不同葡萄砧木品種需冷量及低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)芽休眠相關(guān)基因表達(dá)的影響

摘要：【目的】探究不同葡萄砧木品種需冷量及低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)芽休眠相關(guān)基因表達(dá)的影響，為篩選熱區(qū)葡萄低需冷量砧木品種及探究葡萄萌芽進(jìn)程調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。【方法】以15個(gè)葡萄砧木品種的冬季修剪枝梢為試驗(yàn)材料，進(jìn)行不同低溫時(shí)長(zhǎng)處理，處理溫度為（4±1）℃，測(cè)定各砧木品種的需冷量，統(tǒng)計(jì)各葡萄砧木品種萌芽進(jìn)程；并研究需冷量有差異的葡萄砧木品種，在低溫處理打破休眠過(guò)程中枝梢中可溶性總糖和淀粉含量變化；通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)砧木芽中休眠相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量?！窘Y(jié)果】貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Fercal和5C等12個(gè)品種需冷量為0 h，1103P需冷量為168 h。1103P砧木枝梢中可溶性總糖含量隨著低溫處理時(shí)長(zhǎng)增加呈顯著增加趨勢(shì)（P<0.05，下同）；在低溫處理304 h時(shí)，可溶性總糖含量最高，達(dá)2.55μg/g，此時(shí)枝梢中淀粉含量顯著降低，僅0.06μg/g，低需冷量的3309C枝梢中淀粉含量在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理間無(wú)顯著差異（P>0.05，下同）。1103P砧木隨著低溫處理時(shí)長(zhǎng)增加，胼胝體合成酶基因VvCALLOSE SYNTHASE1的相對(duì)表達(dá)量呈顯著下降趨勢(shì)，未低溫處理的1103P冬芽中VvCALLOSE SYNTHASE1基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于3309C。3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理中，1103P芽中β-1，3-葡聚糖酶基因VvGLU1、ABA合成關(guān)鍵酶基因VvNCED1、GA20-氧化酶基因VvGA20ox-2、響應(yīng)低溫脅迫的重要轉(zhuǎn)錄因子基因VvbHLH92和開(kāi)花抑制基因VvSVP的相對(duì)表達(dá)量在低溫處理304 h時(shí)最高。未進(jìn)入內(nèi)休眠的3309C在低溫處理過(guò)程中，VvCALLOSE SYNTHASE1和VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著變化，未經(jīng)低溫處理時(shí)的3309C芽中VvGLU1基因、ABA合成誘導(dǎo)因子基因VvXERICO和VvbHLH92基因的相對(duì)表達(dá)量最高。3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)下1103P芽中VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于3309C?！窘Y(jié)論】篩選出貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Fercal和5C等12個(gè)不需經(jīng)低溫處理即可萌芽的砧木品種，葡萄的萌芽受品種需冷量、營(yíng)養(yǎng)和休眠相關(guān)基因的共同調(diào)控。

關(guān)鍵詞：葡萄砧木；需冷量；低溫處理；休眠解除；基因表達(dá)

中圖分類號(hào)：S663.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095-1191（2024）08-2237-11

Effects of chilling requirement and chilling duration on theexpression of bud dormancy-related genes in differentgrape rootstock varieties

XIAO Li-bing ZHONG Ting-wei LI Lin-lin LU Xiu-bian LIN Qin-xiong HAN Jia-yu ZHANG Yan-hui3，JIA Hai-feng BAI Xian-jin WANG Bo1*

（1College of Agriculture，Guangxi University，Nanning，Guangxi 530004，China；2Grape and Wine Research Institute，Guangxi Academy of Agricultural Sciences，Nanning，Guangxi 530007，China；3Guangxi Zhencheng Agricultural Co.，Ltd.，Nanning，Guangxi 530105，China）

Abstract：【Objective】This study aimed to investigate the effects of chilling requirement and chilling duration on the expression of bud dormancy-related genes in different grape rootstock varieties，providing theoretical basis for screeninglow-chilling rootstock varieties suitable for tropical and subtropical regions and exploring the regulatory mechanisms of grape germination.【Method】Winter pruning bud-wood of 15 grape rootstock varieties were used as test materials，andsubjected to different chilling duration treatments at（4±1）℃.The chilling requirement of each grape rootstock variety was detected，and the germination process was recorded.The changes of total soluble sugar and starch content in branches with different chilling requirements were analyzed during dormancy release induced by chilling requirement.The relative expression levels of dormancy-related genes in the buds were determined using real-time fluorescence quantitative PCR.【Result】The chilling requirement of 12 grape varieties including Bayda，SO4，101-14，110R，188-08，3309C，140R，Valliant，Shanhe No. BR No. Fercal and 5C was 0 h，while the chilling requirement of 1103P was 168 h.The totalsoluble sugar content in the branches of 1103P rootstocks increased significantly with chilling duration added（P<0.05，the same below），reaching a maximum of 2.55μg/g at 304 h of chilling duration，and the starch content in branches decreased significantly to 0.06μg/g.In contrast，there was no significant difference in starch content in branches of 3309 C with low chilling requirement among the three chilling duration treatments（P>0.05，the same below）.With in-creasing chillinng duration treatment，the relative expression of VvCALLOSE SYNTHASE1 in 1103P decreased signifi-cantly.The relative expression of callosal synthase gene VvCALLOSE SYNTHASE1 in 1103P winter buds without chillingtreatment was significantly higher than that in 3309C.Among the three chilling duration treatments，the relative expres-sion levels ofβ-1，3-glucanase gene VvGLU ABA synthesis key enzyme gene VvNCED GA20-oxidase gene VvGA20ox- key transcription factor gene responding to cold stress VvbHLH92 and flowering inhibitory gene VvSVP in 1103P buds were the highest at 304 h of chilling treatment.In 3309C which did not enter endodormancy，the relative ex-pression levels of VvCALLOSE SYNTHASE1 and VvSVP genes did not change significantly.The relative expression levels of VvGLU1 gene，ABA biosynthesis inducer VvXERICO gene and VvbHLH92 in 3309C buds were the highest without chilling treatment.The relative expression of VvSVP gene in 1103P buds was significantly higher than that in 3309C under all three chilling duration treatments.【Conclusion】The twelve grape rootstock varieties，including Bayda，SO4，101-14，110R，188-08，3309C，140R，Valliant，Shanhe No. BR No. Fercal and 5C，are identified as rootstock varieties notrequiring chilling requirement for germination.Grape germination is co-regulated by chilling requirement，nutrients and dormancy-related genes.

