a-硫辛酸在微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)草魚卵巢細(xì)胞損傷中的作用

關(guān)鍵詞：草魚卵巢細(xì)胞；a-硫辛酸；微囊藻毒素-LR；氧化應(yīng)激；炎癥反應(yīng)

微囊藻毒素（MicrocVstins，MCs）是淡水水體有毒藍(lán)藻產(chǎn)生的一類藻毒素，目前已有超過279種微囊藻毒素異構(gòu)體，其中微囊藻毒素-LR（MicrocVstin-LR，MC-LR）是毒性最大、研究最廣泛的一種異構(gòu)體。研究表明MC-LR具有顯著的肝毒性，它通過抑制絲氨酸一蘇氨酸磷酸酶1和2A而引起蛋白質(zhì)磷酸化增加，導(dǎo)致細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的改變。此外，研究表明，氧化應(yīng)激在MCs誘導(dǎo)毒性作用中也起著重要作用，它們可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的形成，氧化和破壞細(xì)胞大分子，導(dǎo)致組織和器官的損傷。目前，MCs的氧化毒性機(jī)制已引起廣泛的關(guān)注，一些學(xué)者嘗試使用天然或化學(xué)抗氧化劑來減少M(fèi)Cs誘導(dǎo)的組織或器官的損傷，例如，Gehringer等研究發(fā)現(xiàn)維生素E對MC-LR誘導(dǎo)的小鼠肝臟有保護(hù)作用，其他學(xué)者還發(fā)現(xiàn)姜黃素、褪黑素、N-乙酰半胱氨酸、水飛薊素、巖藻多糖和大蒜等可顯著降低MC-LR誘導(dǎo)的肝臟氧化損傷。

MC-LR除了誘導(dǎo)肝毒性之外，還可在生殖系統(tǒng)中蓄積并產(chǎn)生生殖毒性。研究發(fā)現(xiàn)，MC-LR可破壞哺乳動(dòng)物睪丸、卵巢、前列腺和胎盤等器官的結(jié)構(gòu)和功能，從而降低哺乳動(dòng)物的生殖能力；同時(shí)，MC-LR的毒性還可以通過胎盤傳給后代，造成后代死亡、畸形、生長遲緩以及器官功能障礙等。在魚類中，MC-LR能影響斑馬魚的內(nèi)分泌和卵子發(fā)生，并干擾卵母細(xì)胞減數(shù)分裂，從而對斑馬魚的生殖造成不利影響，同時(shí)其還能在魚類的卵巢和精巢中積累并傳遞給后代。卵巢由于富含不飽和脂質(zhì)而很容易受到氧化損傷。Hou等研究發(fā)現(xiàn)卵巢的抗氧化防御系統(tǒng)可能是斑馬魚對抗MC-LR毒性作用的重要機(jī)制。因此，有學(xué)者對抗氧化劑降低MC-LR誘導(dǎo)的生殖毒性做了一些探索性的工作。例如，N-乙酰半胱氨酸可以降低MC-LR誘導(dǎo)的中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）和C57BL/6小鼠卵巢的氧化損傷，但這方面的研究還比較少。

a-硫辛酸（Alpha lipoic acid， a-LA）是一種含有1個(gè)二硫鍵的天然有機(jī)硫化物（圖1），屬于B族維生素，兼具水溶性和脂溶性的性質(zhì)，極易被多種組織器官吸收利用。此外，a-LA對內(nèi)源性的抗氧化劑如維生素C、維生素E以及谷胱甘肽（Glutathione，GSH）等具有再生作用，從而可提高機(jī)體的抗氧化能力。同時(shí)，a-LA還可通過提高抗氧化酶的活性從而發(fā)揮抗氧化功能，如飼料中添加a-LA可顯著提高皺紋盤鮑體內(nèi)的超氧化物歧化酶（Superoxide dis-mutase．SOD）活性以及GSH含量。a-LA作為一種強(qiáng)大的抗氧化劑，可有效提高機(jī)體的抗氧化能力，從而降低MC-LR的毒性。也有一些研究表明，a-LA能有效降低MC-LR對魚類肝臟、大腦和肌肉的毒性，并通過激活核因子相關(guān)因子2（Nuclear factorervthroid 2-related factor 2，Nrf2）再生GSH來保護(hù)MC-LR誘導(dǎo)的肝毒性。但目前還沒有報(bào)道a-LA在MC-LR誘導(dǎo)的生殖毒性方面的保護(hù)作用。草魚（Ctenopharyngodon idella）作為我國四大家魚之一，是我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，但目前關(guān)于MC-LR對草魚生殖的影響還未見報(bào)道，更沒有相關(guān)研究報(bào)道a-LA在MC-LR誘導(dǎo)的草魚卵巢（Grass carp ovary，GCO）細(xì)胞毒性中的作用。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，我們推測a-LA可通過抑制MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞氧化應(yīng)激從而保護(hù)細(xì)胞。因此，本研究以GCO細(xì)胞為研究對象，探討a-LA在MC-LR致GCO細(xì)胞毒性中的保護(hù)作用，并為MC-LR生殖毒性的防治提供新的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)細(xì)胞

