• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑果枸杞葉綠體基因組特征分析

    2024-11-02 00:00:00柳迪杜雨李效雄馬瑞劉筠馬彥軍
    西北農(nóng)業(yè)學(xué)報 2024年10期

    摘 要 為揭示黑果枸杞葉綠體基因組(cpDNA)特征及系統(tǒng)發(fā)育規(guī)律,采用二代測序技術(shù)對黑果枸杞葉綠體進(jìn)行測序,并分析其基因組特征。結(jié)果表明:黑果枸杞cpDNA全長154 979 bp,其中包括1個大單拷貝區(qū)LSC,長度為85 984 bp,1個小單拷貝區(qū)SSC,長18 205 bp和2個反向互補(bǔ)重復(fù)區(qū)(IRs,25 395 bp)。共注釋到125個基因,其中,81個蛋白編碼基因(CDS),36個tRNA基因,8個rRNA基因。共檢測到60個核苷酸重復(fù)序列,有5種核苷酸類型,其中單核苷酸重復(fù)最多,為38個,占總體數(shù)的63.33%,基因序列為A/T。密碼子偏好性研究顯示,黑果枸杞cpDNA偏好G或C堿基,其中編碼亮氨酸(Leu)的密碼子最多,為2 154個,占總數(shù)的10.57%;編碼半胱氨酸(Cys)的密碼子最少,為219個。多態(tài)性分析結(jié)果顯示,IR區(qū)域表現(xiàn)出最高的保守性,而高變區(qū)在SSC區(qū);SSR位點在葉綠體基因組中分布不均,多態(tài)性較高。系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果表明,寧夏枸杞和中國枸杞聚為一類,與黑果枸杞、非洲枸杞匯聚在一起形成姐妹分支,四者之間的遺傳關(guān)系較近。

    關(guān)鍵詞 黑果枸杞;葉綠體基因組;SSR;密碼子;系統(tǒng)發(fā)育分析

    黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)為茄科(Solanaceae)枸杞屬(Lycium),是一種多年生灌木,主要分布在中國西北荒漠地區(qū),在中亞和歐洲等地也有分布,具有極高的藥用和食用價值[1-2]。黑果枸杞花色苷含量的測定原理主要通過其光學(xué)特性,目前常用的測定方法包括:色階法、消光系數(shù)法和pH示差法等[3]。阿力同·其米克等[4]通過ISSR分子標(biāo)記法及DNA分析法研究黑果枸杞的遺傳多樣性,從60個引物中篩選出7個有效引物,結(jié)果顯示,黑果枸杞在物種水平的遺傳多樣性較高。Yun等[5]通過物理和酶的方法從黑果枸杞中提取多糖,發(fā)現(xiàn)表面枸杞多糖的結(jié)構(gòu)與分離純化方法及其生長環(huán)境有關(guān)。Sina等[6]使用ImageJ程序測定不同基因型的枸杞葉片特征,研究表明,在同一物種的不同基因型之間,枸杞葉片的大小和形狀存在明顯差異。

    隨著分子測序技術(shù)的迅速發(fā)展,植物系統(tǒng)發(fā)育研究從比較生理學(xué)和形態(tài)學(xué)開始向分子研究轉(zhuǎn)變[7]。葉綠體基因組具有相對分子量小、結(jié)構(gòu)簡單且高度保守的特點,因此廣泛應(yīng)用于分子系統(tǒng)發(fā)育研究[8]。安明珠等[9]在基于葉綠體基因,篩選鴨茅(Dactylis glomerata L .)葉綠體引物的研究中,從搜集的35對葉綠體引物中成功篩選出7對作為目的引物,為鴨茅的系統(tǒng)發(fā)育分析提供了依據(jù)。Yin等[10]通過采用Illumina高通量測序技術(shù)對野茄子(Solanum coagulans Forsk .)葉綠體基因組測序研究顯示,整個葉綠體基因組共注釋了128個編碼基因,包括83個蛋白編碼基因、37個轉(zhuǎn)移RNA基因和17個核糖體RNA基因;完整葉綠體基因組的長度為155 771 bp,其GC含量為37.76%。毛桂蓮等[11]通過鈣離子和過氧化氫對NaCl脅迫下枸杞葉片葉綠體功能的影響研究顯示,對氯化鈉脅迫的枸杞造成的傷害,外源Ca2+和H2O2具有一定緩解作用。Cui 等[12]對寧夏枸杞(L.barbarum)、中國枸杞 (L.chinense Mill)的葉綠體全基因組測序和分析,兩種枸杞葉綠體均注釋到133個基因,基因組全長分別為155 656 bp、155 745 bp,揭示了寧夏枸杞與中國枸杞的親緣關(guān)系。目前,有關(guān)黑果枸杞葉綠體的基因組研究較少,本研究以黑果枸杞葉片為材料,采用二代測序技術(shù)獲得黑果枸杞葉綠體全基因組序列,利用生物信息學(xué)相關(guān)軟件,分析其葉綠體基因組構(gòu)成和特征,不僅豐富了黑果枸杞的遺傳信息,也為后續(xù)黑果枸杞的遺傳多樣性、種群歷史動態(tài)和枸杞親緣關(guān)系等發(fā)展研究奠定了基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    2017年采集民勤(地理坐標(biāo)為39°01′N, 103°36′E,海拔1 309 m)1 a生野生黑果枸杞枝條,帶回學(xué)校,進(jìn)行扦插育苗,2018年4月將扦插苗移栽到甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)校內(nèi)實習(xí)基地(地理坐標(biāo):38°28′N,106°16′E)。2022年7月,從長勢基本一致的不同黑果枸杞植株上隨機(jī)摘取成熟健康的葉片,沖洗干凈后,用液氮速凍處理,然后放于 -80 ℃超低溫冰箱中保存,備用。

    1.2 葉綠體DNA提取和檢測

    依據(jù)DNA提取試劑盒[生工生物工程(上海)股份有限公司,型號:B518731-0050]的提取步驟,將備用葉片放入研缽中充分研磨后提取黑果枸杞的cpDNA。經(jīng)過除雜后,將檢測合格的 cpDNA進(jìn)行純化、末端修復(fù)等過程,然后開始建立文庫,并且通過Illumina高通量測序獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)(Clean Data)。

