糖腎化濁通脈顆粒對糖尿病腎臟疾病患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 的影響

朱曉鷗 沈金峰

糖尿病腎臟疾病（diabetic kidney disease，DKD）是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎臟疾病的主要病因[1]。DKD 發(fā)病機制復(fù)雜，目前尚無特效藥物，進展至終末期腎臟病只有依賴透析或腎移植進行腎臟替代治療[2]。研究表明，炎癥因子相互作用可誘發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，促進血管發(fā)生炎癥和纖維化，導(dǎo)致終末期腎臟病發(fā)生[3]。NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NLRP3）/白介素-1β（IL-1β）/超敏C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）是參與炎癥反應(yīng)的重要通路[4]。糖腎化濁通脈顆粒是浙江省臨海市中醫(yī)院治療DKD 的常用方。我們在臨床實踐中發(fā)現(xiàn)，糖腎化濁通脈顆粒不僅能改善DKD 患者臨床癥狀，還可以減少患者蛋白尿，延緩DKD 的進展?；诖?，我們開展了糖腎化濁通脈顆粒對DKD 患者的治療作用及對相關(guān)炎癥因子的影響研究，現(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2019 年10 月至2022 年11 月浙江省臨海市中醫(yī)院收治的DKD 肝腎陰虛、脈絡(luò)瘀阻證患者60 例，按隨機數(shù)字表法分為對照組與治療組，每組30 例。本研究經(jīng)臨海市中醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核通過（批件號2019-Z0829）。

1.2 納入標準 （1）同時符合中西醫(yī)診斷標準：DKD西醫(yī)診斷標準參照《糖尿病腎臟疾病的早期診斷與治療》[5]；肝腎陰虛、脈絡(luò)瘀阻證中醫(yī)辨證標準參照《糖尿病腎病中醫(yī)防治指南》[6]；（2）18 歲≤年齡≤70歲，男女性別不限；（3）了解并且同意參加本研究，簽署研究同意書。

1.3 排除標準 （1）中藥過敏或者拒絕服用中藥；（2）妊娠或哺乳期女性；（3）嚴重肝腎功能損傷；（4）合并嚴重感染；（5）血糖控制不佳；（6）患有腫瘤。

1.4 脫落及退出標準 （1）出現(xiàn)嚴重不良反應(yīng)；（2）病情進展進入透析治療；（3）患者自動放棄研究。

2 方 法

2.1 治療方法 對照組：運動、飲食指導(dǎo)，血壓、血糖調(diào)控等；恩格列凈（正大天晴，批號206236，規(guī)格：10 mg）10 mg/d，口服，1 天1 次，療程為12 周。治療組：在對照組治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合糖腎化濁通脈顆粒治療，方藥組成：黃芪30 g，黨參15 g，黃精30 g，熟地15 g，山藥20 g，山茱萸、當歸、澤蘭各15 g，丹參20 g，川芎10 g，厚樸6 g，陳皮、茯苓各10 g，藥物來源我院顆粒劑中藥房，每日1 劑，分早晚2 次溶解后溫服，療程為12 周。

2.2 觀察指標 （1）采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平，NLRP3 試劑盒購于武漢華美（批號G13012242）；IL-1β、hs-CRP 試劑盒購于深圳市科潤達生物工程有限公司（批號20180312、20180513）。（2）采用膠乳免疫比濁法檢測尿液上清液尿β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）、微量白蛋白（microalbumin，mALB）水平，計算尿微量蛋白排泄率（rate of urinary microprotein excretion，UAER），UAER＝mALB（mg/mL）×24 h 尿量（mL）。（3）觀察治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況（低血壓、低血糖、尿路感染、胃腸道反應(yīng)、肝功能異常）。

2.3 療效判定 參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]制定評價標準：顯效：尿蛋白減少≥70%；有效：尿蛋白減少≥30%；無效：臨床癥狀或體征無明顯好轉(zhuǎn)或加重者，尿蛋白減少＜30%。總有效率=（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

2.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS 21.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用例數(shù)和百分數(shù)（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，計量資料經(jīng)檢驗符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間數(shù)據(jù)比較使用獨立樣本t 檢驗，治療前后數(shù)據(jù)比較采用配對樣本t 檢驗。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié) 果

3.1 兩組DKD 患者一般資料比較 兩組均無脫落及退出病例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組DKD 患者一般資料比較

3.2 兩組DKD 患者尿液指標比較 兩組患者治療前尿β2-MG、UAER 水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與治療前比較，兩組治療后尿β2-MG、UAER 下降（P＜0.05），與對照組相比，觀察組尿β2-MG、UAER 下降更明顯（P＜0.05），見表2。

表2 兩組DKD 患者治療前后尿液指標比較（±s）

表2 兩組DKD 患者治療前后尿液指標比較（±s）

注：對照組采用恩格列凈治療；治療組在對照組基礎(chǔ)上加用糖腎化濁通脈顆粒治療；DKD 為糖尿病腎臟疾??；β2-MG 為β2-微球蛋白；UAER 為尿微量蛋白排泄率；與本組治療前比較，aP＜0.05；與對照組治療后比較，bP＜0.05

組別治療組治療前治療后對照組治療前治療后例數(shù)30 β2-MG（mg/L）UAER（mg/24 h）0.75±0.09 0.40±0.11ab 64.97±9.98 35.47±11.85ab 30 0.77±0.08 0.62±0.12a 67.50±12.24 52.87±11.86a

3.3 不同DKD 分期患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較 與Ⅱ期相比，DKDⅢ期患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 升高更顯著（P＜0.05），見表3。

表3 不同DKD 分期患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較（±s）

表3 不同DKD 分期患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較（±s）

注：DKD 為糖尿病腎臟疾??；NLRP3 為NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3；IL-1β 為白介素-1β；hs-CRP 為超敏C 反應(yīng)蛋白；與Ⅱ期比較，aP＜0.05

