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    云南元江諾麗果汁對正常大鼠血壓與糖尿病模型小鼠血糖的影響

    2024-10-09 00:00:00杜鵬鵬王建昭藍(lán)增全王燦吳田
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2024年9期

    關(guān)鍵詞:諾麗果汁;輔助藥物;降血糖功效;降血壓功效

    中圖分類號(hào):TS201.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    諾麗(Morinda citrifolia)又稱海巴戟,茜草科,巴戟天屬,灌木至小喬木,果實(shí)為聚花核果漿果狀,熟果采后極易軟化腐爛產(chǎn)生腐臭味[1],生長于熱帶叢林中,是一種熱帶果樹[2],在我國主要分布于臺(tái)灣和云南等地[3],1991 年引種至海南,成為海南的特色水果[4]。諾麗用途廣泛,可藥食兩用,也是一種保健食品。其富含多酚和黃銅[5],具有抗氧化、抗腫瘤[6]等多種功效,果實(shí)、根、葉片、枝干均可入藥[7],果體內(nèi)的活性物質(zhì)和營養(yǎng)成分是藥用成分的主要來源[8],有較好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[9]。前人已在諾麗果汁中檢測到200 多種功能性成分[10],波利尼西亞人以諾麗作為藥物治療疾病已有2000 多年的歷史[11],現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,諾麗可緩解病痛[12],能治療蚊蟲叮咬引起的感染性疾病[13],其提取物可以緩解細(xì)菌引起的感冒等癥狀[14],同時(shí)能作為藥物輔助治療糖尿病、消化不良以及高血壓疾病[15-16],在治療感染方面效果顯著[17],還可抗腫瘤[18]。作為全球最暢銷的健康產(chǎn)品之一[19],近幾年,諾麗產(chǎn)品在我國廣泛銷售,如諾麗發(fā)酵產(chǎn)品、諾麗果粉、諾麗果汁等,其作為藥用作物也被越來越多的國家引種栽培。國內(nèi)有許多有關(guān)諾麗營養(yǎng)價(jià)值的研究,但關(guān)于諾麗在引種后不同環(huán)境條件下其藥效功能變化方面的研究較少,尤其缺少因環(huán)境變化而影響其降血糖及血壓功效的研究。

    本研究以云南元江諾麗鮮果汁為試驗(yàn)材料,以大溪地諾麗果汁作為對照,觀察正常大鼠和糖尿病模型小鼠注藥或注果汁前后血壓和血糖的變化情況,以便進(jìn)一步探討來自其他地區(qū)的諾麗果種植元江縣后其適應(yīng)環(huán)境的過程中內(nèi)在成分在降血壓與血糖方面是否受到影響,以期為諾麗引種后藥用價(jià)值的開發(fā)以及作為藥物臨床輔助治療高血壓、高血糖等疾病提供相關(guān)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 藥物與試劑 諾麗果汁,棕褐色液體(諾麗果采摘于云南省元江縣諾麗生產(chǎn)基地);市售大溪地諾麗果汁(1 L/瓶),購于大溪地諾麗飲料(中國)有限公司;鹽酸苯乙雙胍片,25 mg×100片/瓶,購于江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司(批號(hào):0802004);四氧嘧啶(購于Sigma 公司,批號(hào):12k1460);復(fù)方利血平氨苯喋啶片,10 片/盒,購于北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司(批號(hào):080904A)。

    1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 正常血糖小鼠,雄性,體重為22~25 g,年齡為4~5 個(gè)月,由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK(滇)20050008。

    正常血壓大鼠,雄性,體重為250~300g,年齡為10~12 個(gè)月,由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK(滇)20050008。

    試驗(yàn)全過程給小鼠提供適宜的環(huán)境和充足的營養(yǎng)。試驗(yàn)研究過程中,采取人道方式處理小鼠,期間使用麻醉劑,試驗(yàn)后續(xù)對小鼠妥善處理。本試驗(yàn)遵循“尊重生命,科學(xué)試驗(yàn)”道德規(guī)范,確保小鼠的使用和研究符合法律和道德要求。

    1.1.3 主要儀器 TMS-1024 全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào):藍(lán)寶石),購自日本Tokyo Bokei 集團(tuán)公司。

    1.2 方法

    1.2.1 不同種類諾麗果汁對正常大鼠血壓的影響 取復(fù)方利血平氨苯喋啶片1 片,置于研缽中,加入少量滅菌純水,用研缽棒研磨后移入量筒,反復(fù)清洗2~3 次,直至量筒中藥液總量為30 mL,混勻即可作為陽性對照組試劑。

