羊細(xì)菌性腹瀉實驗室診斷與治療方案及預(yù)防措施探討

唐潔

DOI： 10.3969/j.issn.1003-1650.2024.18.031

羊細(xì)菌性腹瀉是一種常見的疾病，由多種細(xì)菌感染引起，主要包括產(chǎn)期莢膜梭菌、大腸埃希菌等。由于病原種類多種多樣，上述幾種疾病都會導(dǎo)致羊群出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉癥狀。本文主要結(jié)合實際工作經(jīng)驗，探討了羊細(xì)菌性腹瀉的流行與診斷，然后提出了相應(yīng)的防治措施，希望對更好的提升該種疾病的診斷效果有一定幫助。

一、羊細(xì)菌性腹瀉的流行病學(xué)

1、羔羊大腸桿菌性腹瀉

①病原特征

大腸桿菌是一種在自然環(huán)境和動物體內(nèi)廣泛分布的細(xì)菌。在賦予相應(yīng)毒力因子的情況下，大腸桿菌能夠成為羔羊的病原體，引發(fā)羔羊大腸桿菌病。大腸桿菌的血清分型主要根據(jù)其O抗原（脂多糖）、K抗原（莢膜）和H抗原（鞭毛）來進(jìn)行。其中O抗原由于其分子在不同菌株間的多樣性，被廣泛應(yīng)用于分型。目前已知的大腸桿菌O抗原型有超過170種。大腸桿菌是一種革蘭氏陰性菌，呈短桿狀，兩端圓鈍，單個或成對存在，也可形成鏈狀。在顯微鏡下，大腸桿菌呈現(xiàn)出粉紅色。病原適應(yīng)各種環(huán)境條件。它可以在氧氣豐富或缺乏的環(huán)境中生存。在適宜溫度（通常為37℃）下，大腸桿菌可以在幾分鐘至幾小時內(nèi)繁殖一次。在羔羊大腸桿菌病的病原菌中，血清型O157∶H7和O111∶B4等比較常見，這些大腸桿菌具有特定的毒力因子，如毒素（例如Shiga毒素）、粘附因子等，使其能夠侵入宿主組織，干擾宿主機(jī)體正常生理功能，導(dǎo)致疾病。

②致病機(jī)理

大腸桿菌首先需要在宿主體內(nèi)找到合適的位置并附著。這通常涉及到大腸桿菌表面的粘附因子，例如鞭毛、菌毛、粘附素等。這些結(jié)構(gòu)可以幫助大腸桿菌粘附到宿主的細(xì)胞表面，尤其是腸道黏膜細(xì)胞。某些大腸桿菌菌株能夠侵入宿主細(xì)胞。大腸桿菌的某些毒力因子。例如，分泌系統(tǒng)和各種侵入素，可以幫助它們破壞宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。病原在繁殖過程中能夠產(chǎn)生多種毒素，例如腸毒素和志賀毒素等。這些毒素可以干擾宿主細(xì)胞的正常生理功能，導(dǎo)致細(xì)胞損傷或死亡，進(jìn)一步引發(fā)疾病。大腸桿菌還有多種機(jī)制可以逃避宿主的免疫反應(yīng)。例如，它們可以改變自己的抗原性，以避免被免疫系統(tǒng)識別。同時，它們也可以通過抑制宿主的免疫反應(yīng)。例如，通過產(chǎn)生免疫抑制因子，抑制宿主的炎癥反應(yīng)等，來逃避免疫應(yīng)答。

