鴨梨花粉的采集貯藏及活力檢測方法

張國棟 李貴美 趙永飛

（山東省聊城市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，聊城 252000）

梨作為典型的配子體型自交不親和果樹，絕大部分的品種自花授粉不結(jié)實(shí)或者結(jié)實(shí)率很低，生產(chǎn)中果農(nóng)通常采用配置授粉樹或者人工輔助授粉的方式來提高果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量[1]。鴨梨花粉管較長，花粉萌發(fā)能力較強(qiáng)，適合作為授粉品種樹[2]，且冠縣地區(qū)鴨梨花期在3月下旬，早于其他梨品種花期3～4 d，使人工采粉授粉在時間上做到了無縫銜接。當(dāng)?shù)毓r(nóng)通過自采或者合采的方式，自制花粉用作人工授粉，而鴨梨花粉采集作為一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對梨果生產(chǎn)的最終經(jīng)濟(jì)效益有著較大影響。

1 梨花粉的采集制備

1.1 梨花的采摘

梨花采摘應(yīng)在開花前1～2 d至初花期，過早采摘，花粉的發(fā)育不成熟，萌發(fā)率低；過晚采摘，花朵已開放開始散粉。采摘時選擇大鈴鐺花和初展花，使用編織袋或布袋進(jìn)行盛裝，避免使用透氣性差的塑料袋，花朵自樹上采摘后最好在24 h內(nèi)完成花藥采集，堆放過程中不宜太厚，避免因堆積產(chǎn)熱影響花粉活力。

1.2 花藥的采集

采摘量大時，可采用破碎機(jī)進(jìn)行破碎；采摘量小時，可以用手各持一花進(jìn)行對搓，使花藥脫落?；ǘ淦扑楹筮^粗篩，使花瓣、花托、花梗與花藥分離。為使花藥盡量干凈，可選用10～16目篩子，通過多次過篩，分離出破碎的花絲，放在牛皮紙板或銅版紙上進(jìn)行散粉，保持室溫20～25 ℃，濕度70%～80%[3]。

1.3 花粉的篩取

在花藥陰晾過程中，顏色會逐步由紫色變?yōu)榈S色，并散出花粉，形狀為顆粒狀，且可以聞到明顯的魚腥味。散粉時間大概在兩天左右，最后選用60～100目的篩子進(jìn)行篩取。

1.4 花粉的貯藏

花粉活力受溫度和濕度影響較大，在室溫條件下貯藏的花粉發(fā)芽率會迅速下降，2個月內(nèi)就會全部失去活力[4]。制取的花粉宜即采即用，在花粉干燥后，使用白紙或硫酸紙制作的紙袋進(jìn)行分包，或裝入棕色廣口瓶內(nèi)放在低溫、干燥和避光的地方暫時存放[5]。

2 花粉活力檢測方法

花粉作為雄性高等植物的配子體，在植物的遺傳、育種、進(jìn)化和生殖等過程中扮演著不可或缺的角色[6]，花粉萌發(fā)能力的強(qiáng)弱直接決定著梨生產(chǎn)效益或雜交育種工作的成敗[7]。花粉使用前，需對花粉的生活力進(jìn)行檢測，以確保正常的生產(chǎn)、育種需要。因此掌握花粉生活力的檢測方法不論對梨果生產(chǎn)還是對雜交培育新品種都有著重要意義，常見的方法為染色法和離體培養(yǎng)法。

2.1 染色法

2.1.1 藍(lán)黑墨水染色法姜雪婷等[8]通過比較4種花粉生活力的檢測方法認(rèn)為藍(lán)墨水染色法測定值可以用來快速測定梨花粉生活力。具體操作為：首先在載玻片上滴一滴蒸餾水或超純水，再滴一滴藍(lán)黑墨水，用鑷子或細(xì)玻璃棒攪拌均勻，用頭發(fā)絲或毛筆尖蘸取少量花粉均勻撒在藍(lán)黑墨水中，蓋上蓋玻片靜置5 min左右，在顯微鏡10X視野下進(jìn)行觀察。若花粉粒為無色，則表明該花粉粒具有生活力；若花粉粒被染為藍(lán)黑色，則視該花粉粒為無生活力或發(fā)育不良。觀察3個不同區(qū)域的視野，每個視野要求花粉?？倲?shù)在70粒以上，通過計(jì)算平均值，來統(tǒng)計(jì)花粉的生活力[6]。

2.2.2 TTC染色法氯化三苯基四氮唑作為一種氧化還原染料，其基本原理是花粉在萌發(fā)過程中，其中的脫氫酶能夠引起氧化還原反應(yīng)，有生活力的花粉會因還原作用變成紅色，無生活力的花粉不變色[9]。具體操作為：用頭發(fā)或毛筆尖絲蘸取少量花粉置于載玻片凹槽內(nèi)，加1～2滴TTC溶液，蓋上蓋玻片，置于35 ℃恒溫箱內(nèi)15 min，在低倍顯微鏡下觀察。被染料染成紅色的花粉，生活力較強(qiáng)，淡紅色次之，無色的即為不具有活力或者發(fā)育不良。觀察5個不同區(qū)域的視野，統(tǒng)計(jì)100粒，然后計(jì)算花粉生活力，重復(fù)3次[10]。

2.3 離體萌發(fā)測定法

離體萌發(fā)測定法是將花粉分離后，在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，然后通過顯微鏡觀察花粉管萌發(fā)生長的狀況來判斷其生活力的大小，可分為液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法兩種，檢測效果與其他方法相比較準(zhǔn)確[11]。

2.3.1 液體培養(yǎng)基法按照10%蔗糖+0.01%硼酸的比例配置液體培養(yǎng)基，將液體培養(yǎng)基用吸管滴入載玻片的凹槽內(nèi)，然后用頭發(fā)絲或者毛筆等工具，蘸取少量花粉均勻撒在培養(yǎng)基上，之后將其放置于墊有濕紗布的培養(yǎng)皿中，加蓋置于23～25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h。在100X的普通光學(xué)顯微鏡下觀察3個視野的花粉萌發(fā)率，每個處理觀察200粒。以花粉管的生長長度超過花粉粒的直徑視為萌發(fā)，否則為不萌發(fā)。記錄數(shù)據(jù)計(jì)算平均值，用梨花粉的萌發(fā)率確定其生活力[7，11，12]。

2.3.2 固體培養(yǎng)基法固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基的配方中添加1%的瓊脂，其他成份均相同。配置過程中，需進(jìn)行加熱使瓊脂全部溶化，其他操作均與液體培養(yǎng)基法相同[9]。

通過鴨梨花粉的自采自制，在一定程度上可以降低果農(nóng)生產(chǎn)成本，也可以避免因花粉需求量大帶來的供不應(yīng)求的問題，鴨梨花期與其他品種花期的間隔也為梨花粉的制作提供了充足的時間。另外，在冠縣走訪梨種植戶的過程中，發(fā)現(xiàn)有部分梨農(nóng)在花藥散粉后不再進(jìn)行過篩，而是直接使用毛絨球或者雞毛撣進(jìn)行抖動和滾動授粉，也起到了較好的授粉效果。