阿壩2023年包蟲病檢測結果分析與防控建議

何 苗,羅昌俊,胡 毅,任云芳

阿壩藏族羌族自治州動物疫病預防控制中心,四川 馬爾康 624000

0 引言

包蟲病又稱棘球蚴病(echinococcosis),棘球屬絳蟲,成蟲體長2～7 mm,扁平帶狀,幼蟲是棘球屬絳蟲的傳染階段,也被稱為囊蚴(hydatidcyst),棘球屬絳蟲包含中間宿主和終末宿主,囊蚴在中間宿主體內(nèi)形成并寄生[1]。包蟲病主要有2種類型,分別為由細粒棘球絳蟲(Echinococcusgranulosus)引起的囊型棘球蚴病和由多房棘球絳蟲引起的泡型棘球幼病[2]。棘球幼體積大、活力強,常寄生于動物的肝、肺、脾以及其他器官,造成其功能障礙和萎縮。人食用被寄生的肉制品而導致感染。棘球絳蟲成蟲寄生于犬科食肉動物[3-4],幼蟲(棘球蚴)寄生于人和多種食草類家畜及其他動物,羊包蟲病的主要傳染源是感染了絳蟲的犬,羊包蟲病對羊和其他哺乳動物均具有潛在感染的風險[1]。阿壩藏族羌族自治州農(nóng)牧民分布較為廣泛,牛羊散養(yǎng),加上鄉(xiāng)鎮(zhèn)居民對犬只的管理還有待完善,是包蟲病高發(fā)地區(qū)。本文基于2023年8月阿壩藏族羌族自治州動物疫病預防控制中心實驗室采集的全州13個縣(市)的樣本結果進行分析,并給出包蟲病的防控建議。

1 樣本采集

1.1 犬糞采集

使用無菌離心管從阿壩13個縣(市)中按照每個縣(市)200份隨機采集犬只糞便樣本,并于-80 ℃超低溫冰柜中凍存至少7 d以上,以確保樣本中病原被滅活。

1.2 羊血清采集

使用無菌離心管從阿壩13個縣(市)中按照每個縣(市)100份隨機采集羊血,并分離血清,-20 ℃低溫保存待用。

2 實驗方法

2.1 犬糞包蟲抗原ELISA檢測實驗方法

本次實驗使用犬糞包蟲抗原試劑盒,實驗前將待檢樣本取出,放置常溫,配備洗滌液,使用蒸餾水或去離子水按照1：10稀釋;配備樣品稀釋液,用蒸餾水或去離子水與樣品稀釋液按照1：1稀釋;取1 g犬糞加入1 mL工作濃度樣品稀釋液,充分攪拌混勻,靜置10 min,再3 000 rpm離心10 min,取上清待檢;在板上加入待檢樣本、陰性對照孔、陽性對照孔各100 μL,蓋膜37 ℃避光反應30 min,反應結束后洗板6次;每孔各加入酶100 μL,蓋膜37 ℃避光反應30 min,反應結束后洗板6次;洗板結束后每孔加入等體積的底物液與顯色液混合液100 μL,蓋膜37 ℃避光反應10 min;反應結束后每孔加入終止液50 μL,用酶標儀雙波長450 nm主波長,630 nm參比波長讀取OD值。

2.2 羊包蟲病抗體血清ELISA檢測實驗方法

實驗使用羊包蟲Eg95免疫抗體檢測試劑盒,實驗前將待檢樣本取出,放置常溫,配備洗滌液,用蒸餾水或去離子水按照1：10稀釋;稀釋待檢血清,按照1：100稀釋;然后在板中加入原液陰性對照、原液陽性對照及待檢樣本各100 μL,蓋膜37 ℃避光反應30 min;反應結束后洗板3次,再每孔加入酶100 μL,蓋膜37 ℃避光反應30 min,反應結束后重復洗板3次;拍干后每孔加入等體積的底物液與顯色液混合液100 μL,蓋膜37 ℃避光反應10 min;反應結束后每孔加入終止液50 μL,用酶標儀雙波長450 nm主波長,630 nm參比波長讀取OD值。

3 結果與分析

3.1 犬糞包蟲抗原檢測結果判定

本次實驗,犬糞包蟲抗原檢測有效樣本數(shù)量為2 119份,陽性數(shù)56份,犬糞包蟲陽性率2.64%。如圖1所示,阿壩藏族羌族自治州13個縣(市)2023年犬糞包蟲抗原檢測結果陽性率均控制在5%以下。

