體外模擬胃腸消化過程中云南金花茶抗氧化能力變化

石志嬌，唐軍榮，向建英，闞歡，趙平，張貴良，劉云＊

（1.西南林業(yè)大學(xué)西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650224）（2.云南省高校大健康類森林資源開發(fā)利用工程研究中心，云南昆明 650224）（3.云南大圍山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管護(hù)局河口管護(hù)分局，云南河口 661399）

云南金花茶（Camellia fascicularis）又稱簇蕊金花茶、云南顯脈金花茶，是云南特有的一個(gè)極小種群植物，含有多種對(duì)人體有益的維生素、微量元素、氨基酸以及黃酮、多酚等成分[1]。據(jù)研究報(bào)道，金花茶對(duì)于調(diào)節(jié)人體血脂、血糖、膽固醇等具有明顯效果，可改善因高血壓引起的各種不適癥狀[2]，具有極高的開發(fā)價(jià)值。作為金花茶組的一個(gè)種，云南金花茶在育種方面的研究較為深入，在活性物質(zhì)方面如黃酮、多酚等的研究包括了含量評(píng)價(jià)[3]、提取方法優(yōu)化和抗氧化活性[4,5]、抗炎活性[6,7]以及抗腫瘤活性[8]等的測(cè)定。云南金花茶是云南特有的藥食同源性植物，目前對(duì)其在人體中的消化釋放和吸收利用情況還未見任何報(bào)道，因此，為了充分考慮其活性物質(zhì)在人體消化過程中的變化情況，更好地了解云南金花茶活性物質(zhì)與健康之間的聯(lián)系和所涉及的機(jī)制，在體外模擬人體消化的生理過程就顯得尤為必要。

體外模擬消化是基于人體體內(nèi)消化環(huán)境和生理過程而在體外建立相似的條件來(lái)模擬人體消化過程的一種模型，這種模型可以綜合模擬人體口腔、胃、小腸和大腸的消化過程，靈活簡(jiǎn)單、應(yīng)用范圍廣泛并且重現(xiàn)性較好[9]。目前，體外模擬胃腸消化模型已廣泛用于研究功能性食品中生物活性化合物的變化、生物可及性和生物活性的變化等[10]。

黃酮、多酚等活性物質(zhì)對(duì)由自由基鏈反應(yīng)引起的氧化、過氧化等炎癥反應(yīng)具有很重要的調(diào)節(jié)和抑制作用[11,12]，然而，人體胃腸道的物理和生化特性可能會(huì)影響植物中活性物質(zhì)的存在形式及其功能活性。因此，本研究通過胃腸道消化模型來(lái)探索云南金花茶葉片在消化過程中總黃酮、總多酚的釋放情況，并測(cè)定其消化階段中的自由基清除能力、鐵離子還原能力以及脂質(zhì)過氧化抑制能力，以此來(lái)評(píng)價(jià)云南金花茶在不同消化時(shí)間段內(nèi)總黃酮、總多酚含量及活性變化之間的關(guān)系，為擴(kuò)大云南金花茶應(yīng)用范圍提供思路，可以為進(jìn)一步研究云南金花茶多酚消化吸收機(jī)制提供一定的理論依據(jù)，這對(duì)于推進(jìn)云南金花茶產(chǎn)品化進(jìn)程具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

云南金花茶葉片，于2021 年采自云南河口。

沒食子酸、蘆丁、福林酚、α-淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、豬膽鹽、大豆卵磷脂，上海源葉生物科技有限公司；DPPH、ABTS，合肥博美生物科技有限責(zé)任公司；TBA，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

YXFT3MP pH 計(jì)，上海梅特勒-托利多精密儀器有限公司；SpectraMax190 酶標(biāo)儀，上海美谷分子儀器有限公司；THZ-82A 數(shù)顯恒溫振蕩器，常州朗越儀器制造有限公司；TG16-WS 離心機(jī)，湖南邁克爾實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 云南金花茶粗提液制備

準(zhǔn)確稱取0.4 g 云南金花茶葉粉末，加入20 mL甲醇，40 ℃超聲提取30 min，8 000 r/min 離心10 min，取上清液，重復(fù)提取2 次，合并提取液備用。

