不同強(qiáng)度UVA對(duì)銀杏雜交子代生理生化的影響

關(guān)鍵詞：銀杏雜交子代；UVA；黃酮

中圖分類號(hào)：S687.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1003—8981（2024）03—0058—11

銀杏Ginkgo biloba L. 是我國(guó)特有的孑遺植物，素有“活化石”的美稱，銀杏藥用價(jià)值極高，銀杏葉中含有豐富的黃酮類化合物，對(duì)治療心腦血管疾病有很好的效果[1]。金葉銀杏是普通銀杏的一個(gè)芽變品種，葉片在春季即為金黃色，夏季轉(zhuǎn)綠，秋季再變黃，具有較好的觀賞價(jià)值[2]。我國(guó)在銀杏藥源方面擁有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，但是我國(guó)銀杏葉提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與歐美國(guó)家還存在一定的差距[3]，因此采取一定的措施提高銀杏總黃酮含量具有重要意義。

黃酮類化合物是植物體內(nèi)最重要的次生代謝物之一，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育以及抗逆性方面有至關(guān)重要的作用[4]。類黃酮的合成首先要經(jīng)過(guò)苯丙氨酸代謝途徑，苯丙氨酸解氨酶（PAL）、肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）和4- 香豆酸輔酶A 連接酶（4CL）是苯丙氨酸代謝途徑的關(guān)鍵酶，對(duì)類黃酮前體物質(zhì)的合成起著關(guān)鍵作用[5]。在逆境條件下，植物通過(guò)增加苯丙氨酸代謝途徑相關(guān)酶的基因表達(dá)，促進(jìn)次生代謝產(chǎn)物的合成，以保護(hù)自身免受損傷[6]。

光是植物進(jìn)行光合作用獲得生長(zhǎng)所需能量的來(lái)源，光強(qiáng)和光質(zhì)的變化都會(huì)對(duì)植物的生長(zhǎng)生理產(chǎn)生一定的影響，植物通過(guò)光合作用產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是黃酮類次生代謝物合成的基礎(chǔ)[7]。目前大多數(shù)研究都是圍繞紅藍(lán)光等可見(jiàn)光對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響展開，而對(duì)于短波紫外光研究較少。紫外線輻射通常被認(rèn)為是一種非生物脅迫，植物可以利用抗氧化酶，如超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化物酶（POD）來(lái)清除活性氧（ROS），類黃酮等抗氧化劑也可以快速合成以防止活性氧引起的細(xì)胞損傷[8]。He 等[9] 研究表明在250 μmol·m^-2·s^-1 白光下添加20 μmol·m^-2·s^-1UVA 可以顯著提高芥藍(lán)總黃酮含量，郭佩瑤等[10]研究發(fā)現(xiàn)添加UVA 有利于紅花檵木總黃酮含量的提高。目前關(guān)于補(bǔ)充UVA 對(duì)銀杏的影響的研究較少，并且對(duì)于金葉銀杏的研究多以嫁接苗為主，實(shí)生苗鮮有人研究。本研究以此為出發(fā)點(diǎn)，在相同強(qiáng)度白光下增加不同強(qiáng)度的UVA 紫外光，探究不同強(qiáng)度紫外線（UVA）對(duì)銀杏雜交子代黃酮積累的影響，為銀杏的栽培管理提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2021年9月20日， 采集南京林業(yè)大學(xué)（118°58′ ～ 119°58′E，31°37′ ～ 32°19′N）下蜀林場(chǎng)銀杏全同胞雜交子代種子，母本為嫁接的湖北安陸的金葉銀杏，父本為南京林業(yè)大學(xué)的一株健康的綠葉銀杏，將種子剝?nèi)ネ夥N皮后在4℃低溫冷藏室中進(jìn)行沙藏。次年3月20日，種子用清水浸泡48 h，然后放置在25 ℃光照培養(yǎng)箱中催芽，發(fā)芽后分化為金葉和綠葉兩種表型，分別種植在無(wú)紡布袋中，基質(zhì)為泥炭- 蛭石- 珍珠巖（體積比1︰1︰1），在自然條件下生長(zhǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2023年6月1日，選擇生長(zhǎng)一致、表現(xiàn)良好的銀杏雜交子代幼苗，放在人工氣候室適應(yīng)一個(gè)月后進(jìn)行光質(zhì)試驗(yàn)。以白光（300 μmol·m^-2·s^-1）作為對(duì)照，分別在相同強(qiáng)度白光下添加2、4、6 根紫外UVA 燈管（395 ～ 405 nm）， 紫外光UVA的強(qiáng)度分別是20 μmol·m^-2·s^-1、40 μmol·m^-2·s^-1 和60 μmol·m^-2·s^-1，三個(gè)處理分別用UVA-2、UVA-4和UVA-6 表示，對(duì)照記為CK。人工氣候室光照周期為光照12 h，黑暗12 h，培養(yǎng)的晝夜溫度分別為25±1 ℃和20±1 ℃。每處理組各選擇18 株金葉和18 株綠葉銀杏，進(jìn)行完全隨機(jī)試驗(yàn)，每個(gè)處理設(shè)3 個(gè)生物重復(fù)，不同強(qiáng)度UVA 處理30 d，每10 d 采一次樣測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。LED 紫外燈由廈門三農(nóng)匯光電科技有限公司提供，用OHSP-350UV 光譜儀（杭州虹譜光色科技有限公司）分別測(cè)定不同強(qiáng)度UVA 處理的光譜圖，如圖1 所示。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1可溶性糖、可溶性蛋白含量的測(cè)定