Key words：grape rootstock；chilling requirement；chilling treatment；dormancy release；gene expression

Foundation items：National Natural Science Foundation of China（31960572）；Guangxi Natural Science Foundation（2023GXNSFBA026047）；Guangxi Key Research and Development Project（Guike AB21196042）；Innovation and En-trepreneurship Project for Undergraduates of Guangxi（S202410593403）

0引言

【研究意義】葡萄為落葉果樹(shù)，落葉后芽進(jìn)入自然休眠，休眠芽需要經(jīng)過(guò)一定時(shí)長(zhǎng)的低溫春化作用才能萌芽整齊。解除自然休眠所需的有效低溫時(shí)數(shù)即為需冷量（Chilling requirement）。需冷量具有遺傳特性，不同葡萄品種的需冷量不同，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較廣泛估算需冷量的3種模型分別為≤7.2℃模型、猶他模型和動(dòng)力學(xué)模型（章鎮(zhèn)等，2002；張玉斌和王惠萍，2004；王海波等，2017；劉天華，2021；黃泳碧，2023）。近年來(lái)，我國(guó)熱區(qū)葡萄發(fā)展迅速，由于新模式、新技術(shù)、新設(shè)施的不斷完善，葡萄種植效益逐年提高，熱區(qū)葡萄產(chǎn)區(qū)已成為我國(guó)鮮食葡萄生產(chǎn)的重要力量。近20年來(lái)與全國(guó)增速相比，熱區(qū)葡萄種植面積及產(chǎn)量的增幅均超過(guò)全國(guó)平均水平（劉俊等，2020）。但由于熱區(qū)冬季溫暖的氣候難以滿足需冷量高的葡萄品種解除休眠的低溫需求，會(huì)導(dǎo)致春季萌芽難或萌芽不整齊、花芽發(fā)育不良等問(wèn)題。目前熱區(qū)主栽葡萄品種如陽(yáng)光玫瑰和巨峰等需冷量均較高（章鎮(zhèn)等，2002；劉天華，2021），因此，探究不同葡萄砧木品種需冷量及低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)芽休眠相關(guān)基因表達(dá)的影響，對(duì)篩選熱區(qū)葡萄低需冷量砧木品種及探究葡萄萌芽進(jìn)程調(diào)控機(jī)制具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】嫁接是葡萄生產(chǎn)上普遍采用的苗木繁殖方式，研究表明除葡萄（何愛(ài)華，2006；王海波等，2019）外，油桃（汪曉云和馬永柱，2005）、梨（李璇等，2011；趙丹丹等，2015）等落葉果樹(shù)的砧木也會(huì)影響砧、穗組合的需冷量。藤稔葡萄嫁接在高需冷量砧木品種DE上需冷量升高，嫁接在低需冷量砧木SO4上需冷量降低（何愛(ài)華，2006）；夏黑和87-1等2個(gè)葡萄品種嫁接在101-14M砧木上其需冷量均顯著低于嫁接在5C砧木上（王海波等，2019）。然而，目前有關(guān)葡萄砧木品種的需冷量的研究較少。葡萄的自然休眠為內(nèi)休眠，即為休眠芽本身因素（如冷溫需求和光周期影響）控制的生長(zhǎng)停滯現(xiàn)象（Lang，1987），并受多種因素綜合調(diào)控，其形成、維持和解除不僅受到光照、溫度、水分等外界環(huán)境因素的影響，還受樹(shù)體內(nèi)激素、酶、糖類等內(nèi)部因素調(diào)控（王新超等，2011；李瑭等，2023）。糖作為信號(hào)分子調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程（Gibson，2005），在芽休眠過(guò)程中，淀粉與脫落酸（ABA）協(xié)同調(diào)控芽休眠，而糖參與赤霉素（GA）合成對(duì)芽休眠進(jìn)行調(diào)控的過(guò)程（Perata etal.，1997）。葡萄在休眠期間枝梢韌皮部的碳水化合物主要以淀粉為主，隨著休眠解除淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性糖，可溶性糖含量上升而淀粉含量下降，芽恢復(fù)到活躍的生長(zhǎng)狀態(tài)（Mohamed et al.，2010）。ABA促進(jìn)芽的休眠誘導(dǎo)，芽休眠時(shí)ABA含量顯著上升（Li etal.，2018），Zheng等（2015）的研究結(jié)果表明，ABA誘導(dǎo)因子基因VvXERICO與ABA合成關(guān)鍵酶基因VvNCED1的表達(dá)下調(diào)，ABA含量降低，能促進(jìn)葡萄芽休眠解除。在落葉果樹(shù)和楊樹(shù)中，開(kāi)花抑制基因SVP受ABA調(diào)節(jié)，SVP蛋白為整合ABA信號(hào)、GA生物合成和分解代謝的轉(zhuǎn)錄因子，以此參與落葉果樹(shù)和楊樹(shù)的休眠過(guò)程（Yang et al.，2021）。ABA和GA在拮抗調(diào)節(jié)芽休眠誘導(dǎo)、維持和解除過(guò)程中發(fā)揮重要作用，高水平ABA是維持芽休眠的首要因素，而GA負(fù)責(zé)內(nèi)休眠解除（Yang et al.，2021）。GAs生物合成由多種酶共同調(diào)控，GA20-氧化酶（GA20ox）基因是GAs生物合成中的關(guān)鍵酶基因，可催化形成活性GAs（張加強(qiáng)等，2019）。由胼胝體沉積引起的胞間連絲閉合會(huì)導(dǎo)致植物休眠，胼胝體合成酶（CALLOSE SYNTHASE）促使胼胝質(zhì)沉積，從而阻斷促進(jìn)萌芽的植物信號(hào)，使細(xì)胞保持休眠狀態(tài)；CALLOSE SYNTHASE1能介導(dǎo)胞間連絲閉合以促進(jìn)休眠（Singh etal.，2019）。β-1，3-葡聚糖酶（β-1，3-glucanase，GLU）在休眠解除過(guò)程中參與胞間連絲運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)的轉(zhuǎn)變（Rinne etal.，2011），VvGLU蛋白在葡萄芽的休眠解除過(guò)程中參與胞間連絲的打開(kāi)，葡萄休眠芽GLU基因家族成員中受乙烯和HC顯著調(diào)控的VvGLU1基因在葡萄芽休眠解除過(guò)程中其相對(duì)表達(dá)量上升（施招婉，2019）。轉(zhuǎn)基因擬南芥響應(yīng)低溫脅迫的重要轉(zhuǎn)錄因子基因LcbHLH92通過(guò)負(fù)調(diào)控花青素/原花青素的合成，從而抑制ABA合成，促使種子打破休眠（Zhao et al.，2019）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】砧木品種的選擇會(huì)影響葡萄接穗品種的需冷量，但目前有關(guān)不同葡萄砧木品種需冷量及低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)芽休眠相關(guān)基因表達(dá)影響的研究鮮見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以貝達(dá)、5BB、SO4、101-14、110R、188-08、1103P、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Rupestris du Lot、Fercal和5C等15個(gè)葡萄砧木品種為試驗(yàn)材料，對(duì)其冬季修剪枝梢進(jìn)行不同時(shí)長(zhǎng)低溫處理，用水培觀察萌芽率法調(diào)查其需冷量，并測(cè)定需冷量差異較大的2個(gè)砧木品種不同低溫處理下枝梢中可溶性總糖和淀粉含量及芽休眠相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量，為篩選熱區(qū)葡萄低需冷量砧木品種及探究葡萄萌芽進(jìn)程調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