1.3.2 體外模擬胃腸消化

參照尹瑞旸等[13]的方法略作修改，對(duì)云南金花茶葉片模擬胃腸消化。

模擬口腔消化：于50 mL 離心管中加入0.4 g 云南金花茶粉末，后加入20 mL 口腔電解液（20 mg NaCl，30 mg KCl，12 mg CaCl2溶解于100 mL 蒸餾水），2 mLα-淀粉酶（活力為100 U/mL）將pH值調(diào)至6.6，37 ℃ 120 r/min 下震蕩10 min，離心取上清液備用。

模擬胃消化：口腔殘留樣用0.1 mol/L HCl 調(diào)pH 值至2.0，終止α-淀粉酶作用，加入10 mL 胃電解液（775 mg NaCl，275 mg KCl，37.5 mg CaCl2，150 mg NaHCO2溶解于250 mL 蒸餾水），2 mL 酶液（0.5 g 胃蛋白酶溶于100 mL 的0.03 mol/L NaCl溶液），37 ℃ 120 r/min 下震蕩2 h，分別于0、30、60、90、120 min 時(shí)取樣8 mL 進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

模擬腸消化：口腔-胃殘留樣用0.1 mol/L NaHCO3調(diào)pH 值至7.0，終止胃蛋白酶作用，加入10 mL 腸電解液（540 mg NaCl，65 mg KCl，33 mg CaCl2溶解于100 mL 蒸餾水）及2 mL 胰蛋白酶-膽鹽混合液，37 ℃ 120 r/min 下震蕩4 h，分別于0、30、60、120、180、240 min 時(shí)取樣8 mL 進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

1.3.3 總黃酮、總多酚含量測(cè)定

總黃酮含量測(cè)定采用亞硝酸鈉法[14]，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品在510 nm 處測(cè)得的吸光度（y1）對(duì)濃度（x1）進(jìn)行回歸，得到回歸方程為y1=0.046 46+0.001 04x1，R12=0.999，以此進(jìn)行樣液中總黃酮含量測(cè)定?？偠喾雍繙y(cè)定采用福林酚法[15]，以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品在765 nm 處測(cè)得的吸光度（y2）對(duì)濃度（x2）進(jìn)行回歸，得到回歸方程為y2=0.070 79+0.035 78x2，R22=0.999，以此進(jìn)行樣液中總多酚含量測(cè)定。

1.3.4 自由基清除能力測(cè)定

1.3.4.1 DPPH·清除率測(cè)定

參考Zheng 等[16]的方法略作修改。取100 μL不同消化液與等體積的DPPH（40 mg/L，φ=95%乙醇）溶液混合，避光30 min，于波長(zhǎng)517 nm 處測(cè)吸光度。

式中：

ADPPH——DPPH·清除率，%；

A0——蒸餾水代替消化液的吸光度；

A1——φ=95%乙醇代替DPPH 溶液的吸光度；

A2——消化液的吸光度。

1.3.4.2 ABTS+·清除率測(cè)定

參考Teng 等[17]的方法稍作修改。7.4 mmol/L ABTS 溶液與2.6 mmol/L 過硫酸鉀溶液以1:1（V/V）混合，室溫黑暗放置12 小時(shí)，用前稀釋，于波長(zhǎng)734 nm 處調(diào)節(jié)吸光度至0.700±0.02，作為ABTS+·工作液。取800 μL ABTS+·工作溶液分別與200 μL 的消化液充分混合，避光反應(yīng)6 min 于734 nm 處測(cè)吸光度。

式中：

AABTS——ABTS+·清除率，%；

A0——蒸餾水代替消化液的吸光度；

A1——消化液的吸光度。

1.3.5 鐵離子還原能力測(cè)定

參照石志嬌等[18]的方法并微調(diào)。分別取100 μL不同消化液、pH 值為6.6 的PBS 緩沖溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鐵氰化鉀于離心管中混合均勻，50 ℃的水浴中孵育20 min，后加入100 μL 體積分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸搖勻，取100 μL 上清液加入96 孔酶標(biāo)板中，同時(shí)加入等體積的蒸餾水和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的三氯化鐵溶液，反應(yīng)10 min 后在700 nm 處測(cè)吸光度。用吸光度值表示消化液對(duì)三氯化鐵中鐵離子的還原能力。

1.3.6 脂質(zhì)過氧化抑制能力測(cè)定

結(jié)合閆紅秀等[19]和曠慧等[20]的方法并作修改調(diào)整。

1.3.6.1 蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制率測(cè)定

卵黃懸液的配制：將新鮮的雞蛋去除蛋清，加入等體積的0.1 mol/L 的PBS（pH 值為7.4）配置懸液，37 ℃磁力攪拌10 min，以1:25 稀釋為卵黃懸液備用。

