β-石竹烯產(chǎn)生菌的篩選和提取工藝優(yōu)化

牟飛燕，何夷敏，夏博宇，董孝元，陳 暉，常 煦，陳茂彬，方尚玲*

（1.湖北工業(yè)大學(xué) 生物工程與食品學(xué)院 工業(yè)發(fā)酵省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北 武漢430068；2.黃鶴樓酒業(yè)有限有限公司，湖北 武漢430000；3.安琪酵母股份有限公司，湖北 宜昌443000）

β-石竹烯（β-caryophyllene,BCP）屬于雙環(huán)倍半萜型化合物，該物質(zhì)具有局部麻醉、消炎鎮(zhèn)痛、抗癌、抗高血壓、鎮(zhèn)咳、治療結(jié)腸炎及治療帕金森癥等藥理作用，同時還具有凈化空氣的作用[1]。目前，BCP的研究主要圍繞各類食用香精、重質(zhì)松節(jié)油、積雪草、菊花、牛至精油等[2-4]，由于BCP不溶于水，易溶于醇類物質(zhì)和醚類物質(zhì)，所以在BCP提取物質(zhì)選擇上主要偏向于醇類和醚類物質(zhì)，王芳等[2]對積雪草中BCP的提取主要采用的是石油醚（沸程30～60 ℃），劉東靜等[5]對佩蘭藥材中石竹烯含量測定中亦采用了乙醇與石油醚進行提取，其中乙醇提取效果更佳。另外，隨著BCP在生物醫(yī)藥、保健食品及生物燃料等領(lǐng)域的需求量增大，僅依靠植物提取和純化的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法提取的BCP顯然供不應(yīng)求，目前，BCP在許多領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注和研究，但仍需要進一步深入的研究和開發(fā)，以更好地應(yīng)用于相關(guān)領(lǐng)域中[3]。

白酒是我國傳統(tǒng)飲料酒，工藝獨特，風(fēng)格突出，許多名酒在國內(nèi)外享有盛名，其中清香型白酒作為我國濃、醬、清、兼四大香型白酒之一，其獨特的花香與果香味受到廣大消費者的歡迎[6]?！按笄弊鳛榘拙瓢l(fā)酵過程中的催化劑[7]，為白酒釀造提供了主要的功能微生物區(qū)系及其代謝物，包括水解酶、揮發(fā)物和半揮發(fā)物等，這些成分有助于白酒風(fēng)味物質(zhì)的產(chǎn)生[8]。白酒中的微量組分約占1%～2%，含量雖低，但其種類、組成與比例均對白酒的口感、風(fēng)味和香氣的形成具有重要影響，因此需對白酒中特征風(fēng)味物質(zhì)進行研究[9]。另外，由于微生物的生長代謝是產(chǎn)生風(fēng)味物質(zhì)最主要的來源，明晰白酒中相關(guān)微生物的作用及其與特征風(fēng)味的關(guān)系對提升白酒品質(zhì)具有重要意義[10]，但是目前對白酒和大曲中BCP及其來源研究甚少，已經(jīng)報道了產(chǎn)BCP的真菌有黃曲霉[11]、青霉[12]等。這些真菌的分離篩選主要是通過采用傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法，如土壤分離、植物樣品分離等，近年來關(guān)于中國白酒中萜烯類化合物的研究也越來越多，霉菌是釀制中國白酒的重要微生物之一，但目前僅有一篇相關(guān)專利表示大曲中的分支橫梗霉（Lichtheimia ramosa）可在大曲的發(fā)酵過程中，通過代謝產(chǎn)生BCP，為大曲賦予了特殊的風(fēng)味和香氣。BCP產(chǎn)生真菌的分離篩選及其BCP的提取是一個復(fù)雜的過程，需要綜合考慮多種因素[13]。產(chǎn)BCP的真菌篩選具有提高產(chǎn)量、優(yōu)化生產(chǎn)工藝、提高品質(zhì)和探索新資源的必要性，有助于推動BCP的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展和應(yīng)用推廣[14]。

