黃榆痔疾洗劑制備工藝研究

【摘 要】 目的：優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的制備工藝。方法：采用HPLC法測(cè)定黃榆痔疾洗劑鹽酸小檗堿的含量，以含量和干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)正交設(shè)計(jì)考察黃榆痔疾洗劑的煎煮時(shí)間、加水量、煎煮次數(shù)，優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝；

同時(shí)對(duì)黃榆痔疾洗劑進(jìn)行了濃縮工藝、純化工藝和成型工藝的考察。結(jié)果：黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝為加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h；濃縮采用減壓或常壓濃縮方式，離心除雜純化轉(zhuǎn)速5000 r·min-1，成型工藝加入0.3%的苯甲酸鈉獲得黃榆痔疾洗劑的最佳制備工藝。結(jié)論：優(yōu)選的制備工藝簡(jiǎn)單可行，具備科學(xué)性，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】 黃榆痔疾洗劑；制備工藝；鹽酸小檗堿

【中圖分類(lèi)號(hào)】R283

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）20-0061-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.20.zgmzmjyyzz202420013

Study on Preparation Technology of Huangyu Zhiji Lotion

PAN Haihua1 LI Zhiyong3 DENG Guizhu1，2* ZHANG Jianjun3 GUO Cai e1 ZHOU Guoyan1

1.Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Qingyuan 511500，China;

2.Engineering Technology Research Center of Fresh Medicine and National Medicine of Guangdong Province，Qingyuan 511500，China;

3.Guangdong Institute of Traditional Chinese Medicine Engineering Technology，Guangzhou 510095，China

Abstract：Objective To optimize the preparation process of Huangyu Zhiji Lotion.Method The content of berberine hydrochloride in Huangyu Zhiji Lotion was determined by HPLC.Taking the content and dry paste rate as evaluation indexes，the decocting time，water addition and decocting times of Huangyu Zhiji Lotion were investigated by orthogonal design，and the best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion was optimized.At the same time，the concentration process，purification process and molding process of Huangyu Zhiji Lotion were investigated.Result The best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion is to add water for three times，add 6 times of water each time，and decoct for 1 hour each time;Concentrating under reduced pressure or normal pressure，centrifugal impurity removal and purification speed of 5000 r·min-1，and adding 0.3% sodium benzoate to the molding process，the best preparation technology of Huangyu Zhiji Lotion was obtained.Conclusion The optimized preparation process is simple，feasible，scientific and suitable for industrial production.

Keywords：Huangyu Zhiji Lotion；Preparation Technology；Berberine Hydrochloride

痔瘡是一種發(fā)病率極高的肛腸疾病，在我國(guó)成年人中痔瘡發(fā)病率高達(dá)50.10%［1］。其發(fā)病原因往往與飲食習(xí)慣改變、生活習(xí)慣不良等相關(guān)［2］，痔瘡的癥狀一般表現(xiàn)為肛門(mén)瘙癢、肛門(mén)灼熱疼痛等，嚴(yán)重的還會(huì)伴有大便出血、內(nèi)痔脫垂等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［3］?，F(xiàn)代中醫(yī)辨證分型將痔分為風(fēng)傷腸絡(luò)型、濕熱下注型、氣滯血瘀型、脾虛氣陷型四種［4］。在近30年的我國(guó)痔瘡治療研究中，治療方式上更傾向于我國(guó)傳統(tǒng)的中醫(yī)療法和中草藥的使用［5］。而傳統(tǒng)的中醫(yī)療法以外治法為主，中醫(yī)外治法不僅可以減少藥物內(nèi)服對(duì)胃腸道的不良反應(yīng)，還能快速精準(zhǔn)的直接作用于患處，常用外治療法包括熏洗、藥物貼敷等。

