屏障環(huán)境下SPF大小鼠的飼養(yǎng)管理

王昌軍 單嬌 逄春華 劉小卓 李新 常凱

摘要：目前雖有大量文獻(xiàn)就大小鼠的飼養(yǎng)及屏障系統(tǒng)運營管理進(jìn)行討論，但較為籠統(tǒng)，對詳細(xì)的管理方法及動物飼養(yǎng)狀態(tài)記錄較少。本文根據(jù)筆者工作實際就大小鼠在屏障環(huán)境下的飼養(yǎng)管理做一簡要探討。

關(guān)鍵詞：屏障環(huán)境；大小鼠；飼養(yǎng)管理

隨著動物實驗在各類科研以及教學(xué)中的普及使用率的上升，對實驗動物的需求也在日益增長[1]，對SPF級動物需求也更為迫切。健康的實驗動物是開展動物實驗科學(xué)研究的基礎(chǔ)，保持屏障環(huán)境內(nèi)的清潔度是SPF級動物房正常運行的關(guān)鍵，目前雖有不少文獻(xiàn)就大小鼠的飼養(yǎng)及屏障系統(tǒng)運行管理進(jìn)行討論，但較為籠統(tǒng)，對詳細(xì)的管理方法及動物飼養(yǎng)狀態(tài)記錄較少。筆者在動物房工作多年，積累了豐富的工作經(jīng)驗，根據(jù)屏障環(huán)境的特點，建立了一套行之有效的屏障環(huán)境實驗室運行管理規(guī)范。本文就大小鼠在屏障環(huán)境下的飼養(yǎng)管理做一簡要探討。

1 實驗動物房基本情況

1.1 人員、物品、動物的流向

在目前屏障環(huán)境的管理中，人員進(jìn)出屏障環(huán)境是影響環(huán)境細(xì)菌數(shù)量和細(xì)菌種類的主要因素之一，因此為了減少屏障環(huán)境受到污染，保證實驗動物質(zhì)量與實驗準(zhǔn)確性，必須加強對實驗人員的管理[2]。動物房按照相關(guān)管理規(guī)定，制定了《人員管理程序》等相關(guān)制度，嚴(yán)格規(guī)范人員進(jìn)出，要求所有進(jìn)出屏障環(huán)境的實驗人員均需要持有實驗動物從業(yè)人員資格證，未經(jīng)授權(quán)，外部人員不得隨意進(jìn)出動物房。對來訪參觀人員實行預(yù)約制度，并填寫《人員進(jìn)出登記表》。同時針對屏障環(huán)境內(nèi)物品和實驗動物的流向也做出了明確規(guī)定。詳見圖1。

1.2 動物房主要儀器設(shè)備

動物房目前在用儀器設(shè)備多達(dá)50臺套，關(guān)鍵設(shè)備有屏障環(huán)境系統(tǒng)、IVC系統(tǒng)、銳思捷純水系統(tǒng)、新華雙扉高壓滅菌器等。為確保儀器設(shè)備正常運轉(zhuǎn)，動物房制定了《儀器設(shè)備操作規(guī)程》《實驗動物設(shè)施衛(wèi)生與消毒標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》《停電、停水、停氣、火災(zāi)、設(shè)備故障應(yīng)急處理操作規(guī)程》等規(guī)則制度，同時為確保SPF區(qū)環(huán)境潔凈度，定期委托第三方公司對中央空調(diào)控制系統(tǒng)定期保養(yǎng)與維護，并及時更換濾膜、濾芯等主要配件。壓力表、安全閥和呼吸器等設(shè)備，每年定期送青島市特種設(shè)備檢驗檢測研究院進(jìn)行計量校驗。目前動物房采用的是屏障環(huán)境中央控制系統(tǒng)，通過電腦設(shè)備可全面控制屏障環(huán)境內(nèi)的門禁系統(tǒng)、報警系統(tǒng)、溫濕度和壓力等。圖2為動物房IVC系統(tǒng)。