    在飼養(yǎng)過程中,大鼠自由飲水、自由采食,并保持室內(nèi)通風(fēng)換氣,環(huán)境干凈整潔。溫度和濕度分別控制在20~26 ℃和40%~70%。期間對大鼠的各項(xiàng)生物性狀進(jìn)行檢查,若各性狀無異常,即可進(jìn)行下一步試驗(yàn)。

    檢疫結(jié)束后,選擇體重均一(體重差異不超過平均體重的20%)、皮毛光澤、行為活動(dòng)自如、狀況良好的健康大鼠用于試驗(yàn)。大鼠稱重后按體重分段,再隨機(jī)分為6 組,即:空白對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組,每組10 只。注射前對大鼠各項(xiàng)檢查指標(biāo)進(jìn)行微調(diào),使各組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)情況基本相同,并貼上相應(yīng)的標(biāo)簽。

    采用十二指腸注藥法,對分好的6 個(gè)組:空白對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組分別注予純水、復(fù)方利血平氨苯喋片、大溪地諾麗果汁、云南元江諾麗果汁(5、10、20 mL/kg)(表1),且均只注藥1 次(注藥前充分混勻藥液,用注射器抽取濃度均一的藥液經(jīng)十二指腸注予藥物),并在相應(yīng)時(shí)間測定大鼠的血壓。

    對各組正常大鼠,腹腔注射麻醉劑戊巴比妥鈉45 mg/kg,待大鼠麻醉后,采取仰臥位的方式將其固定于解剖臺(tái)上,剔除頸總動(dòng)脈部周圍的毛發(fā),并在正中位置作縱形約2 cm 切口。頸動(dòng)脈插管時(shí),沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣將筋膜分開,可見頸總動(dòng)脈迷走神經(jīng)混合干,將動(dòng)脈和神經(jīng)分開,分離甲狀腺動(dòng)脈以下的頸總動(dòng)脈一段(2~4 cm),下穿2 根線,一根線結(jié)扎血管遠(yuǎn)心端,用動(dòng)脈夾夾住血管近心端,在血管上剪一小口,插入動(dòng)脈導(dǎo)管,用另一根線固定。將動(dòng)脈導(dǎo)管與血壓計(jì)相連接,待大鼠穩(wěn)定后,便可讀取注藥前的血壓值,經(jīng)十二指腸注藥后,讀取30、60、90、120、180、240 min 大鼠的血壓值。

    1.2.2 不同種類諾麗果汁對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影響 向雄性小鼠腹腔注射四氧嘧啶構(gòu)建糖尿病小鼠模型[20],隨后將小鼠隨機(jī)分為6組:模型對照組、陽性對照組、大溪地組和云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組,另設(shè)12 只生理狀況正常的小鼠作為空白對照組,各組小鼠分別給予相對應(yīng)的藥物或果汁,每日給藥或果汁1 次,連續(xù)給藥或果汁9 d,并在第10 天采集血液測定空腹血糖值。

    檢疫結(jié)束后,對各項(xiàng)指標(biāo)均合格的小鼠稱重,選擇體重均一( 體重差異不超過平均體重的20%)、皮毛光澤、行動(dòng)自如且狀況良好的小鼠用于試驗(yàn)。小鼠稱重后按體重分段,再隨機(jī)分為7 組,即空白對照組、模型對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組。除空白對照組12 只外,其余每組20 只,每籠5~6只。給藥前對小鼠各項(xiàng)檢指標(biāo)進(jìn)行微調(diào),使各組小鼠各指標(biāo)情況基本相同,并貼上相應(yīng)的標(biāo)簽。

    將篩選出來的模型對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組的合格小鼠禁食不禁水18 h 后,向腹腔注射100 mg/kg四氧嘧啶,空白對照組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。5d 后抽取禁食12 h 小鼠血液,分離出血清,測定小鼠空腹血糖,若血糖濃度達(dá)11.1 mmol/L 以上,則表明四氧嘧啶模型糖尿病小鼠建模成功。

    對造模成功的糖尿病模型對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江低、中、高3 個(gè)劑量組的小鼠每日灌胃相應(yīng)的純水、3.75 mg/mL 鹽酸苯乙雙胍、100%大溪地諾麗果汁以及50%、100%和200%云南元江諾麗果汁20 mL/kg(表2)。灌胃給藥前固定小鼠,充分混勻藥液,用注射器抽取濃度均一的藥液灌胃小鼠藥物,各組小鼠每日給藥1 次,連續(xù)9 d,給藥后第10 天取禁食12 h,對自由飲水的小鼠取靜脈血液,分離血清,測定各組糖尿病小鼠在給藥后的空腹血糖值,比較給藥前后各組小鼠血糖值變化。計(jì)算降糖率=(模型對照組給藥后血糖值-處理組給藥后血糖值)/模型對照組給藥后血糖值×100%。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 對正常大鼠血壓的影響

