補(bǔ)肺益腎組分方Ⅲ組分配伍對慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道重塑的干預(yù)作用研究

【摘要】 背景 慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是重大慢性疾病，氣道重塑是其重要病理機(jī)制。補(bǔ)肺益腎方對COPD療效較好，其有效成分組成的補(bǔ)肺益腎組分方Ⅲ（ECC-BYF Ⅲ）與之療效相當(dāng)，可顯著改善COPD模型大鼠氣道重塑，但其組分配伍規(guī)律尚待揭示。目的 基于COPD大鼠模型評價(jià)ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍對COPD氣道重塑的干預(yù)作用。方法 將ECC-BYF Ⅲ組分分成補(bǔ)氣、補(bǔ)腎、化痰、活血4類，按數(shù)學(xué)排列組合的方法將其分成不同的組分配伍組。2018年5—9月進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。將216只SD大鼠隨機(jī)分為正常、模型、ECC-BYF Ⅲ、不同組分配伍及氨茶堿組，共18組，每組12只。第1～8周，采用香煙煙霧暴露聯(lián)合反復(fù)細(xì)菌感染的方法制備COPD穩(wěn)定期大鼠模型（正常組除外）；第9～16周，給予相應(yīng)的藥物干預(yù)。蘇木素-伊紅（HE）染色技術(shù)觀察氣道壁及氣道平滑肌變化；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清中基質(zhì)金屬蛋白酶12（MMP-12）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）及支氣管肺泡灌洗液（BALF）中膠原蛋白（COL）-1、COL-3、MMP-12等氣道重塑相關(guān)指標(biāo)水平。Region（R）值綜合評價(jià)各組分配伍對COPD大鼠氣道重塑的干預(yù)作用。結(jié)果 與模型組比較，ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍、氨茶堿組大鼠氣道壁厚度均降低，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)氣化痰組、扶正化痰組、扶正活血組、補(bǔ)氣祛邪組、氨茶堿組大鼠平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)減少（P<0.05）。與模型組比較，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)腎組、補(bǔ)氣化痰組、補(bǔ)氣活血組、補(bǔ)腎化痰組、補(bǔ)腎活血組血清bFGF水平降低，ECC-BYF Ⅲ組、扶正組血清MMP-12水平降低，ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍、氨茶堿組BALF MMP-12、BALF COL-1水平均降低，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)腎組、化痰組、活血組、扶正組、補(bǔ)氣化痰組、補(bǔ)氣活血組、補(bǔ)腎活血組、扶正化痰組、補(bǔ)氣祛邪組、補(bǔ)腎祛邪組及氨茶堿組BALF COL-3水平均降低（P<0.05）。對COPD大鼠氣道壁厚度、氣道平滑肌增生情況、血清及BALF中所有氣道重塑相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行R值綜合評價(jià)結(jié)果顯示，除化痰、祛邪組分配伍外，ECC-BYF Ⅲ及其余組分配伍和氨茶堿組均可改善COPD大鼠氣道重塑（P<0.05），以補(bǔ)氣祛邪、扶正化痰、補(bǔ)氣活血組分配伍改善COPD大鼠氣道重塑效果較好。結(jié)論 ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍可不同程度干預(yù)COPD大鼠氣道重塑，其中以補(bǔ)氣祛邪、扶正化痰、補(bǔ)氣活血（均含補(bǔ)氣類組分：人參皂苷Rh1和黃芪甲苷）組分配伍效果較為顯著。

【關(guān)鍵詞】 肺疾病，慢性阻塞性；補(bǔ)肺益腎組分方Ⅲ；氣道重塑；組分配伍；大鼠

【中圖分類號(hào)】 R 563.9 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0868

The Evaluation of Effective-component Compatibility of Bufei Yishen FormulaⅢ and Components Compatibility in Treating Airway Remodeling of COPD

QIN Yanqin1，2，DONG Haoran1，2，YANG Jingfan1，LI Haibo1，ZHAO Peng1，2，LI Jiansheng1，3*

1.Henan University of Chinese Medicine/Henan Key Laboratory of Chinese Medicine for Respiratory Disease/Co-construction Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine and Respiratory Diseases by Henan & Education Ministry of P.R.，Zhengzhou 450046，China

2.Academy of Chinese Medical Sciences，Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China

3.Department of Respiratory and Critical Care Medicine，the First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450003，China

*Corresponding author：LI Jiansheng，Professor/Doctoral supervisor；E-mail：li_js8@163.com