分期Ⅱ期Ⅲ期例數(shù)25 35 NLRP3（pg/mL）142.43±8.12 161.92±11.81a IL-1β（pg/mL）55.26±5.75 67.43±6.08a hs-CRP（μg/mL）3.17±0.62 4.84±0.90a

3.4 兩組DKD 患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較 兩組患者治療前NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與治療前比較，兩組治療后NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平下降（P ＜0.05），與對照組相比，治療組NLRP3、IL-1β、hs-CRP水平下降更明顯（P＜0.05），見表4。

表4 兩組DKD 患者治療前后NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較（±s）

表4 兩組DKD 患者治療前后NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平比較（±s）

注：對照組采用恩格列凈治療；治療組在對照組基礎(chǔ)上加用糖腎化濁通脈顆粒治療；DKD 為糖尿病腎臟疾??；NLRP3 為NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3；IL-1β 為白介素-1β；hs-CRP 為超敏C 反應(yīng)蛋白；與本組治療前比較，aP＜0.05；與對照組治療后比較，bP＜0.05

組別治療組治療前治療后對照組治療前治療后例數(shù)30 NLRP3（pg/mL）IL-1β（pg/mL）hs-CRP（μg/mL）153.83±14.84 114.70±11.97ab 61.13±9.25 31.73±8.36ab 4.14±1.08 2.45±0.73ab 30 155.06±13.72 144.30±13.31a 64.40.±7.23 51.67±9.61a 4.26±1.22 3.49±1.07a

3.5 兩組DKD 患者臨床療效比較 治療組總有效率為83.33%（25/30），對照組總有效率為53.33%（16/30），治療組臨床總有效率高于對照組（χ2=6.239，P=0.012），見表5。

表5 兩組DKD 患者臨床療效比較

3.6 兩組DKD 患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 治療組發(fā)生胃腸道反應(yīng)1 例，對照組發(fā)生低血壓、尿路感染各1 例，兩組不良事件發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.351，P=0.554）。

4 討 論

中醫(yī)古籍中無DKD 病名，依據(jù)其臨床表現(xiàn)可歸屬于“水腫”“內(nèi)消”“尿濁”“腎消”“消腎”等范疇?！鹅`樞》：“脾脆則善病消癉易傷?！逼楹筇熘荆瑲庋?。長期飲食不節(jié)，嗜食肥甘厚膩易傷脾胃，脾虛則無力運化飲食精微，導(dǎo)致脾不散精，血糖升高；精微久蓄化為濁（糖濁、脂濁）。濁性黏質(zhì)，易阻氣機，導(dǎo)致血脈瘀阻，瘀濁化生。久病入絡(luò)，久病入腎，糖濁、脂濁留滯血脈，損傷絡(luò)脈，久則導(dǎo)致腎絡(luò)癥積（腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化），發(fā)為DKD。糖濁、脂濁、瘀濁不化，互結(jié)于脈絡(luò)貫穿于DKD 的始末。正如《靈樞》所言：“迫聚不得散，日以成積?！币虼私堤腔瘽嵬}為防治DKD 基本大法。糖腎化濁通脈顆粒是由參芪地黃湯加味而來，由黃芪、黨參、黃精、熟地、山藥、山茱萸、當歸、澤蘭、丹參、川芎、厚樸、陳皮、茯苓組成，其中黃芪、黨參健脾胃，降糖濁；黃精、熟地、山藥、山茱萸、當歸滋補肝腎，補精微，澤蘭、丹參、川芎利血脈，給濁通路，厚樸、陳皮行氣運濕，助濁散，茯苓利水除濕，全方緊扣病機，健脾運、降糖濁，滋肝腎、固精微，通血脈、化痰濁，標本兼顧，補而不留邪，祛邪不傷正。

炎癥在DKD 的發(fā)生、發(fā)展中扮演了重要角色。hs-CRP 是肝細胞分泌的一種非特異性炎癥介質(zhì)，是各種炎癥反應(yīng)的始動因素；IL-1β 是一種重要的促炎癥介質(zhì)，活性IL-1β 通過自分泌、旁分泌途徑，誘導(dǎo)大量IL-1β 及下游促炎細胞因子hs-CRP 生成[8]。IL-1β 合成與分泌主要依賴于炎性體中的caspase-1。NLRP3 炎性小體是NOD 樣家族成員，NLRP3 蛋白通過與銜接蛋白ASC 和caspase-1 效應(yīng)蛋白形成寡聚化蛋白復(fù)合物，在激活信號刺激下，NLRP3 炎性小體活化，將下游的pro-IL-1β 和pro-IL-18 剪切為成熟的IL-1β，加重組織炎癥[9]。有研究表明，敲除NLRP3 基因可改善DKD 模型小鼠腎功能，減輕腎小球硬化、間質(zhì)纖維化和炎癥反應(yīng)[10-12]。

本研究顯示，DKDⅡ期患者NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平低于Ⅲ期患者，進一步證實DKD 處于一種炎癥狀態(tài)，隨著DKD 進展，炎癥加重（濁邪加重），這與上述文獻相符。本研究中，治療后治療組NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平低于對照組，提示糖腎化濁通脈顆粒具有抗炎作用，同時還能降低尿β2-MG、UAER水平，并且不良事件發(fā)生率未見明顯升高。

基于上述研究，我們證明了DKD 進展過程與炎癥因子NLRP3、IL-1β、hs-CRP 密切相關(guān)，糖腎化濁通脈顆粒能有效降低NLRP3、IL-1β、hs-CRP 水平，抑制炎癥反應(yīng)，且臨床上使用安全性較高。