2量子點(diǎn)標(biāo)記抗體結(jié)合磁免疫單顆粒電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定人血清中卵巢癌生物標(biāo)志物CA125和HE4"/>
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    ZnO量子點(diǎn)和SnO2量子點(diǎn)標(biāo)記抗體結(jié)合磁免疫單顆粒電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定人血清中卵巢癌生物標(biāo)志物CA125和HE4

    2024-11-24 00:00:00曹玉嬪陳海平梁潔鄧必陽
    分析化學(xué) 2024年10期

    關(guān)鍵詞 氧化鋅量子點(diǎn);二氧化錫量子點(diǎn);糖類抗原125;人附睪分泌蛋白4;電感耦合等離子體質(zhì)譜;單顆粒分析

    卵巢癌是世界上最致命的婦科惡性腫瘤之一[1-2]。目前,臨床上卵巢癌的篩查方法包括盆腔檢查、超聲成像和測(cè)定糖類抗原125(Carbohydrate antigen 125, CA125)的含量[3]。人血清中生物標(biāo)志物濃度的升高可作為癌癥的預(yù)警,為癌癥的診斷提供依據(jù)。CA125 是一種由MUC16 基因編碼的糖蛋白,最早從卵巢癌125 單克隆抗體中檢出[1]。CA125 在正常人體組織中含量較低,在卵巢癌中含量較高,因此, CA125是診斷卵巢癌重要的生物標(biāo)志物[2]。人附睪分泌蛋白4(Human epididymis protein 4, HE4)是乳清酸性蛋白4-二硫鍵核心結(jié)構(gòu)域2(Whey-acidic-protein (WAP) four-disulfide core domain 2, WFDC2)基因的分泌性糖蛋白產(chǎn)物。HE4 在卵巢癌、肺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等多種腫瘤細(xì)胞系中均有高水平表達(dá),并在卵巢癌患者的血清中檢測(cè)到高水平的分泌型HE4。研究表明,聯(lián)合檢測(cè)血清中的HE4 和CA125 可提高卵巢癌的臨床診斷率,是診斷和鑒別良性和惡性卵巢腫瘤的良好指標(biāo)[4]。因此,同時(shí)檢測(cè)人血清中CA125 和HE4 的含量對(duì)卵巢癌的早期診斷具有重要意義。

    目前,已報(bào)道的用于檢測(cè)血清中CA125和HE4的方法有計(jì)算機(jī)斷層成像[5]、化學(xué)發(fā)光免疫分析法[6]、電化學(xué)免疫分析[7-8]、電化學(xué)發(fā)光[9-10]、酶聯(lián)免疫吸附分析[11]和激光誘導(dǎo)擊穿光譜[12]等。上述方法需要專業(yè)人員操作,而且檢測(cè)成本高。目前,探索簡單和低成本的檢測(cè)方法已成為生物標(biāo)志物研究的重要方向[13]。電感耦合等離子體質(zhì)譜法(Inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP-MS)[14]具有檢測(cè)靈敏度高、檢出限低、線性范圍寬、抗干擾能力強(qiáng)和具有多重分析能力等優(yōu)點(diǎn)[15-16],元素標(biāo)記結(jié)合ICP-MS近年來被廣泛應(yīng)用于測(cè)定RNA[17]、DNA[18]、蛋白質(zhì)[19-24]、細(xì)胞[25-27]和病毒[28-30]等。量子點(diǎn)(Quantumdots, QDs)由于其生物相容性良好、在ICP-MS 中靈敏度高和在生物樣品中背景低等特性,在ICP-MS 免疫分析中得到了廣泛關(guān)注。文獻(xiàn)報(bào)道用于ICP-MS 免疫分析的量子點(diǎn)有CdSe QDs[29]、CdTe QDs[31]、ZnSe QDs[22-23]、ZnS QDs[32]和MoS2 QDs[32]等。本研究組在前期工作中利用ZnSe QDs、MoS2 QDs 和ZnS QDs 標(biāo)記結(jié)合磁免疫單顆粒,采用ICP-MS 測(cè)定了人血清中的生物標(biāo)志物[22-23,32]。

