馬梨形蟲病的診斷及防控措施

程國華

摘要：馬梨形蟲病是一種由駑巴貝斯蟲或泰勒蟲引起的馬屬動物（馬、驢、騾和斑馬）的一種血液原蟲病。呈季節(jié)性流行且尚無特效藥物，發(fā)病率高，嚴重威脅我國馬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。因此，本文從馬梨形蟲病的臨床癥狀、流行病學特征及流行規(guī)律、診斷方法展開敘述，提出相關(guān)的防控措施，以期為我國馬梨形蟲病的診斷、凈化和防控提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：馬梨形蟲病；流行病學；診斷方法；防控

馬梨形蟲病是由巴貝斯蟲屬的駑巴貝斯蟲（Theileria equi）或泰勒蟲屬的泰勒蟲（Babesia caballi）感染引起馬屬動物（馬、驢、騾和斑馬）的一種蜱傳血液原蟲病[1]。呈明顯的季節(jié)性流行且尚無特效藥，發(fā)病率高，若不及時治療，極易導致死亡，造成嚴重的經(jīng)濟損失[2]。受感染動物可長期攜帶蟲體成為傳播媒介蜱的感染源，通過叮咬感染或血液污染的器具傳播從而重新引起發(fā)病[3]。駑巴貝斯蟲和泰勒蟲都是引發(fā)馬梨形蟲病的病原體，雖兩者有所不同，但感染后均可引起貧血、發(fā)熱、食欲不振、水腫、黃疸、肝脾腫大，特殊情況下可引發(fā)死亡，嚴重威脅我國馬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 臨床癥狀

馬梨形蟲病的潛伏期很長，一般為7～19 d。按照發(fā)病程度分為特急性、急性、亞急性和慢性四種形式。其中特急性極為罕見，發(fā)現(xiàn)時一般處于垂死或死亡狀態(tài)。急性較為常見，以40 ℃以上的高熱，食欲不振，精神沉郁，呼吸頻率和脈搏數(shù)增加，黏膜充血，糞球比平時小。急性癥發(fā)病期短，發(fā)現(xiàn)及時并加強護理，采取相關(guān)治療措施，病情會有所好轉(zhuǎn)，但恢復時間長[4]。亞急性臨診癥狀與急性相似，感染馬匹體重下降，間歇性發(fā)熱，黏膜從淡粉色到粉色，或淡黃色到深黃色不等，表面可見斑點和/或瘀斑，腸蠕動減緩，可能出現(xiàn)輕度疝痛癥狀，有時發(fā)生四肢末梢輕度水腫。慢性病例通常無特異性的臨診癥狀，如輕度食欲減退、精神狀態(tài)不良和體重下降等。直腸檢查常發(fā)現(xiàn)脾臟腫大。

2 流行病學特征及流行規(guī)律

馬梨形蟲病已形成“馬梨形蟲-蜱-馬”流行傳播形式。只有從消滅傳染源（馬梨形蟲病例）源頭入手，進而傳播途徑消殺（滅蜱），提高易感動物（馬）自身抵抗力是有效防控馬梨形蟲發(fā)生的關(guān)鍵。病原體主要寄生于單核細胞和紅細胞內(nèi)，目前已確認革蜱屬、扇頭蜱屬和璃眼蜱屬中約14種可作為馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲的傳播媒介，其中8種蜱能經(jīng)卵傳播駑巴貝斯蟲[5]，并致動物感染。感染后的動物可長期攜帶這些血液原蟲，并成為傳播媒介蜱的感染源。在沒有臨診癥狀的駱駝和犬體內(nèi)也檢測到其中一些蟲體的DNA片段[6]。非馬科動物在本病流行病學中的作用尚不清楚。

馬梨形蟲病的產(chǎn)生主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，具有一定的區(qū)域性和季節(jié)性，多見于春秋季蜱蟲活動頻繁時期[7]。澳大利亞部分溫帶地區(qū)也有相關(guān)疾病報道，但未形成感染區(qū)。我國多個北方地區(qū)都曾有馬梨形蟲病的發(fā)生。我國新疆地區(qū)每年3—9月蜱蟲活動時期多發(fā)[8]。媒介蜱蟲是導致馬梨形蟲病多發(fā)的關(guān)鍵因素，蜱蟲可通過叮咬將病原蟲從一匹馬向另外一匹馬傳播，從而導致大面積流行。

3 診斷方法

目前，在馬梨形蟲病的病原檢測或血清學檢測中，檢測結(jié)果陰性并不一定意味著動物沒有感染。若蟲體寄生/潛伏于持續(xù)感染動物脾臟、骨髓等器官中是無法在循環(huán)系統(tǒng)中檢測到蟲體或其遺傳物質(zhì)。在感染早期抗體滴度未到一定水平時也會存在假陰性情況，而PCR檢測可能會出現(xiàn)陽性[3]。因此，PCR和血清學方法是確定動物是否感染的關(guān)鍵。一般出現(xiàn)臨床癥狀的病例也可通過顯微鏡檢查和PCR對臨診病例進行確診。

