序列。真菌序列的平均長(zhǎng)度為232 bp，在97%的高通量序列相似性水平上進(jìn)行聚類，共獲得1 448個(gè)OTU，由圖3-Ⅰ可知，4組土壤真菌共享322個(gè)OTU，其中A組與空白對(duì)照組土壤真菌共享87個(gè)OTU，B組與空白對(duì)照組土壤真菌共享73個(gè)OTU，C組與空白對(duì)照組土壤真菌共享30個(gè)OTU。A組土壤真菌獨(dú)有142個(gè)OTU，B組土壤真菌獨(dú)有299個(gè)OTU，C組土壤真菌獨(dú)有91個(gè)OTU，CK組土壤真菌獨(dú)有93個(gè)OTU?；贠TU的所有樣品稀釋曲線均達(dá)到其漸近線（圖3-Ⅱ），表明本研究中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)足以分析真菌多樣性。

α多樣性分析結(jié)果（表3）表明，與空白對(duì)照組相比，3個(gè)處理組參田土壤的Shannon指數(shù)相對(duì)較高。此外，空白對(duì)照組土壤的Simpson指數(shù)高于其他土壤，而A組、C組土壤中的ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)低于CK組。分層聚類分析結(jié)果（圖3-Ⅲ）表明，A組、C組、CK組土壤樣品中的真菌群落更為相似且較為聚集，與B組中的真菌群落明顯分離。此外，在不同改良方法中，B組的參田土壤真菌群落成簇，與空白對(duì)照組土壤分離明顯，但B1、C3、CK2處理組土壤由于重現(xiàn)性差除外。基于OTU豐度進(jìn)行NMDS（stress=0.081），結(jié)果（圖3-Ⅳ）表明，所有樣品分為4類。A組、C組、CK組的土壤樣品高度相似并聚集，與B組土壤樣品分離。這一結(jié)果與層次聚類分析結(jié)果相似。

老參田土壤真菌在門水平上，將相對(duì)豐度小于1%的土壤真菌歸于others，檢測(cè)到的參田土壤真菌涵蓋6個(gè)類群、14門、44綱、97目、205科、369屬、577種。在所有樣品中，子囊菌門（Ascomycota，48.50%～58.49%）的相對(duì)豐度最高（圖4-Ⅰ），其次是擔(dān)子菌門（Basidiomycota，25.16%～38.19%）、被孢霉門（Mortierellomycota，7.04%～17.9%）、unclassified_k__Fungi（1.48%～5.26%）、羅茲菌門（Rozellomycota，0.23%～1.87%）、壺菌門（Chytridiomycota，0.43%～1.05%）。A組子囊菌門的相對(duì)豐度高于其他3組，而unclassified_k__Fungi、羅茲菌門的相對(duì)豐度明顯低于其他3組。CK組擔(dān)子菌門的相對(duì)豐度高于其他各組。

在屬水平上，共檢測(cè)到25個(gè)真菌屬（圖4-Ⅱ、表4）。不同改良方法處理下土壤中優(yōu)勢(shì)真菌群落的相對(duì)豐度不同，空白對(duì)照組土壤中有7個(gè)屬［Saitozyma、Hannaella、Neonectria、芽枝霉屬（Cladosporium）、附球霉屬（Epicoccum）、Tausonia、毛喙殼屬（Chaetomidium）］的相對(duì)豐度高于其他3個(gè)處理組。A組中Solicoccozyma、籃狀菌屬（Talaromyces）、Naganishia、鐮刀菌屬（Fusarium）、unclassified_o__Helotiales、unclassified_c__Sordariomycetes、Paraphaeosphaeria、Holtermanniella、毛殼菌屬（Chaetomium）、杯梗孢屬（Cyphellophora）的相對(duì)豐度均高于B組、C組、CK組。此外，被孢霉屬（Mortierella）、unclassified_k__Fungi、樹粉孢屬（Oidiodendron）、瓶毛殼屬（Lophotrichus）、unclassified_o__Trechisporales的相對(duì)豐度在B組中最高。青霉菌（Penicillium）、枝頂孢屬（Acremonium）、帚枝霉屬（Sarocladium）的相對(duì)豐度在C組中最高。