    1.3 葉綠體全基因組序列拼接、組裝與注釋

    使用SPAdes、GapFiller和PrInSeS-G軟件對基因組拼接、檢查與組裝,從而獲得完整葉綠體基因組。基于反向blast、參考基因組或內(nèi)建數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,優(yōu)化并提取拼接結(jié)果,注釋其CDS、tRNA、rRNA等基因元件。ARAGORN v1.2.38的tRNA注釋與blast結(jié)果進(jìn)行矯正,最終匯總整理為完整的注釋結(jié)果。注釋完成后,提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/),利用OGDRAW軟件繪制黑果枸杞葉綠體基因組完整圖譜。

    1.4 葉綠體基因組比較和系統(tǒng)發(fā)育分析

    利用MISA軟件(https://webblast.ipk-gatersleben.de/misa/index.php)對枸杞的微衛(wèi)星序列(SSR)進(jìn)行分析和檢測。根據(jù)分布模式將黑果枸杞葉綠體基因組重復(fù)序列分為散在重復(fù)序列和串聯(lián)重復(fù)序列,使用在線軟件REPuter(https://bibiserv.cebitec.uni-bielefeld.de/reputer)分析枸杞葉綠體基因組的重復(fù)序列。利用CodonW1.4.2軟件對黑果枸杞葉綠體基因組密碼子偏好性(RSCU,relative synonymous codon usage)進(jìn)行分析和統(tǒng)計。利用DnaSP軟件對黑果枸杞的葉綠體核苷酸多態(tài)性指數(shù)(nucleotide diversity,Pi)進(jìn)行計算與分析。利用IRscope軟件(https://irscope.shinyapps.io/irapp/)繪制黑果枸杞、紅果枸杞、黃果枸杞、白果枸杞、煙草和擬南芥的葉綠體基因組邊界對比圖,比較枸杞種間與其他物種間的基因大小和分布差異。為探究黑果枸杞的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系,利用muscle軟件對22個葉綠體全基因組序列進(jìn)行多重序列比對,使用raxml軟件和最大似然法(ML)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 葉綠體基因組結(jié)構(gòu)與特征

    將已測得的黑果枸杞葉綠體基因序列上傳到NCBI,從中獲取黑果枸杞葉綠體的基因序列號為OP846043。由表1可知,黑果枸杞葉綠體基因組的總長度為154 979 bp,GC含量為37.9%。黑果枸杞葉綠體基因組結(jié)構(gòu)與大多數(shù)被子植物相同,呈四段式結(jié)構(gòu),由IRA、IRB、LSC和SSC組成,且4個區(qū)的長度存在差異,LSC區(qū)最長,SSC區(qū)最短;其中,LSC結(jié)構(gòu)區(qū)長度為85 984 bp,SSC結(jié)構(gòu)區(qū)長度為18 205 bp,2個反向互補(bǔ)重復(fù)區(qū)IR長度相等,總長為50 790 bp。

    由圖1可知,黑果枸杞葉綠體基因組中共檢測到125個基因,其中,注釋有81個蛋白編碼基因(protein-coding genes,CDS),36個tRNA基因,8個rRNA基因。其中有17個基因在IR區(qū)重復(fù),包含6個蛋白質(zhì)編碼基因( rpl2、 rpl23、ndhB、 rps12、 rps7、 ycf2),4個rRNA基因( rrn16、 rrn23、 rrn4.5、 rrn5),7個tRNA基因(trnA-UGC、trnI-CAU、trnI-GAU、trnL-CAA、trnN-GUU、trnR-ACG、trnV-GAC);SSC區(qū)包含11個蛋白質(zhì)編碼基因,1個tRNA基因;LSC區(qū)包含62個蛋白質(zhì)編碼基因,21個tRNA基因。

    如表2所示,葉綠體基因主要包括光合作用和自我翻譯功能,依據(jù)基因功能可劃分為光合系統(tǒng)基因,遺傳系統(tǒng)基因,其他基因和未知功能基因。其中ndhA、petB、atpF、trnG-UCC等12個基因含有1個內(nèi)含子,clpP和 ycf3則含有2個內(nèi)含子,而內(nèi)含子比外顯子更容易在進(jìn)化中喪失功能。與核糖體RNA的合成有關(guān)的4個基因都位于IR區(qū),且存在2個拷貝。此外,有12個基因存在2個拷貝,分別為: rpl2, rpl23,trnI-CAU,trnI-GAU,trnA-UGC,trnR-ACG,trnL-CAA,trnV-GAC, ycf2、ndhB、trnN-GUU、 rps7。

    2.2 葉綠體基因組重復(fù)序列分析

    黑果枸杞葉綠體基因組的簡單重復(fù)序列(SSR)分析結(jié)果如表3和表4所示:黑果枸杞的核苷酸重復(fù)序列有60個,在5種核苷酸類型中,單核苷酸重復(fù)最多,為38個,占總體數(shù)的 63.33%,基因序列為A/T;其次是二核苷酸和四核苷酸序列,均為9個,各占總數(shù)的15%,其中,二核苷酸重復(fù)包含AT/TA基因序列,四核苷酸重復(fù)包含TTCT/TTTG、AAAT/TATT、TTAT/TTTA、CAAA/AAAC和CTAT/ATCA 4種基因序列類型;三核苷酸重復(fù)數(shù)為3個,占總體數(shù)的5%,重復(fù)包含AAG/TTA基因序列;五核苷酸重復(fù)數(shù)是1個,占總體數(shù)的1.70%,包含AATTG基因序列。

    散在重復(fù)序列主要包括4種類型:正向重復(fù)(forward,F(xiàn))、回文重復(fù)(palindrome,P)、反向重復(fù)(reverse,R)和互補(bǔ)重復(fù)(complement,C)。如圖2所示,黑果枸杞葉綠體的散在重復(fù)序列包含回文序列(palindromic)和正向重復(fù)序列(forward)2種,共40條,其中有22條回文序列和18條正向重復(fù)序列;對黑果枸杞的重復(fù)序列分析顯示大多數(shù)重復(fù)序列分布在基因間隔區(qū)或內(nèi)含子區(qū)域,且絕大多數(shù)序列的長度為30~50 bp。

