放養(yǎng)雞新城疫飲水免疫后免疫抗體的持續(xù)期

摘要：雞新城疫（ND）用La Sota弱毒疫苗飲水免疫，能建立良好的黏膜免疫體系，可有效預(yù)防該病的發(fā)生。本次試驗(yàn)通過檢測(cè)免疫后血清中免疫抗體的HI效價(jià)，對(duì)放養(yǎng)雞群用ND La Sota弱毒疫苗飲水免疫后，血清中免疫抗體效價(jià)的消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行研究。從而為放養(yǎng)雞ND免疫提供一定依據(jù)。本次試驗(yàn)免疫抗體維持群體保護(hù)持續(xù)期為210 d，考慮到在試驗(yàn)期間，有新城疫病毒（NDV）感染的原因。建議在生產(chǎn)中，對(duì)于放養(yǎng)雞的ND在進(jìn)行基礎(chǔ)免疫后，每間隔180 d進(jìn)行1次補(bǔ)免，更可靠的方法是根據(jù)每群雞免疫抗體檢測(cè)結(jié)果確定補(bǔ)免時(shí)間。

關(guān)鍵詞：新城疫；活疫苗；飲水免疫；血清；抗體

雞ND是由NDV引起的雞和多種禽類的急性高度接觸性傳染病，易感禽類常呈敗血癥經(jīng)過，主要特征是呼吸困難、腹瀉、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血。因致病毒株不同，ND發(fā)病癥狀、嚴(yán)重程度有很大的差異。本病分布于世界各地，傳播迅速，病死率高，是危害養(yǎng)雞業(yè)的最主要傳染病之一，我國(guó)將ND列為二類動(dòng)物疫病。

1 試驗(yàn)背景

祁門縣為山區(qū)地貌，森林覆蓋率高達(dá)88.64%，環(huán)境優(yōu)越，境內(nèi)多山谷，因地制宜，充分利用林地發(fā)展林下放養(yǎng)肉蛋兼用雞，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民增加經(jīng)濟(jì)收入的重要渠道之一。飲水免疫不僅降低免疫的勞動(dòng)強(qiáng)度，減少工作量，而且免疫效果較好，所以養(yǎng)殖戶們大多選擇飲水免疫。放養(yǎng)雞大多采用的免疫程序如下。

1日齡，頸背部皮下注射馬立克氏病活疫苗；3日齡，飲水免疫雞球蟲病三價(jià)活疫苗；7日齡，雞ND、傳染性支氣管炎H120二聯(lián)活疫苗，倍量飲水；14日齡，雞傳染性法氏囊病活疫苗，倍量飲水；21日齡，雞ND、傳染性支氣管炎H52二聯(lián)活疫苗，倍量飲水；28日齡，

雞傳染性法氏囊活疫苗，倍量飲水；60日齡，雞ND活疫苗，倍量飲水；80日齡，重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗，頸部皮下注射。

在日常工作中，發(fā)現(xiàn)采用上述免疫程序，在免疫操作正確時(shí)，300日齡內(nèi)的放養(yǎng)雞群中未發(fā)現(xiàn)異常；超過300日齡的放養(yǎng)雞群，曾出現(xiàn)多起ND發(fā)病的情況。發(fā)病雞群的臨床癥狀、病理變化都不明顯，ND的典型癥狀和典型病理變化都未出現(xiàn)，發(fā)病時(shí)，雞群產(chǎn)蛋率下降，部分雞有縮頭、呆立、嗜睡的癥狀，少數(shù)排綠色糞便，部分雞出現(xiàn)盲腸扁桃體出血，極少數(shù)雞出現(xiàn)腺胃乳頭出血的病理變化。為更好地了解掌握通過上述免疫程序和免疫方法免疫的放養(yǎng)雞群，NDV在血清中免疫抗體的保護(hù)持續(xù)期，為今后的放養(yǎng)雞ND飲水免疫提供理論依據(jù)，特進(jìn)行此試驗(yàn)。

2 血凝和血凝抑制試驗(yàn)

雞NDV、禽流感病毒（AIV）等病毒具有凝集某些哺乳類和禽類紅細(xì)胞的特性，稱為病毒血凝反應(yīng)（HA），是病毒的一種生物學(xué)特性，而非特異性的血清學(xué)反應(yīng)。但是特異性抗體可以抑制這種反應(yīng)，稱為病毒的血凝抑制反應(yīng)（HI），這一過程是抗原抗體的特異性反應(yīng)?？捎肏A試驗(yàn)和HI試驗(yàn)檢測(cè)、鑒定病毒，也可用于檢測(cè)病毒特異性抗體。