【Abstract】 Background Chronic obstructive pulmonary disease（COPD）is a major chronic disease，and airway remodeling is an important pathological mechanism. Bufei Yishen formula and effective-component compatibility of Bufei Yishen formula Ⅲ（ECC-BYF Ⅲ）are effective for COPD treatment. ECC-BYF Ⅲ significantly improves airway remodeling of COPD model rats，however，the components compatibility remains to be revealed. Objective To evaluate the effect of ECC-BYFⅢ and components compatibility in treating airway remodeling of COPD based on the COPD rat model. Methods The components of ECC-BYFⅢ were divided into four categories：Buqi，Bushen，Huatan，and Huoxue. The four categories were divide into different groups according to the method of mathematical permutation. The animal experiment were performed during May to September in 2018. 216 SD rats were randomly divided into normal，model，ECC-BYF Ⅲ，different components compatibility and aminophylline groups，and 12 rats in each model. From week 1 to week 8，rat model of COPD in stable phase was established by cigarette smoke exposure combined with repeated bacterial infections. The rats were orally gavaged with corresponding drugs from week 9 to week 16. Hematoxylin eosin（HE）staining technique was used to observe the changes of bronchial wall and airway smooth muscle. Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）was used to detect the levels of matrix metalloprotein 12（MMP-12），basic fibroblast growth factor（bFGF）in serum and levels of collagen（COL）-1，COL-3，and MMP-12 in bronchoalveolar lavage fluid（BALF）. Region（R）value comprehensive evaluation method was used to evaluate the effect of different component compatibility on airway remodeling in COPD rats. Results ECC-BYFⅢ，different components compatibility and aminophylline weakened the thickness of airway wall，when compared to model group. ECC-BYFⅢ，Buqi Huatan，F(xiàn)uzheng Huatan，F(xiàn)uzheng Huoxue，Buqi Quxie and aminophylline significantly decreased the number of airway smooth muscle hyperplasia（P<0.05）. When compared to model group，the level of bFGF in serum decreased in ECC-BYF Ⅲ，Bushen，Buqi Huatan，Buqi Huoxue，Bushen Huatan，and Bushen Huoxue groups. The level of MMP-12 in serum decreased ECC-BYFⅢ，F(xiàn)uzheng groups. The levels of MMP-12，COL-1 in BALF decreased in ECC-BYFⅢ，different components compatibility and aminophylline groups. The level of COL-3 in BALF decreased in ECC-BYFⅢ，Bushen，Huatan，Huoxue，F(xiàn)uzheng，Buqi Huatan，Buqi Huoxue，Bushen Huoxue，F(xiàn)uzheng Huatan，Buqi Quxie，Bushen Quxie，and aminophylline groups（P<0.05）. The results of R-value comprehensive evaluation about airway wall thickness，airway smooth muscle hyperplasia，indicators related to airway remodeling in serum and BALF in COPD rats showed that the components compatibility，except for Huatan，Quxie，ECC-BYFⅢ，other components compatibility and aminophylline improved the airway remodeling of COPD rats（P<0.05）. Buqi Quxie，F(xiàn)uzheng Huatan，and Buqi Huoxue showed better effects in improving airway remodeling in COPD rats. Conclusion ECC-BYFⅢ and its components compatibility showed different effects on airway remodeling in COPD rats. Buqi Quxie，F(xiàn)uzheng Huatan，Buqi Huoxie（containing ginsenoside Rh1，astragaloside）showed better effects.

【Key words】 Pulmonary disease，chronic obstructive；Effective-component compatibility of Bufei Yishen formulaⅢ；Airway remodeling；Components compatibility；Rats