TCA-TBA-HCl（TTH）混合液的配制：在蒸餾水中依序放入15 g TCA，0.375 g TBA，2.1 mL 濃鹽酸。

于離心管中依次加入100 μL 卵黃懸液、100 μL 400 μmol/L 三氯化鐵溶液、100 μL 400 μmol/L Vc溶液和100 μL 不同消化液混勻，37 ℃水浴60 min，再加入200 μL TTH 混合液，90～100 ℃水浴15 min，冰水冷卻后離心5 min，取上清液在532 nm 處測(cè)吸光度。

式中：

APC——蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制率，%；

A0——蒸餾水代替消化液的吸光度；

A1——PBS 代替脂質(zhì)體的吸光度；

A2——消化液的吸光度。

1.3.6.2 大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制率測(cè)定

大豆卵磷脂溶液的配制：20 mg 卵磷脂溶解于10 mL PBS（0.1 mol/L、pH 值為7.4）中。

于離心管中依次加入100 μL 大豆卵磷脂溶液、100 μL 400 μmol/L 三氯化鐵溶液、100 μL 400 μmol/L Vc 溶液和100 μL 不同消化液混勻，37 ℃水浴60 min，再加入200 μL TTH 混合液，90～100 ℃水浴15 min，冰水冷卻后離心5 min，取上清液在532 nm 處測(cè)吸光度。

式中：

ALHP——大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制率，%；

A0——蒸餾水代替消化液的吸光度；

A1——PBS 代替脂質(zhì)體的吸光度；

A2——消化液的吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定3 次，以Mean±SD 表示。采用Microsoft Excel 2010 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入和整理，采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05 表示差異顯著。此外，通過聯(lián)川生物云平臺(tái)進(jìn)行主成分分析，對(duì)上傳的數(shù)據(jù)進(jìn)行中心化和z-score 歸一化，并采用Pearson 相關(guān)性測(cè)定模擬胃腸道消化前后總黃酮、總多酚與自由基清除能力（DPPH、ABTS）、鐵離子還原能力、脂質(zhì)過氧化抑制能力（蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化、大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化）之間的相關(guān)性。采用Origin 2022 繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 胃腸消化過程中總黃酮、總多酚含量變化

2.1.1 總黃酮含量變化

根據(jù)圖1a，云南金花茶未消化樣液中總黃酮含量為191.53 μg/mL，口腔消化液中總黃酮含量為159.85 μg/mL。在胃腸消化過程中，總黃酮含量的變化隨消化時(shí)間延長(zhǎng)總體呈上升趨勢(shì)，胃消化階段中總黃酮含量均較于腸消化階段高。胃消化30～60 min總黃酮含量顯著升高（P＜0.05），消化90 min 時(shí)略有降低，但下降趨勢(shì)不顯著，隨后便回升，這可能是酸性環(huán)境促進(jìn)了某些與蛋白質(zhì)結(jié)合的黃酮類物質(zhì)釋放，隨著消化時(shí)間延長(zhǎng)，釋放量大于降解量[20]。由圖1b 可知，經(jīng)胃消化120 min 后，在腸消化初期（0 min），總黃酮含量降低了191.43 μg/mL，隨著腸消化的繼續(xù)，總黃酮含量上升，消化240 min含量達(dá)最高（78.88 μg/mL），是消化0 min 的2.04 倍。原因可能是腸消化初期，消化環(huán)境中的酶系和pH環(huán)境會(huì)使胃消化階段下的黃酮類物質(zhì)降解，且加入腸消化液后，也會(huì)使原本的黃酮濃度受到稀釋，隨著腸消化的進(jìn)行，總黃酮含量有少量回升，推測(cè)胰蛋白酶和膽酸鹽可能會(huì)促使黃酮類物質(zhì)的釋放，是主要的貢獻(xiàn)者，但pH 環(huán)境可能會(huì)影響黃酮類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和存在形式。