    觀察發(fā)現(xiàn),以自身前后血壓值作為對照,陽性對照組在起初30 min 就表現(xiàn)出顯著的降壓效果,在60、90、120、180、240 min 其降壓效果逐漸趨向穩(wěn)定,但與空白對照組相比,陽性對照組大鼠血壓值注藥240 min 時(shí)差異極顯著;大溪地組大鼠血壓值在注藥30 min 和60 min 后無顯著變化,但在注藥90 min 后降壓效果明顯,并逐漸趨于穩(wěn)定,與給藥前相比差異顯著;云南元江高劑量組在180 min 時(shí)才表現(xiàn)出降壓效果,在240 min的降壓效果和起初相比并不顯著,即高劑量組注藥前后降壓效果無顯著差異,其降壓效果弱于中劑量組;云南元江中劑量組在30、60、90、120、180、240 min 降壓效果逐漸增強(qiáng),且在240 min時(shí)降壓效果極顯著;低劑量組在240 min 時(shí)降壓效果顯著,在180 min 和240 min 降壓效果逐漸增強(qiáng),但低劑量組降壓能力弱于中劑量組(表3)。

    2.2 對糖尿病模型小鼠血糖的影響

    造模后的小鼠表現(xiàn)出糖尿病常有的一些癥狀,如精神萎靡、毛發(fā)稀疏無光澤、活動(dòng)性減弱、生長緩慢、食量增加以及尿頻等現(xiàn)象。模型對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江3 個(gè)劑量組小鼠在腹腔注射100 mg/kg 四氧嘧啶后與空白對照組(正常小鼠)相比較差異極顯著(P<0.001)(表4),其血糖值均有所升高,且血糖值均高于11.1 mmol/L。由此表明,糖尿病小鼠已造模成功。

    對建模成功的模型對照組、陽性對照組、大溪地組、云南元江3 個(gè)劑量組糖尿病小鼠腹腔分別灌注純水、鹽酸苯乙雙胍、大溪地諾麗果汁、云南元江諾麗果汁后,小鼠并未出現(xiàn)任何異常情況,表明諾麗果汁等試劑對小鼠并未產(chǎn)生副作用。連續(xù)給藥或果汁9 d,第10 天測其空腹血糖。結(jié)果顯示(表5):云南元江高、中、低3 個(gè)劑量組以及陽性對照組均可不同程度降低糖尿病小鼠的血糖,且降糖能力大小為:陽性對照組>低劑量組>中劑量組>高劑量組,與注射前相比,鹽酸苯乙雙胍、云南元江低劑量組(50%諾麗果汁)均表現(xiàn)出顯著﹙P<0.05﹚的降糖效果。

    2.3 大溪地諾麗果汁與云南元江諾麗果汁對小鼠血糖影響對比分析

    給藥前,大溪地組小鼠血糖值低于云南元江高、中、低3 個(gè)劑量組;給藥后,大溪地組小鼠血糖值反而高于云南元江高、中、低3個(gè)劑量組,且大溪地組小鼠給藥后血糖值高于模型對照組小鼠給藥后血糖值,導(dǎo)致此結(jié)果的因可能是大溪地諾麗果汁中添加了西柚汁等復(fù)合成分可能會(huì)與大溪地諾麗果汁中的相關(guān)功能物質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生拮抗作用,從而使得其降糖率為0.00%(表5)。

    3 討論

    3.1 云南元江諾麗果汁具有降血壓和降血糖的雙重功效

    云南元江諾麗果汁富含多種功能性物質(zhì),有降血壓和降血糖的雙重功效。本研究前期進(jìn)行代謝組學(xué)研究[21-22]發(fā)現(xiàn),采摘后的諾麗果中香豆素顯著上調(diào),前人發(fā)現(xiàn)白花前胡中香豆素等物質(zhì)能顯著降低高血壓[23]。諾麗富含多酚[24],進(jìn)行本研究前,已提取到諾麗果中的多酚,前人發(fā)現(xiàn)黑加侖中多酚可降低自發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓[25]。本試驗(yàn)通過對正常大鼠灌注云南元江諾麗果汁,分析大鼠血壓變化發(fā)現(xiàn),云南元江高、中、低3 個(gè)劑量組均對正常大鼠具有降血壓的作用,且中劑量組降血壓效果最佳;在研究對糖尿病模型小鼠血糖的影響中發(fā)現(xiàn),鹽酸苯乙雙胍、云南元江低劑量組(50%諾麗果汁)均對糖尿病模型小鼠具有顯著的降血糖作用,結(jié)合上述前人對諾麗內(nèi)含成分以及功能的分析結(jié)果,可能是諾麗中的香豆素類和多酚類物質(zhì)發(fā)揮作用,使云南元江諾麗果汁能夠起到降血壓和降血糖的雙重功效。