該研究通過頂空固相微萃?。╤eadspace solid-phase microextraction HS-SPME）-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography，GC-MS）法對清香型白酒和大曲中香氣成分進行檢測，采用傳統(tǒng)分離技術(shù)對大曲中產(chǎn)β-石竹烯（BCP）菌株進行分離篩選，將初篩菌株進行麩皮發(fā)酵對產(chǎn)BCP菌株進行復(fù)篩后通過分子生物學(xué)技術(shù)對其進行鑒定，對麩曲中β-石竹烯通過氣相色譜（GC）法進行提取條件優(yōu)化，并將篩選菌株在小壇發(fā)酵中進行應(yīng)用。為大曲釀造過程中芳香化合物的產(chǎn)生和調(diào)控提供了重要的理論基礎(chǔ)和實踐指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣品

清香型白酒及大曲來源于湖北某酒廠，貯藏于4℃冰箱。

1.1.2 試劑

BCP、雙戊烯、十二烷、乙醇、石油醚（沸程在30～60 ℃）、NaCl：上海麥克林生化科技有限公司。所用試劑均為分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

沙氏培養(yǎng)基（SDA）：葡萄糖40 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL，pH值自然。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 000 mL，pH值自然。

麩皮培養(yǎng)基：細麩皮100 g，蒸餾水70 mL（料水比為10∶7），pH值自然。

以上培養(yǎng)基均在121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-50KBS高壓蒸汽滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械廠；LRH-250生化培養(yǎng)箱：上海智城分析儀器有限公司；5977B-7890B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 分析檢測

（1）清香型白酒中香氣成分

清香型白酒香氣成分檢測通過頂空固相微萃取-氣相色譜聯(lián)用（HS-SPME-GC-MS）法[15-17]。

HS-SPME條件：在頂空瓶中加入6 mL原酒樣稀釋至14%vol待測酒樣，加入100μL混標(biāo)（203mg/L叔戊醇、201mg/L乙酸正戊酯），同時加入3 g NaCl和白色磁力轉(zhuǎn)子于60 ℃磁力攪拌加熱臺上加熱45 min，轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為200 r/min，然后將已老化過的萃取頭插入樣品瓶的頂空部分，萃取過程為40 min，之后將萃取頭插入氣相色譜的進樣口250 ℃解吸5 min。

GC條件：進樣口溫度250 ℃；升溫程序為初始溫度40 ℃保持2 min，5 ℃/min升至145 ℃，再以20 ℃/min升溫至260 ℃；維持5 min；載氣為高純度氦氣（He），載氣流速1 mL/min。MS條件：電子電離（electron ionization，EI）源，離子源溫度為210 ℃，電離電壓70 eV，接口溫度為250 ℃，四極桿溫度：150 ℃；質(zhì)量掃描范圍：50～550 m/z。

定性、定量分析：通過美國國家標(biāo)準技術(shù)研究所（national institute of standards and technology,NIST）各揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的保留時間對白酒中揮發(fā)性香氣物質(zhì)進行定性分析，并通過內(nèi)標(biāo)法進行定量分析。

（2）清香大曲中香氣成分

清香大曲中香氣成分檢測通過頂空固相微萃取-氣相色譜聯(lián)用（HS-SPME-GC-MS）法。

GC條件：升溫程序起始溫度40℃，維持5min，以5℃/min升溫至220 ℃，維持5 min；氣化室溫度為250 ℃；分流比為10∶1，載氣為高純度氦氣，流速為1 mL/min。MS條件：電子電離（electron ionization，EI）源，離子源溫度為210 ℃，電離電壓70 eV，接口溫度為250 ℃，四極桿溫度150 ℃；質(zhì)量掃描范圍50～550 m/z。

定性、定量分析：通過美國國家標(biāo)準技術(shù)研究所（NIST）各揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的保留時間對大曲中揮發(fā)性香氣物質(zhì)進行定性分析，并通過面積歸一法進行定量分析[18]。

（3）麩曲的制備及香氣成分分析

麩曲的制備：取100 g細麩皮與70 mL水混勻，在121 ℃條件下滅菌15 min，加入孢子懸浮液5 mL，在30 ℃條件下培養(yǎng)3 d，每隔12 h扣瓶一次，保證其麩皮松散，菌株生長均勻。

