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    全自動(dòng)免疫分析儀在檢測SLE 相關(guān)自身抗體中的應(yīng)用價(jià)值

    2024-06-02 16:40:38羅春華郝杏飛柳邦源龔峰戴峻英周昕
    中國設(shè)備工程 2024年10期
    關(guān)鍵詞:抗核方法學(xué)全自動(dòng)

    羅春華,郝杏飛,柳邦源,龔峰,戴峻英,周昕

    (1.宜昌市中心人民醫(yī)院,湖北 宜昌 443000;2.珠海麗珠試劑股份有限公司,廣東 珠海 519000)

    1 背景

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種系統(tǒng)性自身免疫病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、臨床表現(xiàn)多樣。SLE 的主要臨床特征包括:血清中出現(xiàn)以抗核抗體(ANA)為代表的多種自身抗體及多器官和系統(tǒng)受累。與SLE 有關(guān)的ANA 自身抗體主要為dsDNA、Sm、U1-snRNP、Ro-52、SSA、SSB、PCNA、核小體、組蛋白、核糖體P 蛋白等。因此,自身抗體檢測為SLE 的診斷、鑒別診斷以及規(guī)范治療提供了重要的依據(jù)。

    現(xiàn)階段臨床檢測SLE 自身抗體大多采用“間接免疫熒光(IIF)篩查+免疫印跡/多重免疫確認(rèn)”的方式,個(gè)別指標(biāo)的量值有顯著臨床意義時(shí),還會(huì)采用ELISA 或CLIA 等方法進(jìn)行定量檢測,例如,dsDNA 對SLE 疾病活動(dòng)度的監(jiān)測。

    麗珠磁條碼免疫熒光發(fā)光法(DLCM)是一種新興的多重檢測技術(shù),具有高度敏感性和特異性,同時(shí)具備自動(dòng)化、快速和高通量的特點(diǎn),且可提供數(shù)值化結(jié)果。麗珠全自動(dòng)免疫分析儀可以同時(shí)滿足醫(yī)院開展ANA譜(DLCM)+單指標(biāo)定量意義(CLIA)檢測,不需要額外配置2 臺不同方法學(xué)儀器(多重儀器+CLIA 儀器),為醫(yī)院節(jié)省實(shí)驗(yàn)室空間和成本。多重和CLIA 方法學(xué)是目前在ANA 檢測領(lǐng)域具有競爭優(yōu)勢的方法學(xué),因?yàn)槎嘀胤椒▽W(xué)是印跡法的技術(shù)迭代,CLIA 是ELISA 的技術(shù)迭代。

    本研究主要圍繞全自動(dòng)免疫分析儀在檢測SLE 相關(guān)自身抗體中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行開展,旨在為制定更好的SLE 診斷和相關(guān)抗體檢測策略提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

    2 資料與方法

    抗SS-A/Ro52 抗體、抗SS-B/La 抗體、抗Jo-1 抗體、抗U1-snRNP 抗體在健康人中有一定的檢出率,分別為4.0%、4.0%、2.0%、4.0%,具體見表1。

    2.1 一般資料

    本次研究選擇年限為2022 年7 月~2023 年7 月以200 例SLE 患者、22 例dsDNA 陽性且有治療記錄的SLE患者及50 例健康人為研究對象。性別統(tǒng)計(jì):男43 例、女229 例,年齡7 ~72 歲。SLE 患者具有2012 年國際狼瘡研究臨床協(xié)作組(SLICC)或2019 年EULAR/ACR 制定的SLE 分類標(biāo)準(zhǔn)中的臨床表現(xiàn)、腎臟病理和實(shí)驗(yàn)室免疫檢測結(jié)果。