試驗(yàn)所用GCO細(xì)胞是中國科學(xué)院水生生物研究所在20世紀(jì)70年代開展草魚m血病研究時(shí)建立的一株細(xì)胞系，由江西師范大學(xué)付建平老師保存惠贈(zèng)。

1.2主要儀器與試劑

細(xì)胞培養(yǎng)所用的C02培養(yǎng)箱為Hengzi公司產(chǎn)品。冷凍離心機(jī)和NANODROP2000超微量分光光度計(jì)為Thermo公司產(chǎn)品。MULTISKANFC全波段掃描酶標(biāo)儀和CFX96／384 Touch實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為Bio-Rad公司產(chǎn)品。MC-LR（純度gt;98%）與a-LA分別購自Expreess Technology與Sigma公司。胎牛血清、M199培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶購自Biological Indus-tries公司。青鏈霉素混合液、二甲基亞砜（DMSO）、1×PBS、噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bro-mide，MTT）檢測試劑盒為Solarbio公司的產(chǎn)品。提取RNA的TRIzol Reagent試劑盒購自Invitrogen公司。合成cDNA的PrimeScript RT reagent Kit With gDNAEraser試劑盒與用于qRT-PCR的SYBR Premix ExTaprMⅡ試劑盒均購自Takara公司。乳酸脫氫酶（Lac-tic dehydrogenase， LDH）、GSH、丙二醛（Malondialde-hvde，MDA）測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所有限公司，二喹啉甲酸法（Bicinchoninic Acid Assay，BCA）蛋白濃度測定試劑盒購自Bevotime公司。

1.3 GCO細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)

從-80℃冰箱中取出凍存的GCO細(xì)胞，置于26℃水浴鍋中水浴溶解，將溶解的GCO細(xì)胞懸液用基礎(chǔ)培養(yǎng)基重復(fù)清洗兩次，隨后加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，在條件為26℃、5% C02的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.4 MTT法測定細(xì)胞活力

取對數(shù)生長期的GCO細(xì)胞，以1.2×105 ind·mL-1的濃度接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，設(shè)置不同MC-LR濃度（0、5、10、20、40、60umol·L-1）和a-LA濃度（0、62.5、125、250、500、1000、2000umol`L-1）的完全培養(yǎng)基處理GCO細(xì)胞。每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)平行，處理24h后，采用MTT法分別分析MC-LR和a-LA對GCO細(xì)胞活力的影響。MTT法簡單操作步驟如下：在避光條件下每孔加入20uL MTT溶液，于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4h，小心吸出上清液，避免吸到藍(lán)紫色結(jié)晶，隨后每孔加入150uL DMSO溶液，搖勻后，孵育10min，充分溶解結(jié)晶，最后采用酶標(biāo)儀測定各孔在570nm處的吸光度值（OD），計(jì)算細(xì)胞活力。根據(jù)吸光度值采用SPSS 22.0軟件計(jì)算得到MC-LR 24h的半數(shù)增殖抑制濃度（Half maximal inhibitory concentration，IC50）約為48umol·L-1，隨后選擇12umol·L-1（IC50/4）和24umol·L-1 （IC50/2） MC-LR作用于GCO細(xì)胞并進(jìn)行形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)24umol·L-1 MC-LR組細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)自噬體、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)較多的空泡、線粒體發(fā)生腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等，因此，選擇1/2 IC50即24umol-L-1MC-LR為后續(xù)試驗(yàn)的染毒濃度，相關(guān)信息參考本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)表的文章。

1.5試驗(yàn)分組及處理

取對數(shù)生長期的GCO細(xì)胞，以1.2x105ind·mL-1的濃度接種到100mm培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞貼壁生長至80%左右后，根據(jù)1.4活力測定的MC-LR和a-LA對GCO細(xì)胞活力影響的結(jié)果，設(shè)置空白對照組（不添加MC-LR和a-LA）、a-LA組（125umol·L-1a-LA）、MC-LR組（24umol·L-1MC-LR）以及a-LA+MC-LR組（125umol·L-1 a-LA+24umol·L-1 MC-LR），每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。細(xì)胞培養(yǎng)24h后取樣分析。