1.3 動物房環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測

環(huán)境指標(biāo)的主要參數(shù)主要包括溫度、濕度、噪聲、光照、室內(nèi)風(fēng)速、氨濃度、室內(nèi)換氣次數(shù)、各區(qū)域壓力差等[3]。根據(jù)動物實驗要求，溫度、濕度和壓差需要每日記錄，根據(jù)它們的數(shù)值變化，對屏障系統(tǒng)狀態(tài)進(jìn)行簡單維護操作，如風(fēng)閥或空氣過濾器等。每半年一次委托外部第三方機構(gòu)對動物房環(huán)境進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測。同時為確保動物房內(nèi)衛(wèi)生，SPF區(qū)域動物飼料和飲用水均進(jìn)行營養(yǎng)指標(biāo)和微生物指標(biāo)監(jiān)測，主要包括水分及揮發(fā)物質(zhì)、蛋白質(zhì)、大腸桿菌、大腸菌群、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等項目，檢測合格后方可進(jìn)去飼喂大小鼠。

1.4 飼養(yǎng)籠盒及屏障內(nèi)外消毒方法

動物房SPF區(qū)現(xiàn)有飼養(yǎng)籠盒488個，其中檢疫觀察籠盒100籠，大鼠籠盒100個，可飼養(yǎng)大鼠200只，小鼠籠盒288個，可飼養(yǎng)小鼠576只。為避免交叉污染，新采購或已使用的籠盒均需高壓滅菌處理，將清洗過的籠盒放入雙扉高壓滅菌器，選擇滅墊料程序，高壓滅菌后傳入消毒后室。對于籠盒內(nèi)動物使用的飼料、實驗酒精等不耐熱的物品進(jìn)入SPF區(qū)則采用傳遞窗紫外線消毒30 min傳入。每次清洗工作完畢，將清洗工具（如拖把、抹布等）用有效氯或有效溴含量為250～500 mg/L的消毒液浸泡，作用15～30 min后，用清水沖洗、擰干，放置指定位置。

2 屏障環(huán)境下大、小鼠飼養(yǎng)要點

動物房飼養(yǎng)的鼠為大、小鼠ICR體系，在采購實驗動物時，應(yīng)向有實驗動物生產(chǎn)許可證、信譽好、動物質(zhì)量佳、有嚴(yán)格管理和一定規(guī)模的單位購入，目前采購供應(yīng)商是濟南朋悅實驗動物繁育有限公司。當(dāng)SPF動物抵達(dá)后，首先檢查帶空氣過濾裝置的運輸箱密封情況，然后再對照運輸箱上的標(biāo)簽，核對動物的信息與要求是否相符，此外，還要觀察動物的健康狀況，包括觀察動物的精神狀態(tài)、被毛、糞便等方面是否正常。為對實驗動物進(jìn)行區(qū)分，動物房采用染色法對實驗動物進(jìn)行標(biāo)記，如被毛、四肢等處進(jìn)行涂染，以染色部位、顏色不同來標(biāo)記區(qū)分實驗動物。同時對實驗動物進(jìn)行編號，編號原則為：動物品種+驗收日期+籠號或者（籠號+序號）。

2.1 小鼠飼養(yǎng)管理要點

小鼠體型小，胃容量更小，但性格比較活躍，喜歡啃咬物品，目前采取的是籠盒飼養(yǎng)方式，每盒最多5只，在飼喂過程中，應(yīng)采取少量多次添加的方式。自飼料間領(lǐng)取適當(dāng)用量的已輻照過的飼料，確認(rèn)包裝完好后，在傳遞窗內(nèi)紫外消毒后，傳入屏障內(nèi)消毒后室暫存，開袋后應(yīng)于一周內(nèi)飼喂完，若略有剩余，應(yīng)將其做無害化處理后丟棄。小鼠飲水必須保證每天換水，不能中斷，更換時應(yīng)清洗并消毒飲水瓶及吸水管，保證飲用水清潔。飲水瓶應(yīng)符合無毒、無味，流水通暢，不漏水，便于動物吸取，保持飲水不被污染，便于清洗、耐化學(xué)或高溫消毒的要求。發(fā)現(xiàn)有漏水跡象的水瓶及瓶蓋，應(yīng)及時剔除。