圖1 13個縣市2023年犬糞包蟲抗原檢測結果

3.2 羊包蟲血清抗體檢測結果判定

本次實驗,羊包蟲血清抗體檢測有效樣本數(shù)量為542份,陽性數(shù)505份,羊包蟲血清抗體保護率93.17%。如圖2所示,阿壩藏族羌族自治州13個縣(市)2023年羊包蟲血清抗體檢測結果排除阿壩縣與小金縣有效樣本為0,其余縣(市)保護率除理縣外,均在95%以上。

圖2 阿壩藏族羌族自治州2023年羊包蟲血清抗體檢測結果

3.3 分析

3.3.1 犬糞包蟲抗原檢測結果

根據(jù)結果分析,壤塘縣陽性率最高,其次為阿壩縣、松潘縣。壤塘縣為草地縣,據(jù)壤塘縣人口普查數(shù)據(jù),2023年壤塘縣常駐人口4.5萬,管轄面積6 836 km2,人口較為稀少,當?shù)亟?jīng)濟條件發(fā)展還有待提高,對于犬只的疫苗注射、飼養(yǎng)管理等方面還有所欠缺,特別是在偏遠的高海拔地區(qū),基層動物防疫專業(yè)工作人員較為缺乏,配套設施不太齊全,這或許是造成壤塘縣犬糞包蟲病抗原陽性率較高的原因。

3.3.2 羊包蟲血清抗體檢測結果

根據(jù)結果分析,阿壩縣與小金縣本次實驗羊包蟲血清抗體檢測有效樣本數(shù)量為0,其原因為阿壩縣與小金縣在本次實驗中與其他縣(市)樣本混淆,無法辨認,導致此次實驗阿壩縣、小金縣有效樣本數(shù)量為0。理縣羊包蟲血清抗體保護率偏低,可能是因為當?shù)匮蛑粩?shù)量較少,養(yǎng)殖業(yè)并不發(fā)達,主要依靠農(nóng)產(chǎn)品,比如大白菜、卡子核桃等,基層動物防疫的專業(yè)工作人員對羊只的免疫重視度不夠。

4 討論

包蟲病屬于牧區(qū)的高發(fā)疾病,該病可引起懷孕母羊流產(chǎn)或不孕不育,此外還會造成羊只食欲不振,毛發(fā)雜亂、身體消瘦,如不加以干預治療,病癥嚴重后則會導致咳嗽、腹痛、呼吸困難,甚至出現(xiàn)死亡[3]。西藏自治區(qū)屬于肝包蟲的流行地區(qū),對此,肖瑤睿[5]提出專門設立流浪犬收留處,加大對屠宰方式的監(jiān)管等措施來遏制包蟲病的發(fā)生。另外,因為包蟲病屬于人畜共患病,在人醫(yī)方面,包蟲病也屬于一道難題,字金榮 等[6]對云南省北部地區(qū)6～12歲兒童進行棘球蚴病血清學流行病學調(diào)查,其結論為滇西北地區(qū)的兒童抗體陽性率高于其他地區(qū),牧區(qū)最高,此結果也側面表明包蟲病感染率牧區(qū)高于非牧區(qū)。農(nóng)民日報曾對人的包蟲病做過調(diào)查,人在感染前期無明顯癥狀,后期患病部位疼痛,肝包蟲病患者腹脹如鼓,腦包蟲患者則會發(fā)作癲癇[7]。因此,對于該病的預防,不容小覷,不僅僅是要對動物進行免疫預防,也需要做好相關人員的防護。

包蟲病的疫苗研究近年來也取得了一些成果,棘球蚴疫苗目前有4種類型：①早期棘球蚴疫苗,主要是由棘球絳蟲蟲卵、六鉤蚴分離純化的分泌物、代謝物及細胞培養(yǎng)等制成,但由于抗原成分復雜,含有多種抗原蛋白,生產(chǎn)成本高,難以進行批量生產(chǎn)。②合成肽疫苗,棘球蚴合成肽疫苗是根據(jù)棘球蚴的主要宿主保護性抗原中已知抗原表位中某段氨基酸序列,通過人工設計和合成具有免疫原性的多肽疫苗,缺點是其抗原性及免疫原性受自身組成及宿主免疫系統(tǒng)等多種因素影響,并且免疫力不能垂直傳遞。③基因工程重組疫苗,運用DNA重組技術,基因工程重組疫苗生產(chǎn)成本低、安全性好,具有一針多防等優(yōu)點。④轉基因植物疫苗,該種類型疫苗具有易運輸保存、可大規(guī)模生產(chǎn)、成本低廉、方便接種等優(yōu)點,可廣泛應用[8]。