以種植于廣西南寧東盟經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)廣西真誠(chéng)農(nóng)業(yè)有限公司基地（23°12′2″N，108°9′9″E）的15個(gè)3年生葡萄砧木品種為試驗(yàn)材料，分別為貝達(dá)、5BB、SO4、101-14、110R、188-08、1103P、3309C、140R、Val-liant、山河2號(hào)、BR No.2、Rupestris du Lot、Fercal和5C，鋼架大棚避雨栽培，樹(shù)勢(shì)健壯，管理良好。主要試劑：大生M45（80%代森錳鋅）可濕性粉劑購(gòu)自先正達(dá)（蘇州）作物保護(hù)有限公司；多糖多酚植物總RNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司；PrimeScriptTM Reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）反轉(zhuǎn)錄試劑盒和TB Green?Pre-mix E×TaqTM II（Tli RNaseH Plus）試劑盒購(gòu)自寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)于2024年1月15日冬季修剪時(shí)采樣，各葡萄砧木品種選取木質(zhì)化的1年生枝梢，采集自基部起第2～8節(jié)位枝梢，用濃度為0.2%的大生M45（80%代森錳鋅）可濕性粉劑進(jìn)行消毒，風(fēng)干后將枝梢剪口兩端蠟封裝進(jìn)自封袋中密封，放入（4±1）℃冷庫(kù)中進(jìn)行低溫處理，預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明，低溫處理216 h后，大部分砧木品種的枝段萌芽率顯著高于50%，因此將低溫時(shí)長(zhǎng)處理分別設(shè)置為0、114、168、216、304、360、504、648、792和936 h，其中5BB、1103P、3309C和Repestris du Lot等4個(gè)砧木品種因枝梢數(shù)量較少，設(shè)置0、114seBr1ouzihKPgddqOhBCrA==、168和304 h等4個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理。每時(shí)長(zhǎng)處理每品種分別隨機(jī)選擇10個(gè)枝梢剪成單芽段用于萌芽狀態(tài)評(píng)估試驗(yàn)。根據(jù)需冷量測(cè)定結(jié)果選擇需冷量差異較大的葡萄砧木品種測(cè)定休眠相關(guān)基因表達(dá)情況并測(cè)定淀粉和可溶性總糖含量。取10個(gè)枝梢，隨機(jī)切取15個(gè)芽迅速液氮冷凍處理后置于-80℃冰箱保存，用于休眠相關(guān)基因表達(dá)測(cè)定。用于取芽的10個(gè)枝梢經(jīng)烘箱干燥后磨成粉狀，常溫密封保存，用于測(cè)定淀粉和可溶性總糖含量，每處理每品種3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

1.2.2芽休眠狀態(tài)評(píng)估取15個(gè)葡萄砧木品種的枝梢剪成單芽段后隨機(jī)混合。去除壞芽和干癟芽，選擇完整、飽滿的芽進(jìn)行水培。以10個(gè)單芽段為1個(gè)重復(fù)，每處理3個(gè)重復(fù)。放入人工氣候培養(yǎng)箱進(jìn)行水培，培養(yǎng)條件如表1所示。每隔7 d統(tǒng)計(jì)1次萌芽率，3 d換水1次，連續(xù)4周觀察并根據(jù)公式計(jì)算貝達(dá)、5BB、SO4、101-14、110R、188-08、1103P、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Rupestris du Lot、Fercal和5C等15個(gè)葡萄砧木品種各低溫時(shí)長(zhǎng)處理的萌芽率，以第4周萌芽率判斷芽休眠狀態(tài)，萌芽率保持在50%以上則說(shuō)明休眠解除。芽萌發(fā)的判斷依據(jù)為芽鱗片裂開(kāi)并露出綠色組織（Or etal.，2002）。

萌芽率（%）=萌芽數(shù)/總芽數(shù)×100

1.2.3不同葡萄砧木品種抽梢期萌芽情況調(diào)查

15個(gè)葡萄砧木品種各選取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的3株樹(shù)，每株樹(shù)隨機(jī)選取15個(gè)冬芽作為1個(gè)重復(fù)，每品種3個(gè)重復(fù)。于2024年3月28日（萌芽抽梢期）調(diào)查并記錄冬芽萌發(fā)情況及各萌發(fā)枝梢所處的發(fā)育階段，統(tǒng)計(jì)處于各階段冬芽所占比率。冬芽萌發(fā)枝梢的發(fā)育階段分為6個(gè)階段：休眠芽、絨毛期、初展葉、3葉、4葉和5葉，各階段判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)圖1。

