化痰通脈飲干預(yù)多囊卵巢綜合征大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的機制研究

廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023

多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)是一種發(fā)病多因性，臨床表現(xiàn)多態(tài)性(閉經(jīng)或月經(jīng)稀少、卵巢多囊改變、不孕、多毛、肥胖及黑棘皮征)的綜合征，其內(nèi)分泌學(xué)特征包括高雄激素、高黃體生成激素、高胰島素及胰島素，其發(fā)病率約占育齡婦女的6.6%～6.8%，其中約有50%～60%的PCOS患者伴有胰島素抵抗(insulinresistance，IR)，而胰島素抵抗在普通人群中IR的發(fā)病率僅為10%～25%，說明PCOS和 IR的發(fā)病具有極大的關(guān)聯(lián)性[1-2]。同時，與IR相關(guān)的脂質(zhì)代謝紊亂會增加PCOS患者動脈粥樣硬化、冠心病的風(fēng)險并誘導(dǎo)其他遠期并發(fā)癥的出現(xiàn)。中醫(yī)認為，痰濕阻滯會導(dǎo)致PCOS患者發(fā)生肥胖、痤瘡和不孕，同時痰濕阻滯氣血運行不暢則會引起血瘀，則導(dǎo)至閉經(jīng)、月經(jīng)稀發(fā)、月經(jīng)過少、不孕等癥[3]。

化痰通脈飲為本課題組臨床治療PCOS的經(jīng)驗方，由半夏、蒼術(shù)、白術(shù)、茯苓、雞血藤、當歸、丹參、桃仁、澤蘭、瓦楞子、陳皮、川芎和香附組成，具有燥濕化痰，活血化瘀，理氣調(diào)經(jīng)之功效[4]。根據(jù)臨床觀察及初步臨床研究表明該方具有改善PCOS臨床癥狀、胰島素抵抗調(diào)整脂質(zhì)代謝紊亂的作用。然而，截至目前，化痰通脈飲改善脂質(zhì)代謝紊亂的作用機制研究還未見報道，基于此，本研究通過制作PCOS大鼠模型，分析化痰通脈飲對模型大鼠的胰島素抵抗及脂質(zhì)代謝紊亂的治療作用，佐證化痰祛瘀同治法的治療作用，為臨床治療多囊卵巢綜合征提供科學(xué)的證據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物 選用8周齡SPF級雌性SD大鼠共48只(180～220 g)，均購置于廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心(許可證號：SCXK-20140002)。飼養(yǎng)期間給予充足的食物和濃度為5 %的葡萄糖飲水，室溫22±3℃，濕度為(50±15)%，每天給予 12 h(06:00～18:00)的周期性光照。

1.2 藥材和試劑 化痰通脈飲所用藥材：陳皮、茯苓、香附、蒼術(shù)、瓦楞子、當歸、雞血藤、丹參、澤蘭、川芎、桃仁和法半夏購置于南寧生源中藥飲片有限公司。經(jīng)廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院莫長明副研究員鑒定，半夏為天南星科植物半夏Pinelliaternata的干燥塊莖；蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea的干燥根莖；白術(shù)為菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoid.的干燥根莖；茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos的干燥菌核；雞血藤為豆科植物密花豆SpatholobussuberectusDunn的干燥藤莖；當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis的干燥根；丹參為唇形科植物丹參Salviamiltiorrhiza的干燥根；桃仁為薔薇科植物桃Prunuspersica的干燥成熟種子；澤蘭為唇形科植物毛葉地瓜兒苗LycopiHerba的干燥地上部分；瓦楞子為蚶科動物毛蚶ArcasubcrenataLischke的貝殼；陳皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮；川芎為傘形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort的干燥根；香附為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖。鹽酸二甲雙胍片(批號：1207097，中美上海施貴寶制藥有限公司)；注射用絨促性素(批號：1504012，馬鞍山豐源制藥公司)；精蛋白生物合成人胰島素注射液(批號：150541，丹麥諾和諾德公司)；大鼠胰島素(INS)試劑盒(批號：20160331，南京建成生物工程研究所)。