③流行特點

羔羊大腸桿菌病的傳染源通常是攜帶病原型大腸桿菌的動物或環(huán)境。感染源可以是病羊，健康但攜帶大腸桿菌的動物，或者是被污染的食物、水源和環(huán)境。病原可以通過多種方式傳播。最常見的傳播方式是口服，例如羔羊攝取被大腸桿菌污染的食物或水。此外，直接接觸（例如羔羊間的直接接觸或與被污染的環(huán)境的接觸）也是重要的傳播方式。所有羔羊都可能感染大腸桿菌，但新生和剛斷奶的羔羊以及免疫力較弱的羔羊更容易感染。此外，生活在衛(wèi)生條件差或密度過高的環(huán)境中的羔羊也更容易受到感染。大腸桿菌病可以在一年中的任何時候發(fā)生，一些研究發(fā)現(xiàn)，在溫度較高或濕度較大的季節(jié)（例如夏季和初秋）中，疾病的發(fā)生率可能會增加。大腸桿菌引起的羔羊疾病通常是多因素的結(jié)果。這些因素可能包括宿主的易感性（例如年齡和免疫狀態(tài)）、環(huán)境因素（例如衛(wèi)生條件和動物密度）、病原體因素（例如大腸桿菌的毒力因子）以及管理因素（例如飼養(yǎng)和喂養(yǎng)實踐）。這些因素共同影響了羔羊是否會感染大腸桿菌以及感染后是否會發(fā)病。

2、羊腸毒血癥

①病原特征

產(chǎn)氣莢膜梭菌有多種血清型，其中以A、B、C、D、E、F、G七種血清型最為常見。不同血清型菌株產(chǎn)生的毒素和致病性有所差異。細(xì)菌的形態(tài)為直桿狀，兩端鈍圓，革蘭氏陽性。卵圓形芽孢位于菌體中央或近端，不比菌體明顯膨大。產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布于環(huán)境中，常見于土壤、水和動物腸道。在適當(dāng)?shù)臈l件下，如溫度、濕度等，該菌容易生長繁殖。在普通培養(yǎng)基上能生長，若添加葡萄糖、血液，則生長更好。同時細(xì)菌在繁殖過程中可引起羊腸毒血癥，其主要致病因子為腸毒素（Enterotoxin，ETX）。腸毒素分為腸毒素A（ETXa）、腸毒素B（ETXb）和腸毒素C（ETXc），其中以ETXa的致病性最強(qiáng)。

②致病機(jī)理

產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生多種毒素，其中以腸毒素（Enterotoxin，ETX）為主要致病因子。腸毒素分為腸毒素A（ETXa）、腸毒素B（ETXb）和腸毒素C（ETXc）。其中，ETXa的致病性最強(qiáng)。腸毒素與腸道上皮細(xì)胞表面受體結(jié)合，激活一系列信號傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致腸道上皮細(xì)胞分泌大量水、電解質(zhì)和有機(jī)酸，從而引起腹瀉、腹痛等癥狀。產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的毒素和其他代謝產(chǎn)物可能對腸道上皮細(xì)胞造成直接損傷，導(dǎo)致腸道屏障功能受損，進(jìn)而引發(fā)腸毒血癥。在毒素作用下，腸道屏障功能受損，產(chǎn)氣莢膜梭菌可能趁機(jī)侵入腸道黏膜，引發(fā)細(xì)菌感染，加重病情。產(chǎn)氣莢膜梭菌感染可激活宿主免疫反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤、組織損傷等，進(jìn)一步加重病情。

③流行特點

產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布于環(huán)境中，常見于土壤、水和動物腸道。動物腸道內(nèi)的產(chǎn)氣莢膜梭菌可通過食物、飲水、糞便等途徑傳播給其他動物。該類病原主要通過消化道傳播，包括食物、飲水和直接接觸感染。此外，產(chǎn)氣莢膜梭菌還可能通過飛沫傳播，但這種途徑相對較少。羊腸毒血癥主要發(fā)生在2歲以內(nèi)且膘情好的青壯年羊和部分懷孕母羊。這些動物的免疫力相對較低，容易感染產(chǎn)氣莢膜梭菌。羊腸毒血癥多發(fā)于春季和秋季，這兩個季節(jié)氣溫變化較大，容易導(dǎo)致動物抵抗力下降，從而增加感染風(fēng)險。產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的主要原因是動物免疫力下降，如飼養(yǎng)管理不善、營養(yǎng)不良、應(yīng)激等因素。此外，腸道內(nèi)產(chǎn)氣莢膜梭菌大量繁殖和產(chǎn)生毒素也是導(dǎo)致發(fā)病的重要原因。

