新型鵝細(xì)小病毒病診斷及其綜合防治措施

喬丹丹，劉婷雋，陳全剛，胡安康

（徐州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，江蘇 徐州 221004）

新型鵝細(xì)小病毒（Novel goose parvovirus，NGPV）在鴨群中感染率為10%～30%，死亡率為2%～6%[1]。NGPV 既可通過糞口途徑水平傳播，也可通過種鴨或種蛋垂直傳播，耐過鴨易成為僵鴨或殘鴨，病鴨體重僅為正常鴨體重的50%，淘汰率可達(dá)80%，使養(yǎng)殖成本增加、出欄率降低、不易銷售，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。本文就NGPV 病的病因分析、流行病特點、臨床癥狀和免疫防控進(jìn)行綜述，以期為NGPV 病診斷、檢測、綜合防控提供參考依據(jù)。

1 病因分析

1.1 病原學(xué)特征

NGPV 屬細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒亞科、依賴病毒屬，是鵝細(xì)小病毒（GPV）經(jīng)典株的一個進(jìn)化分支，與GPV 的核苷酸同源性為92.2%～97.1%。但其感染宿主的類型、致病性、發(fā)病特征均有所不同，致病機(jī)制已發(fā)生較大變化[2]。在2015年至2016年期間，從中國不同地區(qū)分離出7 株NGPV 菌株，與經(jīng)典GPV 相比，在NGPV的7 個分離株中發(fā)現(xiàn)5 個共有核苷酸突變，在6個NGPV 分離株中出現(xiàn)2 個核苷酸對缺失，在NGPV 的復(fù)制蛋白和衣殼蛋白中分別發(fā)現(xiàn)12 個和8 個同步氨基酸變化，這對病毒基因調(diào)控、宿主體液免疫反應(yīng)有很重要的影響[3]。

1.2 電鏡觀察特征

電鏡觀察結(jié)果顯示，NGPV 在電鏡下也呈現(xiàn)出直徑約20～25 nm 的病毒粒子，與GPV 類似，皆為球形[4]。

1.3 致病機(jī)理

NGPV 是一種無包膜的細(xì)小病毒，其DNA基因組為線形單鏈，長度約為5.1 kb，是GPV 的鴨源變異株[5]，包含兩個開放閱讀框（ORF1 和ORF2），其中ORF1 含有1 884 nt，編碼628 aa的NS1 蛋白和452 aa 的NS2 蛋白[6]；ORF2 含有2 199 nt，包含編碼733 aa 的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、588 aa 的VP2 和535 aa 的VP3[7]。VP1 包含了VP2 和VP3，VP1、VP2、VP3 公用一個終止密碼子（TAA），但是起始密碼子不同。VP2 和VP3 蛋白是VP1 的mRNA 經(jīng)過可變拼接產(chǎn)生的。該病毒與MDPV 存在著一定的抗原相關(guān)性，它們的共同抗原主要在核衣殼蛋白VP3，而VP1和VP2 蛋白存在抗原性差異[8]。

1.4 病原理化特性

NGPV 對外界環(huán)境和消毒劑的抵抗力較強，在酸性、熱性環(huán)境下的存活力較強，但對刺激性的消毒劑如氨水比較敏感，對紫外線也較敏感。對其他消毒劑，如0.04%甲醛和乙氧基乙烷有較強的抵抗力[9]。

2 流行特點

2.1 傳播速度快，范圍廣

由 NGPV 引起的鴨短喙與侏儒綜合征（SBDS），于20 世紀(jì)70年代首次在法國的騾鴨和番鴨群中被發(fā)現(xiàn)報道，隨后于20 世紀(jì)90年代在臺灣的騾鴨中被報道[10]。2000年在我國南方福建、臺灣等地的養(yǎng)鴨地區(qū)零星發(fā)生，然后逐漸擴(kuò)散。2015年3月，中國北方如山東、江蘇、安徽各省的番鴨群中出現(xiàn)了SBDS。近年來，SBDS的傳播速度非常迅速，在中國的各個鴨產(chǎn)區(qū)廣泛存在，包括福建、山東、安徽、上海、河北、浙江、湖南和廣東省[11]。盡管鴨群的發(fā)病率在10%～30%之間，死亡率通常低于10%，但是該病導(dǎo)致的患鴨發(fā)育不良、短喙、體重減輕、脛骨易骨折等癥狀對中國養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2.2 發(fā)病具有明顯季節(jié)性