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是以不完全可逆性氣流受限為主要特征的可以預(yù)防和治療的疾病。氣道重塑是COPD的重要病理機(jī)制，與COPD氣道狹窄和不可逆性氣流受限密切相關(guān)。氣道重塑主要發(fā)生在小氣道，是氣道受損引起的氣道壁結(jié)構(gòu)變化和反復(fù)修復(fù)的過程，以氣道結(jié)構(gòu)變化、氣道壁增厚、管腔狹窄為主要特征［1-2］。氣道重塑的機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、細(xì)胞外基質(zhì)沉積等有關(guān)［3-5］。多種病理環(huán)節(jié)導(dǎo)致的氣道重塑引起氣道管腔狹窄，使氣流阻力增加、氣流受限，最終形成不可逆的慢性氣流阻塞，是COPD病情發(fā)展和轉(zhuǎn)折的重要環(huán)節(jié)［6］。因此，有效干預(yù)氣道重塑將是治療COPD的重要手段。補(bǔ)肺益腎方是臨床治療COPD的有效方劑，可減輕患者臨床癥狀，減低急性加重次數(shù)，提高患者生存質(zhì)量［7-8］。中藥有效組分配伍組成的組分方是研發(fā)現(xiàn)代中藥的新模式，便于進(jìn)行藥物質(zhì)量控制，有助于闡釋藥物作用機(jī)制。本課題組前期基于系統(tǒng)藥理學(xué)方法并結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，在補(bǔ)肺益腎方的基礎(chǔ)上經(jīng)補(bǔ)肺益腎組分方（effective-component compatibility of Bufei Yishen formula，ECC-BYF）Ⅰ、ECC-BYF Ⅱ［9-11］，優(yōu)化成由人參皂苷Rh1、黃芪甲苷、淫羊藿苷、川陳皮素、丹皮酚組成的ECC-BYF Ⅲ［12］。前期研究發(fā)現(xiàn)ECC-BYF Ⅲ對COPD大鼠有較好的療效，且能顯著抑制COPD大鼠氣道重塑［13］，但其組分配伍對COPD氣道重塑的干預(yù)特點(diǎn)仍需進(jìn)一步研究。

鑒于上述原因，本研究在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，按原單味藥功效，將ECC-BYF Ⅲ分成補(bǔ)氣類代表組分（人參皂苷Rh1、黃芪甲苷）、補(bǔ)腎類代表組分（淫羊藿苷）、化痰類代表組分（川陳皮素）和活血類代表組分（丹皮酚）4類，進(jìn)行不同組分配伍，基于香煙煙霧暴露聯(lián)合反復(fù)細(xì)菌感染誘導(dǎo)的COPD穩(wěn)定期大鼠模型，評價(jià)ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍干預(yù)COPD氣道重塑的配伍特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物：SPF級SD大鼠216只，體質(zhì)量（200±20）g，

雌雄各半，購于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（SCXK〔豫〕2017-0001）。所涉及實(shí)驗(yàn)已通過河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查委員會(huì)審查（倫理審查批準(zhǔn)編號(hào)：YFYDW2019031）。

1.1.2 香煙與細(xì)菌：紅旗渠過濾嘴香煙（硬金紅，河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，烤煙型，焦油含量11 mg，煙氣煙堿含量0.9 mg，煙氣一氧化碳含量11 mg）；肺炎克雷伯桿菌（菌株號(hào)：46117），由中國藥品生物制品檢定院中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心提供。

1.1.3 主要藥品與試劑：人參皂苷Rh1（CHB180608）購于成都克洛瑪生物科技有限公司；黃芪甲苷（MUST-17022804）、淫羊藿苷（MUST-16111710）、丹皮酚（MUST-16071405）購于成都曼斯特生物科技有限公司；川陳皮素（HL-20170312）購于西安匯林生物科技有限公司；氨茶堿片（100 mg/片×100片）購于山東新華制藥股份有限公司。伊紅染色液（71014544）、二甲苯（10023428）、無水乙醇（10009218）、中性樹膠（10004160）等由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；蘇木素染色液（H9627）由美國Sigma公司提供。大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶12（matrix metalloprotein 12，MMP-12）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）Kit（E-EL-R0044c）、大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF） ELISA Kit（E-EL-R0091c）、大鼠膠原蛋白（collagen，COL）-1 ELISA Kit（E-EL-R0233c）、大鼠COL-3 ELISA Kit（E-EL-R0233c）購于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司。

1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器：IVC-Ⅱ型動(dòng)物飼養(yǎng)籠具（馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司，蘇州）；ELX800UV型酶標(biāo)儀（BIO-TEK，美國）；RM2145型自動(dòng)切片機(jī)（Leica，德國）；DMI3000 B型熒光顯微鏡（Leica，德國）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組與藥物干預(yù)：于2018年5—9月進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，大鼠飼養(yǎng)條件為：溫度（25±2）℃，相對濕度（50±10）%，給予無菌水及飼料常規(guī)飼養(yǎng)，每日更換墊料。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將大鼠隨機(jī)分為18組，每組12只，雌雄各半。1～8周采用香煙煙霧暴露聯(lián)合反復(fù)細(xì)菌感染的方法制備COPD穩(wěn)定期大鼠模型，每4周檢測大鼠肺功能，根據(jù)肺功能變化評價(jià)模型是否成功［14］（正常組除外）。9～16周各組給予相應(yīng)的藥物干預(yù)。采用等效劑量系數(shù)換算公式計(jì)算；公式為：D大鼠=D人×（HI大鼠/HI人）×（W大鼠/W人）2/3，D表示劑量，HI表示體型系數(shù)，W表示體質(zhì)量。動(dòng)物分組與藥物干預(yù)具體情況見表1。