可溶性糖采用蒽酮比色法測(cè)定，可溶性蛋白采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定[11]。

1.3.2 SOD、POD酶活性

SOD采用氮藍(lán)四唑（NBT）光化還原法測(cè)定，POD 采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定[11]。

1.3.3 PAL、C4H、4CL 酶活性的測(cè)定

采用陳雷等[12] 的方法測(cè)定。

1.3.4 總黃酮含量、ABTS 以及DPPH 自由基清除率測(cè)定

總黃酮含量參考謝寶東等[13] 的方法，ABTS自由基清除率參考郭晉鳴等[14] 的方法，DPPH 自由基清除率參考李姣娟等[15] 的方法。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并用SPSS24.0 軟件中的Duncan 法進(jìn)行方差分析、多重比較和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代可溶性糖含量的影響

金葉銀杏的可溶性糖含量隨著UVA 強(qiáng)度的增大以及處理時(shí)間的增加而呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)（圖2）。同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下可溶性糖含量存在顯著差異（P ＜ 0.05），表現(xiàn)為UVA-6 ＞ UVA-4 ＞UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA 處理30 d 的可溶性糖含量明顯大于處理10 d 和20 d 的，UVA-6 處理30 d 的可溶性糖含量最高，為4.49 mg·g^-1。綠葉銀杏的可溶性糖含量隨著UVA 強(qiáng)度的增大也呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下可溶性糖含量存在顯著差異（P ＜ 0.05），具體表現(xiàn)為UVA-6 ＞ UVA-4 ＞ UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA處理20 d 和30 d 的可溶性糖含量明顯大于處理10 d 的，UVA-6 處理30 d 可溶性糖含量最高，為5.43 mg·g^-1?？偟膩?lái)看，綠葉銀杏的可溶性糖含量高于金葉銀杏的可溶性糖含量。

2.2 不同UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代可溶性蛋白含量的影響

金葉銀杏的可溶性蛋白含量隨著UVA 強(qiáng)度的增大以及處理時(shí)間的增加而呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)（圖3）。同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下可溶性蛋白含量存在極顯著差異（P ＜ 0.01），表現(xiàn)為UVA-6 ＞ UVA-4 ＞ UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），處理30 d 的可溶性蛋白含量明顯大于處理10 d 和20 d，UVA-6 處理30 d 的可溶性蛋白含量最高，為5.46 mg·g^-1。綠葉銀杏的可溶性蛋白含量隨著UVA強(qiáng)度的增大和處理時(shí)間的增加也呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下可溶性蛋白含量存在顯著差異（P ＜ 0.05），具體表現(xiàn)為UVA-6 ＞UVA-4 ＞ UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），處理20 d 和30 d的可溶性蛋白含量明顯大于處理10 d 的，UVA-6處理30 d 可溶性蛋白含量最高，為6.24 mg·g^-1?？偟膩?lái)看，綠葉銀杏的可溶性蛋白含量高于金葉銀杏。

