摘 要：為了探究整合因子復(fù)合物亞基10（integrator complex subunits 10，INTS10 ）對人肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）細胞周期、凋亡、生長和遷移能力的影響及其潛在的分子作用機制，利用慢病毒感染法獲得穩(wěn)定過表達或敲低INTS10的HCC細胞系，采用qRT-PCR和Western blotting檢測INTS10 mRNA和蛋白表達水平，接著采用 CCK-8法、克隆形成和BrdU實驗檢測細胞生長情況，采用 Transwell小室實驗檢測細胞遷移能力，采用流式分析術(shù)檢測細胞的周期和凋亡.結(jié)果顯示：過表達INTS10可顯著抑制HCC細胞的凋亡、生長和遷移能力，促進G1期細胞數(shù)量的增加，而敲低INTS10則呈現(xiàn)相反的表型.通過通路富集分析發(fā)現(xiàn)，周期相關(guān)通路被顯著富集，過表達INTS10后，CDC25A和CDK4的mRNA和蛋白質(zhì)水平顯著減少，而CDKN1A的水平顯著增加，敲低INTS10則呈現(xiàn)相反趨勢.綜上，本研究初步揭示了INTS10在HCC細胞中可能通過影響G1/S期相關(guān)蛋白質(zhì)的表達而發(fā)揮抑癌基因的功能，為下一步更為深入的功能和機制研究提供了基礎(chǔ).

關(guān)鍵詞：

肝細胞癌（HCC）；整合因子復(fù)合物亞基10（INTS10）；CDC25A；CDKN1A；CDK4

中圖分類號：

Q279"" 文獻標(biāo)志碼：

A"" 文章編號：

1000-1565（2024）03-0290-11

Effect of INTS10" on cell cycle， apoptosis， growth and"" migration capacity of HCC

WANG Xueting1，2， QI Xin3， WEI Xiaojun4， YANG Aiqing2， ZHOU Gangqiao1，2，3

（1. College of Chemistry and Materials Science， Hebei University， Baoding 071002， China; 2. Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Sciences， Beijing 100850， China; 3. Medical College， Guizhou University， Guiyang 550025， China; 4. Department of Hepatobiliary Surgery，Space Center Hospital， Beijing 100049，China）

Abstract： The effects of integrator complex subunits 10（INTS10） on cell cycle，apoptosis，growth and migration of hepatocellular carcinoma （HCC） cells and its potential molecular mechanism were explored. The HCC cell lines with stable overexpression or knockdown of INTS10 were obtained by lentivirus infection. The mRNA and protein expression levels of INTS10 were detected by qRT-PCR and Western blotting. The cell growth was detected by CCK-8， clonal formation and BrdU assay. The" cell migration ability was detected by Transwell assay. Flow cytometry was used to detect the number of cell cycles and apoptosis. The results showed that overexpression of INTS10 could significantly inhibit the apoptosis， growth

and migration of HCC， and promote the increase of the number of G1 phase cells， while knockdown of INTS10 showed the opposite effects. Through pathway enrichment analysis， it was found that the cycle-dependent pathway was significantly enriched. Overexpression of INTS10 could significantly reduce the mRNA and protein levels of CDC25A and CDK4， while the level of CDKN1A was significantly increased， and INTS10 knockdown showed the opposite trend. In conclusion， it is preliminarily revealed that INTS10 may play a role as a tumor suppressor gene in HCC by affecting the expression of G1/S phase related proteins， which provides a foundation for further functional and mechanism studies.

Key words： hepatocellular carcinoma（HCC）; integrator complex subunits 10（INTS10）; CDC25A; CDKN1A; CDK4

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）是世界上第六大常見惡性腫瘤，也是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，近年來其發(fā)病率呈不斷上升趨勢［1-2］.雖然外科技術(shù)的發(fā)展改善了部分肝細胞癌患者的預(yù)后，但其總體生存率仍然較低，全世界每年約造成超過70萬人死亡［3］.在國內(nèi)，其5年生存率也小于12.5%［4］.HCC最常見的危險因素是乙型肝炎病毒（hepatitis B virus）和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus）感染［5］.此外，肥胖、酒精性肝病（alcoholic liver disease， ALD）和非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease， NAFLD）等也是HCC的重要危險因素，并且這些病因?qū)е碌陌l(fā)病率仍處于上升趨勢［6］.臨床上，雖然計算機斷層掃描（CT）和磁共振成像（MRI）技術(shù)極大地提高了HCC的診斷能力，但由于價格昂貴，尚不能用于廣泛篩查［3］.另外，HCC具有發(fā)病隱匿、侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強等特點［7］，導(dǎo)致許多患者失去及時治療的機會.發(fā)現(xiàn)HCC相關(guān)基因，解析其在HCC發(fā)生發(fā)展中的功能和分子機制，尋找有效的生物標(biāo)志物，將有助于HCC患者新的預(yù)防、診治措施的研發(fā).