我院黃榆痔疾方用于痔瘡屬濕熱下注證，原處方煎湯外洗，臨床療效較好，但存在煎煮、攜帶和使用不便的缺點(diǎn)。在中藥外用制劑中，洗劑具有順應(yīng)性好，可避免頻繁給藥，促進(jìn)藥物吸收，提高生物利用度的優(yōu)點(diǎn)，非常適合醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑生產(chǎn)。因此本處方選擇制備成洗劑，現(xiàn)對(duì)其制備、濃縮、純化、成型工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XS205型1/10萬(wàn)電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；TP-114型分析天平（深圳市君達(dá)時(shí)代儀器有限公司）；RE-2000A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）；DHG 9023A型電熱恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備），TG16-WS型高速臺(tái)式離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201212，純度91.0%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；所有藥材均購(gòu)自廣東眾康藥業(yè)有限公司，經(jīng)郭彩娥主任中藥師鑒定均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部各項(xiàng)規(guī)定；黃榆痔疾洗劑成品（批準(zhǔn)文號(hào)：粵藥制字Z20220006;批號(hào)：202308081）；甲醇（色譜純，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；甲醇（分析純，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；乙腈（色譜純，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；磷酸（色譜純，上海麥克林生化科技有限公司），超純水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸小檗堿測(cè)定方法建立

2.1.1 鹽酸小檗堿色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（40∶60） （每100 g含十二烷基磺酸鈉0.1 g）；柱溫25 ℃；1 mL/min流速；檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計(jì)不低于4000。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液，即得每1 mL含248 μg的鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 按處方比例，稱(chēng)取黃柏等十五味飲片共計(jì)285 g，加10倍量水煎煮二次，每次1 h，濾過(guò)，合并，濾液濃縮并定容至500 mL。精密吸取濃縮液2 mL，置25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例，稱(chēng)取除黃柏外的其他飲片255 g，加水煎煮二次，每次加10倍量水，煎煮1 h，濾過(guò)，合并濾液，常壓濃縮并定容至500 mL量瓶中，精密吸取濃縮液2 mL，照“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.1.5 專(zhuān)屬性考察 分別精密吸取對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下高效液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陰性對(duì)照?qǐng)D譜上沒(méi)有對(duì)應(yīng)的鹽酸小檗堿的峰，表明無(wú)干擾，如圖1所示。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)選煎煮工藝 采用正交試驗(yàn)法，以君藥黃柏中鹽酸小檗堿含量和干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)影響煎煮的加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)進(jìn)行優(yōu)選，因素水平和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及結(jié)果分別見(jiàn)表1和表2。

2.2.1 樣品的制備 按處方比例，稱(chēng)取黃柏、苦參和桃仁等飲片9份，每份285 g，照表2中正交試驗(yàn)水平方案煎煮，濾過(guò)，合并，濾液濃縮并定容至500 mL。

2.2.2 干膏得率的測(cè)定 精密吸取各樣品濃縮液20 mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，照干燥失重測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0831［6］103）測(cè)定，計(jì)算干膏得率。

計(jì)算公式：干膏得率%=［W/20xV/飲片重量］×100%。

其中W為20 mL濃縮液中干浸膏重量，V為定容體積。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 分別精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5 mL、1 mL，2 mL、3 mL和4 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，精密吸取10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下高效液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖。得標(biāo)淮曲線(xiàn)的回歸方程為Y=41.114X-66.161，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。表明鹽酸小檗堿在進(jìn)樣量124～992 ng之間線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.3 濃縮液鹽酸小檗堿的含量測(cè)定 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的濃縮液2 mL，參照“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下高效液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各濃縮液中鹽酸小檗堿的含量。

2.2.4 數(shù)據(jù)處理與工藝優(yōu)選 用綜合加權(quán)評(píng)分法，以干膏得率和黃柏中鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)，將各指標(biāo)成分的總量分別轉(zhuǎn)換為評(píng)分值，干膏得率的加權(quán)系數(shù)為0.4，鹽酸小檗堿含量的加權(quán)系數(shù)為0.6，將每次試驗(yàn)的各指標(biāo)成分評(píng)分值乘以相應(yīng)的加權(quán)系數(shù)后求和計(jì)算綜合評(píng)分值，以綜合評(píng)分值進(jìn)行正交試驗(yàn)分析和方差分析。結(jié)果表明，由直觀(guān)分析可知各因素主次影響為：煎煮次數(shù)（A）>加水量（B）>煎煮時(shí)間（C），最佳工藝組合為A3B3C3。方差分析表明，與空白組相比較，因素A（煎煮次數(shù)）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著的影響;因素B（加水量）、因素C（煎煮時(shí)間）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著的影響，考慮到縮短生產(chǎn)周期，以及節(jié)能降耗等綜合因素，故選擇煎煮工藝為：A3B1C1，即加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1 h。見(jiàn)表2和表3。