二、羊細(xì)菌性腹瀉的臨床癥狀

1、羔羊大腸桿菌性腹瀉

羔羊大腸桿菌病潛伏期通常為感染后的12～72小時，但這個時間可能會因上述因素而變化。在此期間，大腸桿菌在羔羊體內(nèi)生長和繁殖，但尚未引發(fā)顯著的癥狀。最常見的癥狀包括腹瀉，糞便可能酸臭、黏液性或帶血。羔羊可能會出現(xiàn)食欲下降、體重減輕和脫水等癥狀。羔羊萎靡不振，行動遲緩。嚴(yán)重時，可能會出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如步態(tài)不穩(wěn)、抽搐或癱瘓。在某些情況下，大腸桿菌可能通過血液傳播到肺部，引發(fā)肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病，表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難等。在感染嚴(yán)重或未得到及時治療的情況下，羔羊可能會出現(xiàn)全身性癥狀，如發(fā)熱、虛弱和休克。

2、羊腸毒血癥

產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的潛伏期較短，通常為幾小時至1天。潛伏期長短取決于動物的抵抗力、感染程度和病原體種類等因素。羊腸毒血癥的發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為急性胃腸炎，包括腹瀉、腹痛、食欲不振等。病程較短，一般在24小時內(nèi)。嚴(yán)重病例可能出現(xiàn)脫水和混合感染，導(dǎo)致死亡。發(fā)病初期病羊突然出現(xiàn)水樣或稀薄糞便，有時伴有黏液，腹痛、肌肉顫抖、不愿走動等癥狀。食欲減退或完全消失，出現(xiàn)口渴、皮膚干燥、眼窩下陷等脫水癥狀。病羊可能伴有其他細(xì)菌或病毒感染，導(dǎo)致病情加重。

三、病理學(xué)變化

1、羔羊大腸桿菌性腹瀉

腸道是大腸桿菌感染的主要部位。在感染早期，常可見到腸壁充血、水腫，小腸和大腸粘膜出現(xiàn)充血、水腫、糜爛或潰瘍等病變。在病理切片上，可以看到腸上皮細(xì)胞萎縮、變性或壞死，腸壁炎細(xì)胞浸潤。部分病例中，腸道內(nèi)可見到假膜形成。當(dāng)大腸桿菌通過腸壁進(jìn)入血液時，可能引發(fā)敗血癥，使全身多個器官出現(xiàn)病變。例如，肝臟、脾臟、腎臟和心臟等器官可能出現(xiàn)充血、出血或壞死等病變。病理切片上可以看到炎細(xì)胞浸潤、組織細(xì)胞增多等病變。某些大腸桿菌菌株產(chǎn)生的志賀毒素可能影響神經(jīng)系統(tǒng)，引發(fā)神經(jīng)癥狀。在病理切片上，可能可以看到腦組織充血、水腫，神經(jīng)細(xì)胞變性或壞死等病變。

2、羊腸毒血癥

產(chǎn)氣莢膜梭菌感染引起的羊腸毒血癥主要影響腸道，導(dǎo)致腸道炎癥、充血、水腫等病理組織學(xué)變化。小腸黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，黏膜層充血、水腫，局部有出血點。腸腺分泌功能受損，部分腸腺發(fā)生萎縮、退化。腸系膜血管充血，淋巴結(jié)腫大、充血。大腸黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，黏膜層充血、水腫，局部有出血點。腸腺分泌功能受損，部分腸腺發(fā)生萎縮、退化。腸系膜血管充血，淋巴結(jié)腫大、充血。腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血，切面呈暗紅色，淋巴結(jié)實質(zhì)細(xì)胞發(fā)生變性、壞死。肝臟腫大、充血，肝細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，肝竇充血，肝小葉間質(zhì)水腫。脾臟腫大、充血，脾細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，脾竇充血，脾小梁間質(zhì)水腫。腎臟腫大、充血，腎小球發(fā)生充血、水腫，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死。