    2.3 葉綠體基因組密碼子偏好性分析

    對黑果枸杞葉綠體密碼子分析結(jié)果如表5所示,檢測到所有密碼子的出現(xiàn)次數(shù)為20 370(終止子除外),其中編碼亮氨酸(Leu)的密碼子為UUA、UUG、CUU、CUC、CUA、CUG,出現(xiàn)次數(shù)為2 154,占總數(shù)的10.57%;編碼半胱氨酸(Cys)的密碼子為UGU、UGC,出現(xiàn)次數(shù)最少,為219,占總數(shù)的1.08%。相對同義密碼子相對使用度的值大于1時,說明密碼子在蛋白質(zhì)編碼的使用上具有偏好性。使用度最高的是UUA,為 1.90,使用度最低的是AGC,為0.35;有31個密碼子的RSCU值大于1,其中,有28個密碼子的堿基構(gòu)成以A或U結(jié)尾,3個密碼子的堿基構(gòu)成以G或C結(jié)尾。

    葉綠體蛋白質(zhì)編碼基因的RSCU值的大小是衡量密碼子偏好性的標(biāo)準(zhǔn)。如圖3所示,黑果枸杞葉綠體蛋白編碼基因主要偏好以A、T結(jié)尾的密碼子,且T的使用率大于A。以亮氨酸(Leu)和絲氨酸(Ser)為例,編碼Leu的密碼子共有6個(TTA、TTG、CTT、CTC、CTA、CTG),其中TTA的RSCU值最大,為1.9,CTC和CTG的RSCU值最小,分別為0.41和0.40,說明黑果枸杞葉綠體在編碼Leu時偏好使用密碼子TTA,而盡量避開CTC和CTG兩個密碼子;編碼Ser的密碼子也有6個(TCT、TCC、TCA、TCG、AGT、AGC),但測序結(jié)果顯示主要使用TCT、TCA、AGT(RSCU值均大于1),尤其是TCT的使用率最高,而AGC的使用率最低,為0.35。

    2.4 葉綠體基因組的核苷酸序列多態(tài)性分析

    對黑果枸杞葉綠體基因組序列進(jìn)行多態(tài)性分析,結(jié)果如圖4所示,用核苷酸變異性(Pi)表示,在黑果枸杞葉綠體基因組的4個典型區(qū)域中,IR區(qū)域表現(xiàn)出最高的保守性,而高變區(qū)在SSC區(qū);黑果枸杞葉綠體CDS中突變率最高的5個基因分別為 ycf1、ndhE、ccsA、trnL-UAG和ndhF,Pi值依次為0.103 31、0.102 55、0.111 31、0.111 49和0.111 75,這些區(qū)域可能包含關(guān)于葉綠體基因組中進(jìn)化速率較快的位點信息。

    2.5 葉綠體基因組IR區(qū)邊界分析

    為探究葉綠體基因組的IR區(qū)與LSC、SSC區(qū)之間連接區(qū)域的詳細(xì)信息,對模式植物擬南芥(MT955897.1)、煙草(NC_035952.1)和4種枸杞屬植物的葉綠體進(jìn)組進(jìn)行分析。結(jié)果如圖5所示,6個葉綠體基因組中IR區(qū)域的長度范圍為 25 384~25 451 bp,顯示出適度的擴(kuò)張。在這6個物種的葉綠體基因組中,除煙草的LSC區(qū)明顯擴(kuò)張外,其他物種的IRb/LSC的連接區(qū)域均處于 rps19基因的編碼區(qū),導(dǎo)致了3′端基因的重復(fù),而這種重復(fù)在IRb/LSC的連接區(qū)域產(chǎn)生了長度不等(48~61 bp)的 rps19假基因;此外,4種枸杞屬植物的IRb/SSC邊界和2種模式植物的IRa/SSC邊界均存在于 ycf1基因的編碼區(qū),煙草和擬南芥在IRb/SSC邊界產(chǎn)生的 ycf1假基因長度均為995 bp,4種枸杞屬植物在IRa/SSC邊界產(chǎn)生的 ycf1假基因長度不等(995~998 bp)。在這些葉綠體基因組中, rpl2基因長度為1 491 bp,分別位于IRb區(qū)域靠近IRb/LSC邊界71~132 bp和IRa區(qū)域靠近IRa/LSC邊界 70~132 bp的位置;trnN基因分別位于IRb區(qū)域靠近IRb/SSC邊界和IRa區(qū)域靠近IRa/SSC邊界72 bp(擬南芥為73 bp)的位置;trnH基因僅存在于LSC區(qū),距離IRa/LSC邊界11~26 bp;ndhF基因只存在于SSC區(qū)域,擬南芥和煙草靠近IRb/SSC邊界的距離分別為52 bp、44 bp,其他4種枸杞屬植物則距離IRa/SSC邊界52 bp(紅果枸杞為42 bp)。[JP]

    2.6 葉綠體基因組的系統(tǒng)進(jìn)化分析

    為了確定黑果枸杞的系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育關(guān)系,本研究將黑果枸杞與茄科以及2個外類物種等共21個cpDNA序列構(gòu)建ML系統(tǒng)發(fā)育樹。發(fā)育樹如圖6所示,21個物種可分為2類,第1類是外類群組,堿草(Cressa cretica)和圓葉牽牛(Ipomoea purpurea)聚為1類,第2類由19個茄科物種組成;第2類群又可分為2個小類群,其中煙草(Nicotiana attenuata)自為1類,其余的茄科植物為一類。寧夏枸杞(Lycium barbarum)與中國枸杞(Lycium chinense)聚為一類,與黑果枸杞 (Lycium ruthenicum)、非洲枸杞(Lycium ferocissimum)匯聚在一起形成姐妹分支,支持率較高。枸杞屬植物與天仙子(Hyoscyamus niger)、馬尿脬(Przewalskia tangutica)和顛茄(Atropa belladonna)匯聚成的姐妹分支聚為一個大分支,說明枸杞屬植物與這3個屬的植物遺傳關(guān)系 較近。