1.6 LDH活性和抗氧化指標(biāo)的測定

由1.5分組處理結(jié)束后，采用PBS溶液洗兩遍，離心收集細(xì)胞，加入200uL PBS重懸細(xì)胞，利用超聲儀超聲破碎細(xì)胞使細(xì)胞內(nèi)成分釋放，離心10min（12000r·min-1），收集上清。LDH活性以及組織中MDA和GSH含量均按照試劑盒說明書嚴(yán)格操作測定，測定GSH及MDA含量時(shí)，采用BCA法測定蛋白含量。

1.7引物設(shè)計(jì)

根據(jù)NCBI基因庫已有的草魚基因全長序列，使用Primer Premier 5軟件設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量（qRT-PCR）的引物，其中內(nèi)參基因GAPDH的選用參考本實(shí)驗(yàn)室前期已發(fā)表的文章。引物由上海生物工程有限公司合成，試驗(yàn)所用引物如表1所示。

1.8RNA提取及qRT-PCR

根據(jù)1.5中的分組方案將GCO細(xì)胞處理24 h后，PBS溶液清洗細(xì)胞兩次，收集細(xì)胞于無RNA酶的離心管。使用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，再利用微量分光光度計(jì)測定RNA的純度和濃度。然后嚴(yán)格按照PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒使用說明合成cDNA。將合成的cDNA稀釋5倍，再根據(jù)SYBR Premix Ex TapⅡ試劑盒使用說明配制10uL qRT-PCR反應(yīng)體系，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，采用Bio-Rad CFX熒光定量PCR儀進(jìn)行反應(yīng)，以GAPDH為內(nèi)參基因，采用2法計(jì)算各基因在GCO細(xì)胞中的相對表達(dá)量。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本試驗(yàn)的所有結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。使用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-ANOVA），運(yùn)用Tukey檢驗(yàn)進(jìn)行組間多重比較，其中Plt;0.05表示組間差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

2.1a-LA對GCO細(xì)胞活力的影響

a-LA作用24 h對GCO細(xì)胞活力的影響結(jié)果如圖2所示，與不添加a-LA組相比，隨著a-LA濃度的升高，細(xì)胞活力呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。62.5pmol·L-1a-LA可顯著提高細(xì)胞活力（Plt;0.05），而當(dāng)a-LA濃度為125-1000umol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力無顯著變化（Pgt;0.05），當(dāng)a-LA的濃度上升至2000umol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力顯著下降（Plt;0.05）。

2.2a-LA對MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞活力的影響

如圖3所示，與對照組相比，MC-LR單獨(dú)處理和MC-LR聯(lián)合不同濃度a-LA處理均能夠顯著降低細(xì)胞活力（Plt;0.05）．而與MC-LR組相比，125umol·L-1a-LA+MC-LR組細(xì)胞活力顯著上升（Plt;0.05），說明該濃度的a-LA對MC-LR致GCO細(xì)胞毒性具有較好的保護(hù)效果。因此，后續(xù)選用125umol·L-1的a-LA進(jìn)行試驗(yàn)。

2.3 a-LA對MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞培養(yǎng)基上清LDH活性的影響

GCO細(xì)胞培養(yǎng)基上清中LDH的活性結(jié)果如圖4所示，與對照組相比，a-LA組LDH活性無顯著變化（Pgt;0.05），MC-LR組LDH活性顯著上升（Plt;0.05）。而與MC-LR組相比，a-LA+MC-LR組LDH活性顯著下降（Plt;0.05）。

2.4 a-LA對MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的影響

如圖SA所示，與對照組相比，GCO細(xì)胞內(nèi)GSH相對含量在MC-LR組顯著下降（Plt;0.05），而在a-LA+MC-LR組中其含量顯著上升（Plt;0.05）。與MC-LR組相比，a-LA+MC -LR組GCO細(xì)胞內(nèi)GSH相對含量顯著上升（Plt;0.05）。由圖SB可知，MC-LR組GCO細(xì)胞內(nèi)MDA相對含量與各組相比均顯著上升（Plt;0.05），且在對照組、a-LA組、a-LA+MC-LR組間無顯著變化。

如圖5C、圖5D、圖5E所示，GCO細(xì)胞內(nèi)SOD1、CAT、GST基因相對表達(dá)量在對照組與a-LA組間均無顯著變化（Pgt;0.05）；相對于對照組與a-LA組，MC-LR組、a-LA+MC-LR組的SOD1、CAT、GST基因相對表達(dá)量均顯著下降（Plt;0.05）；相對于MC-LR組，a-LA+MC-LR組的.SOD1、CAT基因相對表達(dá)量無顯著變化（Pgt;0.05），GST基因相對表達(dá)量顯著上升（Plt;0.05）。

