腫塊型乳腺癌患者腫瘤組織中Ki-67表達與超聲特征的相關性

馬新樂，徐 杰，秦金霞

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院超聲科一/新鄉(xiāng)醫(yī)學院第四臨床學院,河南 新鄉(xiāng) 453000)

乳腺癌為女性常見惡性腫瘤,腫塊型乳腺癌患者發(fā)病早期以患側乳房出現單發(fā)、無痛小腫塊為主要表現,且腫塊質硬、表面不光滑,與周圍組織無明顯分界,在乳房內不易被推動,多發(fā)于乳房外上象限[1-2]。腫塊型乳腺癌早期癥狀不典型,容易漏診和誤診,對后續(xù)的治療效果影響較大。目前常規(guī)超聲、超聲造影(contrast-enhanced ultrasound,CEUS)、剪切波彈性成像(shear wave elastography,SWE)等已成為診斷乳腺疾病的重要檢查方法[3-4]。既往研究發(fā)現,腫瘤分子生物學指標會對患者的病理學和影像學產生影響[5]。Ki-67為細胞增殖相關核抗原,其高表達提示腫瘤增殖速度加快,并與腫瘤惡性程度、侵襲能力呈正相關,對預后評估、療效預測以及指導方案制定意義重大[6-7]。超聲特征聯(lián)合Ki-67表達可在一定程度提高腫塊型乳腺癌診斷結果的準確性。既往研究僅分析了單獨或聯(lián)合應用CEUS、SWE、常規(guī)超聲特征與Ki-67表達的相關性,但聯(lián)合CEUS、SWE、常規(guī)超聲的定性、定量特征預測Ki-67表達的研究鮮見報道?；诖?本研究分析了腫塊型乳腺癌組織中Ki-67表達與超聲特征的相關性,以期為腫塊型乳腺癌的臨床診斷和治療方案制定提供參考,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月至2022年12月新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院收治的腫塊型乳腺癌患者90例(90個腫塊)為研究對象?；颊呔鶠榕?年齡為35～69(57.86±5.95)歲。病例納入標準:(1)經臨床病理學診斷為腫塊型乳腺癌;(2)年齡≥18歲;(3)有完整穿刺/手術前多模態(tài)超聲檢查資料;(4)有完整的病理及臨床資料。排除標準:(1)病灶最大直徑>5 cm者;(2)有假體植入者;(3)術前接受內分泌治療、新輔助化療、放射治療者;(4)合并其他類型惡性腫瘤者;(5)患有精神疾病或認知障礙者。

1.2 超聲檢查

患者取仰臥位,雙臂上舉,將乳腺和腋窩暴露出來,使用L15-4線陣探頭進行多切面、多角度二維灰階超聲掃查,確定病灶位置,并存儲正交切面圖像。打開彩色多普勒血流顯像(color doppler flow imaging,CDFI)模式,存儲血流最豐富的切片圖像;打開SWE模式,切換L10-2線陣探頭,探頭涂抹耦合劑,患者屏氣,圖像穩(wěn)定后凍結、存儲圖像;選取CDFI上有顯著病灶血流特征的切面進行CEUS檢查,將造影劑SonoVue與生理鹽水(5 mL)充分混合為懸濁液,首先靜脈團注2.4 mL懸濁液,生理鹽水快速推送,觀察腫塊橫切面顯影,再次推注2.4 mL懸濁液,觀察腫塊縱切面,記錄3 min動態(tài)過程。由2名具有5 a以上工作經驗的醫(yī)師獨立判定檢查結果,結果不一致時經過協(xié)商達成一致。雙盲法分析CEUS定性和定量特征、SWE定性和定量特征及超聲顯像特征。

1.3 免疫組織化學法檢測腫塊型乳腺癌組織中Ki-67的表達

取患者切除的病理組織標本經甲醛固定、石蠟包埋后切片,蘇木精-伊紅染色后于光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶聯(lián)結法染色:切片脫蠟、抗原修復、蒸餾水漂洗、置入磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)、加兔單克隆抗體、PBS漂洗、二氨基聯(lián)苯胺顯色、漂洗、復染、封片,用PBS代替一抗作為陰性對照,已知陽性切片作為陽性對照。細胞核中出現棕黃色均勻顆粒為Ki-67表達陽性。根據國際乳腺癌會議專家共識[7],陽性細胞數占比≥14%為高表達,<14%為低表達。根據Ki-67表達將患者分為Ki-67高表達組(n=53)和Ki-67低表達組(n=37)。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者CEUS定性特征比較

Ki-67高表達組CEUS灌注缺損患者占比顯著高于Ki-67低表達組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組患者的CEUS邊界、均勻性、增強水平、增強后病灶范圍、方向比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表1。

表1 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者CEUS定性特征比較

2.2 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者CEUS定量特征比較

Ki-67高表達組患者的峰值強度(maximum of intensity,Imax)、上升時間(rise time,RT)、半降時間(half time,HT)顯著高于Ki-67低表達組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組患者的到達時間(arrival time,AT)、達峰時間(time to peak,TTP)、平均通過時間(mean transit time,mTT)比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表2。

表2 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者CEUS定量特征比較

2.3 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者SWE定性特征比較

Ki-67高表達組具有SWE硬環(huán)征患者占比顯著高于Ki-67低表達組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組具有SWE黑洞征患者占比比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表3。