2.3 不同強(qiáng)度UVA 對(duì)銀杏雜交子代抗氧化酶活性的影響

2.3.1 不同UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代SOD酶活性的影響

SOD酶活性可以反映植物受脅迫的程度。如圖4 所示，金葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度處理下SOD 酶活性差異顯著（P ＜ 0.05）， 隨著UVA強(qiáng)度的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，UVA-4 處理20 d 時(shí)SOD 酶活性最大，為633.72 U·g-1。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜0.05），隨著處理時(shí)間的增加，SOD 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，UVA-4 和UVA-6 處理20 d的SOD 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下SOD 酶活性存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大SOD 酶活性呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK，UVA-6 處理30d 的SOD 酶活性最大，為875.12 U·g^-1。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），處理30 d 的SOD 酶活性明顯大于處理10 d 和20 d。

2.3.2 不同UVA強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代POD 酶活性的影響

如圖5 所示，金葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度處理下POD 酶活性差異顯著（P＜0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，UVA-4處理20 d 時(shí)POD 酶活性最大，為935.45 U·g^-1。隨著處理時(shí)間的增加，UVA-4 和UVA-6 處理POD酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，處理20 d 的POD 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下POD 酶活性存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，POD 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA 在不同時(shí)間也存在顯著差異（P＜0.05），UVA-4 和UVA-6 處理20 d 的POD 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的，其中UVA-4 處理20 d 的POD 酶活性最大，為840.00 U·g^-1。

2.4 不同UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代黃酮代謝相關(guān)酶活性的影響

PAL 、C4H 和4CL 是類黃酮合成途徑的關(guān)鍵酶。金葉銀杏PAL 酶活性在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下差異顯著（P ＜ 0.05），由表1 可見(jiàn)，隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，銀杏PAL 酶活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK。同一強(qiáng)度UVA 處理在不同時(shí)間也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA-4和UVA-6 處理20 d 的PAL 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的，UVA-4 處理20 d 的PAL 酶活性最大，為35.57 U·g^-1。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下PAL 酶活性存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，PAL 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK。PAL 酶活性在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P＜0.05），UVA-4 和UVA-6 處理20 d 的PAL 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的，UVA-4 處理20 d 的PAL酶活性最大，為45.34 U·g^-1。金葉銀杏PAL 酶活性總的來(lái)看低于綠葉銀杏。

金葉銀杏C4H 酶活性在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下差異顯著（P ＜ 0.05）， 隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，C4H 酶活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞CK。隨著處理時(shí)間的增加，C4H 酶活性差異不顯著，UVA-4 處理20 d 的C4H 酶活性最大，為162.95 U·g^-1。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA處理下C4H 酶活性存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，C4H 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞UVA-2 ＞ CK。C4H 酶活性在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA-4 和UVA-6 處理20 d 的C4H 酶活性明顯大于處理10 d和30 d 的，UVA-4 處理20 d 的C4H 酶活性最大，為193.77 U·g^-1。金葉銀杏C4H 酶活性總的來(lái)看低于綠葉銀杏。

金葉銀杏4CL 酶活性在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下差異顯著（P ＜ 0.05）， 隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，4CL 酶活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞CK。4CL 酶活性在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA-4 和UVA-6 處理的4CL 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，UVA-4處理20 d 的4CL 酶活性最大，為295.05 U·g^-1。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下4CL 酶活性存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，4CL 酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK。4CL酶活性在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P＜0.05），UVA-4 和UVA-6 處理20 d 的4CL 酶活性明顯大于處理10 d 和30 d 的，UVA-4處理20 d 的4CL 酶活性最大，為353.50 U·g^-1。金葉銀杏4CL 酶活性總的來(lái)看低于綠葉銀杏。

2.5 不同UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代總黃酮含量及自由基清除率的影響

金葉銀杏總黃酮含量在不同強(qiáng)度UVA 下差異顯著（P ＜ 0.05）。如表2 所示， 隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，總黃酮呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，UVA-4 處理20 d 的總黃酮含量最大，為22.14 mg·g^-1，是CK 的1.04 倍。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA 處理下總黃酮含量存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，總黃酮含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK，UVA-4 處理20 d 的總黃酮含量最大，為28.65 mg·g^-1，是CK 的1.56 倍。