2.5a-LA對MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響

a-LA對MC-LR誘導(dǎo)GCO細(xì)胞炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響結(jié)果如圖6所示，與對照組相比，a-LA組中TNFa基因的相對表達(dá)量無顯著變化（Pgt;0.05），與MC-LR組相比，a-LA+MC -LR組中TNFa基因的相對表達(dá)量顯著下降（Plt;0.05，圖6A）。與對照組相比，a-LA組中基因的相對表達(dá)量無顯著變化（Pgt;0.05），與MC-LR組相比，a-LA+MC-LR組中基因的相對表達(dá)量顯著下降（Plt;0.05，圖6B）。

3討論

卵巢是雌性動(dòng)物的重要生殖器官，可以產(chǎn)生卵子和類固醇性激素。急性暴露于MC-LR已被證明會(huì)導(dǎo)致斑馬魚卵巢的病理損傷，并引發(fā)氧化應(yīng)激。本實(shí)驗(yàn)室前期研究也發(fā)現(xiàn)MC-LR可誘導(dǎo)GCO細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激。本研究旨在確定a-LA是否對MC-LR誘導(dǎo)的GCO細(xì)胞氧化損傷具有緩解作用。

a-LA作為一種天然的抗氧化劑，含有1個(gè)二硫鍵，其一旦進(jìn)入細(xì)胞，二硫鍵就被還原為二氫硫辛酸（DHIA），并與蛋白質(zhì)氨基酸殘基的氨基結(jié)合形成酰胺鍵，酰胺鍵可經(jīng)脂酰胺酶作用裂解釋放具有生理功能的a-LA。研究表明a-LA在保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷方面具有巨大的潛力，因此其在臨床研究以及生產(chǎn)實(shí)踐中得到廣泛應(yīng)用。有研究表明，a-LA可以顯著提高缺氧狀態(tài)下大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞的活力，并且a-LA可顯著提高鎘脅迫下大鼠肝細(xì)胞活力。本研究發(fā)現(xiàn)a-LA可顯著提高M(jìn)C-LR作用后的細(xì)胞活力（Plt;0.05）。此外，LDH是無氧酵解和糖異生的重要酶系之一，在體內(nèi)能量代謝過程中發(fā)揮重要作用，幾乎存在于所有組織中，細(xì)胞損傷均可導(dǎo)致LDH濃度增加。進(jìn)行離體細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，如果培養(yǎng)的細(xì)胞受損，LDH也會(huì)由細(xì)胞漏m至培養(yǎng)液中。本試驗(yàn)結(jié)果表明，a-LA+MC-LR組LDH活性較MC-LR組顯著下降（Plt;0.05），這與其他人的研究結(jié)果類似．如Zhang等研究發(fā)現(xiàn)，a-LA能降低缺氧誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中LDH的釋放。因此，本研究結(jié)果表明a-LA能夠緩解MC-LR導(dǎo)致的GCO細(xì)胞損傷。