整合因子復(fù)合體（integrator complex）是一種由多個亞基組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體，目前發(fā)現(xiàn)了至少15個進化上保守的亞基成員（integrator complex subunits，INTS1～INTS15）［8］.整合因子復(fù)合體的主要功能是參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和核酸代謝，然而，其部分亞基也可直接參與或間接影響人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，例如：INTS6可通過Wnt途徑抑制肝細胞癌的生長［9］；INTS7能夠增強肺腺癌細胞的遷移和侵襲能力，并誘導(dǎo)肺腺癌細胞的增殖，降低其凋亡能力，因此可能是肺腺癌的潛在治療靶點和預(yù)后標(biāo)志物［10］；INTS11的缺失可導(dǎo)致食管腺癌細胞G2/M期細胞阻滯和細胞凋亡，進而抑制細胞的生長［11］；與正常癌旁組織相比，INTS3在肝細胞癌組織中顯著上調(diào)表達［12］；INTS14/VWA9被發(fā)現(xiàn)在永生化細胞非小細胞肺癌組織中顯著上調(diào)表達［13］.另外，Simpson等［14］通過微陣列和外顯子組測序分析發(fā)現(xiàn)，INTS8可能在胃癌和外周T細胞淋巴瘤中發(fā)揮作用.INTS10也是整合因子蛋白質(zhì)復(fù)合體家族中的一員，其編碼基因位于染色體8p21.3區(qū)域［8］.本課題組的前期研究［15］發(fā)現(xiàn)，INTS10通過激活I(lǐng)RF3及IFN-λ抑制HBV的復(fù)制.HBV感染作為HCC發(fā)病的主要原因之一，約占總HCC病例的85%，由此推斷，INTS10在HCC的發(fā)病過程中也可能發(fā)揮一定的功能.然而，INTS10在HCC發(fā)生發(fā)展中的功能尚未見報道.本文旨在探索INTS10對HCC細胞系的生長和遷移能力等的影響，初步揭示其在HCC發(fā)生、發(fā)展中的作用.

1 材料與方法

1.1 細胞系與質(zhì)粒

本文所用的細胞系包括人HCC細胞系HepG2和HCC97H，以及人胚腎細胞系HEK293T（本實驗室細胞庫）.所用的質(zhì)粒包括用于基因過表達的pLV-3×Flag-mCherry（2A）Puro-INTS10和對照質(zhì)粒pLV-3×Flag-mCherry（2A）Puro，以及用于敲低基因的質(zhì)粒pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro、pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#1、pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#2和pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#3（英茂盛業(yè)科技有限公司）.

1.2 主要試劑與抗體

DMEM（dulbecco’s modified eagle’s medium）細胞培養(yǎng)基（北京細工生物科技公司）；胎牛血清（fetal bovine serum， FBS）（Gibco公司）；SYBR Green 熒光定量試劑（美國Kapa）；INTS10抗體（1∶1 000， 15271-1-AP， Proteintech），CDKN1A抗體（1∶1 000， 10355-1-AP， Proteintech），CDC25A抗體（1∶1 000， 55031-1-AP， Proteintech），CDK4抗體（1∶1 000，11026-1-AP， Proteintech）和GAPDH抗體（1∶2 000， 60004-1-Ig， Proteintech）（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）等.

1.3 細胞培養(yǎng)

實驗所用培養(yǎng)基均為含體積分?jǐn)?shù)10% FBS和1%青鏈霉素雙抗的DMEM，培養(yǎng)條件為37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2，并保持一定的濕度.