    氧化鋅量子點(diǎn)(ZnO QD)以其獨(dú)特的光學(xué)、電學(xué)、抗菌活性及低成本、無毒、良好的生物相容性和長期環(huán)境穩(wěn)定性等特性而備受關(guān)注[33]。氧化錫量子點(diǎn)(SnO2 QD)具有卓越的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、高光敏性和優(yōu)異的電學(xué)性能,廣泛應(yīng)用于傳感器、細(xì)胞毒性和抗菌活性等研究[34]。四氧化三鐵磁納米粒子(Magnetic nanoparticles, MNPs)具有超順磁性,可將目標(biāo)分析物從復(fù)雜樣品中快速分離[35]。目前,利用ZnO QD 和SnO2 QD 標(biāo)記抗體結(jié)合磁免疫ICP-MS 檢測(cè)人血清中卵巢癌生物標(biāo)志物CA125 和HE4 的研究尚未見報(bào)道。

    本研究提出了一種高靈敏的ZnO QD 和SnO2 QD 標(biāo)記抗體結(jié)合磁免疫單顆粒ICP-MS 分析人血清中卵巢癌生物標(biāo)志物CA125 和HE4 的新方法。本方法將自主合成的氨基功能化的四氧化三鐵磁納米粒子(Amino modified magnetic nanoparticles, AMNPs)與CA125 和HE4 一抗結(jié)合,利用ZnO QD 和SnO2 QD 分別標(biāo)記CA125 和HE4 二抗,通過夾心免疫反應(yīng)形成磁免疫復(fù)合物,采用ICP-MS 測(cè)定Zn 和Sn 的信號(hào)頻數(shù),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)CA125 和HE4 的定量分析。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 儀器與試劑

    NexIon 300 X 型ICP-MS 儀、Spectrum Two FT-IR 紅外光譜儀(美國PerkinElmer 公司);Cary 60 紫外可見分光光度計(jì)(美國安捷倫科技有限公司);JEM-2100 型透射電子顯微鏡(日本電子株式會(huì)社);D8 Advance X 射線衍射儀(德國Bruker 公司);KQ5200B 超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);H1650-W 高速離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司);DZF-300 真空干燥箱(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);PHS-3C雷磁pH計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)。

    K2HPO4、KH2PO4、SnCl2·2H2O、HNO3、NaCl、硫脲、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS, 98%)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、對(duì)氨基苯甲酸(PABA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC,98%)和氨水(分析純,上海阿拉丁生化科技股份有限公司);牛血清白蛋白(BSA,美國Sigma-Aldrich 公司);親和純山羊抗兔免疫球蛋白(Affinipure goat anti-rabbit IgG)和親和純山羊抗小鼠免疫球蛋白(Affinipure goat anti-mouse IgG)(武漢博士德生物工程有限公司);人附睪分泌蛋白4 多克隆抗體(HE4polyclonal antibody)、糖類抗原125 單克隆抗體(CA125 monoclonal antibody,武漢三鷹生物技術(shù)有限公司);CA125 和HE4(美國MedChemExpress 公司);KCl(分析純,山東科源生化有限公司);KOH、HCl、無水醋酸鋅、甲酸、檸檬酸、乙酸、甲醇和乙醇(分析純,四川西隴科學(xué)有限公司);質(zhì)譜調(diào)諧液分別為1 ng/mL 的Be、Mg、In、U 和Ce 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(美國PerkinElmer 公司);氦氣(99.999%,廣西瑞達(dá)氣體有限公司(南寧))。實(shí)驗(yàn)用水為超純水(18.2 MΩ·cm)。除特別注明外,磷酸鹽緩沖溶液(PBS, pH=7.4)的濃度均為0.01 mol/L, BSA 濃度均為1%。血清樣本由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供,相關(guān)研究經(jīng)過相關(guān)倫理道德委員會(huì)批準(zhǔn),志愿者知情同意。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 AMNPs的制備