    3 討 論

    目前,因基因組測序技術(shù)的廣泛運用和葉綠體基因組的深入研究,使其數(shù)據(jù)庫迅速擴(kuò)大,從而為探究分子進(jìn)化的過程提供了基礎(chǔ),與枸杞核基因組相比,葉綠體基因組更具有顯著的優(yōu)勢,因此,本試驗對黑果枸杞葉綠體的全基因組序列進(jìn)行研究。試驗測得黑果枸杞的cpDNA全長為154 979 bp,LSC長度為85 984 bp,SSC為 18 205 bp,IR為25 395 bp,與已報道的高等植物的葉綠體基因組數(shù)據(jù)相符[13]。有關(guān)枸杞屬葉綠體基因組測序研究的報道較少,目前只有2種枸杞屬植物被報道,分別為中國枸杞[14] 、寧夏枸杞 [15]。比較這3種枸杞葉綠體基因組的組成和特征發(fā)現(xiàn),寧夏枸杞和中國枸杞葉綠體基因組總GC含量為37.8%;黑果枸杞葉綠體基因組GC含量為37.9%,而GC的含量可反應(yīng)葉綠體基因組組成特征,在同屬內(nèi)枸杞的葉綠體基因組的進(jìn)化速度慢,表現(xiàn)出的保守性較高。不同植物葉綠體的tRNA基因數(shù)目存在較大差異,如砂仁[16](Amomum villosum Lour.)葉綠體基因組中注釋113個基因,包括79個蛋白編碼基因,30個tRNA個基因和4個rRNA基因;山楂[16](Crataegus pinnatifida Bunge.)注釋到112個基因,包括78個蛋白編碼基因、30個tRNA基因和4個rRNA基因。對測得的黑果枸杞葉綠體基因組進(jìn)行基本功能注釋,共注釋到125個基因,檢測到81個蛋白編碼基因,36個tRNA基因,8個rRNA基因,而出現(xiàn)這種差異的原因是不同植物之間葉綠體基因本就存在較大差異。黑果枸杞的編碼基因主要分布在LSC區(qū),大多數(shù)基因只含有1個內(nèi)含子,這與其他植物研究結(jié)果一致[17]。SSR序列常見于動物和植物中,由于DNA在進(jìn)行復(fù)制時 ,堿基容易發(fā)生錯位,因此使得SSR序列具有豐富的多態(tài)性,為生物的進(jìn)化和系統(tǒng)進(jìn)化提供依據(jù)[18]。枸杞的散在重復(fù)序列主要有回文序列(Palindromic)和正向重復(fù)序列(Forward)2種類型[14],在39~48之間,并且回文序列的重復(fù)次數(shù)較多,黑果枸杞葉綠體基因組含22條回文序列和18條正向重復(fù)序列。在黑果枸杞的葉綠體基因組中,檢測出60個SSR序列,共有5種類型(除了這5種重復(fù)序列外,其他所有重復(fù)序列都位于相同的基因或基因間區(qū)域),其中大多數(shù)為單核苷酸重復(fù)序列,沒有檢測到六核苷酸序列,且主要由多聚腺苷酸(polyA)和多聚胸腺嘧啶(polyT)重復(fù)序列組成[19]。本研究中的重復(fù)序列差異,有助于枸杞植物的探索和利用。黑果枸杞SSR位點在葉綠體基因組中分布不均,多態(tài)性較高,為人們研究枸杞葉綠體基因組片段的進(jìn)化,以及SSR分子標(biāo)記技術(shù)的開發(fā)提供理論依據(jù)。

    密碼子的偏好性是由基因突變和物種進(jìn)化等多種因素作用下形成的[20]。在植物基因中,不論在同一物種還是不同物種之間,不同密碼子的出現(xiàn)頻率有明顯差異。RSCU值是衡量密碼子偏好性的一個重要參數(shù),RSCU值越大,則表示該密碼子在基因表達(dá)中的使用頻率越高,反之則越低;當(dāng)RSCU 值等于1時,認(rèn)為該密碼子的使用情況僅受基因突變的影響[21]。本研究中黑果枸杞葉綠體基因組有31個密碼子的RSCU值大于1,說明這31個密碼子在蛋白質(zhì)基因編碼上具有偏好性,其中以A或U結(jié)尾的密碼子占90.32%,這與番茄等植物的研究結(jié)果一致[22];而在山楂屬[23]的葉綠體基因組中,最優(yōu)密碼子的數(shù)目為17~20個,兩者之間的差異可能與植物種類以及選入的基因數(shù)量有關(guān)。比較密碼子使用頻率之間的差異,在黑果枸杞中亮氨酸(Leu)、精氨酸(Arg)、絲氨酸(Ser)RSCU同義密碼子使用度最大,由此推測,黑果枸杞中這3種氨基酸的含量可能較高。普遍認(rèn)為IR區(qū)是葉綠體基因組中最保守的部位,而形成植物葉綠體基因組長度變化的主要原因是IR區(qū)邊緣的收縮和擴(kuò)張[24]。研究表明,葉綠體基因組的演化和系統(tǒng)發(fā)育分析的過程可由 ycf1、ndhF基因的特征分析[25]。本試驗研究發(fā)現(xiàn),不同物種葉綠體基因組的IR區(qū)與LSC、SSC區(qū)之間連接區(qū)域的編碼基因存在相似的規(guī)律,但仍存在一定差異,例如 ycf1和ndhF基因在不同的連接區(qū)域編碼。在枸杞屬植物的葉綠體基因組IR區(qū)分析中發(fā)現(xiàn),屬內(nèi)植物的連接區(qū)域及基因表達(dá)具有高度相似性,這與丁香屬[26]植物的研究結(jié)果也類似。核苷酸多態(tài)性可以用來評價群體基因組遺傳多樣性水平,本研究得出在黑果枸杞葉綠體基因組中,IR區(qū)域表現(xiàn)出最高的保守性,而高變區(qū)在SSC區(qū),其中ndhF基因的多態(tài)性最高,且 ycf1、ccsA和ndhE等基因的突變率也比較高,這些突變位點可為枸杞屬內(nèi)物種鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析提供更有價值的信息,這與南洋杉科葉綠體基因組在基因組特征的各個方面均高度保守的特征相同[27]。系統(tǒng)發(fā)育基本組學(xué)研究是通過分子數(shù)據(jù)來探討生物之間的發(fā)育規(guī)律的;系統(tǒng)發(fā)育對于研究進(jìn)化歷史對生態(tài)群落中物種組裝的影響以及物種組合系統(tǒng)發(fā)育結(jié)構(gòu)的地理和生態(tài)模式至關(guān)重要[28-29]。由于cpDNA具有序列保守、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等特點[30],因此,基于cpDNA進(jìn)行的系統(tǒng)發(fā)育研究得到了很好的發(fā)展。本研究以測得黑果枸杞葉綠體基因組全部序列聯(lián)合NCBI下載的茄科植物以及外類群組植物的葉綠體基因組序列構(gòu)建了進(jìn)化樹,結(jié)果表明,該進(jìn)化樹的分辨率較高,各節(jié)點也獲得了較高的支持率,茄科內(nèi)屬間呈現(xiàn)出較為明確的發(fā)育關(guān)系,枸杞屬內(nèi)呈明顯的姐妹關(guān)系,與Wang等 [31]研究的枸杞(寧夏枸杞)的進(jìn)化關(guān)系一致。