3 討論

土壤是微生物的生存環(huán)境，土壤微生物參與調(diào)節(jié)大部分的土壤活動(dòng)，尤其在土壤養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化和循環(huán)中發(fā)揮著重要作用［13-14］。在西洋參連作系統(tǒng)中，根系不斷向土壤中分泌相同類型的分泌物， 可能會(huì)促進(jìn)某些微生物物種在土壤中定殖，最終引起土壤微生物多樣性降低［15］。從土壤α多樣性分析結(jié)果可以看出，土壤改良可以增加參田土壤中細(xì)菌和真菌的相對(duì)豐度和多樣性。 β多樣性分析（NMDS）結(jié)果再次驗(yàn)證了不同土壤改良措施對(duì)參田土壤微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響。A組、B組、C組土壤中的細(xì)菌和真菌群落存在明顯差異，其中A組與CK組的土壤細(xì)菌、真菌群落結(jié)構(gòu)相似度較高，說明土壤熏蒸在短時(shí)間內(nèi)對(duì)土壤微生物有一定的滅活作用，隨著植物生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其作用隨著主要物質(zhì)的分解而逐漸失效。

土壤改良可顯著改善參田土壤細(xì)菌和真菌群落結(jié)構(gòu)。在細(xì)菌主要的21個(gè)屬中，C組芽孢桿菌屬的相對(duì)豐度顯著高于A組、B組和CK組，而芽孢桿菌是促進(jìn)植物生長(zhǎng)的細(xì)菌［4］，它不僅對(duì)番茄病原菌尖孢鐮刀菌和番茄早疫病病菌具有抑制作用，還可產(chǎn)生吲哚-3-乙酸和其他促生長(zhǎng)因子，促進(jìn)離體植物生長(zhǎng)［4］。B組、C組中的鞘氨醇單胞菌屬、熱酸菌屬的相對(duì)豐度明顯高于A組、CK組，其中鞘氨醇單胞菌屬細(xì)菌作為土壤中的生防菌，有助于抑制病原體入侵，而熱酸菌屬細(xì)菌可促進(jìn)土壤中的微生物分解有機(jī)質(zhì)、利用碳源［2］。對(duì)于真菌，所有處理中的優(yōu)勢(shì)屬為青霉菌屬、Tausonia、毛殼菌屬、鐮刀菌屬、芽枝霉屬等，其中青霉菌屬、Tausonia、毛殼菌是具有生物防治效果的有益真菌［11］，鐮刀菌屬、芽枝霉屬真菌是引起植物病害的主要植物病原菌［6］。鐮刀菌是被廣泛報(bào)道的主要土傳病害的病原菌，可引起西洋參褐色根腐病和枯萎病。由此可以看出，在土壤改良中，3種處理方法都有利于有益菌和生防菌相對(duì)豐度的增加，但各處理效果有所差異，其中C組最好，A組次之，B組效果較差，主要是由于C組用于改良土壤的微生物菌肥含有益生防菌，在西洋參再植過程中土壤中的青霉菌屬等的相對(duì)豐度增加，可促進(jìn)土壤微生物修復(fù)。土壤微生物的能量代謝，特別是礦質(zhì)養(yǎng)分代謝過程，對(duì)植物的生長(zhǎng)極為關(guān)鍵。同時(shí)，參與碳循環(huán)的微生物需通過高能量的代謝途徑，獲得生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［16］。

4 結(jié)論

西洋參連續(xù)再植經(jīng)過土壤修復(fù)對(duì)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)有一定的影響，不同處理方式與空白組之間存在明顯差異。對(duì)比空白組，在不同處理后的老參田土壤中試劑組細(xì)菌和真菌的多樣性指數(shù)相對(duì)較低。此外，不同處理方式短期處理連坐土壤西洋參再植后，處理組中潛在的植物病原真菌和有益細(xì)菌表現(xiàn)出協(xié)同增加的趨勢(shì)。相反，在不進(jìn)行處理的土壤中連續(xù)種植西洋參后，土壤中的有益細(xì)菌和真菌數(shù)量有所減少，推測(cè)這2類微生物之間可能存在相互制約的關(guān)系。結(jié)合棉隆、高錳酸鉀化學(xué)屬性推測(cè)，大田試驗(yàn)中棉隆土壤熏蒸、高錳酸鉀土壤消毒處理可能在土壤處理初期抑制或殺滅部分有害菌或有益菌，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)試劑揮發(fā)或者分解，其抑菌效果逐漸減弱。微生物菌肥可補(bǔ)充土壤有益菌群，微生物菌肥可改善重茬土壤菌群結(jié)構(gòu)及多樣性，結(jié)合檢測(cè)菌群豐度與空白組對(duì)比可推測(cè)隨著種植時(shí)間的延長(zhǎng)需要持續(xù)補(bǔ)充菌群以維持再植西洋參正常生長(zhǎng)?；谏鲜鼋Y(jié)果，推測(cè)再植后植物的生長(zhǎng)可能取決于致病微生物和有益微生物之間的競(jìng)爭(zhēng)。然而，致病菌和有益菌是否以及如何相互作用還需要進(jìn)一步進(jìn)行研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］Chen J，Zhou L T，Din I U，et al. Antagonistic activity of Trichoderma spp.against Fusarium oxysporum in rhizosphere of Radix pseudostellariae triggers the expression of host defense genes and improves its growth under long-term monoculture system［J］. Frontiers in Microbiology，2021，12：579920.