每年10月至次年的5月為本病高發(fā)期，NGPV 在低溫環(huán)境中可存活數(shù)月及數(shù)年。該病毒對于陽光和溫度敏感，夏季紫外線強，溫度高，不利于NGPV 的存活，導(dǎo)致感染率減少。

2.3 可垂直傳播，危害大

研究發(fā)現(xiàn)，NGPV 可以通過垂直傳播感染雛鴨，這大大地增加了該病的危害性[12]。NGPV 能在鴨胚中增殖，并能導(dǎo)致鴨胚出現(xiàn)生長遲緩和胚體出血的癥狀[13]。

2.4 在水禽細(xì)小病毒群中譜系獨特

Shilong Chen 研究表明，SBDSV M15 分離株對鵝細(xì)小病毒抗原呈陽性，但對番鴨細(xì)小病毒抗原不呈陽性。擴(kuò)增348 bp（2604～2951 nt）的VP1 基因片段，其序列表明該病毒與匈牙利GPV株的親緣關(guān)系最為密切，該株也是從患有SBDS疾病的騾鴨中分離出來的。通過給鳥類接種SBDSV M15，也繁殖了類似的疾病[14]。Vilmos Palya 試驗研究表明，只有用從患SBDS 的番鴨上分離的NGPV 毒株，經(jīng)口服途徑感染1 日齡雛鴨，才能復(fù)現(xiàn)SBDS 癥狀。系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，從騾鴨SBDS 分離的細(xì)小病毒屬于鵝細(xì)小病毒相關(guān)水禽細(xì)小病毒群的一個獨特譜系[15]。

2.5 與經(jīng)典的GPV 存在明顯的差異

陳浩等分離出我國第一株NGPV 全基因組分離株SDLC01 并進(jìn)行了測序，與經(jīng)典水禽細(xì)小病毒分離株和疫苗株進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育比較分析。結(jié)果顯示，SDLC01 株與GPV、MDPV 分離株都不同，SDLC01 與GPV 分離株具有90.8%～94.6%的核苷酸同一性，與MDPV 分離株具有78.6%～81.6%的核苷酸同一性。SDLC01 與騾鴨分離株（菌株D146/02）高度相似，與歐洲GPV 分離株接近，但與亞洲GPV 分離株不同。與經(jīng)典GPV和MDPV 分離株相比，SDLC01 在160～176 nt和306～322 nt 位置之間刪除了兩個主要片段。SDLC01 的病毒致病性和基因組特征表明，NGPV 是SBDS 的致病因子，屬于一個獨特的GPV 相關(guān)亞群。此外，該研究證明病鴨組織PCR檢測結(jié)果陽性，且病毒能在鴨胚和鴨胚成纖維細(xì)胞中增殖[16]。除基因組的差異外，還存在宿主嗜性和臨床癥狀的差異，GPV 主要流行于雛鵝和雛番鴨并引起腹瀉和神經(jīng)癥狀，NGPV 主要流行于雛櫻桃谷鴨、番鴨、北京鴨群并引起SBDS，相比經(jīng)典的GPV，NGPV 在感染宿主的致病性上存在明顯的差異[17]。

2.6 與鴨圓環(huán)病毒共感染情況嚴(yán)重

近年來 NGPV 和鴨圓環(huán)病毒（ Duck circovirus, DUCV）的共同感染通常發(fā)生在SBDS的現(xiàn)場病例中[18]。研究人員建立了一種復(fù)合感染模型，并對2 種病毒的復(fù)制和致病性進(jìn)行了評估，發(fā)現(xiàn)NGPV 和DUCV 之間存在協(xié)同作用。與單感染組相比，合并感染的致病性顯著增強，合并感染對鴨子的生長發(fā)育影響更嚴(yán)重，并引起更嚴(yán)重的臨床癥狀和病理變化。主要病變?yōu)楦?、腎和十二指腸的變性、壞死、出血、淋巴細(xì)胞浸潤，包括脾臟、胸腺、法氏囊在內(nèi)的免疫器官萎縮，以及這些器官的骨髓和組織細(xì)胞損失。DUCV 和GPV 感染的特征性病變出現(xiàn)，但免疫器官的病變更為嚴(yán)重。肝臟和腎臟是主要的代謝器官，因此它們的病變更嚴(yán)重，病毒載量更高[19]。