1.4 構(gòu)建穩(wěn)定過表達和敲低INTS10的HCC細胞系

將慢病毒包裝質(zhì)粒pMD2.G、pSPAX2與目的質(zhì)粒（包括用于基因過表達的質(zhì)粒pLV-3×Flag-mCherry（2A）Puro-INTS10和對照體pLV-3×Flag-mCherry（2A）Puro，以及用于敲低基因的質(zhì)粒pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro、pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#1、pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#2和pLV-shRNA-EGFP（2A）Puro-INTS10#3）按1∶2∶3的質(zhì)量比共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞系，8 h后更換為正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，48 h后收集富含病毒顆粒的細胞培養(yǎng)上清液，用孔徑0.45 μm濾器除去細胞碎片并用超速離心法濃縮病毒.取500 μL濃縮后的病毒液加入5 μg/mL的Polybrene感染HCC97H和HepG2細胞系，48 h后加入2 μg/mL的嘌呤霉素進行篩選.

1.5 蛋白質(zhì)提取及Western blotting實驗

收集對照組和實驗組細胞，加入含有蛋白酶抑制劑的細胞裂解液，置于冰上裂解30 min，12 000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中，按比例加入蛋白質(zhì)上樣緩沖液，煮沸10 min，得到細胞總蛋白質(zhì)樣品.在適宜質(zhì)量濃度的SDS-PAGE膠上進行點樣，隨后進行電泳、電轉(zhuǎn)和封閉，一抗4 ℃孵育過夜，用TBST漂洗3次，每次5 min，二抗室溫孵育1 h，再用TBST洗3次，最后進行顯影.

1.6 RNA提取及qRT-PCR實驗

按照說明書（康為世紀(jì)生物科技有限公司）提取細胞的總RNA.采用分光光度計測量總RNA的質(zhì)量濃度后，取500 ng RNA采用MonScriptTM RTIll All in One Mix試劑盒（莫納生物科技有限公司）逆轉(zhuǎn)錄為cDNA.然后，以5 μL cDNA為模板，進行qRT-PCR擴增實驗，詳細的引物信息見表1.所有樣本均設(shè)3個重復(fù)，以ACTB基因為對照，對mRNA定量結(jié)果進行歸一化處理.根據(jù)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對INTS10模板進行定量分析.

1.7 CCK-8實驗檢測細胞增殖

收集處于生長對數(shù)期的細胞，按2 000/孔將細胞接種于96孔板中，每組3個重復(fù)，在細胞培養(yǎng)一定時間后，加入含體積分?jǐn)?shù)10% CCK-8試劑（北京莊盟國際生物基因科技有限公司）的無血清DMEM培養(yǎng)基，采用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測吸光度值（A450），根據(jù)記錄的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析并繪制細胞生長曲線.

1.8 平板細胞克隆形成實驗檢測細胞增殖

取對數(shù)生長期細胞，按2 000/孔將細胞接種于6孔板中.培養(yǎng)14 d，其間每隔3 d換液1次.待出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)，先用甲醇固定30 min，接著用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的結(jié)晶紫溶液染色30 min，最后洗凈并晾干平板，對克隆進行拍照、計數(shù)和統(tǒng)計分析.

1.9 BrdU法檢測細胞增殖

取對數(shù)生長期的細胞重懸后，加入濃度為10 μmol/L的BrdU，在37 ℃細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)30～120 min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的BSA/PBS清洗后，滴加至預(yù)冷的無水乙醇中，-20 ℃下固定1 h后進行清洗，接著加入1 mL 2 μmol/L的HCl/體積分?jǐn)?shù)0.5%的Triton X-100，室溫緩慢渦旋處理1 h；加入1 mL 0.1 mol/L的Na2BO4（pH 8.5）重懸，中和酸；離心棄上清液，體積分?jǐn)?shù)為0.5%的Tween 20/質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的BSA/PBS洗1次后加入BrdU-PE抗體（1∶100， AB396305， BD Biosciences），室溫緩慢渦旋孵育1 h；體積分?jǐn)?shù)為0.5%的Tween 20/質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的BSA/PBS洗3次，加入300～500 μL的PBS，進行流式檢測，用FlowJo軟件分析數(shù)據(jù).

1.10 流式細胞術(shù)檢測細胞周期

收集對照組和實驗組細胞，用300 μL PBS重懸后懸滴置700 μL預(yù)冷的無水乙醇中，-20 ℃固定過夜.離心后，將細胞沉淀懸浮于300～500 μL含有20 μg/mL RNAaseA（1∶200）和40 μg/mL PI的PBS中，室溫孵育15 min；采用流式細胞術(shù)檢測并用FlowJo軟件分析數(shù)據(jù).