1.2.4可溶性總糖和淀粉含量測(cè)定可溶性總糖和淀粉含量測(cè)定參考黃泳碧等（2023）的方法。

1.2.5 7個(gè)休眠相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量測(cè)定從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢獲得7個(gè)休眠解除相關(guān)基因序列，參考序列均來(lái)源于歐亞種葡萄，以葡萄VvActin作為內(nèi)參基因。部分基因（VvActin、VvCALLOSE SYNTHASE1、VvGLU1、VvNCED1和VvXERICO）的引物序列設(shè)計(jì)參考黃泳碧等（2023）的方法，其余基因在NCBI中采用Primer-BLAST設(shè)計(jì)引物，引物序列見(jiàn)表 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。根據(jù)多糖多酚植物總RNA提取試劑盒說(shuō)明提取樣本的總RNA，以獲得樣品的總RNA為模板，采用PrimeScriptTM Reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real time）反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA。反應(yīng)體系20.0μL：2×TB Green?Premix E×TaqTM II（Tli RNaseH Plus）10.0μL，10μmol/L上、下游引物各0.8μL，50×ROX Reference DyeⅡ0.4μL，cDNA模板2.0μL，ddH2O 6.0μL。擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性30 s；95℃5 s，60℃30 s，65～95℃60 min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。每樣品設(shè)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2019整理并分析數(shù)據(jù)，運(yùn)用SPSS 27.0進(jìn)行差異顯著性分析，采用Origin 2021作圖。

2結(jié)果與分析

2.1 15個(gè)葡萄砧木品種需冷量分析結(jié)果

為統(tǒng)計(jì)不同葡萄砧木的需冷量，基于前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置0～936 h的不同低溫時(shí)長(zhǎng)處理，以水培第4周萌芽率大于50%作為芽休眠解除的判斷標(biāo)準(zhǔn)。由圖2可知，貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Fercal和5C未經(jīng)低溫處理的單芽段水培第4周的萌芽率均高于50.00%，分別達(dá)56.67%，66.67%、70.83%、63.33%、100.00%、85.82%、83.33%、100.00%、100.00%、77.78%、90.48%和80.95%；1103P低溫處理168和304 h后的水培第4周的萌芽率均高于50.00%；Rupestris du Lot低溫處理304h后的水培第4周的萌芽率達(dá)59.39%；5BB低溫處理304 h，萌芽率仍低于50.00%。貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Fercal和5C不需要經(jīng)過(guò)低溫處理就能萌芽，因此這12個(gè)葡萄砧木品種需冷量為0h，1103P需冷量為168 h，Rupestris du Lot的需冷量為304 h，5BB的需冷量則大于304h。

綜合15種葡萄砧木品種的需冷量表現(xiàn)，選擇需冷量有差異的1103P（需冷量為168 h）和3309C（需冷量為0 h）2個(gè)葡萄砧木品種進(jìn)行后續(xù)的可溶性總糖和淀粉含量測(cè)定以及休眠相關(guān)基因表達(dá)分析試驗(yàn)。

2.2 15個(gè)葡萄砧木品種抽梢期萌芽比率分析結(jié)果

為了解15個(gè)葡萄砧木品種春季萌芽快慢的進(jìn)程差異，在抽梢期（2024年3月28日）調(diào)查各品種處于不同萌芽抽梢進(jìn)程的冬芽比例。由圖3知，15個(gè)品種中萌芽進(jìn)程最快的是山河2號(hào)，調(diào)查時(shí)其冬芽均萌發(fā)抽梢，且枝梢均處于5葉期。其他萌芽進(jìn)程較快的砧木品種依次是3309C、101-14、1103P、Val-liant、5C和貝達(dá)，均有超過(guò)80%冬芽抽出的新梢處于3葉期或以上。15個(gè)品種中萌芽進(jìn)程最慢的是5BB，尚未有進(jìn)入5葉期的新梢，188-08和SO4萌芽較慢，均有超過(guò)30%的冬芽還處于休眠芽和絨毛期。

2.3不同低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)2個(gè)葡萄砧木品種枝梢中可溶性總糖及淀粉含量的影響

由圖4可知，葡萄砧木品種1103P枝梢中可溶性總糖含量隨著低溫時(shí)長(zhǎng)處理增加呈顯著增加趨勢(shì)（P<0.05，下同），在低溫處理304h時(shí)，該品種處于休眠解除狀態(tài)，枝梢中可溶性總糖含量最高，達(dá)2.55μg/g。低需冷量砧木品種3309C在測(cè)定的3個(gè)時(shí)期均處于休眠解除狀態(tài)，可溶性總糖含量均在2.00～2.25μg/g范圍。在未低溫處理和低溫處理114h時(shí)，3309C枝梢中可溶性總糖含量均顯著高于1103P，低溫處理304h后，3309C枝梢中可溶性總糖含量顯著低于1103P，說(shuō)明枝梢中可溶性總糖含量可以表征休眠解除。

由圖5可知，葡萄砧木品種1103P在未低溫處理和低溫處理114 h處于休眠狀態(tài)時(shí)淀粉含量均為0.10μg/g，低溫處理304 h，該砧木枝梢中淀粉含量顯著降低，僅0.06μg/g。低需冷量的3309C在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下均處于休眠解除狀態(tài)，淀粉含量在

3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理間無(wú)顯著差異（P>0.05，下同）。在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下3309C的淀粉含量均顯著高于1103P。

2.4不同低溫時(shí)長(zhǎng)對(duì)2個(gè)葡萄砧木品種芽休眠相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.4.1與胞間連絲結(jié)構(gòu)相關(guān)基因的表達(dá)模式由圖6-A可知，葡萄砧木品種1103P隨著低溫時(shí)長(zhǎng)處理的增加，VvCALLOSE SYNTHASE1基因的相對(duì)表達(dá)量顯著下降。3309C在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下均處于休眠解除狀態(tài)，VvCALLOSE SYNTHASE1基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著變化。未低溫處理的處于休眠期的1103P冬芽中VvCALLOSE SYNTHASE1基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于處于休眠解除狀態(tài)的3309C；在低溫處理114和304 h時(shí)，是需冷量為168 h的1103P休眠解除過(guò)程，VvCALLOSE SYNTHASE1基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于3309C。說(shuō)明隨著1103P芽休眠解除，芽中VvCALLOSE SYNTHASE1基因表達(dá)量下調(diào)，解除休眠的3309C芽VvCALLOSE SYNTHASE1基因表達(dá)量維持在一定水平。由圖6-B可知，1103P芽中VvGLU1基因在未低溫處理和低溫處理114 h處于休眠狀態(tài)時(shí)相對(duì)表達(dá)量較低，顯著低于在低溫處理304 h休眠解除時(shí)的相對(duì)表達(dá)量，說(shuō)明1103P解除休眠過(guò)程中芽的VvGLU1基因的相對(duì)表達(dá)量升高。3309C芽中VvGLU1基因的相對(duì)表達(dá)量隨著低溫時(shí)長(zhǎng)處理增加呈顯著降低趨勢(shì)。未經(jīng)低溫處理尚處于休眠期的1103P芽中VvGLU1基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于處于已休眠解除狀態(tài)的3309C，隨著1103P休眠逐漸解除，到低溫處理304h時(shí)，1103P芽中VvGLU1基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于3309C。