動(dòng)物機(jī)體受到抗原（Ag）刺激后，由Ｂ淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白（Ig），能與相應(yīng)的Ag發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，這類Ig稱為Ab。Ig存在于動(dòng)物血液、組織液及其他分泌液中，依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異，可分為IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。IgG是人和動(dòng)物血清中含量最高的Ig，占血清Ig總量的75%～80%，IgM是動(dòng)物機(jī)體初次體液免疫反應(yīng)最早產(chǎn)生的Ig，其含量占血清Ig的10%左右。所以檢測(cè)血清中Ab效價(jià)，主要是針對(duì)IgG、IgM的檢測(cè)[1]。

3 試驗(yàn)材料

3.1 試驗(yàn)動(dòng)物

經(jīng)過上述免疫程序和免疫方法免疫的120日齡的皖南三黃雞母雞30只。

3.2 疫苗選擇

（1）雞馬立克氏病活疫苗（CU1988/Rispens株；每羽份病毒含量不低于3 000 PFU）；（2）雞球蟲三價(jià)活疫苗（柔嫩艾美耳球蟲PTMZ株+巨型艾美耳球蟲PMHY株+堆型艾美耳球蟲PAHY株；每羽份疫苗含孢子化卵囊400個(gè)±10%）；（3）雞ND、傳染性支氣管炎（La Sota株+H120株和La Sota株+H52株；每羽份雞ND病毒含量不低于106.0EID50、傳染性支氣管炎病毒含量不低于103.5EID50）；（4）ND活疫苗（La Sota株；每羽份病毒含量不低于106.0EID50）；（5）傳染性法氏囊活疫苗（B87株；每羽份病毒含量不低于103.0EID50）；（6）重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株；滅活前HA效價(jià)均為1：512）。

3.3 主要器械、試劑

主要器械、試劑有臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司TD5A）；96孔V型微量血凝反應(yīng)板；可調(diào)微量移液器（FinnpipetteF3 KZ07558 KZ03358）；雞ND血凝抑制試驗(yàn)抗原（哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司，批號(hào)20220930，有效期24個(gè)月）；紅細(xì)胞（RBC），每次試驗(yàn)都采用固定的3只成年公雞的紅細(xì)胞，首次采血300日齡。紅細(xì)胞懸液保存時(shí)間不超過24 h。

4 試驗(yàn)方法

在當(dāng)?shù)亓窒路硼B(yǎng)的5 000只經(jīng)過上述免疫程序和免疫方法免疫的皖南三黃雞群體中，隨機(jī)選擇30只母雞，隨機(jī)分成A、B兩組，每組15只。A組為完全放養(yǎng)組，B組為限制放養(yǎng)組，分別混入總數(shù)為100只的雞群中進(jìn)行飼養(yǎng)。A、B組養(yǎng)殖過程中均未出現(xiàn)死亡。在120日齡（ND免疫后第60天）開始，每隔30 d采血、離心（1 000 r/min、8 min）后取血清。用血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)血清中的免疫抗體（按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）中7.3和7.4執(zhí)行）。

5 試驗(yàn)結(jié)論

5.1 日齡與抗體效價(jià)

由表1數(shù)據(jù)顯示，在270日齡即免疫后210 d，免疫抗體效價(jià)的平均值為4.3，已接近臨界值，有26.67%的抗體效價(jià)為4，說明此時(shí)的免疫保護(hù)作用已很弱。如有ND強(qiáng)毒的入侵，此時(shí)雞群就有可能感染ND。在300日齡即免疫后240 d時(shí)，免疫抗體陽(yáng)性率為63.3%，此時(shí)免疫抗體已失去群體保護(hù)作用。

5.2 效價(jià)精密度與免疫方式

表1中抗體效價(jià)分布分散不集中，結(jié)合表2中各日齡抗體效價(jià)的變異系數(shù)都在22%以上，最大差值有7個(gè)滴度，說明此次免疫抗體效價(jià)的精密度差，表示這群雞ND免疫效果不理想，最大的可能性與免疫方式有關(guān)。

5.3 抗體效價(jià)與野毒感染

表2數(shù)據(jù)中，120～150日齡，A組（完全放養(yǎng)組）有7只雞在150日齡檢測(cè)的抗體效價(jià)比120日齡抗體效價(jià)出現(xiàn)明顯升高，在排除試驗(yàn)誤差和免疫應(yīng)答的前提下，說明此期間A組有可能發(fā)生過ND野毒的感染；在150～180日齡，B組（限制放養(yǎng)組）有4只雞在180日齡檢測(cè)的抗體效價(jià)比150日齡抗體效價(jià)出現(xiàn)升高，說明此期間B組有可能發(fā)生過ND病毒感染；在180～210日齡，B組有3只雞在210日齡檢測(cè)的抗體效價(jià)比180日齡抗體效價(jià)出現(xiàn)升高，因出現(xiàn)的個(gè)體少，且只有1個(gè)滴度的差異，最大的可能性是試驗(yàn)誤差造成的結(jié)果。通過試驗(yàn)期A、B組都出現(xiàn)抗體效價(jià)異常升高的情況，說明祁門縣放養(yǎng)雞群感染ND的風(fēng)險(xiǎn)較高。