金葉銀杏總黃酮含量總體來(lái)看低于綠葉銀杏。金葉銀杏DPPH 自由基清除率在不同強(qiáng)度UVA 下差異顯著（P ＜ 0.05）。如表2 所示，隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，DPPH 自由基清除率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，UVA-4 處理20 d 的DPPH 自由基清除率最大，比CK 提高了91.18%。綠葉銀杏在不同強(qiáng)度UVA 處理下DPPH 自由基清除率存在顯著差異（P ＜ 0.05），隨著UVA 強(qiáng)度的增大，DPPH 自由基清除率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞ UVA-6 ＞ UVA-2 ＞CK。DPPH 自由基清除率在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA-4 和UVA-6 處理20 d 明顯大于處理10 d 和30 d 的，UVA-4 處理20 d 的DPPH 自由基清除率最大，比CK 提高了57.45%。金葉銀杏DPPH 自由基清除率總的來(lái)看低于綠葉銀杏。

金葉銀杏ABTS 自由基清除率在不同強(qiáng)度UVA 下差異顯著（P ＜ 0.05）。如表2 所示，隨著紫外UVA 強(qiáng)度的增加，ABTS 自由基清除率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為UVA-4 ＞UVA-6 ＞ UVA-2 ＞ CK。ABTS 在同一強(qiáng)度不同時(shí)間處理下也存在顯著差異（P ＜ 0.05），UVA-4處理20 d 的ABTS 自由基清除率最大，比CK 提高了77.78%。綠葉銀杏在同一時(shí)間不同強(qiáng)度UVA處理下ABTS 自由基清除率存在顯著差異（P ＜0.05）， 隨著UVA 強(qiáng)度的增大，ABTS 自由基清除率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，UVA-4 處理20 d 的ABTS 自由基清除率最大，比CK 提高了73.68%。金葉銀杏ABTS 自由基清除率總體來(lái)看低于綠葉銀杏。

2.6 銀杏雜交子代不同生理指標(biāo)間相關(guān)性分析

由表3 相關(guān)性分析可知，銀杏雜交子代可溶性糖、可溶性蛋白、抗氧化酶活性（SOD、POD）、黃酮代謝相關(guān)酶活性（PAL、C4H、4CL）、總黃酮含量以及ABTS 和DPPH 自由基清除率之間都呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)。

2.7 不同因素對(duì)銀杏雜交子代生理生化影響的互作分析

由表4 可知，葉色、處理時(shí)間和UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏雜交子代生理指標(biāo)存在極顯著影響（P ＜0.01），葉色和時(shí)間的交互作用對(duì)銀杏雜交子代的POD、C4H 和DPPH 存在顯著影響（P ＜ 0.05），對(duì)可溶性蛋白、可溶性糖、SOD、PAL、4CL、ABTS 存在極顯著影響（P ＜ 0.01）。葉色和UVA 強(qiáng)度的交互作用對(duì)銀杏雜交子代黃酮含量存在顯著差異（P ＜ 0.05），對(duì)SOD、POD、PAL、4CL 和ABTS 存在極顯著差異（P ＜ 0.01）。時(shí)間和UVA 強(qiáng)度的交互作用對(duì)銀杏雜交子代抗氧化酶活性、黃酮代謝相關(guān)酶活性、黃酮含量以及DPPH 和ABTS 自由基清除率存在極顯著差異（P ＜ 0.01）。葉色、時(shí)間以及UVA 強(qiáng)度的交互作用對(duì)銀杏雜交子代SOD、PAL 和C4H 酶活性存在極顯著差異（P ＜ 0.01）。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

不同強(qiáng)度UVA 處理對(duì)銀杏雜交子代生理指標(biāo)都存在顯著影響，隨著UVA 處理強(qiáng)度的增大以及時(shí)間的增加，銀杏雜交子代可溶性糖和可溶性蛋白含量顯著增加，在UVA-6 處理30d 達(dá)到最高。SOD、POD 抗氧化酶活性以及苯丙烷生物合成途徑中的PAL、C4H 和4CL 酶都顯著升高，總黃酮含量和DPPH、ABTS 自由基清除率在UVA 處理下也顯著升高，在UVA-4 處理20 d 時(shí)達(dá)到最大，銀杏各生理指標(biāo)間都呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)，葉色、處理時(shí)間以及UVA 強(qiáng)度對(duì)銀杏各項(xiàng)生理指標(biāo)都存在極顯著影響，并且UVA 強(qiáng)度和處理時(shí)間以及兩者的交互效應(yīng)對(duì)抗氧化酶活性、黃酮代謝相關(guān)酶活性、黃酮含量以及DPPH、ABTS 自由基清除率存在極顯著影響。綜上所述，40 μmol·m^-2·s^-1 處理20 d 最有利于銀杏雜交子代總黃酮含量的積累以及藥用價(jià)值的提高，綠葉銀杏總黃酮含量顯著高于金葉銀杏。

