雞傳染性貧血（CIA）活疫苗免疫肛拭子排毒規(guī)律

李玉燕 張秀明 彭曉艷 曲秀娟 來慶梅 郭龍宗 張鵬

摘 要：為調(diào)查雞傳染性貧血（CIA）活疫苗免疫后的排毒規(guī)律，本研究在隔離器中免疫CIAV活疫苗，免疫后每隔一周采集肛拭子，持續(xù)采樣至第7周，檢測(cè)CIAV疫苗的排毒陽性率。結(jié)果顯示：CIAV疫苗免疫后第10天排毒率為50%，免疫后第2周排毒率達(dá)到高峰為80%，免疫后第6周排毒率下降至27.27%，第7周不排毒，本研究為CIAV感染的監(jiān)測(cè)提供了數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：CIAV疫苗；肛拭子；排毒

中圖分類號(hào)：S858.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1673-1085（2024）05-0025-03

基金項(xiàng)目：山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2021CXGC010805）

第一作者：李玉燕（1982—），女，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)禽病監(jiān)測(cè)防控研究，E-mail：lyuyan918@163.com；

并列第一作者：張秀明（1981—），男，漢族，碩士，獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)飼養(yǎng)及蛋雞育種工作，E-mail：xmz1207@163.com

*通信作者：郭龍宗（1981—），男，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)實(shí)驗(yàn)室管理和主要疫病防控凈化，E-mail：guolongzong1981@163.com

*并列通信作者：張鵬（1980—），女，本科，獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)禽病監(jiān)測(cè)防控研究，E-mail：zhangpeng80815@163.com

雞傳染性貧血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV），2015年劃分于圓環(huán)病毒科環(huán)狀病毒屬，不含囊膜，基因組為單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA，基因組全長(zhǎng)2 298 bp或2 319 bp，有3個(gè)開放閱讀框，編碼3種病毒蛋白（VPl、VP2和VP3），VP1是主要的結(jié)構(gòu)蛋白，是變異率最大的蛋白；與VP2共同作用誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體；VP3又稱為凋亡素，會(huì)誘導(dǎo)雞胸腺細(xì)胞和原始造血細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致嚴(yán)重貧血、免疫抑制等癥狀[1-2] ，臨床常引起2～4周齡雛雞或育成雞群發(fā)生傳染性貧血綜合征（CIA）。CIAV在雞群中可水平傳播和垂直傳播，目前該病在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中感染壓力較大，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前尚無治療CIAV的有效藥物，臨床推薦以活苗免疫預(yù)防為主，配合良好的生物安全等綜合防控措施。本試驗(yàn)對(duì)隔離器中飼養(yǎng)雞群CIAV活苗免疫后的排毒規(guī)律進(jìn)行研究，可為臨床CIAV的活苗免疫防控提供參考依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

1.1.1? 試驗(yàn)對(duì)象和免疫程序? ?本試驗(yàn)所選試驗(yàn)雞來自膠東某養(yǎng)殖集團(tuán)祖代哈伯德肉種雞場(chǎng)5#棟舍，該雞舍存欄雞數(shù)為9800只，選取30只放入隔離器中進(jìn)行試驗(yàn)。

免疫程序：該雞群于8周齡免疫CIAV活苗，免疫廠家為MSD，批號(hào)為02440066，免疫途徑：刺種。

1.1.2? 試驗(yàn)試劑? ?2×Taq PCR MasterMix購(gòu)自諾唯贊，生產(chǎn)批號(hào)為7E321B9；病毒DNA/RNA磁珠法機(jī)器提取試劑盒購(gòu)自青島英賽特生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為2022305010；GelStain、50×TAE緩沖液、瓊脂糖購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司。

1.1.3? 試驗(yàn)儀器? 全自動(dòng)核酸提取純化儀（青島英賽特生物科技有限公司）、普通PCR基因擴(kuò)增儀和凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)伯樂公司）；SPF雞隔離器（蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司）。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? ?樣品采集? 在CIAV疫苗免疫后1周、10日齡、2、3、4、5、6、7周采集肛拭子，采集30份肛拭子檢測(cè)CIAV病原。肛拭子采集使用一次性無菌植絨棉簽在雞只肛門內(nèi)旋轉(zhuǎn)3圈，蘸取分泌物后放入1.5 mL無菌離心管中，剪去多余的部分、蓋緊離心管的蓋子并做好標(biāo)記、冷藏保存。

1.2.2? 樣品前處理? 肛拭子樣品采用“3合一”混合樣品檢測(cè)方法，每個(gè)含肛拭子的離心管中加入450 L PBS，浸泡1 h左右后再進(jìn)行機(jī)器提取加樣。