    根據(jù)本研究組前期工作制備MNPs[21]。稱取0.5 g MNPs 分散在100 mL 乙醇-水(1∶1, V/V)溶液中,超聲30 min,轉(zhuǎn)入250 mL 三頸燒瓶中;在持續(xù)攪拌下加入2 mL APTES,在N2 保護(hù)條件下于60 ℃加熱2 h。反應(yīng)結(jié)束后,冷卻至室溫,通過外部磁場(chǎng)分離,用水和無水乙醇交替洗滌數(shù)次,直至溶液的pH 值為中性,即得到AMNPs。在2000 Pa 壓力下于70 ℃干燥10 h, 在干燥器中保存,備用。

    1.2.2 ZnO QD的制備

    參考文獻(xiàn)[33]的方法并稍作修改合成ZnO QD(圖1A)。將含1 mol/L KOH 的甲醇溶液逐滴加入到0.1 mol/L 醋酸鋅的甲醇溶液中,磁力攪拌1 h 以控制顆粒的生長;將0.25 mL APTES 逐滴加入到上述溶液中,再加入0.5 mL 超純水,使其發(fā)生溶膠凝膠反應(yīng),得到ZnO QD。離心,用甲醇和水交替洗滌3 次,將獲得的膠體溶于水介質(zhì)中。

    1.2.3 SnO2 QD的制備

    參考文獻(xiàn)[36-37]的方法并稍作改進(jìn)合成SnO2 QD(圖1B)。稱取1.3539 g SnCl2·2H2O 和0.0457 g 硫脲,用30 mL 水超聲分散10 min,磁力攪拌24 h,再轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中,于200 ℃下反應(yīng)12 h,離心,得到SnO2 QD。將上述合成的SnO2 QD 加入到30 mL PABA 的乙醇溶液中, 50 ℃下超聲30 min, 再置于60 ℃熱水浴中保持2 h;離心,用95%乙醇洗滌3次,在60 ℃下真空干燥2 h, 得到功能化的SnO2 QD。

    1.2.4 磁免疫反應(yīng)

    取0.50 mL ZnO QD 分散在5 mL PBS 溶液中,加入12.5 mg EDC 和12.5 mg NHS,反應(yīng)1 h 后離心,棄去上清液,用PBS 溶液洗滌3次;加入20 μL CA125-Ab2(Affinipure goat anti-mouse IgG),攪拌反應(yīng)2h,離心;用PBS溶液洗滌3次,除去未反應(yīng)的CA125-Ab2,得到CA125-Ab2-ZnO QD。加入BSA以封閉非特異性吸附位點(diǎn)(圖1C),離心,用PBS 溶液洗滌3 次,于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    取0.50 mL SnO2 QD 分散在5 mL PBS 中,加入12.5 mg EDC 和12.5 mg NHS,反應(yīng)1 h 后離心,棄去上清液,用PBS 溶液洗滌3 次;加入20 μL HE4-Ab2(Affinipure goat anti-rabbit IgG),攪拌下反應(yīng)2 h,離心,用PBS溶液洗滌3次,除去未反應(yīng)的HE4-Ab2,得到HE4-Ab2-SnO2 QD。加入BSA 以封閉非特異性吸附位點(diǎn)(圖1D),離心,用PBS溶液洗滌3次,于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    稱取15 mg AMNPs 分散在10 mL PBS 溶液中,超聲0.5 h, 加入50 mg EDC 和50 mg NHS,反應(yīng)1 h;磁分離,用PBS 溶液洗滌3 次;將AMNPs 分散于2 mL PBS 溶液中,分別加入10 μL CA125-Ab1 和HE4-Ab1,攪拌反應(yīng)2 h,磁分離, PBS 溶液洗滌3 次,除去未反應(yīng)的CA125-Ab1 和HE4-Ab1,得到AMNPs-Ab1。加入400 μL BSA 反應(yīng)1 h,以封閉非特異性吸附結(jié)合位點(diǎn)(圖1E)。磁分離,用PBS 溶液洗滌3 次,于4 ℃保存?zhèn)溆?。移?00 μL AMNPs-Ab1,分別加入5 μL CA125 和HE4 或血清樣品,反應(yīng)80 min,引發(fā)抗原抗體特異性結(jié)合;磁分離,用PBS 溶液洗滌3 次,得到AMNPs-Ab1-CA125/HE4 復(fù)合物。分別加入100 μL CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD,反應(yīng)60 min,形成雙抗夾心AMNPs-Ab1-CA125/HE4-Ab2-ZnO QD/SnO2 QD 復(fù)合物。磁分離,用PBS 溶液洗滌3 次。以100 μL 1 mol/L 檸檬酸作為洗脫劑,超聲10 min,磁分離,收集洗脫液。移取10 μL 洗脫液,用PBS 溶液稀釋至1 mL,用于ICP-MS測(cè)試;通過空白實(shí)驗(yàn)消除樣品中Zn 的干擾。