2.4.2 ABA合成相關(guān)基因的表達(dá)模式由圖7-A可知，1103P砧木芽中VvXERICO基因的相對(duì)表達(dá)量在未低溫處理時(shí)最高，隨著休眠逐漸解除在低溫處理114和304 h時(shí)，該基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于未低溫處理。3309C芽中VvXERICO基因的相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)與1103P相似，即未低溫處理芽中VvXERICO基因的相對(duì)表達(dá)量最高，低溫處理114和304 h時(shí)VvXERICO基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異。而1103P低溫處理114 h該基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于低溫處理304h。3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下3309C芽中VvXERICO基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于1103P。由圖7-B可知，1103P芽中VvNCED1基因的相對(duì)表達(dá)量受低溫時(shí)長(zhǎng)增加的誘導(dǎo)顯著升高，而3309C芽中VvNCED1基因的相對(duì)表達(dá)量在未低溫處理和低溫處理304 h時(shí)差異不顯著，低溫處理114 h時(shí)該基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于其他2個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理。低溫處理114和304 h時(shí)，1103P芽中VvNCED1基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于3309C。

2.4.3 GA合成相關(guān)基因的表達(dá)模式由圖8可知，1103P葡萄砧木芽中VvGA20ox-2基因的相對(duì)表達(dá)量在低溫處理304h處于休眠解除狀態(tài)時(shí)，顯著高于處于休眠狀態(tài)時(shí)的未低溫處理和低溫處理114 h。說(shuō)明VvGA20ox-2基因在1103P芽休眠解除后相對(duì)表達(dá)量升高。3309C芽中VvGA20ox-2基因的相對(duì)表達(dá)量隨著低溫時(shí)長(zhǎng)的增加呈顯著上升趨勢(shì)，說(shuō)明在解除休眠的3309C中隨低溫時(shí)長(zhǎng)增加該基因的相對(duì)表達(dá)量也增加。除114 h低溫時(shí)長(zhǎng)1103P芽中VvGA20ox-2基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于3309C外，未低溫處理和低溫處理304h 1103P芽中VvGA20ox-2基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于3309C。

2.4.4其他休眠相關(guān)基因的表達(dá)模式由圖9-A可知，1103P砧木芽中VvbHLH92基因的相對(duì)表達(dá)量隨著低溫時(shí)長(zhǎng)處理增加呈顯著上升趨勢(shì)，說(shuō)明Vvb-HLH92基因在1103P芽休眠解除過(guò)程中相對(duì)表達(dá)量升高。3309C芽中VvbHLH92基因的相對(duì)表達(dá)量在未低溫處理時(shí)最高，顯著高于114和304h低溫時(shí)長(zhǎng)處理。3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下1103P芽中VvbHLH92基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于3309C。由圖9-B可知，1103P砧木在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理下，呈先顯著降低后顯著增加的變化趨勢(shì)，1103P芽中VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量在低溫處理114h最低，顯著低于未低溫處理和304 h時(shí)長(zhǎng)處理，低溫處理304 h的芽中該基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于未經(jīng)低溫處理和低溫處理114 h。3309C芽中VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量在3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)處理間無(wú)顯著差異。3個(gè)低溫時(shí)長(zhǎng)下1103P芽中VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于3309C。

3討論

油桃、梨和葡萄等果樹(shù)的研究表明砧木對(duì)嫁接后的砧穗組合需冷量影響明顯（汪曉云和馬永柱，2005；何愛(ài)華，2006；李璇等，2011；趙丹丹等，2015；王海波等，2019）。葡萄砧木的需冷量因品種的遺傳特性、根系活力不同而有所差異（王海波等，2019）。隨著全球氣溫的上升，亟需開(kāi)展對(duì)葡萄砧木品種需冷量的篩選研究，尤其是南方熱區(qū)，低需冷量砧木是熱區(qū)葡萄的栽培成功的基礎(chǔ)。本研究中，貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BR No.2、Fercal和5C等12個(gè)砧木品種在不經(jīng)過(guò)低溫處理單芽段水培第4周萌芽率均在50%以上，1103P在低溫處理168 h后萌芽率高于50%，Rupestris du Lot在低溫處理304 h后萌芽率達(dá)到59.39%。由此可斷定葡萄砧木貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BRNo.2、Fercal和5C的需冷量為0 h，1103P需冷量為168 h，Rupestris du Lot的需冷量為304 h，5BB的需冷量則高于304 h。本研究設(shè)置的低溫時(shí)長(zhǎng)處理未能預(yù)估出5BB砧木的需冷量，5BB是目前葡萄嫁接苗常用的砧木品種（韓曉等，2022），因此有關(guān)該砧木需冷量還有待進(jìn)一步研究。本研究所用的葡萄砧木品種多為低需冷量品種，后續(xù)可進(jìn)一步研究這些品種在熱區(qū)的推廣效果并作為資源進(jìn)行低需冷量種質(zhì)創(chuàng)制工作。

為觀察不同需冷量砧木品種春季萌芽情況，本研究跟蹤調(diào)查了各砧木春季萌芽情況，結(jié)果顯示需冷量為0 h的各砧木品種中，山河2號(hào)萌芽最快，其他萌芽進(jìn)程較快的砧木品種依次是3309C、101-14、1103P、Valliant、5C和貝達(dá)，需冷量為168 h的1103P其萌芽進(jìn)程與需冷量為0的101-14相差不大，而需冷量等于或高于304 h的Rupestris du Lot和5BB萌芽進(jìn)程均較慢。由此可見(jiàn)需冷量會(huì)影響葡萄砧木品種的萌芽進(jìn)程，而需冷量相近的低需冷量品種之間的萌芽進(jìn)程也有較大差異，說(shuō)明低需冷量葡萄品種的萌芽生長(zhǎng)除受需冷量影響外還受其他因素調(diào)節(jié)。