    2.2 研究方法

    于患者空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血,將血樣高速離心15min 后,取上層血清。

    (1)DLCM 法檢測。抗核抗體15 項(xiàng)檢測試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,所有檢測均在配套的全自動(dòng)免疫分析儀(珠海麗珠試劑股份有限公司,型號:xx)上完成,檢測儀器為全自動(dòng),上樣方式為隨機(jī)進(jìn)樣,單個(gè)樣本檢測時(shí)限為37 min。檢測前,確保檢測儀器已校準(zhǔn)、性能驗(yàn)證合格且室內(nèi)質(zhì)控在控。

    (2)CLIA 法檢測。抗雙鏈DNA 抗體IgG 測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)由麗珠海麗珠試劑股份有限公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,所有檢測均在配套的全自動(dòng)免疫分析儀(珠海麗珠試劑股份有限公司,型號:xx)上完成,檢測儀器為全自動(dòng),上樣方式為隨機(jī)進(jìn)樣,單個(gè)樣本檢測時(shí)限為37min。檢測前,確保檢測儀器已校準(zhǔn)、性能驗(yàn)證合格且室內(nèi)質(zhì)控在控。

    2.3 觀察指標(biāo)

    (1)統(tǒng)計(jì)DLCM 檢測抗核抗體譜在200 例SLE 患者和50 例健康人中檢出率情況,進(jìn)行敏感性和特異性分析。

    (2)對于22 例抗dsDNA 抗體陽性的SLE 患者,在治療前后檢測抗dsDNA 抗體濃度變化,來監(jiān)測患者的治療反應(yīng)和疾病活動(dòng)度。

    2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    使用SPSS 26.0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以例和率表示。涉及到計(jì)數(shù)資料x2 檢驗(yàn)均以[n(%)] 表達(dá),涉及計(jì)量資料相關(guān)性分析使用Pearson 相關(guān)系數(shù)表示,P <0.05 提示檢驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    3.1 抗核抗體譜檢測結(jié)果

    SLE 組患者抗dsDNA 抗體陽性檢出率為41.5%、抗Nucleosome 抗體陽性檢出率為25.0%、抗Histone抗體陽性檢出率為32.0%、抗Sm 抗體的陽性檢出率為17.0%、抗P0 抗體的陽性檢出率為30.5%、抗U1-snRNP抗體的陽性檢出率為23.5%、抗SS-A/Ro52 抗體的陽性檢出率為47.5%、抗SS-A/Ro60 抗體的陽性檢出率為57.0%等,其他抗體陽性檢出率見表1。

    3.2 dsDNA 陽性的SLE 患者經(jīng)藥物治療前后,dsDNA CLIA 檢測結(jié)果

    22 例dsDNA 陽性的SLE 患者,在經(jīng)藥物治療前后(如圖1),均使用dsDNA CLIA 檢測,來觀察監(jiān)測藥物治療效果及疾病活動(dòng)度。22 例患者中,有11 例患者經(jīng)藥物治療后,dsDNA 滴度有明顯的下降,患者有明顯好轉(zhuǎn),表示藥物治療有效;有8 例患者經(jīng)藥物治療后,dsDNA滴度變化不明顯,表示藥物治療效果不佳,提示臨床可改變治療方式;有3 例患者經(jīng)藥物治療后,dsDNA 滴度不降反升,表示疾病處于加重期,藥物治療無效,需引起臨床高度重視。

    圖1 dsDNA 陽性SLE 患者治療前后抗體滴度變化情況

    使用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析22 例患者治療后dsDNA抗體濃度和治療前dsDNA抗體濃度之間的相關(guān)性關(guān)系(見表2)。具體分析可知:治療后dsDNA 抗體濃度和治療前dsDNA 抗體濃度之間的相關(guān)系數(shù)值為0.706,并且呈現(xiàn)出0.01 水平的顯著性,因而說明治療后dsDNA 抗體濃度和治療前dsDNA 抗體濃度之間有著顯著的正相關(guān)關(guān)系,通過檢測dsDNA 抗體濃度可以用來評估SLE 患者的病情發(fā)展進(jìn)程及藥物療效評價(jià)。