麩曲中香氣成分采用HS-SPME-GC-MS法。其色譜、質(zhì)譜條件及定性定量方法同清香大曲中香氣成分測定。

定性、定量分析：通過美國國家標(biāo)準技術(shù)研究所（NIST）各揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的保留時間對大曲中揮發(fā)性香氣物質(zhì)進行定性分析，并通過面積歸一法進行定量分析。

（4）麩曲中BCP含量分析

麩曲中BCP含量檢測采用GC法[19]。樣品預(yù)處理條件：取2 g麩曲，加入10 mL無水乙醇提取2 h，于8 000 r/min離心5 min，取上清液2.50 mL于5 mL容量瓶中，加入100 μL內(nèi)標(biāo)（質(zhì)量濃度為167.40 mg/L的十二烷），定容至5 mL，過0.22 μm有機濾膜。GC條件：參照胡雪等[20]的方法。定性定量方法：采用保留時間定性，內(nèi)標(biāo)法定量[21-22]。

企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)對績效考核具有指導(dǎo)性，績效考核體系的設(shè)計應(yīng)與企業(yè)的戰(zhàn)略規(guī)劃保持一致，只有這樣才能引導(dǎo)個人和團隊樹立共同的目標(biāo)、激發(fā)工作熱情、為組織發(fā)展和目標(biāo)的實現(xiàn)努力。

1.3.2 清香大曲中產(chǎn)BCP菌株的初篩

將清香型大曲粉碎至20目后過篩，稱取10 g曲樣加入90 mL 0.90%的生理鹽水中，于30 ℃、120 r/min搖床振蕩30 min，用紗布過濾，并用0.90%生理鹽水逐級稀釋至適當(dāng)稀釋梯度，分別吸取稀釋梯度為10-3倍、10-4倍、10-5倍、10-6倍的稀釋液150 μL涂布于沙氏培養(yǎng)基，于30 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，挑取生長較好的、菌落形態(tài)或鏡檢形態(tài)不同的單菌落，接種于PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，多次劃線分離，直至得到純種菌落，初步判定菌株類型參照《真菌鑒定手冊》[23]。

1.3.3 清香大曲中產(chǎn)BCP菌株的復(fù)篩

孢子懸液的制備：取斜面保存的純種菌株，加入5 mL滅菌后的0.90%生理鹽水（加入體積占比為0.1%的吐溫20），將其孢子沖入已滅菌且裝有玻璃珠的空三角瓶中，在30 ℃條件下120 r/min振蕩30 min，采用四層紗布過濾，利用血球計數(shù)板計數(shù)，將孢子懸浮液稀釋至106～107個/mL。

取100 g細麩皮與70 mL水混勻，在121 ℃條件下滅菌15 min，加入106～107個/mL初篩選菌株孢子懸浮液5 mL，在30 ℃條件下培養(yǎng)3 d，每隔12 h扣瓶一次，保證其麩皮松散，菌株生長均勻，得到麩曲。測定麩曲中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)，復(fù)篩BCP產(chǎn)量高的菌株。

1.3.4 分子生物學(xué)鑒定

對產(chǎn)BCP的霉菌進行分子生物學(xué)鑒定，將樣品送至北京六合華大基因科技有限公司進行測序。引物設(shè)計為通用引物：ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'），PCR擴增體系采用PCR Mix 21 μL、引物各1 μL、DNA模板2 ng/μL。PCR擴增程序為96 ℃預(yù)熱5 min；96 ℃變性20 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 min，進行35個循環(huán)；然后于72 ℃終延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后，取PCR產(chǎn)物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，觀察條帶性狀，最后進行純化測序。將最終的測序結(jié)果在美國國家生物技術(shù)信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）的GenBank數(shù)據(jù)庫中進行基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）比對，并對近似序列進行系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析[24]。

1.3.5 麩曲中BCP提取條件優(yōu)化

提取溶劑：取麩曲樣品2 g、分別加入體積分數(shù)為60%乙醇、無水乙醇、石油醚（沸程為30～60 ℃）10 mL，靜置提取1 h，考察提取溶劑對BCP含量的影響。