3 臨床癥狀

NGPV 可造成跛行、脛骨易折、上下喙萎縮導(dǎo)致舌頭外露，使患鴨采食困難，體重減輕，大大降低患病鴨的經(jīng)濟(jì)價值[20]。最初感染NGPV 的雛鴨無明顯癥狀，一周后出現(xiàn)呆滯、精神沉郁，兩周后開始表現(xiàn)出短喙、生長變慢等特征性癥狀[21]。NGPV 發(fā)病癥狀與感染鴨的日齡有一定關(guān)聯(lián)。

2～4 日齡。肉鴨出現(xiàn)腿軟，站立不穩(wěn)，走路時雙腿分叉向外，呈八字腳，易摔倒。隨后出現(xiàn)跛行，癱瘓，腹瀉，病鴨仰面著地，掙扎著卻無法站立，翻跟頭，扭脖，不愿走動[22]。

10 日齡。肉鴨出現(xiàn)運動障礙，常見蹲坐式癱瘓，采食不便或無法采食，生長遲緩。

15 日齡。病鴨開始出現(xiàn)上下喙較短，舌頭伸出較大，采食困難，體型消瘦，腿短且無力、羽毛蓬亂稀少，病鴨精神差，表現(xiàn)持續(xù)腹瀉，有的形成僵鴨，死淘率加大[23]。

4 病理變化

病原體主要在腸道和舌上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制。病毒增殖后會破壞病鴨的腸道黏膜，有研究表明，鴨源NGPV 感染會導(dǎo)致腸道屏障受損，免疫功能出現(xiàn)障礙，從而引起鈣磷代謝失衡引起的一系列癥狀[24]。病鴨或死鴨的診斷性病理損傷未發(fā)現(xiàn)明顯變化。

5 免疫防控

5.1 疫苗預(yù)防

目前 NGPV 還沒有特異的商品化疫苗，Jiewen Zhou 等研制了一種SBDS 的候選滅活疫苗。接種此疫苗可顯著抑制鴨體內(nèi)NGPV 的復(fù)制，且該疫苗與油乳劑佐劑合用時，具有良好的免疫原性，為SBDS 的預(yù)防和控制提供了一個潛在的強大工具[25]。

5.2 增強雛鴨的抵抗力

加強環(huán)境管理，增強雛鴨的抵抗力[26]。供應(yīng)清潔飲用水和營養(yǎng)飼料。

5.3 加強飼養(yǎng)管理

在寒冷的冬天，鴨舍須防冷保暖，適度通風(fēng)，保持適宜濕度，做好養(yǎng)殖場的環(huán)境衛(wèi)生，加強飼料營養(yǎng)，養(yǎng)殖密度不宜過大，減少應(yīng)激。

5.4 進(jìn)行無害化處理與及時消毒

出現(xiàn)上下喙萎縮、大舌頭、跛行等特征性癥狀時要及時進(jìn)行NGPV 的檢測。在引種時做好病原檢測，禁止到發(fā)病疫區(qū)引種。患病鴨及時處理隔離，可進(jìn)行無害化處理與及時消毒，避免波及全群。

5.5 及時淘汰凈化

養(yǎng)殖場內(nèi)可能存在水平和垂直傳播情況，感染鴨的不能留作種用。有條件的飼養(yǎng)場可以進(jìn)行NGPV 病毒血清篩查，發(fā)現(xiàn)抗體陽性的鴨要及時淘汰處理掉。

6 小結(jié)

目前尚無針對NGPV 病的特效療法，對該病的防治以小鵝瘟疫苗免疫和預(yù)防為主，因此仍迫切需要研制保護(hù)率高、免疫性好、成本低、生物安全風(fēng)險小且副反應(yīng)少的特異性疫苗，以提供有效的抗體，降低發(fā)病率。關(guān)于NGPV 的致病性及與經(jīng)典毒株的差異性已經(jīng)有許多報道，但是對于NGPV 發(fā)病機(jī)制及病毒演化變異過程還不清楚，相關(guān)研究及治療防控方法還不明確，以后還需更進(jìn)一步研究。本研究旨在分析NGPV 的發(fā)病因素、流行病學(xué)診斷、預(yù)防措施，以期為今后該病的研究及防控提供技術(shù)支撐。