    4 結(jié) 論

    綜上所述,黑果枸杞cpDNA全長154 979 bp,共注釋到125個基因,其中,包含有81個蛋白編碼基因,36個tRNA基因,8個rRNA基因,黑果枸杞cpDNA偏好G或C堿基。系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果表明,黑果枸杞與非洲枸杞、寧夏枸杞和中國枸杞等枸杞屬植物親緣關(guān)系較近。本研究豐富了黑果枸杞的研究內(nèi)容,為進(jìn)一步研究黑果枸杞系統(tǒng)進(jìn)化和遺傳育種提供了理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn) Reference:

    [1] 萬國海.枸杞的生物學(xué)特性、栽培管理及采收加工[J].種植與環(huán)境,2013(4):214.

    WAN G H.Biological characteristics,cultivation management and harvesting and processing of Lycium barbarum L.[J].Modern Animal Husbandry Science & Technology,2013(4):214.

    [2]YU ZH L,XIA M Q,AN J P,et al.A comprehensive review on the ethnobotany,phytochemistry,pharmacology and quality control of the genus Lycium in China[J].Food & Function,2023,14:2998-3025.

    [3]閆亞美,冉林武,曹有龍,等.黑果枸杞花色苷含量測定方法研究[J].食品工業(yè),2012,33((6):145-147.

    YAN Y M,RAN L W,CAO Y L,et al.Determine the total anthocyanins in Lycium ruthenicum Murr.by different methods[J].The Food Industry,2012,33((6):145-147.

    [4]阿力同·其米克,王青鋒,楊春鋒,等.新疆產(chǎn)藥用植物黑果枸杞遺傳多樣性的ISSR分析[J].植物科學(xué)學(xué)報,2013, 31(5):517-524.

    ALITONG QIMIKE,WANG Q F,YANG CH F,et al.ISSA analysis on genetic diversity of medically important Lycium ruthenicum Murr.in Xinjiang.[J].Plant Science Journal, 2013,31(5):517-524.

    [5]YUN D W,YAN Y M,LIU J.Isolation,structure and biological activity of polysaccharides from the fruits of Lycium ruthenicum Murr:A review[J].Carbohydrate Polymers,2022,291:119618.

    [6]SINA C,F(xiàn)LAVIA S,MANUELA M.Determination of leaf characteristics in different medlar genotypes usingthe image program[J].Horticultural Science,2020,47(2):117-121.

    [7]SOMSSICH MARC.The dawn of plant molecular biology:how three key methodologies paved the way[J].Current Protocols,2022,2(4):e417.

    [8]潘 登,高宏波.葉綠體DNA的發(fā)現(xiàn)歷程[J].生物學(xué)通報,2012,47(7):53-55.

    PAN D,GAO H B.Discovery process of chloroplast DNA[J].Bulletin of Biology,2012,47(7):53-55.

    [9]安明珠,趙世偉,朱文露,等.鴨茅葉綠體引物篩選[J].草學(xué),2022(1):30-36,47.

    AN M ZH,ZHAO SH W,ZHU W L,et al.Screening of Dactylis chloroplast primers[J].Journal of Grassland and Forage Science,2022(1):30-36,47.

    [10] YIN M Y,YU Y A,GONG Y J,et al.The complete chloroplast genome of; Solanum sisymbriifolium; (Solanaceae),the wild eggplant[J].Mitochondrial DNA Part B,2022,7(5):886-888.

    [11]毛桂蓮,付曉輝.外源Ca2+和H2O2對NaCl脅迫下枸杞離體葉片葉綠體中活性氧代謝的影響研究[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2009,27(5):191-195.

    MAO G L,F(xiàn)U X H.Effects of exogenous Ca2+ and H2O2 on active oxygen metabolism of isolated leaves of Lycium barbarum L.chloroplast under NaCl stress[J].Agricultural Research in the Arid Areas,2009,27(5):191-195.

    [12]CUI Y,ZHOU J,CHEN X,et al.Complete chloroplast genome and comparative analysis of three Lycium (Solanaceae) species with medicinal and edible properties[J].Gene Reports,2019,10:0464.

    [13]ZHANG T W,F(xiàn)ANG Y J,WANG X M,et al.The complete chloroplast and mitochondrial genome sequences of Boea hygrometrica:insights into the evolution of plant organellar genomes[J].PloS One,2012,7(1):e30531.

    [14]YANG Z,HUANG Y,AN W,et al.Sequencing and structural analysis of the complete chloroplast genome of the medicinal plant Lycium chinense Mill[J].Plants,2019, 8(4):87.

    [15]劉晶星.寧夏枸杞和黑果枸杞葉綠體全基因組測序及基因注釋分析[D].北京:中國科學(xué)院北京基因組研究所,2013.

    LIU J X.De novo assembly and gene annotation of the chloroplast genomes of Lycium barbarum and Lycium ruthenicum[D].Beijing:Beijing Institute of genome research,Chinese Academy of Sciences,2013.

    [16]崔英賢.藥食兩用藥材砂仁、枸杞、山楂和姜基原植物葉綠體基因組結(jié)構(gòu)解析[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2020.

    CUI Y X.Structural analysis of complete chloroplast genome of medicinal and edible original plants of Amomum,Chinese Wolfberry,Hawthorn and Ginger[D].Beijing:Peking Union Medical College,2020.

    [17]NI Z X,YE Y J,BAI T D,et al.Complete chloroplast genome of Pinus massoniana (Pinaceae):Gene rearrangements,loss of ndh genes,and short inverted repeats contraction,expansion[J].Molecules,2017,22(9):1528.