［2］孫子欣，蔡柏巖. 連作對(duì)土壤微生物菌群影響及修復(fù)研究進(jìn)展［J］. 作物雜志，2022（6）：7-13.

［3］Wu H M，F(xiàn)ang C X，Malacrinò A，et al. Editorial：rhizosphere conversation among the plant-plant microbiome-soil under consecutive monoculture regimes［J］. Frontiers in Microbiology，2022，13：1061427.

［4］Liu Q W，Wang S X，Li K，et al. Responses of soil bacterial and fungal communities to the long-term monoculture of grapevine［J］. Applied Microbiology and Biotechnology，2021，105（18）：7035-7050.

［5］Xu X J，Luo Q Y，Wei Q C，et al. The deterioration of agronomical traits of the continuous cropping of Stevia is associated with the dynamics of soil bacterial community［J］. Frontiers in Microbiology，2022，13：917000.

［6］劉麗娟，佟愛仔，秦佳梅. 天然闊葉林下不同年生人參根際微生物群落多樣性［J］. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2024，46（2）：246-254.

［7］游浩宇，陳大剛，徐開未，等. 不同改良措施對(duì)獼猴桃園土壤理化性質(zhì)變化的影響［J］. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，40（6）：826-837.

［8］楊艾華. 西洋參栽培過程中土壤微生物群落、養(yǎng)分和酶活性的變化及其相互關(guān)系［D］. 西安：陜西師范大學(xué)，2017.

［9］劉亮亮. 強(qiáng)還原土壤消毒防控土傳病害效果及其微生物學(xué)機(jī)制研究［D］. 南京：南京師范大學(xué)，2019.

［10］Semenov M V，Krasnov G S，Semenov V M，et al. Does fresh farmyard manure introduce surviving microbes into soil or activate soil-borne microbiota？［J］. Journal of Environmental Management，2021，294：113018.[HJ2mm]

［11］聶揚(yáng)眉，步連燕，陳文峰，等. 高量秸稈還田配施芽孢桿菌對(duì)沙化土壤細(xì)菌群落及肥力的影響［J］. 環(huán)境科學(xué)，2023，44（9）：5176-5185.

［12］付寬寬，王小兵，汪曉麗，等. 不同改良措施對(duì)設(shè)施芹菜根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響［J］. 中國(guó)瓜菜，202 5（8）：42-49.

［13］朱 怡，吳永波，安玉亭. 基于高通量測(cè)序的禁牧對(duì)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響［J］. 生態(tài)學(xué)報(bào)，2022，42（17）：7137-7146.

［14］李榮飛，楊仕品，王愛華，等. 不同調(diào)控措施對(duì)草莓連作大棚土壤微生物群落的影響［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，51（3）：197-204.

［15］閆 寧，戰(zhàn) 宇，謝昊臻，等. 不同改土方式對(duì)連作人參生長(zhǎng)發(fā)育的影響［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（6）：120-125.

［16］孫鵬洲，羅珠珠，李玲玲，等. 黃土高原紫花苜蓿種植對(duì)土壤反硝化細(xì)菌群落的影響［J］. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)（中英文），2023，31（1）：67-78.

收稿日期：2023-07-13

基金項(xiàng)目：中央轉(zhuǎn)移支付項(xiàng)目（編號(hào)：202219）；濟(jì)南市農(nóng)業(yè)應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新計(jì)劃（編號(hào)：CX202112）；山東省科技型中小企業(yè)創(chuàng)新能力提升工程（編號(hào)：2022TSGC1059）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃（編號(hào)：2021Q125）；中央本級(jí)重大增減支項(xiàng)目（編號(hào)：2060302）；國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（編號(hào)：2017YFC1701500、2017YFC1701502、2017YFC1701504）。

作者簡(jiǎn)介：郭瑞齊（1989—），女，山東菏澤人，碩士，助理研究員，從事中藥質(zhì)量與資源研究。E-mail：guoruiqi14@163.com。

通信作者：林慧彬，博士，研究員，從事中藥質(zhì)量與資源研究。E-mail：linhuibin68@163.com。