圖1 總黃酮含量變化Fig.1 Changes of total flavonoid content

2.1.2 總多酚含量變化

由圖2a 可知，云南金花茶未消化樣液中總多酚含量為243.51 μg/mL，口腔消化液中云南金花茶總多酚含量為121.77 μg/mL。在模擬胃液消化過程中，總多酚含量的變化隨消化時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)了波動(dòng)，但整體來(lái)看，與消化0 min 相比是增加的，可能是在胃蛋白酶的作用下，部分結(jié)合態(tài)多酚水解釋放出多酚，從而使可測(cè)多酚增加[21]。在胃消化90 min，總多酚含量達(dá)到最高，為327.65 μg/mL。由圖2b 可知，腸消化階段中總多酚含量變化趨勢(shì)與總黃酮一致。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，胃消化120 min 后，在腸消化初期（0 min）時(shí)，總多酚含量大幅度地降低了238.49 μg/mL，損失量為腸消化0 min的7.94倍，這可能是加入腸消化液，稀釋了原有的多酚，此外，pH 值上升，酸堿環(huán)境改變，多酚降解或聚合，導(dǎo)致可測(cè)多酚減少[22]。隨著腸消化的繼續(xù)，總多酚含量逐漸上升，但均比胃消化部位低，說明多酚在胃環(huán)境中更穩(wěn)定[23]，造成這種差異的原因可能是總多酚在弱堿性的腸消化環(huán)境下會(huì)發(fā)生氧化、聚合、降解等反應(yīng)，導(dǎo)致其總體含量低[22]。

圖2 總多酚含量變化Fig.2 Changes in total polyphenol content

2.2 胃腸消化過程中自由基清除能力變化

2.2.1 DPPH·清除能力

如圖3a，云南金花茶未消化樣液的DPPH·清除率為86.62%。與口腔消化（51.89%）相比，模擬胃消化后，云南金花茶DPPH·清除能力顯著升高（P＜0.05），清除能力提高了32.69%～35.21%，均達(dá)到90%以上。根據(jù)圖3b 可知，與胃消化末期（120 min）相比，經(jīng)腸消化后，消化液的清除能力均降低，降幅在60.92%～68.55%之間。此外，胃消化階段中消化0 min 時(shí)對(duì)DPPH·清除能力最低（92.58%），在腸消化階段中消化180 min 時(shí)對(duì)DPPH·清除能力最高（32.97%），兩者相差近2.81 倍，表明相對(duì)于腸消化，胃消化過程中的DPPH·清除能力更高[24]。

圖3 DPPH·清除能力變化Fig.3 Change of DPPH· scavenging ability

2.2.2 ABTS+·清除能力

如圖4a 所示，云南金花茶未消化樣液的ABTS+·清除率為94.36%，高于口腔消化液。在胃消化過程中，云南金花茶ABTS+·清除能力的變化趨勢(shì)與DPPH·相似。根據(jù)圖4b 可知，在腸消化60 min 時(shí)，消化液對(duì)ABTS+·清除能力顯著下降（P＜0.05），隨著消化的繼續(xù)，清除能力逐漸上升，但總體上都低于胃消化階段?？赡苁悄c消化前期，由于消化環(huán)境的改變，使得胃消化過程遺留下的多酚和黃酮類成分迅速降解，結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致清除率下降，隨著消化的繼續(xù)，活性物質(zhì)釋放量大于降解量，因此清除能力逐漸回升。

圖4 ABTS+·清除能力變化Fig.4 Change of ABTS+· scavenging ability

綜上，經(jīng)模擬消化后，云南金花茶中的黃酮和多酚類物質(zhì)逐漸被釋放出來(lái)，表現(xiàn)出不同的活性。較口腔消化組，云南金花茶經(jīng)胃消化后，不同消化階段的DPPH·、ABTS+·清除能力顯著升高。經(jīng)腸消化后，自由基清除能力急劇下降，且均比胃消化階段低，這與總黃酮、總多酚含量變化趨勢(shì)大體一致，表明胃腸消化過程中自由基清除能力變化可能與黃酮、多酚類物質(zhì)在胃腸環(huán)境中的變化情況有關(guān)，這些物質(zhì)在弱堿性環(huán)境不穩(wěn)定，且易于蛋白質(zhì)等大分子絡(luò)合，降低其在消化液的溶解性，進(jìn)而降低抗氧化活性[26]。自由基的清除效果可以反應(yīng)抗氧化作用，在本研究中，胃消化環(huán)境中的抗氧化能力較高，經(jīng)腸消化后抗氧化能力下降，這與上述說法一致。