    [18]JANSEN R K,SASKI C,LEE S,et al.Complete plastid genome seque nces of three Rosids (Castanea,Prunus,Theobroma):evidence for at least two independent transfers of rpl22 to the nucleus[J].Molecular Biology and Evolution,2011,28(1):835-847.

    [19]ZHANG Y J,DU L W.The complete chloroplast genome sequences of five Epimedium species:lights into phylogenetic and taxonomic analyses[J].Frontiers in Plant Science,2016,7(696):1-11.

    [20]HLNE CHIAPELLO A B,F(xiàn)RDRIQUE LISACEK B,et al.Codon usage and gene function are related in sequences of Arabidopsis thaliana[J].Gene,1998,209(1/2):1-38.

    [21]SONG H,LIU J,CHEN T,et al.Synonymous codon usage pattern in model legume Medicago truncatula[J].Journal of Integrative Agriculture,2018,17(9):2074-2081.

    [22]LI N,LI Y Y,ZHENG C C,et al.Genome-wide comparative analysis of the codon usage patterns in plants[J].Genes&Genomics,2016,38(8):723-731.

    [23]趙振寧,孫浩田,宋雨茹,等.山楂屬植物葉綠體基因組特征與密碼子偏好性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2023,39(2):504-517.

    ZHAO ZH N,SUN H T,SONG Y R,et al.Chloroplast genome characteristics and codon usage bias analysis of Crataegus L.[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2023,39(2):504-517.

    [24]WANG Q,ZHANG CH H,WANG CH J,et al.Complete chloroplast genome data for Mimosa diplotricha and Mimosa diplotricha var.inermis from China[J].Data in Brief,2023,48:109045.

    [25]JOEY S,EDGAR B L,EDWARD E S,et al.Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for phylogenetic studies in angiosperms:the tortoise and the hare III[J].American Journal of Botany,2007,94(3):275-288.

    [26]張 航.丁香屬3種植物完整葉綠體基因組與系統(tǒng)發(fā)育研究[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué),2022,001431.

    ZHANG H.Complete chloroplast genomes and phylogeny of three plants of the Syringa[D].Harbin:Northeast Forestry University,2022,001431.

    [27]VAN BINH NGUYEN,VO NGOC LINH GIANG,NOMAR ESPINOSA WAMINAL,et al.Comprehensive comparative analysis of chloroplast genomes from seven Panax species and development of an authentication system based on species-unique single nucleotide polymorphism markers[J].Journal of Ginseng Research,2020,44(1):135-144.

    [28]TANGJ Y,WEI R,ZHANG X CH,et al.Mitogenome-based phylogenomics provides insights into the positions of the enigmatic sinensis group and the sanguinolenta group in Selaginellaceae (Lycophyte)[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2023,179:107673.

    [29]YU M,ZHANG D,ZHAO X M.Sequencing and phylogenomics of the complete mitochondrial genome of Allodiplogaster sp.(Rhabditida:Diplogasteridae):a new gene order and its phylogenetic implications[J].Gene,2022,840:146761.

    [30]CASTROA A,NUNES R,CARVALHO L R,et al.Chloroplast genome characterization of Uncaria guianensis and Uncaria tomentosa and evolutive dynamics of the Cinchonoideae subfamily[J].Scientific Reports,2023,13(1):8390.

    [31]WANG C P,JIA G L,ZHU L ZH,et al.The complete chloroplast genome sequence of Lycium ruthenicum(Solanaceae),a traditional medicinal plant in China[J].Mitochondrial DNA Part B,2019,4(2):2495-2496.

    Analysis of Chloroplast Genomic Characteristics of L.ruthenicum Murr

    LIU Di1,DU Yu1,LI Xiaoxiong 2,MA Rui1,LIU Yun1 and MA Yanjun1

    (1.Forestry College,Gansu Agriculture University,Lanzhou 730070,China; 2.LanzhouResources & Environment Voc-Tech University,Lanzhou 730030,China )

    Abstract Tounveil the chloroplast genome (cpDNA) characteristics and phylogenetic development of Lycium ruthenicum,we sequenced the chloroplast of Lycium ruthenicum using NGS technology,and analyzed its genomic characteristics.The results showed that the total length of the cpDNA of Lycium ruthenicum was 154 979 bp,comprising a large single copy region LSC with a length of 85 984 bp,a small single copy region SSC with a length of 18 205 bp,and two reverse complementary repeat regions (IRs) totaling 25 395 bp. Annotation identified a total of 125 genes,including 81 protein coding genes (CDS),36 tRNA genes,and 8 rRNA genes. We detected 60 nucleotide repeat sequences, with five nucleotide types showing the highest single nucleotide repeat of 38,accounting for 63.33% of the total number. The gene sequence was A/T. Codon preference analysis showed a preference for G or C bases,with 2 154 codons encoding Leucine (Leu) accounting for 10.57% of the total,while the least encoded codon was Cysteine (Cys) with 219 occurrences.Polymorphism analysis showed that the IR region exhibited the highest conservatism,while the SSC region was hypervariable; the SSR loci were unevenly distributed and exhibited high polymorphism in the chloroplast genome. The phylogenetic analysis indicated that Lycium barbarum and Lycium chinense clustered together forming sisters branches with Lycium barbarum and Lycium ferocissimum,indicating a close genetic relationship among the four species.

    Key words Lycium ruthenicum,; Chloroplast genome; SSR; Codon; Phylogenetic analysis

    Received 2023-08-16 Returned 2023-09-19

    Foundation item Research Project of Lanzhou Resources & Environment Voc-Tech University (No.X2022ZD-05); University Industry Support Plan of Gansu Province (No.2023CYZC-46); Lanzhou Science and Technology Plan (No.2022-2-22).