1.2.2 大鼠取材：第17周，藥物干預(yù)結(jié)束后取材（每組6只），取材前1 天大鼠禁食禁水。大鼠麻醉后，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，分離血清；取出肺組織，結(jié)扎右支氣管，預(yù)冷的1×磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）灌注左肺3次，收集支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），離心后取上清液，保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 常規(guī)蘇木素-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色：左肺進(jìn)行4%多聚甲醛灌注固定，蠟塊包埋，切4 μm切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色。顯微鏡下選擇直徑200～400 μm形狀規(guī)則的氣道，測量其內(nèi)徑和外徑，根據(jù)公式：氣道壁厚度（μm）=外徑長-內(nèi)徑長，計(jì)算氣道壁厚度。測量氣道外周長及內(nèi)周長，統(tǒng)計(jì)氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)，根據(jù)公式：平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)（個(gè)/mm）=細(xì)胞總數(shù)/（外周長-內(nèi)周長），計(jì)算平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 ELISA法檢測血清bFGF、MMP-12及BALF中MMP-12、COL-1、COL-3水平。

1.3 Region（R）值綜合評價(jià)

采用R值綜合評價(jià)法（著作權(quán)號(hào)：國作登字-2013-A-00096833）對大鼠血清及BALF中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)及總指標(biāo)進(jìn)行綜合評價(jià)。R值綜合評價(jià)法是根據(jù)疾病對指標(biāo)的影響和藥物對指標(biāo)的糾正作用，計(jì)算藥物對指標(biāo)的糾正強(qiáng)度，考察藥物對多個(gè)指標(biāo)的綜合作用［15］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用IBM SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料方差齊者采用最小顯著差（least significant difference，LSD）法，方差不齊經(jīng)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化后用LSD法以（x-±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析。顯著性水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍對COPD大鼠病理變化的影響

18組大鼠氣道壁厚度、平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與正常組比較，模型組大鼠氣道壁增厚，平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍、氨茶堿組大鼠氣道壁厚度均降低，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)氣化痰組、扶正化痰組、扶正活血組、補(bǔ)氣祛邪組、氨茶堿組大鼠平均氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2、圖1。

2.2 ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍對COPD大鼠血清及BALF氣道重塑指標(biāo)的影響

18組大鼠血清bFGF、血清MMP-12、BALF MMP-12、BALF COL-1、BALF COL-3水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與正常組比較，模型組大鼠血清bFGF、血清MMP-12、BALF MMP-12、BALF COL-1、BALF COL-3水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)腎組、補(bǔ)氣化痰組、補(bǔ)氣活血組、補(bǔ)腎化痰組、補(bǔ)腎活血組血清bFGF水平降低，ECC-BYF Ⅲ組、扶正組血清MMP-12水平降低，ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍、氨茶堿組BALF MMP-12、BALF COL-1水平均降低，ECC-BYF Ⅲ組、補(bǔ)腎組、化痰組、活血組、扶正組、補(bǔ)氣化痰組、補(bǔ)氣活血組、補(bǔ)腎活血組、扶正化痰組、補(bǔ)氣祛邪組、補(bǔ)腎祛邪組及氨茶堿組BALF COL-3水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.3 ECC-BYF Ⅲ及其組分配伍對COPD大鼠氣道重塑干預(yù)的綜合評價(jià)

因各組分配伍對各指標(biāo)效應(yīng)不同，本研究采用R值綜合評價(jià)法進(jìn)行評價(jià)。對大鼠血清及BALF中氣道重塑相關(guān)指標(biāo)R值綜合評價(jià)結(jié)果顯示，除化痰、祛邪、補(bǔ)腎化痰和扶正活血組分配伍外，ECC-BYF Ⅲ及其他組分配伍和氨茶堿組均能不同程度地糾正血清及BALF中氣道重塑指標(biāo)分泌（P<0.05），以補(bǔ)氣祛邪、補(bǔ)氣活血、扶正化痰組分配伍效果最佳。對COPD大鼠氣道壁厚度、氣道平滑肌增生情況、血清及BALF中所有氣道重塑相關(guān)指標(biāo)（總指標(biāo)）進(jìn)行R值綜合評價(jià)結(jié)果顯示，除化痰、祛邪組分配伍外，ECC-BYF Ⅲ及其余組分配伍和氨茶堿組均可改善COPD大鼠氣道重塑（P<0.05），補(bǔ)氣祛邪、扶正化痰、補(bǔ)氣活血組分配伍效果較好，見表4。