    1.2.5 ICP-MS 儀器的分析條件

    射頻功率為1500 W,霧化氣流速為1.0 L/min,輔助氣流速為0.8 L/min,等離子體氣流速為14 L/min,RPq 值為0.45,駐留時(shí)間為0.1 ms,氦氣碰撞氣流速為1.2 mL/min,監(jiān)控元素為64Zn 和120Sn。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 MNPs 和AMNPs的表征

    采用傅里葉變換紅外(Fourier transform infrared, FT-IR)光譜和透射電子顯微鏡(Transmission electronmicroscopy, TEM)對(duì)自行合成的MNPs 和AMNPs 進(jìn)行表征(圖2)。如圖2A 紅外光譜中a 譜線所示,在587 cm–1 處為Fe—O 的特征吸收峰, 1632 和3427 cm–1 處分別為—OH 的彎曲振動(dòng)和伸縮振動(dòng)的吸收峰,說明成功合成了MNPs。如圖2A 中b 譜線所示,由于Fe—O—Si 鍵的特征吸收峰與Fe—O 鍵的吸收峰發(fā)生重疊,因此在598 cm–1 處形成了新的吸收峰;827 cm–1 處為—NH2 彎曲振動(dòng)吸收峰;1051 cm–1 處的峰為Si—O—Si 的對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰;位于1632 cm–1 處的譜峰歸屬于—OH 的彎曲振動(dòng);2973 和3433 cm–1處的峰分別為—CH2—的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)和N—H 伸縮振動(dòng)峰,表明氨基已成功修飾在MNPs 上。圖2B和2C 分別為MNPs 和AMNPs 的TEM 圖, MNPs 和AMNPs 的平均粒徑分別為8.08 和9.28 nm。

    2.2 ZnO QD的表征

    分別采用紫外可見吸收光譜、FT-IR 光譜、X 射線衍射(X-ray diffraction, XRD)和TEM 表征自行合成的ZnO QD。如圖3A 所示, ZnO QD 在322 nm 處有紫外吸收峰。采用FT-IR 表征ZnO QD,如圖3B 的譜線a 所示, 2923 cm–1 處的譜峰對(duì)應(yīng)C—H 鍵的不對(duì)稱伸縮振動(dòng);1108 cm–1 處的譜峰歸屬于Si—O—Si基團(tuán);1382 cm–1 處的譜峰是由C—H 鍵振動(dòng)產(chǎn)生;448 cm–1 處的譜峰由Zn—O 的伸縮振動(dòng)引起;3437和1632 cm–1 處的譜峰由N—H 伸縮振動(dòng)引起。此結(jié)果表明, APTES 成功修飾在ZnO QD 表面。如圖3C的譜線a 所示, ZnO QD 的衍射峰位于31.86°、34.81°、36.3°、47.48°、56.66°、62.89°和68.16°處,分別對(duì)應(yīng)(100)、(002)、(101)、(102)、(110)、(103)和(112)晶面,說明成功合成了ZnO QD。ZnO QD 的TEM 圖如圖3D 所示,可見ZnO QD 的分散性較好,平均粒徑為4.07 nm(圖3D 插圖)。