    First author LIU Di,male,master student.Research area:investigation,collection,preservation,and research of plant germplasm resources. E-mail:18193143002@163.com

    Corresponding author MA Yanjun,male,Ph.D,professor.Research area:investigation,collection,preservation,and research of plant germplasm resources.E-mail:mayanjun@gsau.edu.cn

    (責(zé)任編輯:潘學(xué)燕 Responsible editor:PAN Xueyan)

    基金項目:蘭州資源環(huán)境職業(yè)技術(shù)大學(xué)重點研究項目(X2022ZD-05);甘肅省高校產(chǎn)業(yè)支撐計劃(2023CYZC-46);蘭州市科技計劃(2022-2-22)。

    第一作者:柳 迪,男,碩士研究生,從事植物種質(zhì)資源調(diào)查收集、保存與研究。E-mail:18193143002@163.com

    通信作者:馬彥軍,男,博士,教授,主要從事植物種質(zhì)資源調(diào)查收集、保存與研究。E-mail:mayanjun@gsau.edu.cn

    麻豆一二三区av精品| 亚洲精华国产精华精| 在线永久观看黄色视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲成人久久性| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 午夜激情av网站| 国产黄片美女视频| 国产精品免费视频内射| 一二三四在线观看免费中文在| 久久国产精品影院| 男人舔女人的私密视频| 999久久久精品免费观看国产| 国产午夜福利久久久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国语自产精品视频在线第100页| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 婷婷亚洲欧美| 搞女人的毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美日韩精品网址| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 曰老女人黄片| 小说图片视频综合网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 熟女电影av网| 身体一侧抽搐| 18禁观看日本| 日本五十路高清| 午夜福利18| 午夜福利欧美成人| 免费av毛片视频| 99热只有精品国产| 哪里可以看免费的av片| 国产午夜精品久久久久久| videosex国产| 久久中文字幕一级| а√天堂www在线а√下载| 免费搜索国产男女视频| 国模一区二区三区四区视频 | av超薄肉色丝袜交足视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久国产成人免费| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美黄色淫秽网站| www国产在线视频色| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美大码av| 国产精品电影一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久精品影院6| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 最近最新中文字幕大全免费视频| 99riav亚洲国产免费| 国产av又大| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 两人在一起打扑克的视频| 特大巨黑吊av在线直播| 高清在线国产一区| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美激情久久久久久爽电影| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜免费观看网址| 99在线人妻在线中文字幕| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲黑人精品在线| 久久精品成人免费网站| 给我免费播放毛片高清在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 特大巨黑吊av在线直播| 久久国产精品人妻蜜桃| 99国产精品99久久久久| www日本在线高清视频| 精品国产亚洲在线| 好男人电影高清在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲精品色激情综合| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久性视频一级片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| www.999成人在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品久久视频播放| 亚洲人成电影免费在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 色尼玛亚洲综合影院| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产99久久九九免费精品| 国产伦在线观看视频一区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品一区二区免费欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 99国产精品一区二区三区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品免费久久久久久久清纯| 日本一二三区视频观看| 日韩有码中文字幕| 日本三级黄在线观看| 亚洲在线自拍视频| 亚洲最大成人中文| 少妇粗大呻吟视频| 国产不卡一卡二| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲人成77777在线视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久这里只有精品19| 99热这里只有精品一区 | 久久久国产成人免费| 国产成人欧美在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久久久久久久中文| 麻豆成人av在线观看| 此物有八面人人有两片| 一a级毛片在线观看| 久久99热这里只有精品18| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产看品久久| 亚洲美女视频黄频| 久久久久久大精品| a级毛片在线看网站| x7x7x7水蜜桃| 精品久久久久久久久久久久久| 91在线观看av| 欧美三级亚洲精品| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲成人国产一区在线观看| 99国产综合亚洲精品| 成人手机av| 老司机福利观看| 色综合婷婷激情| 久久久久久免费高清国产稀缺| 啦啦啦免费观看视频1| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲人成电影免费在线| 国产av一区在线观看免费| 亚洲午夜理论影院| 在线观看免费视频日本深夜| av天堂在线播放| 亚洲男人天堂网一区| 日韩av在线大香蕉| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久热在线av| 天天一区二区日本电影三级| 12—13女人毛片做爰片一| 啦啦啦免费观看视频1| a级毛片a级免费在线| 国产精华一区二区三区| 成人国语在线视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 一级黄色大片毛片| 在线观看一区二区三区| 91成年电影在线观看| 1024视频免费在线观看| 国产区一区二久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 岛国在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 精品国产美女av久久久久小说| а√天堂www在线а√下载| 精品一区二区三区四区五区乱码| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲色图av天堂| 久久人人精品亚洲av| АⅤ资源中文在线天堂| 又大又爽又粗| 久久久久国产一级毛片高清牌| 成人精品一区二区免费| 欧美日韩黄片免| 精品国产美女av久久久久小说| av视频在线观看入口| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产99久久九九免费精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲美女视频黄频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 18美女黄网站色大片免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品久久久久久久电影 | 淫妇啪啪啪对白视频| 在线a可以看的网站| 国产主播在线观看一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 免费在线观看成人毛片| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲片人在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| bbb黄色大片| 欧美久久黑人一区二区| 国产精品国产高清国产av| 美女免费视频网站| 亚洲无线在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品一区二区免费欧美| 国产视频一区二区在线看| 一a级毛片在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产视频内射| 成人永久免费在线观看视频| 成人三级黄色视频| 国产精品av久久久久免费| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美成人午夜精品| 美女免费视频网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美日韩一级在线毛片| 国内精品久久久久精免费| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 性欧美人与动物交配| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美又色又爽又黄视频| 视频区欧美日本亚洲| 久久久国产成人免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产探花在线观看一区二区| 身体一侧抽搐| 国产高清视频在线观看网站| www.www免费av| 高清在线国产一区| 又紧又爽又黄一区二区| 在线永久观看黄色视频| 中国美女看黄片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清激情床上av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美成人免费av一区二区三区| 757午夜福利合集在线观看| 午夜福利在线在线| 九九热线精品视视频播放| 久久久国产成人免费| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲精品在线观看二区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 一进一出抽搐动态| 国产激情欧美一区二区| 国产爱豆传媒在线观看 | 黄色a级毛片大全视频| 动漫黄色视频在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品欧美国产一区二区三| 看免费av毛片| 亚洲 国产 在线| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 丁香欧美五月| 欧美成人性av电影在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲,欧美精品.