規(guī)模化豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒3型的檢疫及防控

方 勇

安徽省黃山市祁門縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì),安徽 祁門 245600

0 引言

隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展以及規(guī)模化養(yǎng)殖的普及,豬群中病毒病的發(fā)生率也逐漸增加,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)和獸醫(yī)衛(wèi)生工作帶來(lái)了較大的挑戰(zhàn)。其中豬圓環(huán)病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是一種新型病毒,近年來(lái)在全球范圍內(nèi)不斷發(fā)生,并廣泛感染家豬。PCV3病毒是一種DNA病毒,對(duì)豬的免疫系統(tǒng)和器官組織均有影響,表現(xiàn)為呼吸道和泌尿生殖系統(tǒng)疾病,其主要病征為出現(xiàn)瘀斑,嚴(yán)重時(shí)可使染病豬群死亡率高達(dá)50%。因此,對(duì)PCV3病毒進(jìn)行精準(zhǔn)檢疫和有效控制,對(duì)于保障養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和豬群健康至關(guān)重要。本文詳細(xì)介紹了規(guī)模化豬場(chǎng)中PCV3病毒檢疫方法,包括血清學(xué)檢測(cè)、RT-PCR和測(cè)序技術(shù)及其優(yōu)缺點(diǎn);提出了規(guī)?；i場(chǎng)管理和控制該病毒的建議,包括加強(qiáng)衛(wèi)生管理、建立監(jiān)測(cè)體系,加強(qiáng)病源追溯等多方面措施。這些措施可以減小PCV3病毒對(duì)豬群健康的影響,提高豬群產(chǎn)能并保障養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

1 PCV3病毒性質(zhì)及其危害

PCV3病毒是一種DNA病毒,屬于圓環(huán)病毒科,是近年來(lái)才被發(fā)現(xiàn)的一種新型病毒[1]。

PCV3病毒是一種嚴(yán)重的病原體,對(duì)豬的健康和生產(chǎn)都有較大的影響。它可以引起豬的多種疾病,包括肉眼可見(jiàn)的皮膚、內(nèi)臟、神經(jīng)、泌尿生殖、循環(huán)和免疫系統(tǒng)損害等。PCV3病毒可引起瘀斑、水泡、結(jié)塊、水腫等不同嚴(yán)重程度的皮膚病變,尤其是在不注意通風(fēng)的高密度飼養(yǎng)環(huán)境中更容易出現(xiàn)。如果發(fā)病程度較輕,會(huì)影響豬部分皮膚的光澤度和外觀整體程度。如果發(fā)病程度過(guò)重,瘀斑將會(huì)產(chǎn)生大量的氣體,這些氣體對(duì)于豬的健康也具有威脅性。PCV3病毒還會(huì)對(duì)豬的內(nèi)臟器官造成損害,例如感染肝膿腫、淋巴結(jié)炎、肺炎等疾病。由于內(nèi)臟器官是豬的核心體征之一,此類感染容易使豬免疫系統(tǒng)功能下降,影響豬的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖能力。PCV3病毒感染后,可引起豬的神經(jīng)系統(tǒng)受損,出現(xiàn)疼痛、畏寒、癱瘓等現(xiàn)象。在疫情高發(fā)期,神經(jīng)系統(tǒng)受損的豬更易長(zhǎng)時(shí)間處于十分危險(xiǎn)的狀態(tài),如果沒(méi)有及時(shí)進(jìn)行診療,極易出現(xiàn)死亡[2]。PCV3病毒感染后,也會(huì)對(duì)豬的免疫系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)造成影響。

2 規(guī)模化豬場(chǎng)中PCV3病毒檢疫方法

2.1 血清學(xué)檢測(cè)