提取時間：取麩曲樣品2 g、加入上述優(yōu)化提取溶劑提取1 h、2 h、3 h，考察提取時間對BCP含量的影響。

1.3.6 產(chǎn)BCP菌株強化麩曲小壇發(fā)酵應(yīng)用

取4 kg粉碎為4瓣的高粱，加入60%的60～70 ℃水拌勻，堆積潤糧20 h后拌入20%清蒸稻殼，于121 ℃條件下滅菌30 min后進行分壇拌曲，每壇裝500 g，空白組拌入10%清香型大曲，實驗組拌入10%清香型大曲與5%強化麩曲，水密封發(fā)酵27 d后上甑蒸酒（保證中間高，兩邊低，緩慢蒸酒），蒸餾時按照“掐頭去尾，量質(zhì)摘酒”的原則接酒，取每甑蒸餾出的中段基酒等量混合為混合酒樣[25]，根據(jù)GB 5009.225—2023《食品安全國家標(biāo)準酒和食用酒精中乙醇濃度的測定》的酒精計法測定原酒酒精度，計算出酒率[26]。

1.3.7 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2019、SPSS 26.0處理數(shù)據(jù)，GC色譜圖在軟件Origin 2021中繪制，柱狀圖使用軟件GrapHPad Prism 9繪制、系統(tǒng)發(fā)育樹用MEGA-X軟件繪制而成、熱圖使用軟件Chiplot與Hiplot繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 清香型白酒中揮發(fā)性香氣成分檢測

為探究該清香型白酒中是否含有BCP，通過HS-SPMEGC-MS法對原酒中香氣成分進行定性定量分析，具體見表1。

表1 清香型白酒揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的檢測結(jié)果Table 1 Detection results of volatile flavor substances in light-flavor Baijiu

由表1可知，從該清香型白酒中檢測出65種揮發(fā)性香氣物質(zhì)，包括酯類物質(zhì)27種、酸類物質(zhì)6種、醇類物質(zhì)15種、醛酮類物質(zhì)9種，吡嗪類物質(zhì)2種、呋喃類物質(zhì)2種、酚類物質(zhì)2種、其他類物質(zhì)2種。其中乳酸乙酯質(zhì)量濃度為2.31 g/L，乙酸乙酯質(zhì)量濃度為2.83 g/L，基本符合清香型白酒的風(fēng)格，各類呈香物質(zhì)豐富使清香型白酒酒體風(fēng)味富有層次感，在清甜爽口中增添了陳釀的濃厚感。該清香型白酒中BCP含量為0.02 g/L，BCP是白酒中重要的萜烯類物質(zhì)，在清香型白酒酒體中，萜烯類化合物不但具有緩解酒精傷害、預(yù)防疾病、促進康復(fù)、以及調(diào)節(jié)生理節(jié)奏的功效，還具有呈香或呈味的作用，但由于目前對白酒中BCP鮮有報道，需對其產(chǎn)生途徑追根溯源，對白酒釀造過程中不可或缺的啟動物質(zhì)“大曲”進行深入研究和開發(fā)，對于提高白酒的風(fēng)味和口感至關(guān)重要。

2.2 清香大曲中揮發(fā)性香氣成分檢測

大曲作為傳統(tǒng)發(fā)酵食品原料，富含各類微生物，在制曲和釀造的過程中，微生物的不斷生長和繁殖會產(chǎn)生大量的代謝物，這些代謝物是大曲酒獨特風(fēng)格和特色的主要來源[27]。對清香型白酒大曲的揮發(fā)性香氣成分進行檢測，結(jié)果見圖1。由圖1可知，清香大曲共檢測出揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)50種，其中酯類6種，醇類16種，酸類4種，酚類2種，醛酮類6種，吡嗪類10種，萜烯類1種，其他類5種，其相對含量分別為22.91%、14.25%、7.24%、1.11%、3.34%、39.25%、0.85%、3.13%。萜烯類物質(zhì)BCP相對含量達到0.85%。結(jié)果表明，清香大曲中有可以產(chǎn)生BCP的菌株，于是需對清香大曲中產(chǎn)BCP的菌株進行分離篩選。