淀粉和可溶性糖在植物解除休眠的過(guò)程中存在轉(zhuǎn)化關(guān)系，淀粉隨著休眠解除，可轉(zhuǎn)化為可溶性糖而其本身含量降低，可溶性糖含量隨之上升。桃樹(shù)在休眠結(jié)束時(shí)枝梢內(nèi)的可溶性糖含量迅速上升，而淀粉含量則迅速下降（高東升等，1999）；自然休眠解除期的甜櫻桃品種拉賓斯中葡萄糖和果糖含量升高，淀粉含量迅速降低（李勃，2011）。葡萄休眠解除過(guò)程中，淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性糖，可溶性糖含量上升而淀粉含量下降（Mohamed et al.，2010）。本研究中葡萄砧木1103P和3309C在解除休眠過(guò)程中枝梢內(nèi)淀粉和可溶性總糖的含量變化趨勢(shì)與前人的研究結(jié)果一致，表明葡萄砧木在解除休眠過(guò)程中需要將淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性總糖，為葡萄芽萌發(fā)提供能量。

ABA和GA是調(diào)控芽休眠，維持和解除休眠的2種最重要的激素，高水平ABA是維持芽休眠的主要因素，而GA則負(fù)責(zé)芽休眠的解除（Yang，et al.，2021）；在模式植物楊樹(shù)中，SVP-like（SVL）作為整合ABA信號(hào)、ABA合成、GA合成、GA分解代謝和細(xì)胞分裂的中心轉(zhuǎn)錄因子，維持芽休眠（Singhetal.，2018；Singhetal.，2019；Azeez etal.，2021）。Yang等（2021）總結(jié)了落葉果樹(shù)以DAM/SVP為中心的內(nèi)休眠調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果表明ABA能促進(jìn)SVP蛋白合成以維持芽休眠，SVP反過(guò)來(lái)也可以增強(qiáng)NCED蛋白的合成進(jìn)而促進(jìn)ABA的合成，同時(shí)SVP抑制GA20ox進(jìn)行GA的生物合成。ABA會(huì)上調(diào)VvCALLOSE SYNTHASE1基因的表達(dá)，而VvCALLOSE SYNTHASE1促使胼胝質(zhì)的沉積，從而阻斷促進(jìn)萌芽的植物信號(hào)（Tyle-wiczetal.，2018；Singh，et al.，2019）。Zheng等（2015）的研究結(jié)果表明，基因VvXERICO與VvNCED1相對(duì)表達(dá)量下調(diào)會(huì)降低葡萄芽中ABA含量，促進(jìn)葡萄芽休眠解除。本研究結(jié)果表明，1103P葡萄砧木在休眠解除過(guò)程中芽中VvSVP基因的相對(duì)表達(dá)量先顯著下降后顯著上升，且在114～304 h低溫范圍內(nèi)，是需冷量為168h的1103P休眠解除過(guò)程，此過(guò)程中，VvSVP基因受低溫誘導(dǎo)相對(duì)表達(dá)量升高幅度最大，且VvNCED1基因的相對(duì)表達(dá)量在1103P砧木芽的休眠解除過(guò)程中顯著上升，與Yang等（2021）的研究結(jié)果一致；VvGA20ox-2基因在1103P芽休眠解除后相對(duì)表達(dá)量升高，也與Yang等（2021）的研究結(jié)果一致。較未經(jīng)低溫處理，1103P芽VvXERICO基因相對(duì)表達(dá)量在低溫處理114 h時(shí)下調(diào)，與Zheng等（2015）的研究結(jié)果一致，不同的是VvNCED1基因的表達(dá)受低溫時(shí)長(zhǎng)處理增加的誘導(dǎo)下顯著升高，原因可能是VvNCED1基因的表達(dá)受低溫時(shí)長(zhǎng)增加誘導(dǎo)升高，與黃泳碧等（2023）對(duì)妮娜皇后葡萄低溫處理后芽VvNCED1基因在休眠解除過(guò)程中相對(duì)表達(dá)量上升的研究結(jié)果一致，其研究還發(fā)現(xiàn)在休眠解除后，葡萄芽中VvNCED1基因相對(duì)表達(dá)量開(kāi)始下降。本研究發(fā)現(xiàn)VvCALLOSE SYNTHASE1基因在1103P葡萄芽休眠解除的過(guò)程中相對(duì)表達(dá)量顯著降低，與Singh等（2019）的研究結(jié)果一致。葡萄GLU家族成員中的VvGLU1基因在葡萄芽休眠解除的過(guò)程中起到重要的調(diào)節(jié)作用（施招婉，2019），本研究發(fā)現(xiàn)VvGLU1和VvbHLH92基因在1103P葡萄芽休眠解除的過(guò)程中相對(duì)表達(dá)量均升高，與Zhao等（2019）在轉(zhuǎn)基因擬南芥中發(fā)現(xiàn)LcbHLH92促進(jìn)種子休眠解除的結(jié)果一致，但其具體調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

本研究篩選出貝達(dá)、SO4、101-14、110R、188-08、3309C、140R、Valliant、山河2號(hào)、BRNo.2、Fercal和5C等12個(gè)不需經(jīng)低溫處理即可萌芽的砧木品種，葡萄的萌芽受品種需冷量、營(yíng)養(yǎng)和休眠相關(guān)基因的共同調(diào)控。

參考文獻(xiàn)（References）：

高東升，夏寧，王興安.1999.休眠桃樹(shù)枝條中碳水化合物的含量變化和外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)破除休眠的效應(yīng)（簡(jiǎn)報(bào)）［J］.植物生理學(xué)通訊，（1）：10-12.［Gao D S，Xia N，Wang X A.1999.Changes of carbohydrate content and effects of exogenous growth regulators on dormancy-breaking du-ring dormant period of peach shoots［J］.Plant Physiology Journal，（1）：10-12.］doi：10.13592/j.cnki.ppj.1999.01.003.

韓曉，邢婷婷，王軍，何非.2022.不同葡萄砧穗組合硬枝嫁接親和性及生長(zhǎng)差異性比較［J］.中外葡萄與葡萄酒，（3）：1-7.［Han X，Xing T T，Wang J，He F.2022.Comparison of branch graft compatibilities and growth differences between different combinations of grapes［J］.Sino-Overseas Grapevine&Wine，（3）：1-7.］doi：10.13414/j.cnki.zwpp.2022.03.001.

何愛(ài)華.2006.不同砧木對(duì)藤稔葡萄需冷量的影響及休眠期內(nèi)源多胺的代謝［D］.揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué).［He AH.2006.Effects of different rootstocks on chilling requirement and endogenous polyamines metabolism during dormant period‘Fujiminori’grapes［D］.Yangzhou：Yangzhou University.］doi：10.7666/d.Y927377.