表3 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者SWE定性特征比較

2.4 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者SWE定量特征比較

Ki-67高表達組患者病灶與周圍組織彈性模量比值(elastic modulus ratio between lesions and surrounding parenchyma,Eratio)水平顯著高于Ki-67低表達組,差異有統(tǒng)計意義(P<0.05);2組患者的最大彈性模量值(maximum elastic modulus,Emax)、平均彈性模量值(average elastic modulus value,Emean)、最小彈性模量值(minimum elastic modulus,Emin)比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表4。

表4 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者SWE定量特征比較

2.5 Ki-67高表達組與Ki-67低表達組患者CDFI特征比較

Ki-67高表達組CDFI下病灶大小為2～5 cm、邊緣有毛刺患者占比顯著高于Ki-67低表達組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);2組患者CDFI下病灶形狀、方位、鈣化情況比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表5。

2.6 腫塊型乳腺癌患者超聲特征與Ki-67表達的關系logistic回歸分析結果

以腫塊型乳腺癌組織中Ki-67的表達為因變量(Ki-67高表達賦值1,Ki-67低表達賦值0),以表1至表5中P<0.05的指標為自變量,建立非條件logistic回歸模型,結果顯示,灌注缺損、硬環(huán)征、邊緣有毛刺與腫塊型乳腺癌患者Ki-67高表達有關(P<0.05)。結果見表6。

表6 腫塊型乳腺癌患者超聲特征與Ki-67表達的關系

3 討論

目前,乳腺癌的具體發(fā)病機制尚未明確,因此臨床中缺乏有效預防措施,加之生活方式的變化,我國近年來乳腺癌的發(fā)病率逐年升高[8-9]。而隨著精準化醫(yī)療和個體化差異治療的實施,傳統(tǒng)的乳腺癌檢查方案如常規(guī)超聲、鉬靶等已無法滿足日常診療工作需求,有學者逐漸將常規(guī)超聲檢查與分子生物學相結合,以提高臨床診療效果[10]。Ki-67作為細胞核的核增殖相關蛋白,半衰期短,在細胞有絲分裂晚期迅速降解,具有良好的穩(wěn)定性和增殖活性,是臨床中已經明確的與細胞增殖相關的標志物,其在多種疾病的診斷、療效判斷和預后評估中發(fā)揮重要作用。部分學者通過免疫組織化學法檢測Ki-67表達,結果發(fā)現,Ki-67表達水平與直腸癌、肝癌的發(fā)病和進展相關[11-12],因此,推測其表達水平可能與乳腺癌臨床分期存在相關性。本研究擬通過分析超聲特征包括CEUS定性和定量特征、SWE定性和定量特征及超聲顯像特征與腫塊型乳腺癌患者病理標本Ki-67表達的相關性,為臨床診治該病提供更多的超聲影像學信息。

本研究結果顯示,Ki-67高表達組CEUS灌注缺損患者占比顯著高于Ki-67低表達組,而灌注缺損部分多為低度惡性細胞、變性壞死組織、纖維化成分,這與其他研究結果存在一致性[13]。可能原因是Ki-67高表達組患者的腫瘤細胞相對活躍,若微血管形成難以適應快速增殖,表現為瘤體缺血壞死[14];且血管內存在的腫瘤細胞可造成血流不暢、局部腫瘤組織缺血,導致CEUS灌注缺損的發(fā)生[15]。本研究結果發(fā)現,Ki-67高表達組患者CEUS下Imax、RT、HT顯著高于Ki-67低表達組,提示病灶區(qū)域內造影劑分布增多,可能與Ki-67高表達可增加腫瘤新生血管數量和新生血管密度,進而提升微血管通透性,使造影劑Imax升高有關[16];Ki-67高表達組具有SWE硬環(huán)征患者占比顯著高于Ki-67低表達組,可能是因為Ki-67高表達可促使病灶周圍間質膠原纖維反應性增生,增加病灶邊緣硬度,使其邊緣剪切波能量衰減,降低病灶內部區(qū)域剪切波振幅而形成硬環(huán)征[17];此外,本研究結果顯示,Ki-67高表達組患者SWE下Eratio水平顯著高于Ki-67低表達組,這可能是由于Ki-67表達與病灶惡性程度有關,癌細胞浸潤周圍組織,誘發(fā)纖維組織反應性增生,導致腫塊硬度較正常組織升高,從而使Eratio水平升高[18]。鑒于Ki-67高表達患者的腫塊硬度較高,惡性程度較高,其對周圍組織有較強侵襲性,腫瘤細胞極易通過浸潤而誘發(fā)纖維組織反應性增生,導致腫塊邊緣形成長短不一、混雜的粗細放射狀短低回聲,表現出毛刺狀邊緣[19]。本研究logistic回歸分析結果顯示,灌注缺損、硬環(huán)征、邊緣有毛刺與腫塊型乳腺癌患者Ki-67高表達有關,提示腫塊型乳腺癌超聲特征對Ki-67表達有一定的預測價值。

4 結論

腫塊型乳腺癌的超聲特征對Ki-67表達有預測作用,其中灌注缺損、硬環(huán)征、邊緣有毛刺與Ki-67陽性表達具有相關性,可為臨床評估Ki-67表達情況提供參考。