1.11 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡

取處于對數(shù)生長期的實驗組和對照組細胞，以2×105/孔的細胞量接種于12孔板中，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，24 h用800 μmol/L的H2O2對細胞進行損傷刺激.收集細胞，加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細胞，然后加入5 μL V-FITC和10 μL PI，輕混，室溫避光孵育15 min，加入400 μL 1×Binding Buffer，置于冰上，采用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，F(xiàn)lowJo軟件分析數(shù)據(jù).

1.12 細胞遷移能力的檢測

將處于對數(shù)生長期的細胞接種至24孔板中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h.然后更換不含血清的 DMEM 培養(yǎng)基饑餓18 h，消化后用不含血清的 DMEM重懸并計數(shù).在 Transwell 上室中鋪2×103個細胞，在Transwell下室中加入 500 μL 含體積分?jǐn)?shù)20% FBS 的 DMEM，培養(yǎng) 24～36 h 后，將小室移至含1 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛的24孔板中，固定15 min，接著移至加1 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%結(jié)晶紫溶液的孔中染色10 min.用水輕輕沖洗小室后，用棉簽小心將小室內(nèi)部的結(jié)晶紫及未穿過膜的細胞擦拭干凈，在顯微鏡下對穿過小室的細胞拍照并進行統(tǒng)計分析.

1.13 轉(zhuǎn)錄組測序及基因表達定量分析

提取敲低INTS10基因以及對照組的HepG2細胞的總RNA，通過北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司在Illumina Hi Seq X Ten平臺上采用150 堿基對的雙端配對策略進行轉(zhuǎn)錄測序（RNA-seq）.接著，采用了Fast QC軟件對測序的數(shù)據(jù)進行質(zhì)量評價，并利用trim-galore去除低質(zhì)量的數(shù)據(jù)和接頭序列.以Genome Reference Consortium Human Build 38（GRCh38/hg38）基因組序列為參考，采用salmon對通過質(zhì)量評估的測序數(shù)據(jù)進行序列比對和定量.進一步，利用DE Seq軟件進行基因的差異表達分析.然后采用Benjamin-Hochberg（BH）方法對這些基因進行多重檢驗校正，將敲低INTS10前后log2［fold change］gt;0.3及Plt;0.05的基因定義為顯著差異表達基因.最后，使用Metascape網(wǎng)站對顯著差異的表達基因進行功能富集分析，并鑒定INTS10對HCC影響的生物學(xué)過程或信號通路［16］.

1.14 臨床相關(guān)性分析

首先在UALCAN和Human Protein Atlas公共數(shù)據(jù)庫［17］中分析INTS10在HCC和正常組織中mRNA和蛋白的表達水平，接著在13對HCC患者的臨床樣本（來自南京）中進一步驗證INTS10表達的水平.

1.15 統(tǒng)計學(xué)分析

HCC和正常組織間INTS10的差異表達分析采用雙側(cè)t檢驗.所有實驗均至少重復(fù)3次，所有

統(tǒng)計學(xué)檢驗采用SPSS統(tǒng)計軟件完成，數(shù)據(jù)的可視化采用GraphPad 8.0完成.

2 結(jié)果

2.1 HCC組織中INTS10的表達水平

為了探究INTS10在HCC組織中的表達水平，首先在UALCAN和Human Protein Atlas公共數(shù)據(jù)庫中分析INTS10在HCC和正常組織中mRNA與蛋白的表達水平，結(jié)果顯示，INTS10在HCC組織中的mRNA和蛋白表達水平顯著低于正常組織（圖1a、b）.接著選取了13對HCC患者的臨床樣本進行驗證，結(jié)果顯示，INTS10的mRNA在HCC組織中低表達（圖1c），由此，推測INTS10可能在HCC中發(fā)揮抑癌基因的功能.