黃泳碧，覃園媛，陸秀邊，白揚(yáng)，韓佳宇，曹雄軍，白先進(jìn)，廖原，張延暉，王博.2023.妮娜皇后葡萄需冷量及休眠解除過(guò)程中相關(guān)基因表達(dá)分析［J］.南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，54（11）：3165-3173.［Huang Y B，Qin Y Y，Lu X B，Bai Y，Han J Y，Cao X J，Bai X J，Liao Y，Zhang Y H，Wang B.2023.Chilling requirement and related gene expression analysis during dormancy release of Queen Nina grape［J］.Journal of Southern Agriculture，54（11）：3165-3173.］doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.11.004.

李勃.2011.上海地區(qū)甜櫻桃生物學(xué)特性及單氰胺打破休眠研究［D］.上海：上海交通大學(xué).［Li B.2011.Studies on the biological characteristics of sweet cherry in Shanghai and the effect of hygrogen cyanamide on dormancy brea-king［D］.Shanghai：Shanghai Jiaotong University.］

李瑭，白瑞雯，鄒利人，閆可，申海林，齊曉光，溫景輝.2023.葡萄采后摘葉處理對(duì)誘導(dǎo)休眠的影響［J］.中外葡萄與葡萄酒（2）：30-36.［Li T，Bai R W，Zou L R，Yan K，Shen H L，Qi X G，Wen J H.2023.Effects of leaf picking on post-harvest grapevine inducing dormancy［J］.Sino-Overseas Grapevine&Wine，（3）：30-36.］doi：10.13414/j.cnki.zwpp.2023.02.005.

李璇，孫權(quán)，趙輝，陸新敏，馮軼，韋軍.2011.砧木對(duì)梨葉芽休眠的影響及其與多胺代謝的關(guān)系［J］.植物生理學(xué)報(bào)，47（5）：463-467.［Li X，Sun Q，Zhao H，Lu X M，F(xiàn)eng Y，Wei J.2011.Effects of rootstocks on the dormancy of leaf buds in pear trees（Pyrus serotina cv.‘Housui’）and itsrelation to polyamine metabolism［J］.Plant Physiology Jour-nal，47（5）：463-467.］doi：10.13592/j.cnki.ppj.2011.05.005.

劉俊，晁無(wú)疾，亓桂梅，劉寅喆，漢瑞峰.2020.蓬勃發(fā)展的中國(guó)葡萄產(chǎn)業(yè)［J］.中外葡萄與葡萄酒，（1）：1-8.［Liu J，Chao W J，Qi G M，Liu Y Z，Han R F.2020.Booming develop-ment of Chinese grape industry［J］.Sino-Overseas Grape-vine&Wine，（1）：1-8.］doi：10.13414/j.cnki.zwpp.2020.01.001.

劉天華.2021.不同成熟期葡萄品種需冷量比較分析與生物標(biāo)記開(kāi)發(fā)［D］.南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué).［Liu T H.2021.Comparative analysis and biomarker development of grape varieties in different maturity stages［D］.Nanjing：Nanjing Agricultural University.］doi：10.27244/d.cnki.gnjnu.2021.001098.

施招婉.2019.葡萄芽休眠解除過(guò)程中乙烯合成與信號(hào)途徑關(guān)鍵基因的篩選與功能分析［D］.廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué).［Shi Z W.2019.Screening and functional analysis of key genes involved in ethylene biosynthesis and signaling path-ways during grape bud dormancy release［D］.Guangzhou：South China Agricultural University.］doi：10.27152/d.cnki.ghanu.2019.000945.

汪曉云，馬永柱.2005.日光溫室栽培油桃中間砧木休眠特性對(duì)接穗開(kāi)花和果實(shí)成熟期的影響［J］.農(nóng)村實(shí)用工程技術(shù)（溫室園藝），（11）：24-25.［Wang X Y，Ma Y Z.2005.Effects of dormancy characteristics of nectarine interstockson scion flowering and fruit ripening in greenhouse［J］.Rural Practical Engineering Technology（Greenhouse Hor‐ticulture），（11）：24-25.］doi：10.3969/j.issn.1673-5404-B.2005.11.006.

王海波，韓曉，王孝娣，史祥賓，王寶亮，鄭曉翠，王志強(qiáng)，冀曉昊，劉鳳之.2019.不同砧木對(duì)87-1和‘夏黑’設(shè)施葡萄品種需冷量的影響研究［J］.中國(guó)果樹(shù)，（5）：46-49.［Wang H B，Han X，Wang X D，Shi X B，Wang B L，Zheng X C，Wang Z Q，JiH82Y/ZFvEPlRIMP/QoM78GAdiKTqoCw87MCN6afrvPI= X H，Liu F Z.2019.Effect of different root‐stocks on chilling requirement of 87-1 and‘Summer Black’grape cultivars in greenhouse［J］.China Fruits，（5）：46-49.］doi：10.16626/j.cnki.issn 1000-8047.2019.05.010.

王海波，劉鳳之，韓曉，謝計(jì)蒙，王孝娣，王寶亮.2017.葡萄需冷量和需熱量估算模型及設(shè)施促早栽培品種篩選［J］.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，33（17）：187-193.［Wang H B，Liu F Z，Han X，Xie J M，Wang X D，Wang B L.2017.Grape chil-ling requirement estimated models and heat requirement estimated models and selection of early cultivars in green‐house［J］.Transactions of the Chinese Society of Agricul‐tural Engineering，33（17）：187-193.］doi：10.11975/j.issn.1002-6819.2017.17.025.

王新超，馬春雷，楊亞軍.2011.多年生植物的芽休眠及調(diào)控機(jī)理研究進(jìn)展［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，17（4）：589-595.［Wang X C，Ma C L，Yang Y J.2011.Progress in research on bud dormancy and its regulation mechanisms in peren‐nial plants［J］.Chinese Journal of AppliedV4Qhmu1XtXNs6vxSvEjAjoN2cKVsj/Gf2LcWBHZmkwE= and Environ‐mental Biology，17（4）：589-595.］

張加強(qiáng)，劉慧春，周江華，譚晨，朱開(kāi)元.2019.植物赤霉素氧化酶GA20ox基因的生物信息學(xué)分析［J］.分子植物育種，17（15）：4986-5002.［Zhang J Q，Liu H C，Zhou J H，Tan C，Zhu K Y.2019.Bioinformatics analysis of gibberellin oxidase GA20ox gene in plants［J］.Molecular Plant Bree-ding，17（15）：4986-5002.］doi：10.13271/j.mpb.017.004986.