圖1 清香大曲中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)相對含量檢測結(jié)果Fig. 1 Detection results of relative contents of volatile flavor substances in light-flavor Daqu

2.3 清香大曲中菌株的分離篩選

通過稀釋涂布平板法篩選該清香型大曲中生長狀況良好，獲得菌落或鏡檢形態(tài)不同的5株菌，編號為SDA1～SDA5，其菌落及細胞形態(tài)圖見圖2。

圖2 清香大曲中篩選菌株的菌落（a）與細胞形態(tài)（b）Fig. 2 Colony (a) and cell (b) morphology of strains screened from light-flavor Daqu

由圖2可知，5株菌株均菌落大、干燥疏松有菌絲。菌株SDA1、SDA4的菌落呈黑色，菌落較稀疏，無假根，初步鑒定為根霉屬（Rhizopus）；菌株SDA2、SDA5的孢子呈白色，菌落較發(fā)達，菌落為白色，孢子束老熟后幾乎透明無色，無假根，初步鑒定為毛霉屬（Mucor）；菌株SDA3菌落質(zhì)地棉絮狀，基部菌絲白色，后變?yōu)榛液稚?，假根不發(fā)達，孢子囊近球形，孢囊孢子近球形，初步鑒定為根霉屬（Rhizopus）。

2.4 麩曲中揮發(fā)性香氣成分檢測

將篩選出的5株霉菌對麩皮進行發(fā)酵，利用HS-SPMEGC-MS法對其發(fā)酵產(chǎn)物進行揮發(fā)性香氣成分檢測，結(jié)果見圖3。

圖3 5株霉菌發(fā)酵麩曲中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)分析結(jié)果Fig. 3 Analysis results of volatile flavor substances of Fuqu fermented by 5 molds

由圖3可知，5株菌株SDA1、SDA2、SDA3、SDA4及SDA 5對麩曲進行發(fā)酵后分別檢測出揮發(fā)性香氣物質(zhì)17種、10種、23種、15種、18種。其中菌株SDA3麩曲中酯類物質(zhì)的種類與相對含量明顯高于其他菌株且在該麩曲中檢測出了BCP的存在，其相對含量為1.04%?？梢源_定菌株SDA3在生長代謝過程中可產(chǎn)BCP，可能菌株SDA3含有合成BCP的酶，通過甲羥戊酸的上下游途徑可得到BCP[6]。

2.5 篩選菌株的分子生物學(xué)鑒定

基于18S rRNA基因菌株SDA3的系統(tǒng)發(fā)育樹見圖4。由圖4可知，菌株SDA3與數(shù)據(jù)庫已有菌株戴爾根霉（Rhizopus delemar）同源性達100%，屬同一分支，結(jié)合形態(tài)特征，確定產(chǎn)BCP的菌株SDA3為戴爾根霉（Rhizopus delemar），屬于菌物界接合菌門接合菌綱毛霉目毛霉科戴爾根霉屬生物。

圖4 基于18S rRNA基因菌株SDA3的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 4 Phylogenetic tree of strain SDA3 based on 18S rRNA

2.6 麩曲中BCP提取條件優(yōu)化

不同提取溶劑及提取時間對BCP含量的影響結(jié)果見圖5。由圖5a可知，BCP能更好的溶于無水乙醇，質(zhì)量濃度達到37.98 mg/L，與其他提取物提取的BCP含量具有顯著差異（P＜0.05），該結(jié)果可能與BCP不溶于水，但能溶解于乙醇等有機溶劑的溶解性有關(guān)。因此，最適提取溶劑為無水乙醇。由圖5b可知，提取時間為3 h時，BCP的含量達到最高為38.23 mg/L。當(dāng)提取時間為2 h、3 h時提取的BCP含量之間沒有顯著差異（P＞0.05）。當(dāng)提取時間為2 h時，BCP質(zhì)量濃度達37.98 mg/L。因此，為節(jié)約時間成本，最適提取時間為2 h。綜合考慮，通過GC法檢測BCP的含量，以十二烷作為內(nèi)標(biāo)，使用無水乙醇浸提樣品2 h。