MDA被認(rèn)為是評價(jià)機(jī)體氧化應(yīng)激最重要的標(biāo)志物之一，是來源于機(jī)體內(nèi)不飽和脂肪酸被氧自由基攻擊而形成的過氧化產(chǎn)物，而GSH是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化物，可被GST催化并與機(jī)體內(nèi)有害的親電基團(tuán)結(jié)合，從而清除體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物。有研究顯示，MCs能消耗GSH造成的細(xì)胞氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化（Lipid peroxidation，LPO），產(chǎn)生過氧化產(chǎn)物如MDA等，從而損傷細(xì)胞器，繼而引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。也有研究發(fā)現(xiàn)小鼠經(jīng)腹腔注射MC-LR后，其肝臟GSH水平發(fā)生時(shí)間依賴性變化，且谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GPx）和谷胱甘肽還原酶（Glu-tathione reductase．GR）等的活性發(fā)生改變。Amado等的研究表明，a-LA可提高鯉魚腦和肝臟中GST的活性從而抵抗MC-LR誘導(dǎo)的機(jī)體損傷。Gu等的研究表明，a-LA可提高HepG2和Be17402細(xì)胞內(nèi)GSH的生成以及SOD的活性，同時(shí)降低ROS的生成和MDA的含量，從而減弱MC-LR對細(xì)胞的損傷。還有研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加a-LA可提高鯽魚肝臟GPx和CAT活性，并提高機(jī)體的總抗氧化能力，降低MDA含量，從而減輕MC-LR對魚體的氧化損傷。在本研究中，相對于對照組，MC-LR可以顯著升高GCO細(xì)胞內(nèi)MDA含量，并顯著降低GSH含量，這說明MC-LR可以誘導(dǎo)GCO細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激。與MC-LR組相比，a-LA+MC-LR組GCO細(xì)胞內(nèi)GSH含量顯著上升，且MDA含量顯著下降，說明a-LA可能通過升高機(jī)體內(nèi)GSH含量而增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，以此降低MC-LR造成GCO細(xì)胞氧化應(yīng)激而升高M(jìn)DA含量。但在本研究中，a-LA+MC-LR組的CAT和SOD1基因表達(dá)水平相對于MC-LR組并沒有顯著差異，僅上調(diào)了CST基因的相對表達(dá)水平。因此推測本試驗(yàn)中a-LA主要通過增加GCO細(xì)胞內(nèi)GSH的含量，并促進(jìn)GST的表達(dá)，從而促進(jìn)GSH清除MC-LR誘導(dǎo)的自由基，最終降低細(xì)胞內(nèi)MDA的生成，以此來緩解MC-LR引起的GCO細(xì)胞氧化損傷，這與Pflugmacher等的研究結(jié)果類似。

ILII是一種與炎癥及免疫疾病相關(guān)的多功能細(xì)胞因子，也具有抗炎作用。有研究表明，炎癥是刺激ILII表達(dá)的因素之一，當(dāng)機(jī)體受到感染、損傷和炎癥反應(yīng)時(shí)，ILII基因表達(dá)會(huì)增加。TNFa也是一種炎性細(xì)胞因子，可與受體TNFR2結(jié)合介導(dǎo)細(xì)胞激活NF-KB信號通路，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡或促進(jìn)細(xì)胞炎癥的發(fā)生，所以當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥時(shí)，通常會(huì)促進(jìn)TNFa的表達(dá)。有研究表明MC-LR能通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激，致使TNFa的表達(dá)升高，從而誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。在本研究中MC-LR同樣可導(dǎo)致ILII和TNFa基因表達(dá)水平的升高，表明MC-LR誘導(dǎo)了GCO細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)生。有趣的是，有研究發(fā)現(xiàn)a-LA同樣具有緩解機(jī)體內(nèi)炎癥損傷的作用。如Costa等研究發(fā)現(xiàn)，a-LA可降低IL6和TNFa水平，抑制藥物誘導(dǎo)小鼠炎癥的發(fā)生，從而提高小鼠的存活率。此外，a-LA還可作為抗炎劑抑制小鼠IL-1和TNFa蛋白的表達(dá)【46]。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，表明a-LA能通過下調(diào)GCO細(xì)胞中TNFa和ILII基因的表達(dá)來抑制炎癥的發(fā)生，從而減弱MC-LR對GCO細(xì)胞的損傷。

到目前為止，人們盡管嘗試了維生素E、姜黃素、褪黑素、N-乙酰半胱氨酸、水飛薊素、巖藻多糖和大蒜等天然或化學(xué)抗氧化劑來降低MC-LR誘導(dǎo)的肝臟、腎臟、心臟等組織或器官毒性，但仍然處于實(shí)驗(yàn)室研究階段。與其他抗氧化劑相比，a-LA最獨(dú)特的特點(diǎn)是它可以同時(shí)與脂質(zhì)和水溶性化合物反應(yīng)。研究表明a-LA在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均展示了其可緩解MC-LR誘導(dǎo)的肝毒性，也有文獻(xiàn)表明a-LA可作為抗MC-LR誘導(dǎo)的肝臟氧化損傷的潛在藥物。本研究所有結(jié)果也表明a-LA可緩解MC-LR誘導(dǎo)的生殖細(xì)胞毒性，然而，本研究缺乏體內(nèi)生殖毒性實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，對a-LA誘導(dǎo)的生殖毒性的具體調(diào)控機(jī)制也未開展研究，在今后的研究中，將重點(diǎn)對該方面進(jìn)行深入探討。

4結(jié)論

a-硫辛酸作為抗氧化劑具有很大的潛力，可以提高草魚卵巢細(xì)胞經(jīng)微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)后的抗氧化能力，并通過緩解氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，抑制炎癥反應(yīng)，從而減弱微囊藻毒素-LR對草魚卵巢細(xì)胞的損傷。因此，a-硫辛酸對預(yù)防微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)的生殖毒性有一定的作用。