2.2 大鼠飼養(yǎng)管理要點

大鼠的飼養(yǎng)管理基本與小鼠相同。大鼠的飼養(yǎng)室要注意安靜、避免噪聲，強烈的噪聲易引起大鼠狂躁不安[4]，易產(chǎn)生實驗誤差。

同時由于大鼠體型比較大，排泄物也多，產(chǎn)生的有害氣體多（氨氣、硫化氫等）。在飼養(yǎng)過程中要控制大鼠的飼養(yǎng)密度，勤換墊料，以每周更換兩次為宜。

2.3 籠盒和籠具注意事項

籠盒一定要選擇高品質(zhì)、耐高溫籠盒，以避免在高壓過程中造成盒體變形、損壞等，本動物房采用聚乙烯塑料飼養(yǎng)籠，該籠盒可耐120 ℃高溫，具有易清潔、使用壽命長的特點。

墊料是動物直接接觸的鋪墊物，有舒適、吸濕、保暖、可做窩等作用，首選不可食并舒適的刨花或鋸末。應(yīng)注意檢查是否有異味、潮濕、發(fā)霉、粉塵等異樣。自倉庫領(lǐng)取需用量，適量鋪墊于籠盒中，與籠盒一起經(jīng)121 ℃、20 min，高溫高壓滅菌后使用，注意滅菌的干燥效果，及時反饋給滅菌器操作人員。墊料經(jīng)高壓滅菌處理后，保質(zhì)期不超過一周，超過一周轉(zhuǎn)移出屏障，棄用。

廢棄墊料傾倒應(yīng)在清洗間內(nèi)進(jìn)行，并用專用“廢棄物收集袋”包裝，統(tǒng)一存放在污物間，交由專人進(jìn)行處理。

2.4 動物房設(shè)施消毒

加料、給水作業(yè)結(jié)束后，工作人員需將籠架上的墊料、飼料殘渣用刷子或抹布掃清，消毒液擦拭消毒。對于箱式籠子，將動物取出放入滅菌過的新籠具，將墊料連同籠具一起經(jīng)過污物走廊運至消毒后室，小型飼養(yǎng)箱墊料污物等裝入塑料袋內(nèi)，每周更換1～2次。地板上的污物、墊料、飼料殘渣清掃干凈，用消毒液擦拭兩側(cè)的門特別是門把，再用消毒液拖地。貯物間、二更、風(fēng)淋、緩沖間和清潔走廊，用消毒藥水拖地。把換出的物品推出污物走廊后，進(jìn)行拖地、消毒。過氧乙酸的配制和使用方法見表1。

3 小結(jié)

青島海關(guān)技術(shù)中心已建成動物房約600 m2，擁有SPF級動物飼養(yǎng)區(qū)300余m2和300余m2的普通動物飼養(yǎng)區(qū)，可飼養(yǎng)大、小鼠、豚鼠和兔子等實驗動物，除了核心動物房外，還具有P2級生物安全實驗室、細(xì)胞培養(yǎng)室和病理實驗室等輔助實驗室。目前可開展化妝品及固廢等2大類10個項目的動物實驗。

在工作實踐中，總結(jié)了一套規(guī)范的、可操作性強的屏障環(huán)境實驗室運行管理規(guī)范制度，最大限度地發(fā)揮屏障環(huán)境的功效。為確保試驗質(zhì)量，實驗動物均從具備生產(chǎn)許可資質(zhì)的濟南朋悅實驗動物中采購。但在實際飼養(yǎng)過程中，也存在一系列的小問題，比如說部分鼠出現(xiàn)被毛粗糙發(fā)紺、斷尾現(xiàn)象，其約占飼養(yǎng)總數(shù)的10%，經(jīng)綜合分析研判，導(dǎo)致該種癥狀發(fā)生的原因是籠盒內(nèi)濕度過低，為此加強巡查，要求值班人員及時查看中央控制系統(tǒng)溫濕度參數(shù)指標(biāo)，時刻關(guān)注獨立通氣籠盒（IVC）參數(shù)變化，降低換氣次數(shù)，調(diào)高溫濕度參數(shù)，為實驗動物提供良好的生活環(huán)境，避免因環(huán)境不潔導(dǎo)致動物疾病發(fā)生。目前雖然動物房在動物飼養(yǎng)方面取得了一定的經(jīng)驗，但是也遇到了不少問題，在屏障環(huán)境下如何進(jìn)一步完善管理，給實驗動物提供更好的生活環(huán)境，其運行模式和管理方式都有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)：

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