血清學(xué)檢測(cè)是一種常用的間接檢測(cè)PCV3病毒感染的方法。該方法主要通過(guò)檢測(cè)豬血清中的抗體反應(yīng)來(lái)判斷豬是否感染了PCV3病毒。血清學(xué)檢測(cè)快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì),適用于大規(guī)模群體中的PCV3病毒檢測(cè)工作。血清學(xué)檢測(cè)主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和凝集試驗(yàn)法(SN)2種方法。ELISA法是常用的檢測(cè)血清樣品中PCV3病毒抗體的方法。這種方法相比其他檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì),適用于高通量、高效率的大規(guī)模豬場(chǎng)中PCV3病毒檢測(cè)。ELISA法主要分為間接ELISA法和競(jìng)爭(zhēng)ELISA法2種。間接ELISA法是采用PCV3病毒封閉抗原固定在微孔板上,然后在經(jīng)過(guò)適當(dāng)濃度的豬血清樣品中進(jìn)行血清樣品的抗原-抗體反應(yīng),再用特定的二抗檢測(cè)豬抗體-IgG或-IgM特異性的結(jié)合蛋白,以多克隆抗體標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP-I)。血清標(biāo)本中的PCV3病毒抗體可以與固定的抗原結(jié)合,結(jié)合antibo固定在微孔板中,一旦受到特異性HRP抗體的檢測(cè),樣本就會(huì)顯現(xiàn)出HRP顏色反應(yīng)。此時(shí)通過(guò)測(cè)定反應(yīng)物和底物的顏色強(qiáng)度即可確定血清中的抗體消耗情況,從而判斷豬是否感染PCV3病毒。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA法旨在檢測(cè)豬血清中的特異性IgG抗體。在ELISA法中,在線性范圍內(nèi)添加標(biāo)準(zhǔn)化PCV3抗原和待檢測(cè)樣板血清,神經(jīng)投放特異性抗體標(biāo)記的酶標(biāo)記IgG。此時(shí),當(dāng)血清樣品中存在特異性IgG抗體時(shí),它將會(huì)和已經(jīng)在板中固定的PCV3抗原競(jìng)爭(zhēng)IgG酶標(biāo)記結(jié)合。

2.2 RT-PCR檢測(cè)

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)是目前最為常用的直接檢測(cè)PCV3病毒的方法之一。RT-PCR技術(shù)主要通過(guò)從豬組織或血清樣品中提取病毒RNA/DNA,使用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。這種方法具有靈敏度高、特異性好、反應(yīng)迅速等優(yōu)點(diǎn),在PCV3病毒檢測(cè)中有著廣泛的應(yīng)用。樣品處理是RT-PCR檢測(cè)的第1步,主要包括樣品的收集和處理。首先,需要選擇合適的樣品,其中豬血清是最為常見(jiàn)的樣品類型之一。此外,還可以選擇從肺、肝、脾等組織中提取RNA/DNA作為樣品,從而檢測(cè)病原體的存在與否。在樣品處理過(guò)程中,需要遵循規(guī)范的樣品處理流程,以確保樣品質(zhì)量符合要求。RNA/DNA提取是RT-PCR檢測(cè)的關(guān)鍵步驟。在提取過(guò)程中,可以使用各種提取試劑盒或基因組提取儀進(jìn)行,一般而言,RNA提取的方法比DNA提取的方法更加繁瑣。分析結(jié)果是RT-PCR檢測(cè)的最后一步。在進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增后,需要對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定和分析[3]。

2.3 測(cè)序技術(shù)

測(cè)序技術(shù)是檢測(cè)PCV3病毒的重要方法之一,它用于解析病毒的DNA或RNA序列,分析病毒的類型、特點(diǎn)和變異,有助于了解病毒的生物學(xué)特性,為病毒疫苗研發(fā)、藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)。 測(cè)序技術(shù)主要分為3個(gè)步驟:PCR擴(kuò)增、純化、測(cè)序。PCR擴(kuò)增是測(cè)序技術(shù)中最核心的一步,它主要是通過(guò)酶的功能,在特定的條件下,從病毒樣本中放大特定區(qū)域的DNA或RNA片段。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中,需要使用特異性的引物和其他試劑,引物需要特異性好、較長(zhǎng),并且具有一定的范圍性,從而可以擴(kuò)增出所需要的DNA或RNA片段。通過(guò)PCR擴(kuò)增得到DNA或RNA片段后,當(dāng)需要進(jìn)行測(cè)序時(shí),應(yīng)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化處理,以去除其他雜質(zhì),確保樣品純度,從而得到可靠性高的測(cè)序數(shù)據(jù)。純化方法包括凝膠切割、基于柱的純化等。PCR產(chǎn)物純化后,可采用測(cè)序方法進(jìn)行病毒儲(chǔ)存庫(kù)測(cè)序,隨后通過(guò)測(cè)序儀對(duì)經(jīng)過(guò)純化處理的PCR獲得的DNA或RNA片段進(jìn)行測(cè)序,從而得到具體的DNA或RNA序列數(shù)據(jù)[4]。