四、實驗室診斷

1、羔羊大腸桿菌性腹瀉

①病料涂片染色鏡檢

使用無菌器具從羔羊的腸道內(nèi)采集糞便樣本或從病變組織上采集組織樣本。將病料涂在玻片上，讓其自然干燥。用火焰固定涂片，然后用晶紫染色液染色1分鐘，然后用清水沖洗。加入碘溶液，使其與晶紫形成大分子的晶紫碘復(fù)合物，靜置1分鐘后用清水沖洗。用酒精或醋酸乙醇洗脫1～2分鐘，然后用清水沖洗。 用紅色的對比染色液-紅色的抗晶紫染色液染色1～2分鐘，然后用清水沖洗，晾干。用顯微鏡觀察染色結(jié)果。大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，應(yīng)呈紅色。

②病原分離培養(yǎng)

將采集的病料稀釋后接種在大腸桿菌選擇性培養(yǎng)基（如EMB培養(yǎng)基或MacConkey培養(yǎng)基）上，然后在37℃條件下培養(yǎng)18～24小時。觀察菌落的形態(tài)。在EMB培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落通常為深紫色，呈金屬光澤;在MacConkey培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落為粉紅色。

2、羊腸毒血癥

從病羊腸道病變部位采集病料，如糞便、腸道內(nèi)容物或組織樣本。將病料涂抹在載玻片上，滴加適量生理鹽水，覆蓋另一載玻片，用橡皮夾固定。將涂片放入革蘭氏染色液中，按照革蘭氏染色法進(jìn)行操作。首先用稀碘液染色，然后用酒精脫色，最后用結(jié)晶紫染色。染色完成后，用清水沖洗，干燥，顯微鏡觀察。然后將病料接種到厭氧培養(yǎng)基上，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72小時。革蘭氏染色后，顯微鏡下觀察可見到革蘭氏陽性、粗大、芽孢形成的桿菌。在培養(yǎng)基上，產(chǎn)氣莢膜梭菌形成的菌落呈白色或灰色，表面光滑，邊緣整齊。菌落周圍可能出現(xiàn)透明帶，表示產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的氣體。對分離培養(yǎng)的菌株進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，如生化試驗、毒素檢測等，以確認(rèn)是否為產(chǎn)氣莢膜梭菌。

五、羊細(xì)菌性腹瀉治療方案

1、羔羊大腸桿菌性腹瀉

對于羔羊大腸桿菌病，主要使用抗生素進(jìn)行針對性的治療，患病羊可以口服土霉素使用劑量為50mg/kg·bw，分2～3次口服。同時強(qiáng)化補(bǔ)液，選擇使用5%的葡萄糖氯化鈉注射液，每只羊每次使用20～100mL，靜脈注射。并搭配使用胃蛋白酶0.5g加溫開水100mL，混合均勻之后直接灌服，每天早晚各服用1次，這樣能夠增強(qiáng)胃腸道消化功能。上述藥物連續(xù)使用3～5天之后，病情可以得到很好的控制。

2、羊腸毒血癥

對于羊腸毒血癥同樣推薦使用抗生素進(jìn)行治療。患病羊可以口服磺胺脒，每只羊使用8～12g，第1天一次性灌服，第2天分2次服用。用藥之前可以口服5%～8%的硫酸鎂每只羊每次使用200～300mL，排出胃腸道當(dāng)中的有毒有害物質(zhì)，然后再使用含磺胺類藥物。也可以選擇使用10%的石灰水，成年羊使用200mL，羔羊使用50～80mL，每天使用一次，連續(xù)使用1～2次，這樣能夠中和腸道毒素。在使用抗生素進(jìn)行治療的同時，也可以聯(lián)合使用強(qiáng)心鎮(zhèn)靜類的藥物進(jìn)行輔助治療，例如肌肉注射20%的安鈉咖注射液20～30mL。一般按照上述方案治療5～8天病情能夠得到很好的控制。