張玉斌，王惠萍.2004.設(shè)施葡萄主栽品種需冷量測(cè)定及其應(yīng)用研究［J］.甘肅林業(yè)科技，（1）：25-27.［Zhang Y B，Wang H P.2004.Measurement and practical study on cold requirement of major culture varieties in the culture of greenhouse grape［J］.Journal of Gansu Forestry Science and Technology，（1）：25-27.］doi：10.3969/j.issn.1006-0960.2004.01.008.

章鎮(zhèn)，高志紅，盛炳成，周莉莉，王璐，聶赟.2002.葡萄不同品種需冷量研究初報(bào)［J］.中國(guó)果樹(shù)，（3）：18-20.［Zhang Z，Gao Z H，Sheng B C，Zhou L L，Wang L，Nie Y.2002.Pre‐liminary study on chilling requirement of different grape varieties［J］.China Fruits，（3）：18-20.］doi：10.16626/j.cnki.issn 1000-8047.2002.03.008.

趙丹丹，趙輝，吳自然，柯增增，蘇楊映蘭，韋軍.2015.砧木對(duì)梨葉芽休眠的影響及其需冷量估算方法的統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào).24（6）：67-74.［Zhao D D，Zhao H，Wu Z R，Ke Z Z，Su YY L，Wei J.2015.Effects of rootstocks on dormancy of pear leaf buds and statistic evaluation foresti‐mating methods of chilling requirement［J］.Acta Agricul‐turaeBoreali-Occidentalis Sinica，24（6）：67-74.］doi：10.7606/j.issn.1004-1389.2015.06.011.

Azeez A，Zhao Y C，Singh R K，Yordanov Y S，Dash M，Mis‐kolczi P，Stojkovi?K，Strauss S H，Bhalerao R P，Busov V B.2021.EARLY BUD-BREAK1 and EARLY BUD-BREAK3 control resumption of poplar growth after winter dormancy［J］.Nature Communications，12（1）：1123.doi：10.1038/s41467-021-21449-0.

Gibson S I.2005.Control of plant development and gene expression by sugar signaling［J］.Current Opinion in Plant Bio82bf5a7fa13bc61a21d004db0ba1ddd3logy，8（1）：93-102.doi：10.1016/j.pbi.2004.11.003.

Lang G，Early J，Martin G，Darnell R.1987.Endo-，para-，and ecodormancy：Physiological terminology and classification for dormancy research［J］.Hortscience，22（3）：371-377.doi：10.21273/HORTSCI.22.3.371.

Li J Z，Xu Y，Niu Q F，He L F，Teng Y W，Bai S L.2018.Abscisic acid（ABA）promotes the induction and mainte‐nance of pear（Pyrus pyrifolia white pear group）flower bud endodormancy［J］.International Journal of Molecular Sciences，19（1）：310.doi：10.3390/ijms 19010310.

Mohamed H B，Vadel A M，Geuns J M C，Khemira H.2010.Biochemical changes in dormant grapevine shoot tissues in response to chilling：Possible role in dormancy release［J］.Scientia Horticulturae，124（4）：440-447.doi：10.1016/j.scie-nta.2010.01.029.

Or E，Vilozny I，F(xiàn)ennell A，Eyal Y，Ogrodovitch A.2002.Dor‐mancy in grape buds：Isolation and characterization of cata‐lase cDNA and analysis of its expression following chemi‐cal induction of bud dormancy release［J］.Plant Science，162（1）：121-130.doi：10.1016/S0168-9452（01）00542-8.

Perata P，Matsukura C，Vernieri P，Yamaguchi J.1997.Sugar repression of a gibberellin-dependent signaling pathway in barley embryos［J］.Plant Cell，9（12）：2197-2208.doi：10.1105/tpc.9.12.2197.

Rinne P L H，Welling A，Vahala J，Ripel L，Ruonala R，Kangas‐jarvi J，Schoot C V D.2011.Chilling of dormant buds hyperinduces FLOWERING LOCUS T and recruits GA-inducible 1，3-beta-glucanases to reopen signal conduits and release dormancy in Populus［J］.Plant Cell，23（1）：130-146.doi：10.1105/tpc.110.081307.

Singh R K，Maurya J P，AzeezA，Miskolczi P，Tylewicz S，Sto‐jkovi?K，Delhomme N，Busov V，Bhalerao R P.2018.A genetic network mediating the control of bud break in hybrid aspen［J］.Nature Communications，9（1）：4173.doi：10.1038/s41467-018-06696-y.

Singh R K，Miskolczi P，Maurya J P，Bhalerao R P.2019.Atree ortholog of SHORT VEGETATIVE PHASE floralrepressor mediates photoperiodic control of bud dormancy［J］.Current Biology，29（1）：128-133.doi：10.1016/j.cub.2018.11.006.

Tylewicz S，PetterleA，Marttila S，Miskolczi P，AzeezA，Singh R K，Immanen J，M?hler N，Hvidsten T R，Eklund D M，Bowman J L，Helariutta Y，Bhalerao R P.2018.Photope-riodic control of seasonal growth is mediated by ABA acting on cell-cell communication［J］.Science，360（6385）：212-215.doi：10.1126/science.aan8576.

Yang Q S，Gao Y H，Wu X Y，Moriguchi T，Bai S L，Teng Y W.2021.Bud endodormancy in deciduous fruit trees：Advances and prospects［J］dfGRxZ3WE4+kvikHdfbteg==.Horticulture Research，8（1）：139.doi：10.1038/s41438-021-00575-2.

Zhao P C，Li X X，Jia J T，Yuan G X，Chen S Y，Qi D M，Cheng L Q，Liu G S.2019.bHLH92 from sheepgrass acts as a negative regulator of anthocyanin/proanthocyandin accumulation and influences seed dormancy［J］.Journal of Experimental Botany，70（1）：269-284.doi：10.1093/jxb/ery335.

Zheng C L，Halaly T，Acheampong A K，Takebayashi Y，Jiku‐maru Y，Kamiya Y，Or E.2015.Abscisic acid（ABA）regu‐lates grape bud dormancy，and dormancy release stimuli may act through modification of ABA metabolism［J］.Jour‐nal of Experimental Botany，66（5）：1527-1542.doi：10.1039/jxb/eru519.

（責(zé)任編輯李洪艷）