3.1 病原學檢測方法

1）顯微鏡檢查?？赏ㄟ^末梢血液抹片染色證明是否存在蟲體來確認感染馬。疾病急性期，可通過血涂片或器官抹片收集蟲體。一般可采用吉姆薩染色，然而駑巴貝斯蟲病例蟲血癥較低的情況下，檢測難度較大。此時，有經(jīng)驗的技術(shù)人員有時也可以通過改變抹片厚度來檢測低蟲血癥樣本。由于馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲可混合感染，準確鑒別蟲種便顯得尤為重要。但在實際工作中，通過血涂片檢查帶蟲狀態(tài)下的馬梨形蟲不僅難度大，準確率低，蟲體鑒別難度高，且對操作技術(shù)人員要求較高，不適用于大規(guī)模樣本檢測。因此目前臨床中已經(jīng)較少使用。

2）體外培養(yǎng)。體外培養(yǎng)技術(shù)只是作為替代方法用來確定梨形蟲帶蟲動物。相關(guān)研究從補體結(jié)合試驗（CFT）檢測陰性的2匹馬的血液中成功培養(yǎng)出駑巴貝斯蟲。同樣，也從不表現(xiàn)任何蟲血癥的馬的血液中也成功培養(yǎng)出馬泰勒蟲，但體外培養(yǎng)僅局限于少量確診。因此該方法已經(jīng)逐步被其他方法取代。

3）PCR。PCR方法已經(jīng)廣泛應用于各種動物疫病的鑒別診斷。在相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)PCR方法對病原體檢測可以鑒別發(fā)病和帶蟲的動物，且敏感性是ELISA等試驗無法比擬的，而且特異性較高，可準確地進行梨形蟲的區(qū)分，因而逐步成了研究熱點[9]。目前PCR方法主要是以EMA-1基因和18 s核糖體RNA，但在針對某一分離株設(shè)計的分子檢測方法檢測其他蟲株時，由于馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲的基因序列具有多樣性，敏感性會有所降低。

3.2 血清學檢測

血抹片染色鏡檢技術(shù)作為常規(guī)診斷方法不僅難度大，也無法實施大規(guī)模操作。因此，血清學檢測被推薦為首選診斷方法。目前，已有多種血清學技術(shù)用于梨形蟲病的診斷，如補體結(jié)合試驗、間接熒光抗體試驗（IFAT）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）[3]。

1）CFT。CFT是應用于馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲鑒別和診斷比較早的方法，分為常量法和微量法。由于其具有良好的敏感性和特異性，曾受一些國家廣泛使用，但目前已不再作為馬匹進出口推薦的檢驗檢疫方法，是由于CFT僅對早期（急性）感染具有較好的特異性和敏感性，但不能檢測出所有感染期馬匹，尤其是受到過治療或有抗補體反應的動物。因此，C-ELISA和IFAT已充分替代CFT成為最適合國家貿(mào)易及比賽的檢驗檢疫方法。

2）IFAT。IFAT已成功應用于馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲鑒別和診斷，是將待檢樣品從1：80稀釋至1：1 280再加入熒光素標記的馬抗兔IgG，經(jīng)孵育和洗滌，通過熒光顯微鏡觀察蟲體[9]。對強陽性比較敏感，但區(qū)分弱陽性和陰性反應則需要豐富經(jīng)驗判讀。因此，目前IFA試驗仍可作為CFT的輔助試驗，而不作為國際貿(mào)易指定檢驗檢疫方法。

3）ELISA。ELISA因具有快速、敏感和特異的優(yōu)勢而備受國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。多項研究表明ELISA方法能清楚區(qū)分實驗感染馬泰勒蟲、馬駑巴貝斯蟲及健康馬血清，在感染的急性期和潛伏期（一定時期內(nèi)）在感染馬體內(nèi)檢測到特異性抗體[10-12]。目前，抗原制備和檢測方法的詳細方法已經(jīng)被美國農(nóng)業(yè)部（USDA）國家獸醫(yī)服務(wù)實驗室發(fā)布（2005）?，F(xiàn)已有同一種抗原和克隆抗體的商業(yè)化試劑盒使用。

以上診斷方法多為臨床已在廣泛使用的方法，但由于其本身敏感性和特異性的不同，使用場景和時期也會有所不同。此外，還有免疫膠體金技術(shù)、免疫色析法等抗體檢測方法和DNA探針、基于SYBR Green染料的實時熒光PCR等抗原檢測方法均為目前的研究熱點，雖未完全得到國際貿(mào)易的官方認可，但也各有優(yōu)缺，因此，選擇方法時可根據(jù)具體情況選擇具體的單一方法檢測，也可多種方法組合使用，進一步降低假陰性和假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，提高檢測的敏感性和特異性。

