雞傳染性支氣管炎的診斷和控制

文│孫守峰 （山東省郯城縣紅花畜牧獸醫(yī)站）

傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus）是一種RNA病毒，其高突變率和重組率使其快速進(jìn)化，從而阻礙了對病毒分子流行病學(xué)的理解，影響了診斷分析的準(zhǔn)確性，限制了疫苗的效力，并有助于病毒的免疫逃逸。這些因素共同導(dǎo)致了家禽業(yè)面臨的疾病和經(jīng)濟(jì)損失，使之成為主要原因之一。傳染性支氣管炎病毒的診斷和控制策略在實(shí)際應(yīng)用中存在一些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，而其實(shí)施效果很大程度上取決于個體的敏感性。筆者旨在綜述這種病毒的生物學(xué)特征和進(jìn)化，重點(diǎn)介紹它們在診斷和控制方面的相關(guān)性以及潛在應(yīng)用。

一、病毒生物學(xué)和進(jìn)化

傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus）屬于禽冠狀病毒種，Gamma冠狀病毒屬，冠狀病毒科，Nidovirales目。這是一種包膜病毒，其基因組是一條約27 kb的單鏈正義RNA。病毒RNA分子具有5'端帽和3'端的poly（A）尾，這些特征使其成為翻譯和復(fù)制病毒多種蛋白的mRNA。這兩個非翻譯區(qū)在病毒復(fù)制中起著關(guān)鍵作用，與病毒復(fù)制酶和潛在的其他宿主蛋白相互作用。非結(jié)構(gòu)蛋白由兩個開放閱讀框（ORF1a和ORF1ab）編碼，通過-1核糖體移碼被翻譯成兩個多蛋白（pp1a和pp1ab），然后通過自身蛋白水解活性被切割成15個非結(jié)構(gòu)蛋白（nsp2-16）。

傳染性支氣管炎病毒的Spike（S）蛋白是其結(jié)構(gòu)蛋白中最常見的。這種跨膜蛋白以三聚體的形式組織，決定了冠狀病毒典型的冠狀形態(tài)，可以在電子顯微鏡下觀察到。S蛋白被翻譯后分裂成兩個亞單位，S1和S2，S1亞單位包含至少2個可能與宿主受體結(jié)合的結(jié)構(gòu)域?；赟1亞單位測序，傳染性支氣管炎病毒可以分為6個基因型。S2亞單位包含將S蛋白錨定在包膜上的跨膜結(jié)構(gòu)域，是病毒融合的基礎(chǔ)。S1和S2亞單位之間的相互作用可能決定了病毒附著的親和力和特異性，從而決定了病毒組織和宿主的范圍。其他表面蛋白，如膜（M）蛋白和包膜（E）蛋白，參與了病毒的形態(tài)發(fā)生和組裝。M蛋白與核衣殼（N）蛋白相互作用，N蛋白直接結(jié)合基因組RNA形成螺旋核糖核蛋白復(fù)合物。

突變是遺傳多樣性的主要來源之一，對于RNA病毒來說，其錯誤率極高，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈NA依賴的RNA聚合酶校對活性和RNA修復(fù)機(jī)制。盡管突變有助于病毒適應(yīng)環(huán)境變化，但在同一病毒顆粒中累積多個突變會降低病毒的適應(yīng)性。疫苗接種本身并不是導(dǎo)致病毒進(jìn)化的危險因素，但不科學(xué)的疫苗接種可能會導(dǎo)致問題。雖然接種疫苗會施加強(qiáng)烈的自然選擇壓力，但它也會降低病毒的復(fù)制率，減小種群規(guī)模，從而阻止了更多適應(yīng)環(huán)境變異的突變的出現(xiàn)。不適當(dāng)?shù)囊呙邕x擇以及干擾鳥類免疫反應(yīng)可能會導(dǎo)致病毒在環(huán)境中傳播，從而可能導(dǎo)致免疫逃逸變體的出現(xiàn)。目前的研究主要集中在S蛋白上，而這僅代表了傳染性支氣管炎病毒基因組不到10%的部分，因此還需要更多的研究來理解其毒力、發(fā)病機(jī)制和趨向性，這些都是多基因的。

遺傳變異的另一個關(guān)鍵來源是重組，冠狀病毒以高重組率而聞名。一項(xiàng)涉及QX和793B毒株的研究報道了4種不同的重組事件，其中意大利的重組株很少見，而西班牙的重組株是該地區(qū)的主要毒株。重組對傳染性支氣管炎病毒的分類也是一個挑戰(zhàn)。基于S1亞單位的分類雖然廣泛使用，但不能很好地反映其實(shí)際進(jìn)化史和生物學(xué)特性。

二、診斷方法

實(shí)驗(yàn)室檢測是傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus）診斷的關(guān)鍵方法，通常包括病毒分離、血清學(xué)檢測和分子檢測。