另外根據(jù)流行病學調(diào)查,并結合本次實驗結果來看,阿壩草地縣犬糞包蟲抗原檢測結果高于其他非牧區(qū)縣市,這也可能是由于當?shù)啬撩駥游镄约膊≌J知不夠,給當?shù)貏游镆卟〉姆揽毓ぷ鲙砹艘欢ǖ淖璧K。因此,應加強動物疫病預防知識的宣傳與培訓,從多個環(huán)節(jié)做好包蟲病的防控,實現(xiàn)包蟲病的凈化。

5 防控措施

5.1 預防措施

包蟲病的防控措施主要從控制傳染源、切斷傳播途徑、保護易感動物等方面進行。

5.1.1 控制傳染源

感染棘球蚴的動物會成為傳染源,一般為犬科類動物,因為棘球蚴成蟲寄生于犬科類動物體內(nèi),因此要加強犬只管理,對于牧區(qū)犬只劃定活動范圍,遠離牛羊群。定期派專業(yè)獸醫(yī)人員對犬只進行驅蟲,定期打掃犬舍,控制犬不到可能存在絳蟲蟲卵地方逗留,并對犬糞集中進行無害化處理。

5.1.2 切斷傳播途徑

感染后動物的肝、肺等內(nèi)臟必須經(jīng)過高溫煮沸或深埋等無害化處理,不能隨意丟棄或喂食給犬只。

5.1.3 保護易感動物

在包蟲病高發(fā)地區(qū),對牛、羊經(jīng)行定期免疫。定期打掃牛、羊圈舍,禁止犬只進入,保持圈舍干燥通風,感染后的牛、羊應及時隔離。加強飼養(yǎng)管理,增強易感動物機體抵抗力。牧民應加強自我防護,遠離犬只,不飲生水,不食未煮熟食物,并應加強自身防護意識。

5.1.4 提升檢測能力

阿壩藏族羌族自治州基層獸醫(yī)人員不足,專業(yè)知識技能也較為薄弱,因此需要加大對基層獸醫(yī)人員配備力度,加大專業(yè)知識技能的培訓。包蟲病高發(fā)地區(qū)動物疾控部門應與人疾控部門加強聯(lián)系,建立監(jiān)測和報告體系,定期收集該地區(qū)相關數(shù)據(jù),以便分析當?shù)匕x病情況。阿壩藏族羌族自治州各縣(市)實驗室建設不夠完善,實驗室人員專業(yè)能力也不夠強,應加快實驗室建設,配備標準的實驗設備,加強實驗室人員的專業(yè)培訓,以便獲取準確的檢測數(shù)據(jù),更好地保護當?shù)貏游?提高當?shù)亟?jīng)濟。

5.2 治療

5.2.1 藥物治療

羊包蟲病常用藥物為吡喹酮,按體質(zhì)量50 mg/kg,1次/d,連續(xù)5 d[9]。

5.2.2 手術治療

癥狀較為嚴重的羊只,僅通過藥物治療并不能達到想要的效果,此時則需要手術治療,主要是通過肝包蟲外囊切除、肝切除、經(jīng)皮膚穿刺引流或者放射治療這4種方式[3]。

6 結束語

包蟲病的防控,不應只局限于當下,更應用長遠發(fā)展眼光,采取科學的措施。對于阿壩藏族羌族自治州這類牧區(qū)較多、包蟲病高發(fā)地區(qū),應加強獸醫(yī)專業(yè)人員的配備,改善飼養(yǎng)環(huán)境,提升農(nóng)牧民、養(yǎng)殖戶的專業(yè)技能,嚴格進行動物免疫工作。同時,加強犬只管理,對牛羊實施區(qū)域化養(yǎng)殖,從多個環(huán)節(jié)消除包蟲病的發(fā)生,保證農(nóng)牧民的經(jīng)濟收入,促使當?shù)亟?jīng)濟的發(fā)展[10]。