2.2 INTS10對HCC細胞生長能力的影響

通過慢病毒感染法構(gòu)建穩(wěn)定過表達或穩(wěn)定敲低INTS10的HCC細胞株，并采用 qRT-PCR 及Western blotting技術(shù)驗證INTS10的過表達或敲低效果.結(jié)果顯示：在HepG2和HCC97H細胞系中，與對照組（pLV-Flag）相比，過表達組（pLV-Flag-INTS10）中INTS10的mRNA和蛋白質(zhì)水平均顯著增加（圖2a、a′）；與對照組（sh-Ctrl）相比，敲低組（Sh-INTS10#2和Sh-INTS10#3）中INTS10的表達顯著降低（圖2b、b′）.從而證明成功構(gòu)建了穩(wěn)定干擾INTS10的HCC細胞株.首先采用 CCK-8 實驗評價了INTS10對HCC細胞生長能力的影響.結(jié)果顯示，過表達INTS10可顯著抑制HepG2和HCC97H細胞的生長能力（圖2c、c′），而敲低INTS10則顯著促進HCC細胞的生長能力（圖2d、d′）.其次，通過細胞克隆形成實驗，檢測了INTS10對HCC細胞克隆形成能力的影響.結(jié)果顯示：過表達INTS10可顯著抑制HepG2和HCC97H細胞的克隆形成能力（圖2e、e′），而敲低INTS10則顯著促進HCC細胞的克隆形成能力（圖2f、f′）.最后，采用BrdU染色法檢測了增殖期細胞的數(shù)量，BrdU陽性率越高說明細胞的增殖能力越強［18］.結(jié)果顯示：與對照組（pLV-Flag/Sh-Ctrl）BrdU的陽性率相比，過表達INTS10的細胞其BrdU的陽性率顯著降低（圖2g、g′），而敲低組細胞BrdU的陽性率顯著升高（圖2h、h′）.總之，這些結(jié)果表明，INTS10可抑制HCC細胞的生長能力.

2.3 INTS10對HCC細胞遷移能力的影響

用Transwell 實驗評價INTS10對HCC細胞遷移能力的影響.結(jié)果顯示：INTS10過表達后可顯著抑制HepG2和HCC97H細胞的遷移能力（圖3a、a′），而敲低INTS10后則顯著促進其遷移能力（圖3b、b′）.上述結(jié)果表明，INTS10可抑制HCC細胞的生長及遷移能力，在HCC進展中可能發(fā)揮抑癌基因的功能.

2.4 INTS10對HCC細胞凋亡能力的影響

腫瘤細胞凋亡的異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要生物學(xué)機制之一.為了探索INTS10的異常表達對HCC細胞凋亡的影響，采用 Annexin V-APC/PI 染色法，檢測擾動INTS10基因后對 HepG2和HCC97H細胞凋亡的影響（圖4）.結(jié)果顯示：在靜息狀態(tài)下，過表達INTS10可顯著促進HepG2細胞的凋亡，而對HCC97H細胞的凋亡沒有顯著的影響（圖4a、a′）；在800 μmol/L H2O2刺激下，與對照組相比，過表達INTS10后可顯著促進HepG2和HCC97H細胞的凋亡（圖4b、b′）.相反，在靜息狀態(tài)下，敲低INTS10可顯著抑制HepG2細胞的凋亡，但對HCC97H細胞的凋亡沒有顯著的影響（圖4c、c′）；在800 μmol/L H2O2刺激后，敲低INTS10則顯著抑制HepG2和HCC97H細胞的凋亡（圖4d、d′）.

2.5 INTS10對HCC細胞周期進程的影響

細胞周期作為細胞生命活動的基本過程，是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要生物學(xué)機制之一［19］.為了探索INTS10異常表達對肝癌細胞周期的影響，通過流式細胞術(shù)，觀察HepG2和HCC97H細胞中擾動INTS10基因后細胞周期的變化（圖5a）.結(jié)果顯示：過表達INTS10后，處于 G1 期的HCC細胞數(shù)量顯著增加，處于S期的細胞數(shù)量顯著減少，而處于 G2/M 期的細胞數(shù)量無顯著差別（圖5a、a′）.反之，敲低INTS10則顯著減少處于G1期的HCC細胞數(shù)量，顯著增加了處于S期的細胞數(shù)量，同時，對 G2/M期的細胞數(shù)量沒有顯著影響（圖5b、b′）.以上結(jié)果提示，INTS10能夠抑制HCC細胞的G1/S期進程.