    表2 Pearson 相關(guān)系數(shù)分析

    4 討論

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡英文簡稱SLE,屬自身免疫性疾病,由過度免疫引起的細(xì)胞功能紊亂,血液出現(xiàn)多種抗體攻擊健康的身體組織。SLE 好發(fā)于育齡期女性,女性發(fā)病年齡多為15 ~40 歲,女:男約為7 ~9:1。SLE 的發(fā)病率和患病率在不同種族人群中具有一定差異,亞洲及太平洋地區(qū)SLE 的發(fā)病率約為每年2.5 ~9.9/10 萬,患病率約為3.2 ~97.5/10 萬。

    SLE 在臨床上的病癥較為復(fù)雜,早期也無特異性的表現(xiàn),因此,會(huì)出現(xiàn)誤診的可能。抗核抗體譜檢測方法是通過對患者血液中多種抗體的檢測來輔助診斷的一種方法。

    抗核抗體譜檢測方法,目前,有免疫印跡法、多重免疫法等多參數(shù)方法學(xué),以及單指標(biāo)檢測的ELISA 和CLIA。免疫印跡法進(jìn)行自身抗體的多指標(biāo)聯(lián)合檢測屬于傳統(tǒng)的檢測方法學(xué),只能提供定性的檢測結(jié)果,且檢測時(shí)間長,通量小。隨著檢測技術(shù)的更新迭代,磁條碼免疫熒光發(fā)光法,又稱多重?cái)?shù)碼液相芯片(DLCM) 技術(shù)作為新一代的檢測方法學(xué),應(yīng)用場景和免疫印跡法一致,都是多指標(biāo)篩查。DLCM 技術(shù)平臺全自動(dòng)一體化且支持隨機(jī)進(jìn)樣,從原始管上樣、檢測、判讀到數(shù)據(jù)上傳一氣呵成,從結(jié)果看,就是“一個(gè)樣本進(jìn),多個(gè)結(jié)果出”,3 小時(shí)可檢測180 個(gè)樣本。多重ANA 譜15 項(xiàng)中dsDNA 指標(biāo)可定量檢測,其他指標(biāo)則可以提供數(shù)值化結(jié)果,總之,可相當(dāng)于印跡法ANA 譜15 項(xiàng)的定性結(jié)果+CLIA/ELISA dsDNA 單指標(biāo)定量結(jié)果組合。當(dāng)然,對于dsDNA 陽性的SLE 患者,臨床會(huì)對患者進(jìn)行藥物治療,在藥物治療過程中會(huì)定期對患者進(jìn)行dsDNA 單指標(biāo)定量檢測,來監(jiān)測SLE 疾病活動(dòng)度。CLIA 定量檢測dsDNA 是目前主流選擇,且明確的單指標(biāo)檢測也更符合DRG 收費(fèi)政策。

    麗珠全自動(dòng)免疫分析儀可以開展ANA 譜(DLCM)+單指標(biāo)定量意義(CLIA)檢測,具備2 臺儀器的功能。多重和CLIA 方法學(xué)是目前在ANA 檢測領(lǐng)域具有競爭優(yōu)勢的方法學(xué),使用占比越來越高。

    本研究納入200 例SLE 患者和50 例健康人,使用麗珠DLCM 檢測抗核抗體15 項(xiàng),15 項(xiàng)抗體陽性檢出率基本與文獻(xiàn)報(bào)道一致。對于22 例有dsDNA 陽性需要治療的患者,在治療前后使用麗珠CLIA 檢測dsDNA 抗體濃度,可以很好監(jiān)測患者的疾病活動(dòng)度及藥物治療效果。

    綜上,全自動(dòng)免疫分析儀在ANA 檢測應(yīng)用上具有檢測結(jié)果快速精準(zhǔn),臨床醫(yī)生可按需開展DLCM 和CLIA 方法學(xué),經(jīng)濟(jì)高效更具性價(jià)比,可在臨床上廣泛推廣使用。

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