    3.2 大溪地諾麗果汁相比云南元江諾麗果汁已無降糖功效

    Ⅱ型糖尿病的產(chǎn)生主要是由于胰島素不足或分泌缺陷[26-27],因而促進(jìn)胰島素分泌、清除自由基以及提高氧化活性能治療糖尿病及其并發(fā)癥,諾麗果中的多糖、黃酮、醌類物質(zhì)等一些成分恰好具有清除自由基的功能,且能夠提高氧化活性[28]。本課題組前期進(jìn)行代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),采摘后的諾麗果中蘆丁等物質(zhì)也顯著上調(diào),前人也發(fā)現(xiàn)蘆丁有降血糖的作用[29],從而會(huì)使糖尿病模型小鼠的血糖降低[30]。

    在本研究中,對比分析大溪地諾麗果汁與云南元江諾麗果汁降小鼠血糖的影響中,只有云南元江諾麗果汁具有降血糖的作用,結(jié)合前人的研究結(jié)果[29],可能是諾麗中的蘆丁在降低血糖過程中發(fā)揮主要作用。大溪地組給藥后血糖值反而高于模型對照組給藥后血糖值,且給藥前,大溪地組小鼠血糖值低于云南元江高、中、低3 個(gè)劑量組;給藥后,大溪地組小鼠血糖值高于云南元江高、中、低3 個(gè)劑量組,其降糖率為0,其原因可能是大溪地諾麗果汁中添加了西柚汁、葡萄汁等復(fù)合成分使其糖分增加,復(fù)合成分可能會(huì)與大溪地諾麗果汁中的相關(guān)功能物質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生拮抗作用,從而使得其失去降糖功效。

    3.3 栽培產(chǎn)地變化對云南元江諾麗果汁降血糖功效并無顯著影響

    張敏等對比分析發(fā)現(xiàn),海南和斐濟(jì)諾麗果中主要礦物質(zhì)等成分存在差異[31-32];李戈等[33]對比發(fā)現(xiàn)來自海南與云南等地諾麗果中的黃酮等成分含量差異顯著;楊焱等[34]研究發(fā)現(xiàn)來自印尼、美國、中國海南的諾麗果營養(yǎng)品質(zhì)存在差異,說明不同地區(qū)諾麗果各項(xiàng)成分含量不同,不同產(chǎn)地的諾麗果汁營養(yǎng)成分也呈現(xiàn)明顯的產(chǎn)地差異性[35],不同環(huán)境的甘草內(nèi)在成分也具有顯著差異[36],但是其藥效基本不受環(huán)境的影響,可能是因?yàn)樗幮怯伤幱弥参矬w內(nèi)的多種藥用成分相互作用所表現(xiàn)出來的,這些成分呈動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài),本次試驗(yàn)中諾麗引種后其降血糖的功效并沒有受到影響,所以不能僅通過種植環(huán)境的改變來判斷植物藥用價(jià)值的高低。

    本課題組將諾麗從夏威夷引種至云南元江。夏威夷(18°N~19°N)平均海拔270 m,年平均降水量為12 244 mm;元江縣(23°N)平均海拔370 m,年平均降水量為770~2400 mm,兩地年平均降水量有著極大差異,引種后諾麗果各項(xiàng)成分含量雖然可能發(fā)生變化,但引種后其不僅表現(xiàn)出較好的適應(yīng)性,而且能大量結(jié)果,且本研究發(fā)現(xiàn)引種后云南元江諾麗果汁同樣具有良好的降血糖效果,其降血糖的功效相對于大溪地諾麗果汁而言并未受到明顯影響。

    此次試驗(yàn)研究了諾麗果從夏威夷引種到云南元江后對正常大鼠血壓及糖尿病模型小鼠血糖的影響,分析發(fā)現(xiàn)種植環(huán)境改變并未改變其降血糖和降血壓的作用,可作為高血糖與高血壓輔助藥物。因此,建議諾麗果能夠在更多氣候炎熱的地區(qū)如云南文山、紅河、普洱、臨滄等地進(jìn)行推廣種植。本研究為開發(fā)利用諾麗果降血糖和降血壓的功效提供更多理論依據(jù)和試驗(yàn)依據(jù)。

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