圖5 不同提取溶劑（a）及提取時間（b）對β-石竹烯含量的影響Fig. 5 Effects of different extraction solvents (a) and extraction time(b) on β-caryophyllene content

2.7 產(chǎn)BCP菌株強化麩曲小壇發(fā)酵應(yīng)用

將小壇發(fā)酵產(chǎn)物進行蒸餾，計算其出酒率，結(jié)果表明，與只添加了清香型大曲的對照組（CK）出酒率（8.17%）相比，加入清香型大曲和菌株SDA3強化麩曲的實驗組出酒率為13.08%，實驗組出酒率明顯高于對照組，可能與霉菌可以分泌糖化酶、液化酶、蛋白酶等高活性酶有關(guān)，可以將原料中的淀粉分解生成糊精、麥芽糖，最終轉(zhuǎn)化為葡萄糖，因此直接影響著原料的利用及其他種類微生物的生長代謝，進而提高出酒率。通過HS-SPME-GC-MS法對小壇發(fā)酵產(chǎn)物蒸餾的白酒香氣成分進行分析，結(jié)果見表2。

表2 小壇發(fā)酵產(chǎn)物中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)檢測結(jié)果Table 2 Determination results of volatile flavor substances in small tank fermentation products

由表2可知，實驗組共檢測出43種香氣物質(zhì)，其中，酯類物質(zhì)20種、醇類9種、醛酮類3種、酚類1種、酸類2種、其他類8種，與對照組相比，香氣成分種類增加了7種，分別為反式-4-癸烯酸乙酯、亞麻酸乙酯、苯甲醇、正己醇、4-羥基-2-丁酮、3,4-二甲氧基苯乙烯和羥甲基環(huán)丙烷，高級酯相對含量增長明顯，主要是月桂酸乙酯、十四酸乙酯、十五酸乙酯、棕櫚酸乙酯、亞油酸乙酯等，另外BCP的相對含量占比也更高。于是對清香型白酒的特征香氣成分和相對含量較高的物質(zhì)進行定量分析，結(jié)果見圖6。

圖6 小壇發(fā)酵酒體中主體特征揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)含量檢測結(jié)果Fig. 6 Determination results of major characteristic volatile flavor substances contents in Baijiu by small tank fermentation

由圖6可知，加入菌株SDA3強化大曲釀造的白酒中乳酸乙酯、正丁醇、β-石竹烯增加明顯，分別增加了167.83 mg/L、30.31 mg/L、11.00 mg/L，其中BCP含量從13.65 mg/L增加到了24.65 mg/L，該結(jié)果表明在酒的發(fā)酵過程中加入強化大曲可以增加酒體的香氣成分，從而提高了白酒的品質(zhì)。

3 結(jié)論

本研究中清香型白酒中BCP的質(zhì)量濃度約為0.02 g/L，大曲中的BCP相對含量為0.85%，從大曲中篩選出在發(fā)酵過程中可產(chǎn)生BCP的菌株編號為菌株SDA3，其麩曲中BCP相對含量為1.04%，其被鑒定為戴爾根霉（Rhizopus delemar），麩曲中BCP最佳提取條件如下：提取溶劑為無水乙醇、提取時間為2 h，采用GC內(nèi)標(biāo)法進行定量分析，內(nèi)標(biāo)物為十二烷。在此優(yōu)化條件下，BCP質(zhì)量濃度可達到37.98 mg/L，經(jīng)過小壇發(fā)酵應(yīng)用，BCP含量可從13.65 mg/L增加至24.65 mg/L。

本研究可為白酒風(fēng)味成分BCP的產(chǎn)生途徑提供理論依據(jù)，后續(xù)可應(yīng)用于白酒擴大生產(chǎn)過程中，以增強白酒香氣及其品質(zhì)。另外在增強稀有植物天然化合物的產(chǎn)量上也可以提供一定貢獻，利用微生物有針對性地合成天然植物化合物，Rhizopus delemar可以通過微生物發(fā)酵提供一條BCP定向合成和規(guī)?；a(chǎn)的新路徑，可以顯著增強稀有植物天然化合物的產(chǎn)量。