2.2.5 最佳煎煮工藝條件驗(yàn)證 按處方比例稱(chēng)取飲片3份，每份285 g，按照優(yōu)選工藝條件煎煮，濾過(guò)，合并濾液，濃縮并定容至500 mL，并按上述方法計(jì)算干膏得率及鹽酸小檗堿含量，結(jié)果表明，三次平行試驗(yàn)的鹽酸小檗堿含量平均為1.1935 mg/ mL，平均干浸膏得率為21.03%，綜合評(píng)分的平均值為95.21，與正交試驗(yàn)綜合評(píng)分最大值之間差異不大，提示所篩選的煎煮工藝條件基本穩(wěn)定。見(jiàn)表4。

2.3 濃縮工藝的研究 本實(shí)驗(yàn)對(duì)比常壓濃縮和減壓濃縮工藝，以鹽酸小檗堿保留率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選濃縮工藝。稱(chēng)取按照驗(yàn)證工藝條件煎煮的煎煮液二份，每份2000 g，分別采用常壓濃縮和減壓濃縮（真空度-0.085 MPa）進(jìn)行濃縮，各濃縮液分別濃縮至約180 g，稱(chēng)定重量，分別測(cè)定鹽酸小糪堿的含量，計(jì)算保留率。（鹽酸小檗堿保留率=濃縮液中的鹽酸小檗堿含量/煎煮液中的鹽酸小檗堿含量×100%。）結(jié)果發(fā)現(xiàn)減壓濃縮工藝的鹽酸小檗堿保留率略高于常壓濃縮工藝，二者之間無(wú)明顯差異，可根據(jù)生產(chǎn)設(shè)備條件，選擇常壓濃縮或是減壓濃縮。見(jiàn)表5。

2.4 純化工藝考察

2.4.1 純化方法的選擇 取相當(dāng)于飲片量427.5 g的濃縮液2份，分別采用離心除雜（依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)備參數(shù)及實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，選擇轉(zhuǎn)速：5000 r·min-1，離心時(shí)間15 min）和濾過(guò)除雜（200目），收集上清液，再分別加入芒硝30 g，加熱煮沸并保溫30 min，放冷，每份均加純化水調(diào)整至600 mL，裝入200 mL口服液體藥用高密度聚乙烯瓶中（n=3），放置7 d，觀(guān)察藥液沉淀情況并測(cè)定藥液總固物含量。結(jié)果表明，采用離心除雜與濾過(guò)除雜所產(chǎn)生的沉淀均可搖散，但離心除雜所產(chǎn)生的沉淀物量明品少于濾過(guò)除雜所產(chǎn)生的沉淀物量，因此，結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備條件，確定本品的除雜方式采用離心除雜。見(jiàn)表6。

2.4.2 離心除雜工藝參數(shù)的確定 按處方比例稱(chēng)取飲片1140 g，照前述確定的工藝條件提取、濃縮，濃縮液均分為4份，分別在轉(zhuǎn)速為3000 r·min-1、5000 r·min-1的條件下進(jìn)行離心，收集上清液，再分別加入芒硝20 g，加熱煮沸并保溫30 min，放冷，每份均加純化水調(diào)整至400 mL，裝入200 mL口服液體藥用高密度聚乙烯瓶中（n=2），放置7 d，觀(guān)察藥液沉淀情況并測(cè)定藥液總固物含量。結(jié)果表明，2種轉(zhuǎn)速除雜后的樣品在放置7 d后，藥液所產(chǎn)生的沉淀均可搖散。其中轉(zhuǎn)速為5000 r·min-1的除雜效果稍?xún)?yōu)于3000 r·min-1。因此，確定本品離心除雜轉(zhuǎn)數(shù)為5000 r·min-1。見(jiàn)表7。