5.4 抗體效價(jià)與飼養(yǎng)方式

由表2數(shù)據(jù)可見，各日齡的抗體效價(jià)A組與B組間差異不顯著（P﹥0.05），說明完全放養(yǎng)與限制放養(yǎng)兩種飼養(yǎng)方式對(duì)免疫抗體的影響不明顯。

6 分析與討論

在270日齡時(shí)（免疫后210 d），免疫抗體合格率為76.7%，免疫抗體效價(jià)60%集中在4～5（1∶16～1∶32），

說明雞群對(duì)NDV的抗感染能力很弱，如有ND強(qiáng)毒入侵、必然發(fā)病。所以270日齡前必須進(jìn)行ND的加強(qiáng)免疫?？紤]到270日齡的雞個(gè)體較大，可采用ND La Sota弱毒疫苗4倍量飲水免疫[2]。

在300日齡時(shí)，免疫抗體合格率為63.3%，此時(shí)已無群體保護(hù)作用，但對(duì)個(gè)體還有保護(hù)作用。這時(shí)雞群如有ND病毒感染，雞群會(huì)出現(xiàn)每天零星死亡的現(xiàn)象，ND發(fā)病臨床癥狀與病理變化不典型，這與臨床遇到的發(fā)病情況基本一致。如需確診必須進(jìn)行PCR試驗(yàn)。根據(jù)此次試驗(yàn)結(jié)果，生產(chǎn)中，建議按上述基礎(chǔ)免疫程序接種后，對(duì)于ND每間隔180 d進(jìn)行1次加強(qiáng)免疫。

因本次試驗(yàn)抗體效價(jià)的精密度差，通過觀察多家養(yǎng)殖戶的飲水免疫操作，提出以下注意事項(xiàng)：異常天氣和雞群健康狀況有異時(shí)，不宜接種疫苗：接種疫苗前連續(xù)3 d，飲水中加入維生素C，減低應(yīng)激；接種疫苗前后3 d禁止消毒和使用抗生素；接種疫苗最好安排在上午進(jìn)行，控水的時(shí)間從天亮或開始補(bǔ)光時(shí)計(jì)算，當(dāng)雞群中有70%的雞出現(xiàn)飲欲時(shí)（時(shí)長(zhǎng)為2～4 h），開始進(jìn)行飲水免疫接種；使用疫苗前應(yīng)清洗飲水器，清洗飲水器時(shí)嚴(yán)禁使用消毒劑；疫苗要現(xiàn)配現(xiàn)用；配制疫苗時(shí)，使用涼開水，并在水中加入0.3%的脫脂奶粉，為保證疫苗稀釋均勻，可按倍量稀釋法，逐步對(duì)疫苗進(jìn)行稀釋；疫苗用水量為30日齡內(nèi)10 mL/只、30～60日齡20 mL/只、60日齡以上30～40 mL/只（根據(jù)雞大小和季節(jié)調(diào)整），水量的控制要保證每只雞都能飲到的同時(shí)，使雞群在1 h內(nèi)飲完疫苗，充分保證疫苗的活性；增加飲水器或乳頭開關(guān)的數(shù)量，并均勻分布，保證每只雞都能及時(shí)充分飲用到；冬季水溫保持15℃以上，避免水溫過低，引起腹瀉和應(yīng)激。

為盡量排除干擾因素，制備紅細(xì)胞懸液時(shí)，紅細(xì)胞的清洗次數(shù)增加為5次，提取紅細(xì)胞時(shí)從中部抽取。每次試驗(yàn)前用待測(cè)血清與紅細(xì)胞懸液進(jìn)行血凝試驗(yàn)，排除不明凝集因子。因本地放養(yǎng)雞養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖過程中不養(yǎng)公雞，有少量的公雞，在達(dá)到90日齡就全部出欄，所以根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，全部選用母雞。完全放養(yǎng)就是雞的活動(dòng)范圍不受限制，可以完全自由活動(dòng)。限制放養(yǎng)就是雞在固定的區(qū)域內(nèi)活動(dòng)，平均每只雞的活動(dòng)面積為2.25 m2以上。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊漢春.動(dòng)物免疫學(xué)（第2版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003.

[2] 董衛(wèi)英.新城疫La Sota疫苗飲水對(duì)蛋雞免疫效果試驗(yàn)[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2015，11（12）：140-141.