3 規(guī)?；i場(chǎng)防控措施

3.1 加強(qiáng)規(guī)?；i場(chǎng)衛(wèi)生管理

加強(qiáng)規(guī)?；i場(chǎng)衛(wèi)生管理是控制PCV3病毒的重要措施之一。從入場(chǎng)前管理、日常管理、消毒等幾個(gè)方面介紹。入場(chǎng)前管理是防止PCV3病毒登場(chǎng)的重要前提。具體而言,豬入場(chǎng)前需要對(duì)購(gòu)進(jìn)豬場(chǎng)的情況進(jìn)行全面了解,包括檢查豬的身體狀況、自然病死情況、疫苗接種情況等,確保入場(chǎng)豬源安全可靠。同時(shí),在入場(chǎng)前也需要進(jìn)行衛(wèi)生檢查,對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行清潔消毒。此外,還可以采取篩選、檢測(cè)等措施,及時(shí)發(fā)現(xiàn)入場(chǎng)豬的病毒感染狀況,防止病毒擴(kuò)散。規(guī)范的日常管理是預(yù)防和控制PCV3病毒傳播的重要手段。具體而言,需要加強(qiáng)飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生管理,包括保持飼料、水、飲水系統(tǒng)及飼料生產(chǎn)加工環(huán)境的衛(wèi)生,保持飼養(yǎng)場(chǎng)的通風(fēng)良好,避免濕度過(guò)高或過(guò)低,以及定期清理雜物,及時(shí)處理糞便。另外,還需要保持適當(dāng)?shù)娘曫B(yǎng)密度,減少豬生病的概率。消毒是控制PCV3病毒傳播的重要手段之一。對(duì)于規(guī)模化豬場(chǎng),消毒工作尤其關(guān)鍵,在進(jìn)行消毒工作時(shí),需要對(duì)不同區(qū)域和設(shè)施進(jìn)行區(qū)分,采用不同的消毒方式。

3.2 建立PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系

建立PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系是預(yù)防和控制PCV3病毒傳播的重要舉措,也是保障豬場(chǎng)安全穩(wěn)定運(yùn)行的必要措施。監(jiān)測(cè)內(nèi)容是PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系的基礎(chǔ)和核心。主要包括PCV3病毒的檢測(cè)、分型,以及擴(kuò)散狀況和相關(guān)因素等。具體而言,需要對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)的豬及與豬場(chǎng)有關(guān)的物品、環(huán)境等進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè),發(fā)現(xiàn)異常情況即時(shí)報(bào)告和處理。監(jiān)測(cè)方法是PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系的技術(shù)支撐和保障。建立PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系需要綜合運(yùn)用多種監(jiān)測(cè)手段,包括定量PCR、RT-PCR、測(cè)序技術(shù)等。此外,還可以在豬場(chǎng)內(nèi)設(shè)置監(jiān)測(cè)設(shè)備,通過(guò)對(duì)空氣中的病毒或顆粒物進(jìn)行監(jiān)測(cè)。但無(wú)論使用哪種監(jiān)測(cè)方法,均需嚴(yán)格按照監(jiān)測(cè)程序執(zhí)行,確保監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。監(jiān)測(cè)頻率是PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系的重要組成部分。一般情況下,建議定期對(duì)豬場(chǎng)的環(huán)境、設(shè)施等進(jìn)行監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)時(shí)間間隔一般為1個(gè)月。針對(duì)特殊情況,如發(fā)現(xiàn)疫情暴發(fā)或者疑似情況,則需要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)頻率,及時(shí)判斷病毒傳播狀態(tài),并及時(shí)采取防疫措施。建立檔案是PCV3病毒監(jiān)測(cè)體系的必要步驟,需要將監(jiān)測(cè)記錄、監(jiān)測(cè)結(jié)果、監(jiān)測(cè)時(shí)間等信息進(jìn)行統(tǒng)一記錄和歸檔。此外,還需針對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)論和不同防疫措施進(jìn)行完整的分析和總結(jié),為后續(xù)的防疫措施提供支撐[5]。

3.3 加強(qiáng)病源溯源和追溯工作

加強(qiáng)病源溯源和追溯工作是關(guān)鍵措施。溯源和追溯工作需要建立完善的信息平臺(tái)和樣本庫(kù),收集相關(guān)病例信息和各類病毒樣本,以便快速發(fā)現(xiàn)病源,控制疫情的發(fā)展。病源溯源和追溯工作過(guò)程應(yīng)注重合作與協(xié)調(diào),建立合理的聯(lián)合工作機(jī)制,加強(qiáng)部門間溝通和信息共享,整合各方力量,形成合力,縮短病源溯源追溯時(shí)間。具體措施如下。