六、羊細(xì)菌性腹瀉預(yù)防措施

1、加強(qiáng)營養(yǎng)補(bǔ)充

①及時哺乳

哺乳過程中應(yīng)該確保新生羔羊吃到充足的初乳，初乳中含有豐富的免疫球蛋白、乳糖、脂肪等營養(yǎng)成分，有助于羔羊建立自我免疫，提高抵抗力。在羔羊出生后1小時內(nèi)，盡量讓它們吃到初乳。如果母羊乳量不足或沒有乳汁，需要及時為羔羊提供營養(yǎng)豐富的代乳品?？梢赃x擇專為羔羊生產(chǎn)的奶粉，按照產(chǎn)品說明進(jìn)行調(diào)配。按照羔羊的年齡和體重，合理安排哺乳次數(shù)和間隔時間。一般建議每天哺乳3～4次，每次哺乳持續(xù)20～30分鐘。密切觀察羔羊的體重增長、精神狀態(tài)、糞便情況等，及時發(fā)現(xiàn)異常，調(diào)整哺乳方案。如發(fā)現(xiàn)羔羊出現(xiàn)腹瀉癥狀，要及時采取治療措施，防止病情惡化。同時，對母羊的飼養(yǎng)管理、飼料和環(huán)境等進(jìn)行調(diào)整，以降低羔羊腹瀉的發(fā)生率。

②科學(xué)使用礦物質(zhì)、維生素和微生態(tài)制劑

為了預(yù)防羊腹瀉疾病，可以在飼料中添加適量的礦物質(zhì)、維生素和微生態(tài)制劑。常見的礦物質(zhì)主要包括了鈣、磷、食鹽、微量元素。飼料中應(yīng)保證充足的鈣、磷含量。常用的補(bǔ)充劑有石粉、貝殼粉、蛋殼粉等。添加量約為每1kg飼料添加5～10g。適量的食鹽有助于維持羊的電解質(zhì)平衡。添加量約為每1kg飼料添加0.3～0.5g。在飼料中添加適量的微量元素，如鐵、鋅、銅、錳、鈷、碘、硒等，有助于提高羊的免疫力，預(yù)防疾病。添加量約為每1kg飼料添加0.05～0.2g。常見的維生素中包括了維生素A、維生素D維生素E、B族維生素。維生素A添加量約為每1kg飼料添加200～400IU。維生素D100～200IU。維生素E添加10～20IU。維生素B族包括維生素B1、B2、B6、B12等，有助于維持羊的代謝和生理功能。添加量約為每1kg飼料添加0.1～0.5g。微生態(tài)制劑如乳酸桿菌、酵母菌、雙歧桿菌等，有助于調(diào)節(jié)羊腸道菌群平衡，提高免疫力，預(yù)防疾病。添加量約為每1kg飼料添加0.1～0.5g。

2、加強(qiáng)羊舍環(huán)境清理衛(wèi)生消毒

每天清理羊舍內(nèi)的糞便，保持舍內(nèi)衛(wèi)生。清理后的糞便應(yīng)集中堆放，并進(jìn)行發(fā)酵處理。確保羊舍內(nèi)通風(fēng)良好，提高空氣質(zhì)量，降低氨氣、二氧化碳等有害氣體的濃度。每天清洗羊飲水設(shè)備，防止水質(zhì)污染?？墒褂米贤饩€消毒燈或0.1%的二氧化氯等消毒劑進(jìn)行消毒。羊舍消毒可以選擇使用火焰、高壓水槍等對羊舍、墻壁、設(shè)施等進(jìn)行徹底清洗和消毒。也可以使用合適的消毒劑進(jìn)行噴灑或浸泡。常用的消毒劑有2%～5%的氫氧化鈉，2%的過氧化氫、0.1%的二氧化氯、1%～2%的甲醛等。注意按照產(chǎn)品說明進(jìn)行使用，避免濃度不足或過量。

（作者單位：810600青海省海東市平安區(qū)古城鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站）