2.5 成型工藝

2.5.1 防腐劑及其用量的選擇 為了保證制劑的質(zhì)量防止微生物生長(zhǎng)繁殖，應(yīng)加適量的防腐劑，本品藥液PH值在4.3左右，因此可以選擇苯甲酸鈉作為防腐劑，并結(jié)合抑菌效力檢查法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1121［6］151）進(jìn)行用量選擇。

2.5.2 供試品的制備 按處方比例稱(chēng)取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，加熱至沸并保溫30 min，放冷，加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶，作為供試品-1，備用。另按處方比例稱(chēng)取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，濾液加入苯甲酸鈉1.5 g（0.15%），加熱至沸并保溫30 min，放冷，加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶中，作為供試品-2，備用。另按處方比例稱(chēng)取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，濾液加入苯甲酸鈉3 g（0.3%），加熱至沸并保溫30 min，放冷，再加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶中，作為供試品-3，備用。

2.5.3 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn) 照抑菌效力檢查法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1121［6］151）項(xiàng)下方法檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3份供試品試驗(yàn)菌的回收率均不低于70%，表明培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定，見(jiàn)表8。

2.5.4 計(jì)數(shù)與結(jié)果 照抑菌效力檢查法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1121［6］151）項(xiàng)下方法檢查，測(cè)定樣品的抑菌效力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苯甲酸鈉為制成量的0.3%時(shí)，使用劑量及抑菌效力均符合有關(guān)規(guī)定，故確定加入苯甲酸鈉的用量為制成量的0.3%，見(jiàn)表9。

2.6 制備工藝的確定 經(jīng)過(guò)上述考察得到，黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝為加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h； 濃縮采用減壓或常壓濃縮方式，離心除雜純化轉(zhuǎn)速5000 r·min-1，成型工藝加入0.3%的苯甲酸鈉獲得黃榆痔疾洗劑的最佳制備工藝。制備工藝流程圖和樣品成品圖如圖2和圖3所示。

3 討論

黃榆痔疾外用方由黃柏、苦參和地榆等16味中藥組成。黃柏為君藥，小檗堿和黃柏堿為主要活性成分［7］。小檗堿具有抗炎、抗菌的作用，能促進(jìn)內(nèi)源性NO釋放，介導(dǎo)腸粘膜微血管內(nèi)皮依賴(lài)性舒張反應(yīng)，改善腸道局部微循環(huán)［8］。本研究使用正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的煎煮工藝，結(jié)果表明煎煮次數(shù)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響明顯，而加水量跟煎煮時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響不明顯。王抒等［9］通過(guò)對(duì)紅花等5種飲片在相同劑量煎煮后取汁與在相同體積煎煮后取汁發(fā)現(xiàn)，在劑量相等、品種不同的藥材中，質(zhì)地疏松容積大的飲片，煎煮后取汁量不一定少，即吸水量不一定大。本次試驗(yàn)結(jié)果分析原因可能是方中飲片吸水性不大，每次煎煮藥液都能快速達(dá)到濃度平衡，故煎煮時(shí)間加長(zhǎng)和增加加水量對(duì)結(jié)果基本沒(méi)什么影響。通過(guò)測(cè)定總固物含量來(lái)優(yōu)選純化方式，試驗(yàn)結(jié)果表明離心純化優(yōu)于濾過(guò)除雜，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本研究以小檗堿和總固物含量作為考察指標(biāo)，該研究方法專(zhuān)屬性好，技術(shù)成熟，結(jié)果可靠，可滿(mǎn)足提取考察工藝的需要。本研究不足之處，中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，采用小檗堿作為指標(biāo)專(zhuān)屬性好，但未對(duì)其他成分進(jìn)行測(cè)定，評(píng)價(jià)指標(biāo)過(guò)于單一，后期仍需對(duì)其他成分進(jìn)行深入研究。

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（收稿日期：2024-02-01 編輯：杜玲玉珊）

基金項(xiàng)目：

作者簡(jiǎn)介：潘海華（1986—），男，漢族，本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┕に囇芯颗c質(zhì)量評(píng)價(jià)。E-mail：306136555@qq.com

通信作者：鄧桂珠（1990—），女，漢族，碩士，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制研究。E-mail：876456340@qq.com