2 方法

2.1 藥材的提取 提取方法參考廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房已經(jīng)在臨床上取得療效的提取工藝，半夏15 g,蒼術(shù)15 g,白術(shù)15 g,茯苓20 g,雞血藤20 g,當歸10 g,丹參15 g,桃仁10 g,澤蘭15 g,瓦楞子10 g,陳皮6 g,川芎10 g,香附15 g。上藥加6倍水浸泡2 h，回流提取1 h濾過，所得藥渣以同法再提取1次，合并濾液，濃縮至4.8 g/mL的生藥提取液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 動物分組及造模方法 所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后被隨機分為對照組、模型組、陽性對照組和化痰通脈飲低(L-HTY)、中(M-HTY)、高劑量(H-HTY)組，每組8只。除對照組外，其余5組采用“胰島素(INS)聯(lián)合HCG誘導(dǎo)大鼠PCOS模型”[5]的造模方案，給予高脂飼料、葡萄糖水(50 g/L)飲用，第1～10天每晚腹部皮下注射精蛋白鋅重組人胰島素注射液，劑量由0.5 IU起始并逐漸遞增(每日增加0.5 IU)至5.0 IU，第11～22天每晚腹部皮下注射精蛋白鋅重組人胰島素注射液 6.0 IU，同時給予HCG 3.0 IU(溶于0.2 mL生理鹽水)股內(nèi)側(cè)皮下注射，每天早晚各1次。對照組給予普通飼料和飲用水，第1～10天每晚腹部皮下注射0.2 mL生理鹽水，第11～22天，每天早晚各增加注射1次0.2 mL生理鹽水。第22天后，各組均停止注射；模型組停止給予50 g/L葡萄糖水，改為普通飲用水。模型成功標志為：與正常組比較，PCOS模型組大鼠卵巢表面較蒼白，體積增大。鏡下見卵泡擴張，卵母細胞或放射冠消失，顆粒細胞層數(shù)減少至2～3層，部分卵泡閉鎖，無或僅見少量黃體形成鑒定為造模成功。造模成功后，HTY各個劑量組(低中高劑量組分別為8、16和24 g/kg/d)連續(xù)灌胃21 d，停用1天，再用藥21 d。陽性對照組給予灌胃二甲雙胍(156.25 g/kg/d)，模型組和對照組給予蒸餾水，同法灌胃。

2.3 觀察指標及方法

2.3.1 大鼠體重測量 分別于造模前和造模結(jié)束后，用電子天平測量大鼠體重。

2.3.2 大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指標的檢測 末次給藥后，各組大鼠治療前禁食12 h，腹主動脈取血，3 000 r/min 離心10 min分離血清，存儲于-80 ℃?zhèn)溆?。ELISA 檢測血清胰島素(INS)，生化檢測高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)。

3 結(jié)果

3.1 化痰通脈飲對PCOS大鼠體重的影響 造模前各組大鼠體重相當，各組大鼠間體重沒有顯著差異，造模過程中，PCOS大鼠發(fā)胖，體重明顯增加，模型組與空白組比較具有高度顯著差異(P<0.01)；化痰通脈飲中、高劑量組均能從不同程度上減少PCOS大鼠的體重增加(P<0.01、P<0.05)。結(jié)果見表1。

組別劑量體重/g給藥前給藥后Control0217.17±10.80239.99±12.63**Model0217.04±13.79264.21±15.60Positive156.25mg·kg-1·d-1223.14±11.07252.57±14.14L-HTY8g·kg-1·d-1217.34±11.11261.25±24.24M-HTY16g·kg-1·d-1219.92±14.02246.37±15.09*H-HTY24g·kg-1·d-1216.90±14.18248.28±10.51*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 化痰通脈飲對大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指標的影響 結(jié)果表明，與對照組相比，PCOS大鼠血液中LDC-C、TG和INS水平顯著上升(P<0.01～0.05)；HDL-C顯著下降(P<0.01)。二甲雙胍和化痰通脈飲各個劑量組均能不同程度的改善PCOS大鼠HDL-C和TG水平的紊亂，且化痰通脈飲高劑量組能降低PCOS大鼠的胰島素水平。結(jié)果見表2。

組別HDL-CLDL-CTGINSControl1.52±0.14**0.12±0.05*0.41±0.21*17.67±1.25*Mondel1.14±0.130.21±0.050.62±0.0519.25±1.44Postive1.39±0.17*0.24±0.060.53±0.06*17.16±2.80L-HTY1.14±0.140.26±0.140.47±0.05**17.98±0.28M-HTY1.49±0.09**0.23±0.080.46±0.06**18.35±0.72H-HTY1.35±0.20*0.21±0.050.62±0.2015.60±1.63*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