1.2.3? CIAV-PCR檢測(cè)? 根據(jù)任志浩發(fā)表的文獻(xiàn)引物[2]，由上海生工生物有限公司合成，上游序列為：GCAGGGGCAAGTAATTTCAA，下游序列為：GCCACACAGCGATAGAGTGA，擴(kuò)增目的片段大小為164bp；PCR反應(yīng)程序：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s， 72 ℃ 10 min，35個(gè)循環(huán)。

2? 結(jié)果

2.1? CIAV病原檢測(cè)結(jié)果

部分肛拭子樣品PCR擴(kuò)增的基因片段大小為164 bp，與預(yù)期的目的片段大小一致，說明CIAV檢測(cè)結(jié)果呈陽性。結(jié)果見圖1所示。

2.2? CIAV疫苗免疫后各周齡肛拭子排毒陽性率

CIAV疫苗免疫后第10天肛拭子開始排毒，陽性率為50%；免疫后2周排毒率最高，肛拭子CIAV陽性率達(dá)80%；免疫后3周開始下降，至第5周、第6周排毒率下降，肛拭子CIAV陽性率分別為10%和20%；免疫后第7周不再排毒，結(jié)果見表1。

3? 討論

CIAV既可以水平傳播，也可垂直傳播；種雞在產(chǎn)蛋期感染后幾乎無臨床癥狀，受精率和孵化率也不會(huì)受影響；但若產(chǎn)蛋期感染，則可垂直傳播到種蛋，導(dǎo)致后代雛雞感染病毒[3]。CIAV感染會(huì)引起雛雞全身淋巴組織萎縮，尤其是骨髓造血組織和胸腺等淋巴組織，進(jìn)而導(dǎo)致雛雞發(fā)生免疫抑制[4]，同時(shí)會(huì)引起繼發(fā)感染，導(dǎo)致疫苗免疫失敗。目前CIAV 防控主要以疫苗預(yù)防為主，通過疫苗接種使種雞產(chǎn)生抗體，從而給子代提供高水平的母源抗體[5]。CIAV的疫苗主要為弱毒活疫苗，為了與野毒感染區(qū)分，需要摸清活疫苗免疫后的排毒規(guī)律。本研究結(jié)果顯示：CIAV活疫苗免疫7周后不再排毒，臨床規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)大群可采集肛拭子評(píng)估CIAV的野毒感染情況，免疫后超過7周采集的肛拭子樣品若檢出陽性，再結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)雞群表現(xiàn)，應(yīng)判定為野毒感染群。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 宋麗霞，包小萌，范磊，等.雞傳染性貧血病研究進(jìn)展[J].山東畜牧獸醫(yī)，2016，37（ 12）：82-84.

[2]? 任志浩，房立春，趙鵬，等.雞傳染性貧血病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及其在疫苗污染檢測(cè)中的應(yīng)用[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，47（7）：1459-1464.

[3]? 顏靜蕊，劉珂飛.雞傳染性貧血病的診斷與防控[C]/ /第四屆京津冀一體化畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新研討會(huì)暨“瑞環(huán)杯”新思想、新方法、新觀點(diǎn)論壇論文集，2014： 211- 213.

[4]? 陳宗艷，徐大為，程安春，等. 雞傳染性貧血病毒引發(fā)的免疫抑制[J]. 養(yǎng)禽與禽病防治，2006（4）：2-5.

[5]? 藺文成，張新珩，謝青梅，等.4株雞傳染性貧血病毒的分離鑒定及其遺傳進(jìn)化分析[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，38（9）：695-699.

The Detoxification Dattern of Anal Swabs Immunized with Chicken Infectious Anemia （CIAV） Vaccine

Li Yuyan，Zhang Xiuming ，Peng Xiaoyan ，Qu Xiujuan，Lai Qingmei，Guo Longzong， Zhang Peng

（Shandong Yisheng Animal and Poultry Breeding Company，Yantai? 265508，China）

Abstract：? In order to investigate the detoxification pattern after immunization with the chicken infectious anemia （CIAV） live vaccine， this study immunized the CIAV live vaccine in a isolator. After immunization， anal swabs were collected continuously every week， and continued sampling until the 7th week to test the positive detoxification rate of the CIAV vaccine. The results showed that the detoxification rate of CIAV vaccine was 50% on the 10th day after immunization， reaching a peak of 80% in the 2nd week after immunization. The detoxification rate decreased to 27.27% in the 6th week after immunization， and did not detoxify in the 7th week. This study provides data support for monitoring CIAV infection.

Keywords：? CIAV vaccine; Anal swab; Detoxification