1)建立全國(guó)性的PCV3病毒樣品及信息庫(kù),對(duì)相關(guān)管理信息、樣品、物品、人員進(jìn)行管理并及時(shí)更新。

2)加強(qiáng)全行業(yè)的防控教育宣傳,以養(yǎng)殖場(chǎng)為主要宣傳對(duì)象,宣傳疫情相關(guān)知識(shí)。

3)開(kāi)展全行業(yè)的實(shí)驗(yàn)室診斷服務(wù),對(duì)生豬行業(yè)生產(chǎn)主體出現(xiàn)的PCV3病毒疑似或確診病例開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室診斷,加強(qiáng)PCV3病毒的病例管理。

4)加強(qiáng)進(jìn)口生豬防疫措施,對(duì)進(jìn)口生豬全面篩查,加強(qiáng)進(jìn)口生豬檢疫,確保生豬產(chǎn)品安全。

5)加強(qiáng)獸醫(yī)防疫隊(duì)伍建設(shè),開(kāi)展疫情應(yīng)急救援行動(dòng),做好疫情防控和應(yīng)急處置工作,提高溯源和追溯的效率。

6)引進(jìn)先進(jìn)技術(shù),例如基因測(cè)序和病毒檢測(cè)技術(shù),對(duì)PCV3病毒進(jìn)行檢測(cè)和溯源工作,為及時(shí)應(yīng)對(duì)病源提供科學(xué)依據(jù)。

3.4 完善規(guī)?；i場(chǎng)防疫制度及應(yīng)急處理機(jī)制

規(guī)?；i場(chǎng)應(yīng)落實(shí)防疫責(zé)任人員并制定完備的防疫制度,必須建立可行的監(jiān)測(cè)、檢測(cè)、隔離、消毒等多種防疫措施,以有效防止PCV3病毒的傳播,及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情并對(duì)患病豬進(jìn)行隔離處理。完善應(yīng)急預(yù)案是應(yīng)對(duì)PCV3病毒的必要手段,制定應(yīng)急預(yù)案的前提是開(kāi)展科學(xué)的排查和全面準(zhǔn)確的評(píng)估,基于實(shí)際疫情和現(xiàn)場(chǎng)情況制定應(yīng)急預(yù)案。應(yīng)急預(yù)案應(yīng)包括如何封鎖和隔離病毒的具體措施以及如何進(jìn)行安全處置等內(nèi)容,這樣一旦發(fā)生疫情,豬場(chǎng)就可以迅速采取行動(dòng),控制擴(kuò)散并減小對(duì)規(guī)模化豬場(chǎng)的影響。應(yīng)急預(yù)案還需要提高應(yīng)急響應(yīng)的協(xié)調(diào)和指揮效率,確保行動(dòng)有序、及時(shí)和有效進(jìn)行。

4 結(jié)束語(yǔ)

采取規(guī)范的防控措施是控制PCV3病毒傳播的前提,規(guī)?；i場(chǎng)應(yīng)嚴(yán)格落實(shí)防疫責(zé)任人員和制定完備的防疫制度,建立科學(xué)的防控措施,有效防止疫情的傳播和擴(kuò)散。完善應(yīng)急預(yù)案是應(yīng)對(duì)PCV3病毒疫情的必要手段,系統(tǒng)制定應(yīng)急預(yù)案,在發(fā)生疫情時(shí)可以迅速采取行動(dòng),控制擴(kuò)散,減小疫情對(duì)規(guī)?；i場(chǎng)的影響。健全監(jiān)管制度也是完善應(yīng)急處理機(jī)制的重要方面,加強(qiáng)對(duì)規(guī)?；i場(chǎng)疫情的監(jiān)督和管理,建立健全疫情報(bào)告制度和應(yīng)急考核機(jī)制等。通過(guò)加強(qiáng)病源溯源和追溯工作、規(guī)范防控、完善應(yīng)急預(yù)案、健全監(jiān)管制度等有效措施,可保障規(guī)?；i場(chǎng)的生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)安全,提高規(guī)?；i場(chǎng)應(yīng)對(duì)PCV3病毒的能力,促進(jìn)生豬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。