民族藥文王一支筆不同藥用部位止血作用的篩選研究

殷莉 程剛 瞿濤 顧秀峰 陳桂林 吳云毅

【摘 要】???目的： 探討文王一支筆不同藥用部位（花序、花莖、根莖）水煎液的止血作用。 方法： 將實驗動物隨機分為空白對照組，云南白藥組，文王一支筆根莖、花莖、花序三個不同部位給藥組（每個部位再分為高、低劑量組），連續(xù)給藥5d后，采用斷尾法測定小鼠出血時間，毛細管法測定小鼠凝血時間，且測定大鼠血漿復鈣時間。 結果： 與空白組比較，云南白藥組、文王一支筆花序和花莖高低劑量組出血時間、凝血時間與血漿復鈣時間均明顯縮短（ P< 0.05或 P< 0.01）；文王一支筆根莖的作用不顯著。 結論： 文王一支筆花序和花莖水煎液均有較好的止血、促凝血作用，根莖的作用次之。

【關鍵詞】 ?文王一支筆；花序；花莖；根莖；止血作用

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】 A ???【文章編號】1007-8517（2024）08-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408008

Researches on Hemostatic Effect of Different Medicinal Parts of ?Balanophora involucrata

YIN Li 1 CHENG Gang 1 QU Tao 2 GU Xiufeng 2 CHEN Guilin 3 WU Yunyi ?1*

1. Shiyan Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Shiyan 442001，China;

2. Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China;

3. Wuhan Botanical Garden，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430074，China

Abstract：

Objective ?To explore the hemostatic effect of aqueous extract of different medicinal parts （inflorescence， scape， and rhizome） from ?Balanophora involucrata . ?Methods ?The experimental animals were randomly divided into blank control group， Yunnan Baiyao group， ?Balanophora involucrata s inflorescence， scape， and rhizome groups （each part was divided into high and low dose groups）. After continuous administration for 5 days， the hemostasis time （BT） and clotting time （CT） of mice were measured by tail-cutting method and capillary tube method. The plasma ?recalcification time （PRT） were examined on Wistar rats. ?Results ?Compared with the blank group， Yunnan Baiyao group， aqueous extracts of ?Balanophora involucrata s inflorescence and scape groups significantly shortened the BT， CT and PRT （ P＜ 0.05 or ?P＜ 0.01），while the rhizome of ?Balanophora involucrata ?exhibited no obvious hemostatic effect. ?Conclusion ?Among different medicinal parts of ?Balanophora involucrata ， inflorescence and scape showed the strong promotion on hemostasis and coagulation， while the effect of rhizome was weaker.

Key words：

Balanophora involucrata ；Inflorescence；Scape；Rhizome；Hemostasis

文王一支筆來源于蛇菰科蛇菰屬草本寄生植物筒鞘蛇菰（ Balanophora involucrata ?Hook.f.），又稱借母懷胎、鹿仙草、雞心七、觀音蓮等，是土家族“四大名藥”之一。其在我國主要分布于湖北、湖南、四川、云南、廣西等省區(qū)，為鄂西北地區(qū)民間習用藥材，已收載于《湖北省中藥材質量標準》 ?［1］ 中。文王一支筆藥用歷史悠久，據《中國土家族醫(yī)藥學》 ?［2］ 記載，其氣微、味微苦，具有清熱解毒、涼血止血、活血調經、固腎澀精等功效。《中華本草》 ?［3］ 記載其全株可入藥，主治脘腹疼痛、肺熱咳嗽、咯血、外傷出血、跌打損傷、月經不調、血崩、疲勞出血、痔瘡腫痛等癥。在民間常用于治療各類出血癥，功效奇佳 ?［4］ 。文王一支筆對生長環(huán)境要求高，生長季節(jié)性強，故野生資源稀少、產量低，臨床應用受到限制，多為民間用藥 ?［5-6］ ?，F代研究 ?［7-9］ 表明，其主要含有黃酮類、苯丙素類、三萜類和甾體類等活性成分，具有較好的止血、鎮(zhèn)痛抗炎、醒酒保肝、抗疲勞、抗氧化等藥理作用。