    2.3 SnO2 QD的表征

    分別采用FT-IR、XRD 和TEM 表征自行合成的SnO2 QD。如圖3B 紅外光譜中的譜線b 所示,633 cm–1 處的譜峰對(duì)應(yīng)Sn—O—Sn 基團(tuán);1632 和1387 cm–1 處的譜峰分別對(duì)應(yīng)—COO–的不對(duì)稱和對(duì)稱伸縮;1177 和3432 cm–1 處的譜峰分別對(duì)應(yīng)C—H 和N—H 的伸縮振動(dòng),說明PABA 成功包裹在SnO2 QD表面。如圖3C 的XRD 譜圖的譜線b 所示, SnO2 QD 的位于2θ為26.61°、33.89°、37.94°、51.79°和65.94°處的衍射譜峰,分別對(duì)應(yīng)(110)、(101)、(200)、(211)和(301)晶面。圖3E 的TEM 圖顯示,合成的SnO2 QD 較分散,其平均粒徑為2.1 nm(圖3E 插圖)。

    2.4 磁免疫復(fù)合物的表征

    采用TEM 表征合成的AMNPs-Ab1-CA125/HE4-Ab2-ZnO QD/SnO2 QD 復(fù)合物。如圖3F 所示,磁免疫反應(yīng)后, AMNPs 表面有明顯的ZnO QD/SnO2 QD 量子點(diǎn)分布(圖3F 中紅色箭頭指示),表明AMNPs-Ab1-CA125/HE4-Ab2-ZnO QD/SnO2 QD 復(fù)合物成功合成。

    2.5 磁免疫反應(yīng)條件的優(yōu)化

    2.5.1 封閉試劑BSA 體積的選擇

    非特異性吸附會(huì)干擾免疫反應(yīng)的準(zhǔn)確性,因此在免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)前,本研究采用BSA 封閉非特異性吸附位點(diǎn),實(shí)驗(yàn)操作流程見圖1。收集磁免疫反應(yīng)吸附后的殘留液,考察不同體積的BSA 對(duì)免疫反應(yīng)的影響。由圖4A 可知,隨著BSA 體積增加,殘留液中Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)逐漸增大,當(dāng)BSA 體積大于400 μL 以上,殘留液中Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)保持不變。因此,選擇BSA 體積為400 μL。

    2.5.2 AMNPs-Ab1 的體積及孵育時(shí)間的選擇

    固定AMNPs-Ab1 的濃度為2.5 μg/mL, CA125 和HE4 的體積均為5 μL, CA125 和HE4 的濃度分別為200 U/mL 和100 ng/mL, CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 的體積均為100 μL,標(biāo)記時(shí)間為1 h,考察AMNPs-Ab1 體積變化對(duì)Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, Zn 和Sn 的信號(hào)頻數(shù)隨著AMNPs-Ab1 體積增加而逐漸增大,當(dāng)AMNPs-Ab1 體積大于300 μL 時(shí), Zn 和Sn 的信號(hào)頻數(shù)逐漸下降(圖4B)。因此,選擇AMNPs-Ab1 體積為300 μL。

    孵育時(shí)間過短會(huì)導(dǎo)致抗原抗體反應(yīng)不充分,過長則會(huì)增加非特異性吸附。本研究考察了AMNPs-Ab1 和CA125、HE4 的孵育時(shí)間對(duì)Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)的影響,結(jié)果表明, Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)隨著孵育時(shí)間延長而逐漸增大,當(dāng)孵育時(shí)間大于80 min 時(shí), Zn 和Sn 的信號(hào)頻數(shù)變化不大,說明孵育80 min 時(shí)免疫反應(yīng)完全(圖4C)。因此,選擇AMNPs-Ab1 和CA125、HE4 的孵育時(shí)間為80 min 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    2.5.3 CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD的體積及孵育時(shí)間的選擇