多囊卵巢綜合征常于青春期后發(fā)病，表現(xiàn)為卵泡膜細胞良性增生引起的雄激素生成過多造成月經(jīng)紊亂、持續(xù)排卵障礙、卵巢多囊樣變及高雄激素血癥等。然而PCOS的病理生理機制復(fù)雜，至今仍未清楚[6]。目前，大量實驗證實胰島素抵抗(IR)與PCOS的發(fā)病機制關(guān)系最為密切，胰島素水平上升導(dǎo)致卵巢分泌過多的雄激素，并使其轉(zhuǎn)化為二氫睪酮，進一步引起卵泡刺激素(FSH)-顆粒細胞軸功能低下，導(dǎo)致大量卵泡發(fā)育而無優(yōu)勢卵泡形成。此外，高雄激素血癥還會導(dǎo)致PCOS患者體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，是導(dǎo)致動脈粥樣硬化和高血壓等心血管疾病的危險因素[7- 8]。因此，治療胰島素抵抗并調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂可以調(diào)節(jié)多囊卵巢綜合癥并預(yù)防后續(xù)心血管并發(fā)癥的發(fā)生。

祖國醫(yī)學(xué)沒有與多囊卵巢綜合征相應(yīng)的病名，常將其歸于“月經(jīng)后期”、“月經(jīng)過少”、“ 閉經(jīng)”、“ 癥瘕”、“不孕” 等范疇。本課題組前期研究表明，痰濕阻滯是多囊卵巢綜合征患者的重要病理基礎(chǔ)，會導(dǎo)致肥胖，痤瘡，不孕的發(fā)生[9]。臨床研究表明，痰濕阻滯證型患者存在糖脂代謝紊亂，胰島素敏感指數(shù)下降，表明糖脂代謝紊亂、胰島素抵抗是臨床痰證患者重要的病理生理學(xué)基礎(chǔ)[3, 10]?；低}飲方中半夏燥濕化痰，為治痰濕之要藥，能治經(jīng)絡(luò)四肢、皮里膜外之痰；白術(shù)健脾燥濕，中焦運化；蒼術(shù)醒脾助運，開郁寬中，疏化水濕；蒼術(shù)、白術(shù)相須為用，健脾燥濕，改善痰證患者體質(zhì)。茯苓健脾利濕；當歸、雞血藤養(yǎng)血活血；丹參活血調(diào)經(jīng)；桃仁活血祛瘀；澤蘭既能活血化瘀，又能行水；瓦楞子消痰化瘀，軟堅散結(jié)；陳皮理氣燥濕；川芎活血祛瘀，行氣開郁；香附理氣解郁調(diào)經(jīng)。諸藥相和，共奏健脾化痰、活血調(diào)經(jīng)之功效。

肥胖是多囊卵巢綜合征的常見的四大癥之一，肥胖主要表現(xiàn)為機體脂肪組織的堆積，其不僅會降低性激素結(jié)合球蛋白水平，還會促進雄激素與胰島素的分泌，加劇IR[11]，而高濃度的雄激素、胰島素水平又會進一步導(dǎo)致脂肪分布異常。因此，控制肥胖和腰臀比對于PCOS患者具有積極的意義，其不但能減輕月經(jīng)紊亂、多毛和痤瘡等癥狀，還能誘發(fā)排卵并改善妊娠結(jié)果，同時能減少其遠期疾病如糖尿病、高血壓和冠心病的發(fā)生[12]。本研究中，PCOS模型大鼠的體重明顯高于對照組，而化痰通脈飲中、高劑量均能在不同程度上顯著降低模型大鼠體重。

血脂代謝異常是 PCOS 患者的臨床表現(xiàn)之一，主要表現(xiàn)為外周血中 TG 及 LDL 水平的上升，HDL的下降，相關(guān)分析表明，提示 IR、高胰島素血癥是PCOS血脂異常的重要原因[13]。HDL-C含量與動脈管腔狹窄程度呈顯著的負相關(guān)，對血管起保護作用，其能清除血管脂質(zhì), 是血管保護因子。LDL-C是動脈粥樣硬化脂蛋白(AS)，容易沉淀于AS的斑塊中。高濃度的甘油三酯水平可增加 PCOS 患者患動脈粥樣硬化和冠心病的風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示，化痰通脈飲高劑量可以顯著降低PCOS模型大鼠INS水平，同時，各個劑量組均能調(diào)節(jié)TG和HDL-C水平的紊亂。說明了化痰通脈飲可以改善PCOS發(fā)病過程中胰島素抵抗，并提高脂質(zhì)代謝能力，同時降低PCOS患者遠期心血管病的危險性。

本研究通過建立PCOS大鼠模型，分析了化痰通脈飲對模型大鼠的胰島素抵抗及脂質(zhì)代謝紊亂的治療作用，佐證化痰祛瘀同治法的治療作用，為多囊卵巢綜合征的臨床治療提供科學(xué)的依據(jù)。