2.3 鐵離子還原能力

如圖5 所示，云南金花茶未消化樣液吸光度為0.77，大于口腔消化液。經(jīng)模擬消化后，胃消化過程對(duì)鐵離子還原能力均高于腸消化過程，胃消化階段最小吸光度為0.57（消化0 min），腸消化階段最大吸光度為0.16（消化240 min）。由圖5a可知，在胃消化中，隨著消化時(shí)間增加，云南金花茶對(duì)鐵離子還原能力上升，上升差異不顯著（P＞0.05），如圖5b 所示，經(jīng)腸消化過程，還原能力先上升再下降后上升，呈現(xiàn)這一趨勢(shì)可能與腸消化階段活性物質(zhì)濃度變化有關(guān)，也可能與pH 值的變動(dòng)有關(guān)[25]。

圖5 鐵離子還原能力變化Fig.5 Change of iron reduction ability

2.4 胃腸消化過程中脂質(zhì)過氧化抑制能力變化

2.4.1 蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力

蛋黃卵磷脂是一種磷脂混合物，其中的主成分是磷脂酰膽堿（Phosphatidylcholine，PC）。由圖6可知，云南金花茶未消化樣液和胃腸消化液對(duì)蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化均具有一定的抑制能力。在圖6a中的胃消化階段，脂質(zhì)過氧化抑制率具有差異性，消化90 min，蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力最高，為77.17%，在90 min 之前，隨消化時(shí)間增加，抑制能力逐漸降低，可能是在這個(gè)階段，云南金花茶釋放出的對(duì)蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化具有抑制能力的活性物質(zhì)的降解量大于釋放量，在90 min 左右，則是釋放量大于降解量，因此抑制情況便表現(xiàn)出先下降后上升再下降的趨勢(shì)。在圖6b 中的腸消化過程中，脂質(zhì)過氧化抑制率差異不顯著（P＞0.05）。與胃消化末期（120 min）相比，腸消化0 min，抑制率降低，隨著消化進(jìn)行，抑制率顯著提高（P＜0.05），消化240 min 達(dá)最高（82.49%）。這可能是在胃腸消化過度階段（0 min），由于消化環(huán)境的改變，具有抑制能力的黃酮、多酚類成分迅速降解，抑制率最低，隨著腸消化進(jìn)行，釋放出的具有脂質(zhì)過氧化抑制能力的這類物質(zhì)逐漸增多，降解量與釋放量趨于平衡，因此抑制率顯著提升（P＜0.05）后便趨于穩(wěn)定。

圖6 蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力變化Fig.6 Changes in the inhibitory ability of egg yolk lecithin lipid peroxidation

2.4.2 大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力

由圖7 可知，云南金花茶胃腸消化液對(duì)大豆卵磷脂（Lecithin High Potency，LHP）脂質(zhì)過氧化均具有抑制能力。在圖7a 中未消化樣液對(duì)大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制率為90.81%，高于口腔消化，在胃消化階段，消化30 min 時(shí)測(cè)定樣液的脂質(zhì)過氧化抑制率最大為46.15%，隨著消化的進(jìn)行，脂質(zhì)過氧化抑制率具有一定波動(dòng)性，這可能是由于在胃消化環(huán)境中，對(duì)大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化具有抑制作用的黃酮、多酚類成分存在形式不穩(wěn)定，使得脂質(zhì)過氧化抑制率呈現(xiàn)上下波動(dòng)的現(xiàn)象。如圖7b 顯示，腸消化0 min，抑制率為43.30%，消化30 min，抑制率顯著降低（P＜0.05），隨著消化的繼續(xù)，抑制率逐漸上升，消化為240 min 時(shí)，抑制率達(dá)最高（45.62%）。這可能是由于在弱堿性的腸消化環(huán)境中，消化0～30 min，對(duì)大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化具有抑制作用的黃酮、多酚類成分的降解量大于釋放量，隨著消化的進(jìn)行，釋放量大于降解量，這類物質(zhì)累積量逐漸增加，對(duì)大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化的抑制能力顯現(xiàn)出逐漸上升的趨勢(shì)。

圖7 大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力變化Fig.7 Changes in the inhibitory ability of soybean lecithin lipid peroxidation