3.2 討 論

3.2.1 不同強(qiáng)度UVA 對(duì)銀杏雜交子代可溶性糖和可溶性蛋白的影響

可溶性糖和可溶性蛋白是植物體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，在植物適應(yīng)逆境環(huán)境中發(fā)揮了重要作用[16]。李霞[17] 研究發(fā)現(xiàn)采前10天對(duì)芥藍(lán)進(jìn)行UVA 處理可以顯著增加芥藍(lán)可溶性糖與可溶性蛋白含量。孫雨[18] 研究發(fā)現(xiàn)在220 μmol·m^-2·s^-1 白光基礎(chǔ)上添加350 μW·cm^-2 的UVA 紫外光顯著提高了生菜可溶性糖含量。Huang 等[19] 也發(fā)現(xiàn)UVA 處理可以增加青菜可溶性蛋白含量，添加20 μmol·m^-2·s^-1 UVA處理5 天可溶性蛋白含量最大。說(shuō)明在UVA 脅迫下，植物通過(guò)調(diào)節(jié)滲透物質(zhì)來(lái)抵御逆境，從而提高了植物可溶性糖和可溶性蛋白含量。本試驗(yàn)通過(guò)不同強(qiáng)度UVA 處理，顯著提高了雜交銀杏可溶性糖和可溶性蛋白含量，與前人研究結(jié)果一致。隨著UVA 強(qiáng)度以及處理時(shí)間的增加，銀杏雜交子代可溶性糖和可溶性蛋白含量也隨之增加，在UVA-6 處理30 天達(dá)到最大，與Huang 等[19] 不一致的原因可能是不同植物對(duì)UVA 脅迫的耐受性不同以及苗齡不同導(dǎo)致的。總的來(lái)說(shuō)，綠葉銀杏的可溶性糖和可溶性蛋白含量大于金葉銀杏，說(shuō)明綠葉銀杏抗逆性優(yōu)于金葉銀杏。

3.2.2 不同強(qiáng)度UVA對(duì)銀杏雜交子代抗氧化酶活性的影響

植物處于逆境脅迫會(huì)導(dǎo)致活性氧的積累，而植物體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)如SOD、POD 可以消除自由基，以抵抗逆境脅迫[20]。王虹等[21] 在光質(zhì)對(duì)黃瓜葉片抗氧化酶活性的研究中發(fā)現(xiàn)，350 μmol·m^-2·s^-1 的UVA 紫外光處理5、10、15 d，可以促進(jìn)黃瓜葉片中SOD 和POD 酶活性的積累，處理時(shí)間越長(zhǎng)，酶活性越高。耿殿祥等[22] 研究發(fā)現(xiàn)，30 μmol·m^-2·s^-1 的UVA 處理有利于蘿卜芽苗菜SOD 和POD 活性的增加，處理時(shí)間越長(zhǎng)，抗氧化酶活性越大。王麗華等[23] 的研究表明隨著脅迫程度的增大以及時(shí)間的增加，油橄欖葉片的SOD 和POD 酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。胡衍平等[24] 研究表明隨著脅迫時(shí)間增加，烏桕幼苗SOD 和POD 酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)金葉銀杏隨著UVA 強(qiáng)度的增加，SOD 和POD 酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，與前人研究結(jié)果類似，這是由于植物受到脅迫越大，體內(nèi)產(chǎn)生的自由基越多，抗氧化酶系統(tǒng)通過(guò)合成更多的抗氧化酶去保護(hù)植物免受傷害；如果脅迫強(qiáng)度過(guò)大或者處理時(shí)間太久可能會(huì)破壞酶活性，從而導(dǎo)致酶活性降低，對(duì)植物造成不可逆轉(zhuǎn)的傷害。綠葉銀杏SOD 酶活性一直增加，POD 酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，與前人的研究結(jié)果不一致的原因可能在于不同植物的抗氧化性不同以及UVA 處理的強(qiáng)度和時(shí)間不同。