4 防控措施

馬梨形蟲病多發(fā)于熱帶和亞熱帶地區(qū)，部分地區(qū)已形成“馬梨形蟲—蜱蟲—馬匹”有害循環(huán)，嚴重影響世界養(yǎng)馬業(yè)的健康發(fā)展。因此，制定馬梨形蟲病的綜合防控措施顯得尤為重要。由于馬梨形蟲在馬匹中多為隱性感染，單一的檢測方法易造成假陰性的結(jié)果，可通過多種方法聯(lián)合檢測有效提高假陰性（隱性感染）的檢出率[13]，從而減少傳染源的存在。此外，蜱蟲作為馬梨形蟲病重要的傳播媒介，了解蜱蟲生活習性可提前采取措施，阻斷馬梨形蟲的世代周期消滅傳播途徑來降低馬梨形蟲在家畜群體中的流行率。

目前馬梨形蟲尚無特效藥物進行治療，可根據(jù)馬梨形蟲在當?shù)氐木唧w流行情況選擇具體措施進行防控治療。首先，在流行地區(qū)可通過治療以降低死亡率和減輕臨床癥狀作為目標，待其恢復至陰性，提高免疫力，及時淘汰，從而實現(xiàn)降低馬梨形蟲病再次暴發(fā)風險。其次由于不同診斷方法具有敏感性和特異性的不同，可采取多種診斷方法相結(jié)合從而實現(xiàn)在馬梨形蟲病的非流行地區(qū)徹底消滅病原體（馬梨形蟲?。?。在采取以上措施過程中，對圈舍及其周邊范圍內(nèi)在蜱蟲多發(fā)季節(jié)進行充分的環(huán)境消殺，才能充分降低馬梨形蟲的傳播和流行。

參考文獻：

[1] CHEN KW， HU Z， LI JK， et al. Prevalence and molecular epidemiology of equine piroplasmosis in China： a neglected tick-borne disease [J]. Sci China Life Sci， 2022， 65（2）： 445- 447.

[2] 馬天文，王婕然，呂燕，等.伊犁馬梨形蟲病內(nèi)臟器官病理組織學觀察[J].畜牧獸醫(yī)科學（電子版）， 2020 （11）：9-10.

[3] 世界動物衛(wèi)生組織.OIE陸生動物診斷試驗與疫苗手冊[M].8版.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局組譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 2021.

[4] 馮桂萍，孫斌，劉曉芳.馬駑巴貝斯焦蟲病的診斷、鑒別和防治措施[J].現(xiàn)代畜牧科技， 2016（12）：127.

[5] De WDT. Equine piroplasmosis： a review[J]. Br Vet J.1992， 148： 6-14.

[6] ONYICHE TE， SUGANUMA K， IGARASHI I， et al. A review on equine piroplasmosis： epidemiology， vector ecology， risk factors， host immunity， diagnosis and control[J].International Journal of Environmental Research and Public Health， 2019， 16（10）：1736.

[7] 陳克偉，胡哲，郭奎，等.馬泰勒蟲和弩巴貝斯蟲雙重熒光定量PCR檢測方法的建立[J].中國預防獸醫(yī)學報， 2021， 43（12）：1282-1283.

[8] 王莉君. 新疆馬梨形蟲地方蟲株診斷用抗原EMA和Bc48的篩選與應用[D]. 新疆農(nóng)業(yè)大學，2019.

[9] 劉譽，吳錦順，潘娟.馬巴貝斯蟲病的檢測技術(shù)研究進展[J].口岸衛(wèi)生控制， 2023， 28（5）：38-43.

[10] KNOWLES D P， PERRYMAN L E， KAPPMEYER L S， et al. Detection of equine antibody to Babesia equi merozoite proteins by a monoclonal antibody-based competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay.[J].Journal of Clinical Microbiology， 1991， 29（9）：2056-2058.

[11] HUANG X， XUAN X， YOKOYAMA N， et al. High-level expression and purification of a truncated merozoite antigen-2 of babesia equi in Escherichia coli and its potential for immunodiagnosis[J]. Journal of Clinical Microbiology， 2003， 41（3）：1147-1151.

[12] HIRATA H， XUAN X， YOKOYAMA N， et al. Identification of a specific antigenic region of the P82 protein of babesia equi and its potential use in serodiagnosis[J].Journal of Clinical Microbiology， 2003， 41（2）：547-551.

[13] 趙少偉.吉林省馬主要寄生蟲病分子流行病學調(diào)查[D].延邊大學，2020.