歷代本草記載，同一藥物的不同藥用部位“偏勝”不同，入藥也存在差異，中藥的“一體多用”現象普遍存在 ?［10］ ?，F代研究 ?［11-12］ 也發(fā)現，中藥不同入藥部位的化學成分及藥理作用往往不同，藥用價值并不完全相同。也即，不同的藥用部位的臨床功用可能存在差異，比如麻黃（草質莖）可解表發(fā)汗，而麻黃根固表止汗，在臨床實際應用中要謹慎選擇 ?［13-14］ 。文王一支筆為多年生寄生肉質草本，根莖、花莖、花序三個不同部位的組織特征差異顯著 ?［1］ 。目前關于文王一支筆的現代研究多集中在全草，針對其不同藥用部位尚缺乏全面系統(tǒng)的分類研究和比對，以全草入藥的合理性，有待進一步驗證。因此，本研究擬從止血作用方面探討文王一支筆根莖、花莖和花序3個不同部位的功效差異，以期為文王一支筆藥材不同藥用部位的精準應用奠定實驗基礎，為其資源的綜合利用開發(fā)提供科學依據。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 KM小鼠 （SPF級）， 體重18～ 22 g ，雌雄各半，動物質量合格證號：42000600045465； Wistar大鼠（SPF級），體重220 g，雌雄各半，動物質量合格證號：42000600045589。所有動物均由湖北省實驗動物研究中心提供，許可證編號：SYXK（鄂）2017-0065。動物在室溫為（24±2）℃、相對濕度45％～75％的鼠房內適應性喂養(yǎng)3 d后開始實驗，期間自由飲水與攝食。

1.2 藥品與試劑 文王一支筆藥材采自湖北房縣（批號：2020102），經湖北中醫(yī)藥大學藥學院楊紅兵教授鑒定為蛇菰科蛇菰屬植物筒鞘蛇菰（ Balanophora involucrata ?Hook.f.）的干燥全草；云南白藥粉末（云南白藥集團股份有限公司，國藥準字Z53020798，批號：ZCB1908）；3.8%枸櫞酸鈉、氯化鈣、純化水。

1.3 主要儀器 BSA224S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；Legend Micro17R高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技有限公司）；HH-S21-8-S恒溫水浴鍋（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；RE-52AA旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；98-1-B型電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）；FW177中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；超純水機（Merck Millipore，型號Elix Essential 5 UV Kit CN）；真空采血管；小鼠固定器；濾紙；秒表等。

2 方法

2.1 文王一支筆不同部位水提物的制備 將文王一支筆全草分離為根莖、花莖、花序三部分，所有藥材一次性按部位分揀、干燥備用。取文王一支筆根莖、花莖、花序分別粉碎過篩，再各稱取200 g，依次加入10倍量、8倍量和8倍量的水回流提取2 h、1 h和1 h，合并3次濾液，減壓濃縮，冷凍干燥成粉并存放于-80 ℃冰箱備用。

2.2 剪尾法測定小鼠出血時間（bleeding time， BT） ?［15-17］ ?取雌雄各半KM小鼠64只，隨機分成8組，每組8只，分別為：空白對照組，陽性對照組（云南白藥0.33 g·kg ?-1 ），文王一支筆根莖、花莖、花序水煎液給藥組（每個藥用部位再分為高、低劑量組）。將文王一支筆根莖、花莖、花序水提物分別加入0.5% CMC-Na混勻，根據生藥量折算各部位高劑量組為10 g·kg ?-1 ，低劑量組為5 g·kg ?-1 ，各劑量組按0.1 mL·10 g ?-1 每天灌胃1 次，連續(xù)給藥5 d，空白對照組灌胃等量雙蒸水。末次灌胃 ?1 h ?后，固定小鼠，用手術剪刀將小鼠尾尖自1/3處橫斷，當斷尾血液自行流出時開始計時，每隔30 s用濾紙吸取血滴1次，直至濾紙吸時無血跡為止，從開始出血到出血自然停止記為小鼠出血時間，并計算縮短率 ?［18］ 。

2.3 毛細管法測定小鼠凝血時間（clotting time，CT） ?［18-19］ ?取雌雄各半KM小鼠64只，動物分組及給藥同“2.2”。于末次給藥1 h后，將小鼠固定，用毛細玻璃管（Ф1 mm，長 100 mm）從小鼠眼內插入眥球后靜脈叢取血，至血液注滿后取出置于水平處，每隔30 s 折斷毛細玻璃管約5 mm，然后緩慢向左右拉開，并觀察折斷面是否有血凝絲，直至血凝絲出現為止，記錄所經歷時間即為凝血時間。

2.4 測定大鼠血漿復鈣時間（plasma recalcification time，PRT） 取Wistar大鼠48只，雌雄各半，隨機分成8組，每組6只，大鼠給藥容積為5 mL·kg ?-1 ，具體分組及給藥同“2.2”。于末次灌胃1 h后，頸動脈插管取血，立即加入放有3.8% 枸櫞酸鈉溶液的離心管內抗凝（血液與3.8%枸櫞酸鈉之比為9∶[KG-*3/5]1），以3000 rpm離心10 min，分離血漿備用。取試管，分別加入混合血漿0.1 mL，再放入 37 ℃水浴中溫浴 1 min，然后各加入0.28%的氯化鈣溶液0.1 mL，混合均勻后再放入37 ℃水浴中，同時開始計時。在30 s后每隔10 s 緩慢地傾斜試管1次，記錄下自加 Ca ?2+ 至纖維蛋白形成、液面不動所需的時間，即為該組大鼠 PRT ?［20］ 。