| 一本一本综合久久| 中文字幕久久专区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 免费高清视频大片| 操出白浆在线播放| 亚洲专区字幕在线| avwww免费| www.www免费av| 久久人妻av系列| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产精品日韩av在线免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 一级毛片高清免费大全| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品精品国产色婷婷| 免费看日本二区| 国语自产精品视频在线第100页| 免费av毛片视频| 久久午夜亚洲精品久久| 日日夜夜操网爽| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 嫩草影院精品99| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美日韩精品网址| 99热只有精品国产| 亚洲人成电影免费在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产一区在线观看成人免费| 在线观看午夜福利视频| 91老司机精品| 久久精品人妻少妇| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲avbb在线观看| 欧美三级亚洲精品| 欧美性猛交黑人性爽| www国产在线视频色| 亚洲专区国产一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲最大成人中文| 国产欧美日韩一区二区三| 国产真实乱freesex| 看黄色毛片网站| 欧美av亚洲av综合av国产av| a级毛片在线看网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日韩精品青青久久久久久| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲美女黄片视频| 黄频高清免费视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品不卡国产一区二区三区| 哪里可以看免费的av片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一本大道久久a久久精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | www.熟女人妻精品国产| 一二三四在线观看免费中文在| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 超碰成人久久| 国产不卡一卡二| 久99久视频精品免费| 亚洲最大成人中文| 欧美午夜高清在线| 在线观看免费午夜福利视频| 在线观看舔阴道视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 观看免费一级毛片| 精品电影一区二区在线| 亚洲九九香蕉| 99热这里只有精品一区 | 国产av麻豆久久久久久久| 黄色视频,在线免费观看| e午夜精品久久久久久久| 激情在线观看视频在线高清| 欧美午夜高清在线| 亚洲人成电影免费在线| 日本熟妇午夜| 国产精品,欧美在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 91九色精品人成在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 91老司机精品| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美大码av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产成人精品无人区| 亚洲在线自拍视频| 久久人人精品亚洲av| 久久久久国内视频| 看黄色毛片网站| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品,欧美在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久国产精品影院| 91成年电影在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 人成视频在线观看免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美成人午夜精品| 天天添夜夜摸| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产av在哪里看| www.www免费av| 亚洲国产欧美网| 亚洲成人国产一区在线观看| 很黄的视频免费| 亚洲国产高清在线一区二区三| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人18禁在线播放| av天堂在线播放| 俺也久久电影网| 中文资源天堂在线| 岛国视频午夜一区免费看| 成人国语在线视频| 三级国产精品欧美在线观看 | 精品久久久久久久末码| 成人欧美大片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩有码中文字幕| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 91成年电影在线观看| 国产av一区在线观看免费| 免费看a级黄色片| 成年人黄色毛片网站| 国产伦在线观看视频一区| www.999成人在线观看| 91麻豆av在线| 午夜视频精品福利| 午夜福利在线观看吧| 91在线观看av| 天堂动漫精品| 欧美极品一区二区三区四区| 少妇粗大呻吟视频| 国产精品久久视频播放| 中文字幕av在线有码专区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 女警被强在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| av有码第一页| 正在播放国产对白刺激| 999久久久国产精品视频| 精品久久久久久久末码| 国产亚洲精品一区二区www| 久久这里只有精品中国| 热99re8久久精品国产| 婷婷亚洲欧美| 91成年电影在线观看| 天堂影院成人在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 麻豆av在线久日| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品久久久久久精品电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 九色成人免费人妻av| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产av又大| 小说图片视频综合网站| 欧美日韩乱码在线| 丁香六月欧美| 亚洲av美国av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美又色又爽又黄视频| 久久久国产成人免费| 在线a可以看的网站| av视频在线观看入口| 人人妻人人看人人澡| 岛国视频午夜一区免费看| www.精华液| 久久久国产欧美日韩av| 后天国语完整版免费观看| 国产乱人伦免费视频| 黄色视频,在线免费观看| 国产av麻豆久久久久久久| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜福利成人在线免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 91国产中文字幕| 在线观看66精品国产| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一区二区三区国产精品乱码| 免费高清视频大片| 精品久久久久久久久久久久久| 色噜噜av男人的天堂激情| x7x7x7水蜜桃| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久精品成人免费网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产成人av激情在线播放| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美精品综合久久99| ponron亚洲| 一本一本综合久久| 亚洲熟女毛片儿| 久久精品国产亚洲av高清一级| 搡老熟女国产l中国老女人| 黄色视频不卡| 久久久久久久久免费视频了| 国产av一区二区精品久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久香蕉激情| 中文亚洲av片在线观看爽| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品精品国产色婷婷| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久精品国产清高在天天线| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 又大又爽又粗| 免费无遮挡裸体视频| 黄频高清免费视频| 人人妻人人看人人澡| 床上黄色一级片| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产单亲对白刺激| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久精品影院6| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品久久电影中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜福利在线在线| 亚洲人成电影免费在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲18禁久久av| 精品久久久久久久久久久久久| 午夜a级毛片| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精华霜和精华液先用哪个| 首页视频小说图片口味搜索| 国产三级在线视频| e午夜精品久久久久久久| 欧美又色又爽又黄视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人国产一区最新在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲精品在线美女| 成年人黄色毛片网站| 亚洲中文字幕日韩| 青草久久国产| 国产亚洲av高清不卡| 高清毛片免费观看视频网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 老鸭窝网址在线观看| 一级黄色大片毛片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 全区人妻精品视频| 久久久久国内视频| 亚洲熟女毛片儿| tocl精华| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲 国产 在线| 久久久久性生活片| 亚洲精品一区av在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久久久国产欧美日韩av| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 精品久久久久久成人av| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品 欧美亚洲| 日韩欧美三级三区| 日本一本二区三区精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄色毛片三级朝国网站| 国产三级黄色录像| 久久久久免费精品人妻一区二区| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 中亚洲国语对白在线视频| 一区二区三区激情视频| 久久九九热精品免费| 999久久久国产精品视频| 99热6这里只有精品| 亚洲自拍偷在线| 午夜成年电影在线免费观看| 1024香蕉在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 国产一区二区激情短视频| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 桃红色精品国产亚洲av| 12—13女人毛片做爰片一| 国产视频内射| 国产又色又爽无遮挡免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| a级毛片a级免费在线| 99国产精品一区二区三区| 国产成人精品无人区| 久久香蕉精品热| 后天国语完整版免费观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日本五十路高清| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美最黄视频在线播放免费| 91成年电影在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久精品91蜜桃| 99久久国产精品久久久| 久久久久亚洲av毛片大全|