1.病毒分離。傳染性支氣管炎病毒分離是一種重要的診斷方法，特別是在首次觀察到相似體征時。病毒滴度在感染后的第一周達(dá)到峰值，因此應(yīng)盡早采集樣本。氣管組織或拭子通常是首選樣本，特別是在急性期。此外，腎和輸卵管也是合適的位置，尤其是在存在病變的情況下。雖然也可以嘗試從盲腸扁桃體和肛腸拭子中分離病毒，但病毒回收率相對較低。為了保持病毒的活力，采集的樣本應(yīng)小心保存在冰上，并迅速送往實(shí)驗(yàn)室。

2.血清學(xué)方法。血清學(xué)方法包括瓊脂凝膠沉淀（AGP）、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、病毒中和（VN）和血凝抑制（HI）。雖然瓊脂凝膠沉淀是一種快速且廉價的方法，但由于其缺乏敏感性，且主要沉淀抗體（即IgM）需要在感染后幾周后才能檢測到，因此通常不常用。ELISA試劑盒通常設(shè)計用于檢測多克隆抗體，但一些方法也采用血清型或毒株特異性的單克隆抗體。病毒中和和血凝抑制檢測可識別血清型特異性抗體，但可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，并且操作較為復(fù)雜，通常不用于常規(guī)監(jiān)測。

3.分子檢測。分子檢測是最常用的傳染性支氣管炎病毒檢測方法之一，具有高靈敏度和快速反應(yīng)時間。它通常包括基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）的方法。這些方法可以檢測病毒RNA，同時還可以通過遺傳角度表征檢測到的毒株，有助于科學(xué)控制和評估疫苗接種方案。雖然大多數(shù)分子檢測方法具有通用性，但在分析后通常需要進(jìn)一步表征，以獲得有意義的結(jié)果。此外，不同的檢測方法可能導(dǎo)致不同的結(jié)果，因此需要綜合考慮多種因素來做出準(zhǔn)確的診斷。

總的來說，傳染性支氣管炎病毒的診斷通常需要結(jié)合多種方法，根據(jù)具體情況選擇合適的檢測方法。每種方法都有其特點(diǎn)和限制，因此需要根據(jù)流行病學(xué)背景和診斷需求來制定適當(dāng)?shù)脑\斷策略。

三、控制的相關(guān)因素

控制傳染性支氣管炎病毒的首要因素是生物安全措施，它涵蓋了嚴(yán)格控制動物、人員、供應(yīng)品和廢棄物（包括糞尿）的內(nèi)部和外部流動。維持充分的空期和實(shí)施有效的消毒程序?qū)档筒《靖腥撅L(fēng)險至關(guān)重要。盡管生物安全措施是預(yù)防傳染性支氣管炎病毒傳播的關(guān)鍵，但僅憑生物安全防控通常無法單獨(dú)實(shí)現(xiàn)疾病完全的控制和預(yù)防。

疫苗接種是最有效且常用的控制手段之一。雖然疫苗不能完全預(yù)防感染，但可以減輕臨床癥狀并降低感染壓力。在肉雞中，通常使用減毒活疫苗進(jìn)行疫苗接種，這些疫苗是通過將病毒在胚胎中傳代獲得的。減毒活疫苗通常在蛋雞和種雞的早期進(jìn)行接種，然后可以接種滅活疫苗以增強(qiáng)免疫力，確保足夠的母體抗體轉(zhuǎn)移和生殖道保護(hù)。然而，在氣管部位，活疫苗在誘導(dǎo)適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)和強(qiáng)大的黏膜免疫方面更為有效。減毒疫苗成本較低，因此是最常用的疫苗類型。盡管還有其他選擇，如亞單位疫苗，但由于亞單位疫苗缺乏復(fù)制性，因此在保護(hù)方面存在一些限制，通常需要多次重復(fù)接種。

傳染性支氣管炎病毒的極端遺傳變異性對疫苗策略的可靠性產(chǎn)生了影響，因此需要根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)情況和不同毒株的特性來制定疫苗策略。已經(jīng)嘗試了多種疫苗組合，如Masslike和793B-like、Ark、Conn、DE072和GA98、QX、Q1和Var2等。最常見的組合是Mass-like和793B-like，通常也能很好地防止新的變異。

然而，不科學(xué)的接種方式，如不充分接種、過度接種和錯誤的接種時間，可能會嚴(yán)重影響動物的保護(hù)、覆蓋率、疫苗相關(guān)的毒力和疫苗場混合病毒傳播。噴霧疫苗接種是一種減少工作量同時最大化覆蓋范圍的方法，通常在孵化場或養(yǎng)殖場通過噴霧進(jìn)行。但這種方式可能導(dǎo)致疫苗病毒無法充分滲透到肺部。因此，新的疫苗和控制策略需要克服一些現(xiàn)有問題，包括成本、管理、交叉保護(hù)限制和變異毒株的出現(xiàn)。在制定控制策略時，這些問題必須被視為必要的考慮因素。