綜上，本研究在卵磷脂脂質(zhì)體存在下，通過二價(jià)鐵離子促進(jìn)其脂質(zhì)過氧化，探究了云南金花茶消化液對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用。在胃消化過程中，隨著消化的進(jìn)行，脂質(zhì)過氧化抑制能力均表現(xiàn)出上下波動(dòng)的情況，可能是模擬胃消化過程釋放出對(duì)脂質(zhì)過氧化起作用的黃酮、多酚類成分存在形式不穩(wěn)定，模擬腸消化過程，脂質(zhì)過氧化抑制率趨于平穩(wěn)或逐漸上升，可能是隨著腸消化的進(jìn)行，對(duì)脂質(zhì)過氧化起作用的這類物質(zhì)的釋放量大于或等于降解量?？傊?，云南金花茶胃腸消化過程中釋放出的黃酮、多酚類成分均有抑制脂質(zhì)過氧化能力，但抑制率的高低與總黃酮、總多酚含量并不趨于一致，后續(xù)應(yīng)該進(jìn)一步研究單體酚對(duì)脂質(zhì)過氧化的作用。

2.5 相關(guān)性及主成分分析

將體外模擬胃腸消化過程中測(cè)定的總黃酮含量（TFC）、總多酚含量（TPC）、DPPH·清除能力（DPPH·）、ABTS+·清除能力（ABTS+·）、鐵離子還原能力（Fe3+）、蛋黃卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力（PC）和大豆卵磷脂脂質(zhì)過氧化抑制能力（LHP）等7項(xiàng)指標(biāo)之間進(jìn)行了相關(guān)性及主成分分析（PCA），由圖8a 相關(guān)性分析得，總黃酮含量、總多酚含量與自由基清除率和鐵離子還原能力之間呈顯著正相關(guān)，且相關(guān)系數(shù)均在0.9 以上，表明相關(guān)性極強(qiáng)；總黃酮含量、總多酚含量與脂質(zhì)過氧化各指標(biāo)之間的相關(guān)系數(shù)較低，但也具有一定的相關(guān)性。主成分分析中各指標(biāo)之間的距離也可反應(yīng)其聯(lián)系的緊密程度[27]，根據(jù)圖8b 可得，總黃酮、總多酚含量、DPPH·、ABTS+·清除能力和鐵離子還原能力之間的距離較近，說明它們之間的聯(lián)系較為緊密，相關(guān)性高，這也能反應(yīng)相關(guān)性熱圖的分析結(jié)果。

圖8 相關(guān)性和主成分分析Fig.8 Correlation and principal component analysis

3 結(jié)論

本研究通過模擬消化技術(shù)對(duì)云南金花茶進(jìn)行體外模擬胃腸消化，通過動(dòng)態(tài)研究了云南金花茶在口腔、胃、腸消化環(huán)境中總黃酮、總多酚含量及抗氧化變化規(guī)律。在模擬消化過程中，云南金花茶消化液中總黃酮、總多酚含量及自由基清除率、鐵離子還原能力和脂質(zhì)過氧化抑制能力存在顯著性差異。經(jīng)模擬胃消化后，總黃酮、總多酚含量較高，腸消化0 min，含量下降，DPPH·、ABTS+·清除率和鐵離子還原能力的變化趨勢(shì)與總黃酮、總多酚含量變化趨勢(shì)相似。經(jīng)相關(guān)性分析，DPPH·、ABTS+·清除率和鐵離子還原能力與總黃酮、總多酚含量之間呈顯著正相關(guān)，且相關(guān)性較高。在脂質(zhì)過氧化抑制能力測(cè)定中，各消化液均對(duì)脂質(zhì)過氧化具有抑制效果，抑制能力變化趨勢(shì)與總黃酮、總多酚含量不一致，經(jīng)相關(guān)性分析，脂質(zhì)過氧化各指標(biāo)與總黃酮含量、總多酚含量之間的相關(guān)性較低。根據(jù)研究結(jié)果可推測(cè)，胃消化過程對(duì)云南金花茶清除自由基、還原鐵離子和抑制脂質(zhì)過氧化活性物質(zhì)的釋放均有促進(jìn)作用，而腸消化過程主要促進(jìn)了抑制脂質(zhì)過氧化活性物質(zhì)的釋放，可見體外模擬消化過程因消化環(huán)境的改變會(huì)影響黃酮、多酚類物質(zhì)的存在形式并使其表現(xiàn)出不同的活性。為探究云南金花茶在消化過程中起抗氧化作用的主要活性物質(zhì)及其構(gòu)效關(guān)系，后續(xù)還需進(jìn)一步通過細(xì)胞及動(dòng)物模型研究其消化轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和作用機(jī)理。