3 討論

COPD歸屬中醫(yī)“肺脹”“喘病”等范疇，與“肺脹”最為接近。肺臟感邪，遷延失治，痰瘀稽留，損傷正氣，肺脾腎三臟虛損，正虛衛(wèi)外不固，外邪易反復(fù)侵襲而誘使本病發(fā)作，其主要病機(jī)為“正虛積損”，兼痰瘀閉阻［16］。正虛為肺腎氣虛、陽虛或陰陽兩虛，以肺虛為始、腎虛為基、氣虛為本；積損是指痰瘀及其互結(jié)成積、日久損傷正氣，正氣漸損而積損難復(fù)。元代朱丹溪之《丹溪心法·咳嗽》曰：“肺脹而咳，或左或右不得眠，此痰夾瘀血礙氣而病”，提示肺脹的發(fā)生與痰瘀互結(jié)，阻礙肺氣有關(guān)。久病肺脾腎三臟虧虛，痰瘀互結(jié)，阻滯氣道，使氣道澀滯不利，肺氣受阻，還于肺間，肺氣脹滿而失斂降。正虛為痰瘀形成的主要原因，血瘀痰阻，氣道澀滯不利則是導(dǎo)致肺氣受阻而形成肺脹的基礎(chǔ)。這與COPD氣道重塑引起氣道狹窄、阻塞，進(jìn)一步導(dǎo)致氣流受限的機(jī)理一致。因此，可以認(rèn)為COPD氣道重塑的病機(jī)為久病正氣虛損，痰瘀互結(jié)，阻塞氣道，氣道澀滯不利，即正虛血瘀痰阻。肺腎氣虛證兼見痰瘀是COPD穩(wěn)定期主要證候，補(bǔ)肺益腎佐以化痰祛瘀是其主要治則。ECC-BYF Ⅲ是在補(bǔ)肺益腎方的基礎(chǔ)上優(yōu)化篩選形成的，課題組前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，ECC-BYF Ⅲ可顯著改善COPD大鼠肺功能，抑制炎癥反應(yīng)［17-18］，減輕氣道重塑［13］。本研究旨在探討ECC-BYF Ⅲ對COPD氣道重塑干預(yù)作用的配伍規(guī)律。

COPD的主要特征為不可逆性氣道重塑和氣流受限，氣道重塑是發(fā)生氣流受限的主要病理基礎(chǔ)，在COPD 的形成和發(fā)展過程中有重要地位。COPD患者氣道管壁增厚變形，以平滑肌增厚最為顯著，導(dǎo)致氣道管腔狹窄和氣流阻力增加。氣道重塑主要表現(xiàn)為氣道壁增厚、氣道平滑肌細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)沉積。在COPD氣道重塑中，小氣道平滑肌細(xì)胞增生肥大，數(shù)目顯著增多，變化突出［19-20］。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠氣道壁明顯增厚，氣道平滑肌細(xì)胞顯著增多，說明香煙煙霧暴露聯(lián)合反復(fù)細(xì)菌感染的方法誘導(dǎo)的COPD大鼠存在氣道重塑。ECC-BYF Ⅲ干預(yù)組大鼠氣道壁厚度較模型組明顯變薄，氣道平滑肌細(xì)胞數(shù)減少，提示ECC-BYF Ⅲ對COPD氣道重塑有顯著糾正作用。