2.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學軟件進行處理和分析，檢驗結果采用“均數加減標準差 （x ±s） ”表示，組間比較采用單因素方差分析，以 P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。組間均數比較采用獨立樣本 ?t ?檢驗。

3 結果

3.1 對小鼠BT的影響 小鼠灌胃給藥5 d后，與空白對照組比較，文王一支筆花序和花莖高劑量組、低劑量組均可明顯縮短小鼠的出血時間（ P＜ 0.05或 ?P＜ 0.01），BT縮短率最大可達27.69%；而文王一支筆根莖對小鼠出血時間的縮短作用不明顯，差異無統(tǒng)計學意義（ P＞ 0.05）；與陽性對照組比較，文王一支筆花序和花莖高低劑量組 作用與云南白藥相當，均無顯著性差異（ P＞ 0.05），而根莖給藥組小鼠出血時間明顯較長，兩者比較差異極顯著，具有統(tǒng)計學意義（ P＜ 0.01）。詳見表1。

3.2 對小鼠CT的影響 與空白對照組比較，文王一支筆花序和花莖高劑量組、低劑量組均可明顯縮短小鼠的凝血時間（ P＜ 0.05或 ?P＜ 0.01）；而文王一支筆根莖對小鼠凝血時間的縮短作用不明顯（ P＞ 0.05）；與陽性對照組比較，文王一支筆花序和花莖的作用稍弱于云南白藥，但差異不具有顯著性（ P＞ 0.05），而根莖給藥組小鼠凝血時間較長，差異極顯著（ P＜ 0.01）。詳見表2。

3.3 對大鼠PRT的影響 與空白對照組比較，文王一支筆花序和花莖高劑量組、低劑量組均可極顯著縮短大鼠的血漿復鈣時間（ P＜ 0.01）；而文王一支筆根莖對大鼠血漿復鈣時間的影響不明顯，差異無統(tǒng)計學意義（ P＞ 0.05）；與陽性對照組比較，文王一支筆花序和花莖的影響作用與云南白藥接近，花莖高劑量組甚至略優(yōu)于云南白藥組，差異無顯著性（ P＞ 0.05），而根莖給藥組大鼠的血漿復鈣時間明顯較長，具有極顯著性差異（ P＜ 0.01）。詳見表3。

4 討論

文王一支筆是土家族珍稀特產藥材，民間應用歷史悠久，其涼血止血之效在臨床上廣泛用于各種出血癥 ?［17］ ，但其止血方面的現代藥學研究仍較少。小鼠斷尾法和毛細管法常用于藥物止血作用研究 ?［19］ ，出血時間（BT）和凝血時間（CT）是檢測止血藥物的常用篩選指標 ?［17，21］ ：BT反映血小板的數量、質量以及毛細血管的止血功能，CT的長短主要與各種凝血因子含量和功能有關，血漿復鈣時間（PRT）能反映內源性凝血系統(tǒng)的活性。本實驗研究發(fā)現：文王一支筆花序和花莖水煎液高、低劑量連續(xù)給藥5 d均可顯著縮短小鼠止血時間、凝血時間和大鼠血漿復鈣時間，進一步佐證了文王一支筆的止血功效。中藥止血作用的機制十分復雜，是多種成分的協(xié)同作用，具有多途徑多環(huán)節(jié)的特點，文王一支筆止血作用的具體機制還需要進一步深入研究。

同一藥物的不同藥用部位可能性效有異，歷代本草已有深入認識 ?［13］ ：《神農本草經百種錄》言“凡藥之用……各以其所偏勝而即資之療疾，故能補偏救弊，調和臟腑”；《本草蒙筌》稱“根梢各治，尤勿混淆……上焦病者用根，中焦病者身，下焦病者用梢。蓋根升梢降，中守不移故也”。隨著現代中藥研究的不斷深入，同一植物的不同藥用部位，由于性狀不同或主要成分積累分布的差異，會導致不同藥用部位的藥理藥效有一定差異 ?［10，22］ 。因此，為了更好地利用文王一支筆藥材的藥用價值，為其不同藥用部位的精準應用奠定基礎，本實驗對文王一支筆不同藥用部位（花序、花莖和根莖）止血作用的差異性進行了研究。結果表明，文王一支筆花序和花莖的止血作用明顯優(yōu)于根莖，而花序與花莖的效果相近，也即文王一支筆不同部位的止血作用是有差異的。

目前文王一支筆止血機制尚不明確，可能與其涼血止血功效有關，有研究 ?［4］ 推斷，其止血作用的有效成分可能與黃酮類化合物有關，但尚無關于其不同藥用部位物質基礎和含量差異的報道。后續(xù)工作中我們將對文王一支筆不同藥用部位的化學成分進行分離鑒定，并對其結構和藥理活性做進一步的構效關系分析，以期為文王一支筆植物資源的合理開發(fā)利用提供更充分的科學依據和理論參考。

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（收稿日期：2023-07-17 編輯：劉 斌）