3.2.3 不同強(qiáng)度UVA 對(duì)銀杏雜交子代苯丙烷途徑酶活性的影響

苯丙氨酸解氨酶（PAL）、肉桂酸-4- 羥基化酶（C4H）和4- 香豆酸輔酶A 連接酶（4CL）是苯丙烷類代謝途徑中的關(guān)鍵酶，PAL、C4H 和4CL在植物體內(nèi)活性可以影響次生代謝物的合成，以提高植物的抗逆性[25]。Lee 等[26] 研究發(fā)現(xiàn)持續(xù)輻射UV-A 能誘導(dǎo)生菜PAL 酶活性和基因的表達(dá)。朱智慧等[27] 研究表明紫外光處理可以誘導(dǎo)苦蕎幼苗黃酮類化合物合成途徑中PAL、C4H 酶基因的表達(dá)。有研究表明銀杏PAL、C4H 和4CL 酶活性隨著脅迫程度的增加呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)[12]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)不同強(qiáng)度的紫外光UVA 對(duì)銀杏雜交子代PAL、C4H 和4CL 酶活性存在顯著影響，并且隨著UVA 強(qiáng)度的增加，銀杏PAL、C4H 和4CL 酶活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，與前人的研究結(jié)果一致，這說(shuō)明UVA 處理對(duì)銀杏產(chǎn)生了一定程度的脅迫，因此通過(guò)產(chǎn)生更多的PAL、C4H和4CL 酶來(lái)促進(jìn)次生代謝物的合成，以抵抗紫外光脅迫。隨著脅迫程度以及時(shí)間的增加酶活性降低，說(shuō)明長(zhǎng)期高強(qiáng)度的UVA 脅迫抑制了酶活性。綠葉銀杏PAL、C4H 和4CL 酶活性總體高于金葉銀杏，說(shuō)明綠葉銀杏的抗逆性更強(qiáng)。

3.2.4 不同強(qiáng)度UVA 對(duì)銀杏雜交子代總黃酮及自由基清除率的影響

紫外線可以被植物葉片表皮的類黃酮等物質(zhì)所吸收，類黃酮可以減少紫外線對(duì)細(xì)胞的損害[28]。補(bǔ)充UVA（365 nm）可以提高生菜葉片總黃酮含量，并且UVA 強(qiáng)度越高，越有利于總黃酮含量的積累[29]。每天夜間輻照5 小時(shí)60 μW·m^-2 的UVA，處理7、14、21 d 后黃瓜葉片類黃酮含量都顯著提高，處理時(shí)間越久，越有利于類黃酮的積累[30]。有研究表明UVA 強(qiáng)度提高到50 μmol·m^-2·s^-1 時(shí)，紅邊生菜葉片花青素等類黃酮物質(zhì)含量呈下降趨勢(shì)[31]。許亞良等[32] 研究發(fā)現(xiàn)10、20、30 μmol·m^-2·s^-1 UVA處理均促進(jìn)黃瓜嫁接苗，隨著UVA 強(qiáng)度的增加，黃酮含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)隨著UVA 強(qiáng)度的增強(qiáng)，銀杏雜交子代總黃酮含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，與前人的研究結(jié)果一致。周正等[33] 發(fā)現(xiàn)水分脅迫可以提高丹參莖葉DPPH 和ABTS 自由基清除率。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著UVA 脅迫強(qiáng)度的增加，銀杏DPPH 和ABTS自由基清除率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，這說(shuō)明紫外UVA 脅迫促進(jìn)了葉片總黃酮含量的積累和DPPH、ABTS 自由基清除率的提高，但是脅迫強(qiáng)度過(guò)大會(huì)導(dǎo)致總黃酮含量以及自由基清除率的降低。相關(guān)性分析表明，銀杏雜交子代可溶性糖、可溶性蛋白、抗氧化酶、黃酮代謝相關(guān)酶以及ABTS、DPPH 自由基清除率與總黃酮含量都呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)，說(shuō)明逆境條件下，植物通過(guò)合成滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)、抗氧化酶以及黃酮代謝相關(guān)酶來(lái)促進(jìn)總黃酮合成[34]。

由于試驗(yàn)條件有限，本次試驗(yàn)只選用了一種紫外UVA 光質(zhì)對(duì)銀杏雜交子代進(jìn)行不同強(qiáng)度處理，目前已經(jīng)有較多光質(zhì)對(duì)植物生長(zhǎng)生理的研究，涉及到的光質(zhì)有紅藍(lán)光[35]、遠(yuǎn)紅光[36] 等，在后續(xù)研究中，會(huì)增加不同光質(zhì)處理，比較不同光質(zhì)對(duì)銀杏黃酮積累的影響，篩選出最佳光質(zhì)以及光強(qiáng)，為銀杏的栽培管理以及藥用價(jià)值的提高提供科學(xué)依據(jù)。