2.6 INTS10對周期相關(guān)蛋白的影響

癌細胞最顯著的特征之一是其生長失去正常的調(diào)控.這往往是由于基因突變導(dǎo)致癌細胞的增殖和抗凋亡能力的失調(diào)，而這種失調(diào)能力主要與細胞周期密切相關(guān)［20-21］.前面的研究已顯示，干擾INTS10基因后對HCC細胞的周期和生長有顯著的影響（圖2c～d′，圖4）.為了探索INTS10對HCC細胞的作用機制，在HepG2細胞中敲低INTS10并進行RNA-seq分析.結(jié)果顯示：敲低INTS10后可顯著上調(diào) 1 881個基因的表達，下調(diào) 1 443個基因的表達（圖6a）.隨后針對所有差異表達基因的功能富集分析顯示：INTS10調(diào)控的相關(guān)基因顯著富集于細胞周期和凋亡等相關(guān)信號通路（圖6b）.其中，CDC25A和CDKN1A這2個基因是公認的與細胞周期進展相關(guān)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子［22-23］.已知在不同的腫瘤細胞中CDC25A和CDKN1A可影響細胞周期蛋白質(zhì)依賴性激酶4（cyclin-dependent-kinase，CDK4）的表達，進而影響細胞周期進程［23-25］.為此，采用qRT-PCR和Western blotting實驗在HepG2和HCC97H細胞系中驗證INTS10對CDC25A、CDKN1A和CDK4表達的影響.結(jié)果顯示：過表達INTS10后，CDC25A和CDK4的mRNA和蛋

白質(zhì)水平均顯著減少，而CDKN1A的水平顯著增加;相反，敲低INTS10后，CDC25A和CDK4的mRNA和蛋白質(zhì)水平顯著增加，而CDKN1A的水平顯著減少（圖6c～d′）.綜上所述，本文初步揭示了INTS10在HCC細胞中可能通過影響細胞周期G1/S期相關(guān)蛋白質(zhì)的表達而發(fā)揮抑癌基因的功能.

3 討論

HCC是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一［26］.近年來，HCC的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢［27-28］.因此，鑒定與HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因并闡明其功能和致病機制，將為HCC的防治提供理論依據(jù).本研究在HCC細胞系中初步探索了INTS10基因?qū)CC細胞的生長、遷移、凋亡和細胞周期等的影響，并通過初步的生物信息學(xué)分析和功能實驗，提示了該基因可能通過影響細胞周期G1/S期相關(guān)蛋白質(zhì)的表達，進而抑制HCC的發(fā)生發(fā)展.

INTS10作為整合因子蛋白質(zhì)復(fù)合體家族中的一員，已被發(fā)現(xiàn)可能抑制HBV病毒的復(fù)制［8］.但是，INTS10在相關(guān)癌癥方面的生物學(xué)功能還鮮見報道.本研究通過細胞學(xué)實驗首次發(fā)現(xiàn)，INTS10能夠顯著抑制HCC細胞系的生長和遷移能力以及細胞周期進程，顯著促進細胞的死亡.這些結(jié)果均提示INTS10在HCC的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮抑癌基因的功能.

已知整合因子蛋白質(zhì)復(fù)合體主要參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，并且已有少量研究［29］提示，該復(fù)合體的部分亞基可能參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程.例如，INTS6/DICE1可通過影響細胞G1/S期蛋白表達和Wnt信號通路從而抑制前列腺癌細胞的生長［30］.通過轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息學(xué)分析以及初步的實驗研究發(fā)現(xiàn)，INTS10能夠顯著下調(diào)細胞周期相關(guān)蛋白質(zhì)CDC25A和CDK4的表達水平，上調(diào)CDKN1A的表達水平，從而初步揭示了INTS10在HCC中發(fā)揮抑癌基因功能的機制.已知整合因子復(fù)合體可以與RNAP Ⅱ相互作用，調(diào)控核內(nèi)小 RNA（small nuclear RNA，snRNA）的加工，進而直接調(diào)控目的基因的轉(zhuǎn)錄［31］；可以調(diào)控目的基因啟動子區(qū)RNAP Ⅱ的暫停或釋放，進而直接調(diào)控其轉(zhuǎn)錄［32］；也可以通過與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，作為轉(zhuǎn)錄輔因子間接參與目的基因的轉(zhuǎn)錄［33］.然而，INTS10對周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄方式尚需深入研究.

未來將進一步研究INTS10在HCC發(fā)生發(fā)展中詳細的功能和分子機制，為肝癌的臨床診治提供科學(xué)依據(jù).

參 考 文 獻：

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（責(zé)任編輯：趙藏賞）

收稿日期：2023-05-11;修回日期：2023-06-15

基金項目：

國家自然科學(xué)基金青年基金資助項目（ 8190061543）

第一作者：王雪婷（1998—），女，河北大學(xué)碩士研究生，主要從事遺傳學(xué)和整合組學(xué)研究.E-mail：1379402926@qq.com

通信作者：周鋼橋（1972—），男，軍事醫(yī)學(xué)研究院研究員，主要從事遺傳學(xué)和整合組學(xué)研究.E-mail：zhougq114@126.com