COPD氣道重塑是損傷/修復(fù)的反復(fù)過程，機(jī)制復(fù)雜，涉及多種因子和多個(gè)環(huán)節(jié)。bFGF是具有較強(qiáng)絲裂原活性的多肽分子，可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等生長、增殖和分化，并趨化成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞參與損傷組織的重建和修復(fù)［21-22］。bFGF還能激活成纖維細(xì)胞，使膠原合成增加并堆積于氣道壁和血管壁細(xì)胞外基質(zhì)中，加重氣道重塑。血清bFGF的表達(dá)與COPD急性加重期患者氣道阻塞程度密切相關(guān)［23］?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的多種蛋白成分，參與氣道重塑。在香煙煙霧、細(xì)菌等刺激下，MMPs分泌增多，降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白，破壞細(xì)胞外基質(zhì)成分，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)沉積，加速氣道重塑［24-25］。本研究結(jié)果顯示，COPD大鼠血清中bFGF、MMP-12水平顯著升高，且BALF中MMP-12、COL-1、COL-3水平顯著升高。這可能與bFGF的高表達(dá)促進(jìn)膠原蛋白的合成與沉積有關(guān)。bFGF高表達(dá)加重氣道平滑肌細(xì)胞的增生，平滑肌細(xì)胞收縮使管腔狹窄，細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積限制了管腔擴(kuò)張，共同促進(jìn)COPD氣道重塑。ECC-BYF Ⅲ干預(yù)組大鼠bFGF、MMP-12、COL-1、COL-3水平均顯著降低，提示ECC-BYF Ⅲ對COPD氣道重塑的干預(yù)作用可能與調(diào)節(jié)bFGF、MMP-12分泌、減輕細(xì)胞外基質(zhì)沉積有關(guān)。

為了探討ECC-BYF Ⅲ組分配伍對COPD氣道重塑的配伍規(guī)律，本研究還檢測了不同組分配伍對氣道重塑相關(guān)指標(biāo)的影響，結(jié)果顯示不同組分配伍對相關(guān)指標(biāo)有不同的影響。R值綜合評價(jià)發(fā)現(xiàn)，在對大鼠血清及BALF中氣道重塑相關(guān)的影響方面，除化痰、祛邪、補(bǔ)腎化痰和扶正活血組分配伍外，ECC-BYF Ⅲ及其他組分配伍均能不同程度地糾正血清及BALF中氣道重塑指標(biāo)分泌，以補(bǔ)氣祛邪、補(bǔ)氣活血、扶正化痰效果最佳。對所有指標(biāo)進(jìn)行R值綜合評價(jià)，結(jié)果顯示，除化痰、祛邪外，余組分配伍可顯著糾正COPD大鼠氣道重塑，作用較強(qiáng)的為補(bǔ)氣祛邪、扶正化痰、補(bǔ)氣活血組分配伍。補(bǔ)氣祛邪、扶正化痰、補(bǔ)氣活血組分配伍均含補(bǔ)氣類組分人參皂苷Rh1和黃芪甲苷。因此，可以認(rèn)為含補(bǔ)氣類組分（人參皂苷Rh1和黃芪甲苷）的配伍對COPD大鼠氣道重塑有較好的糾正作用。

綜上所述，ECC-BYF Ⅲ中不同組分配伍對COPD氣道重塑指標(biāo)有不同的作用，含補(bǔ)氣類（人參皂苷Rh1和黃芪甲苷）的組分配伍對COPD大鼠氣道重塑有較好的糾正作用，但其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。本研究基于ECC-BYF Ⅲ的良好療效，評價(jià)不同組分配伍對COPD大鼠氣道重塑的干預(yù)特點(diǎn)，為組分方的配伍規(guī)律及優(yōu)化治法研究提供思路。但是，COPD氣道重塑機(jī)制較復(fù)雜，本研究僅從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評價(jià)ECC-BYF Ⅲ不同組分配伍對COPD氣道重塑的配伍規(guī)律，后續(xù)研究需要基于體外模型，評價(jià)其療效特點(diǎn)，深入探討機(jī)制，為補(bǔ)肺益腎組分方的臨床應(yīng)用及新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)。

作者貢獻(xiàn)：李建生提出“組分配伍”的研究思路，設(shè)計(jì)研究方案；秦燕勤、董浩然進(jìn)行動(dòng)物飼養(yǎng)、藥物干預(yù)、肺功能檢測及氣道重塑指標(biāo)測定；楊靜帆、李海博負(fù)責(zé)肺組織病理檢測；秦燕勤、楊靜帆負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集及統(tǒng)計(jì)分析；秦燕勤負(fù)責(zé)論文起草；趙鵬、李建生負(fù)責(zé)論文修改；秦燕勤、李建生負(fù)責(zé)最終版本修訂，對論文負(fù)責(zé)。

本文無利益沖突。

秦燕勤：https：//orcid.org/0000-0002-7313-1576

李建生：https：//orcid.org/0000-0002-6485-2371

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（收稿日期：2024-01-05；修回日期：2024-03-21）

（本文編輯：康艷輝）