    為了保證CA125-Ab2-ZnO QD、HE4-Ab2-SnO2 QD 與AMNPs-Ab1-CA125/HE4 完全標(biāo)記,需要加入過量的CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD。固定CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 濃度均為5 μg/mL,考察CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 的體積變化對(duì)Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)的影響。由圖5A 可知, Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)隨著CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 的體積增加而逐漸增大,當(dāng)CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 的體積大于100 μL 時(shí), Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)變化較小。因此,選擇CA125-Ab2-ZnO QD 和HE4-Ab2-SnO2 QD 體積為100 μL。

    考察了CA125-Ab2-ZnO QD、HE4-Ab2-SnO2 QD 和AMNPs-Ab1-CA125/HE4 的孵育時(shí)間對(duì)Zn 和Sn信號(hào)頻數(shù)的影響。如圖5B 所示, Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)隨著孵育時(shí)間延長而逐漸增大,當(dāng)孵育時(shí)間大于60 min 時(shí), Zn 和Sn 信號(hào)頻數(shù)保持不變,說明孵育60 min 時(shí)免疫反應(yīng)已經(jīng)完全。因此,選擇CA125-Ab2-ZnO QD、HE4-Ab2-SnO2 QD 和AMNPs-Ab1-CA125/HE4 的孵育時(shí)間為60 min。

    2.5.4 洗脫劑的選擇

    分別考察了1 mol/L HNO3、甲酸、乙酸和檸檬酸溶液對(duì)免疫復(fù)合物的洗脫效果。由圖5C 可見,與其它洗脫劑相比,檸檬酸對(duì)免疫復(fù)合物AMNPs-Ab1-CA125/HE4-Ab2-ZnO QD/SnO2 QD 中的ZnO QD 和SnO2 QD 的洗脫效果較好。因此,選擇檸檬酸作為洗脫劑。

    2.6 分析性能考察

    在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,利用本方法分別檢測(cè)不同濃度的CA125 和HE4。結(jié)果表明,在一定濃度范圍內(nèi), 64Zn 和120Sn 的信號(hào)頻數(shù)(y)分別與CA125 和HE4 的濃度(x)呈線性關(guān)系。其中, CA125 的線性檢測(cè)范圍為0.02~200 U/mL,線性方程為y=3.54x+9.22(R2=0.9994),檢出限為0.004 U/mL(3σ),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.2%(n=6);HE4 的線性檢測(cè)范圍為0.02~100 ng/mL,線性方程為y=5.59x+13.77(R2=0.9995),檢出限為0.006 ng/mL(3σ), RSD 為3.5%(n=6)。與其它檢測(cè)CA125 和HE4 的方法相比(表1),本方法的檢出限優(yōu)于文獻(xiàn)[8-9,19]報(bào)道的結(jié)果。

    2.7 實(shí)際樣品分析

    為了驗(yàn)證本方法的可行性,將本方法應(yīng)用于人血清樣品中CA125 和HE4 的測(cè)定。本研究所用血清樣品來自廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,未經(jīng)過任何預(yù)處理直接按照上述的磁免疫分析方法進(jìn)行檢測(cè),并于3 d 內(nèi)完成分析,檢測(cè)結(jié)果見表2,加標(biāo)回收率為95.0%~102.0%, RSD 在2.2%~3.4%之間。

    3 結(jié)論

    建立了一種高靈敏的ZnO QD 和SnO2 QD 標(biāo)記抗體結(jié)合ICP-MS 單顆粒模式分析人血清中卵巢癌生物標(biāo)志物CA125 和HE4 的新方法。本方法利用ZnO QD 和SnO2 QD 分別標(biāo)記CA125 和HE4 二抗,采用ICP-MS 測(cè)定Zn 和Sn 的信號(hào)頻數(shù),進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)CA125 和HE4 的定量分析。本方法具有檢測(cè)靈敏度高和試劑消耗少等優(yōu)點(diǎn),適用于人血清中CA125 和HE4 含量的測(cè)定。本方法在提取樣品前不需要預(yù)處理,為生物標(biāo)志物的多重測(cè)定提供了技術(shù)參考,具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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