豬口蹄疫O型滅活疫苗質(zhì)量控制與安全性評估的技術(shù)研究

梁俊武

玉林市動物疫病預(yù)防控制中心,廣西 玉林 537000

0 引言

隨著全球生豬養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,豬疫病對行業(yè)的影響逐漸凸顯,疫苗在保障生豬養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展中具有重要作用。近年來,豬口蹄疫O型滅活疫苗作為一種新型豬疫苗,受到了廣泛關(guān)注。而疫苗的質(zhì)量安全問題直接關(guān)系到養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展和食品安全,因此,對豬口蹄疫O型滅活疫苗的質(zhì)量控制與安全性評估研究具有重要意義。

1 豬口蹄疫O型滅活疫苗概述

豬口蹄疫O型滅活疫苗由內(nèi)蒙古金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn),通用名為豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+/GX/09-7株),商品名為保蹄靈,英文名為swine foot and mouth disease vaccine,inactivated(Type 0,Strain 0/Mya98/XJ/2010+StrainO/GX/09-7)。成分主要有滅活的豬口蹄疫O型病毒變異毒0/GX/09-7株和東南亞拓?fù)湫途挼?98毒0/Mya98/XJ/2010株,滅活前1 mL疫苗中病毒含量應(yīng)至少為107TCID50或每0.2 mL病毒含量應(yīng)至少為107LD50。每頭份疫苗對豬口蹄疫型0/GX/09-7株和0/Mya98/XJ/2010株2個毒的效力應(yīng)至少各含6個PD50。每頭份疫苗中每個毒株病毒含量應(yīng)分別不低于600 ng。疫苗性狀為淡粉紅色或乳白色略帶粘滯性乳狀液。此疫苗主要用于預(yù)防豬O型口蹄疫,免疫期為6個月,注射方式為耳根后肌內(nèi)注射,10～25 kg豬1 mL/頭(1/2頭份);25 kg以上豬用量為2 mL/頭(1頭份)。

2 質(zhì)量控制

2.1 成分確認(rèn)與含量檢測

在豬口蹄疫O型滅活疫苗的質(zhì)量控制中,成分確認(rèn)與含量檢測是確保疫苗質(zhì)量和效力的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過一系列精密的檢測和分析,制造商可以確認(rèn)疫苗中的成分以及病毒含量,從而保證疫苗的一致性和有效性。

成分確認(rèn)是質(zhì)量控制的首要步驟。疫苗的成分應(yīng)當(dāng)包括指定的病毒株,對于豬口蹄疫O型滅活疫苗而言,即O/Mya98/XJ/2010株和O/GX/09-7株。成分確認(rèn)通常通過分子生物學(xué)技術(shù),特別是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)來進(jìn)行。PCR可以對病毒核酸進(jìn)行擴(kuò)增和檢測,通過比對樣本中的核酸序列與已知病毒株的序列,確認(rèn)疫苗中是否含有指定的病毒株。這項(xiàng)技術(shù)的高靈敏性和特異性確保了疫苗中成分的準(zhǔn)確性。同時,病毒含量的檢測也是質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。疫苗的效力與病毒含量密切相關(guān),因此確保每劑疫苗中的病毒數(shù)量達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)至關(guān)重要。病毒含量的測定通常采用定量PCR等方法。通過在樣本中引入已知濃度的病毒標(biāo)準(zhǔn),結(jié)合PCR技術(shù)的放大效應(yīng),可以精確地測定病毒的數(shù)量。在疫苗中,病毒含量的標(biāo)準(zhǔn)通常以TCID50(終點(diǎn)免疫毒量)或LD50(致死量)等指標(biāo)表示,確保疫苗每劑中含有足夠的病毒量,以誘導(dǎo)有效的免疫反應(yīng)。

2.2 病毒滅活效果檢測

在檢測豬口蹄疫O型滅活疫苗的病毒滅活效果時,關(guān)鍵在于驗(yàn)證制造過程中病毒是否被有效地滅活,以確保疫苗的質(zhì)量和安全性。這一檢測過程基于多個關(guān)鍵指標(biāo),其中病毒含量和免疫原性是重要指標(biāo)。病毒含量作為主要指標(biāo),不僅需要控制在特定范圍內(nèi),以確保疫苗的效力,同時也應(yīng)避免含量過高而導(dǎo)致實(shí)際感染。例如在滅活疫苗的制造過程中,1 mL疫苗中病毒含量至少要達(dá)到107TCID50,以保證疫苗的免疫原性;免疫原性的驗(yàn)證通過動物實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行,通過觀察免疫動物是否產(chǎn)生特異性抗體,驗(yàn)證疫苗是否能夠引發(fā)免疫反應(yīng)。

2.3 疫苗效力評估

疫苗效力評估作為豬口蹄疫O型滅活疫苗質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié),旨在驗(yàn)證疫苗在實(shí)際應(yīng)用中的免疫保護(hù)效果。在野外實(shí)驗(yàn)中,疫苗接種群體的發(fā)病率明顯低于對照群,充分顯示了疫苗的防護(hù)作用。例如接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后,批次A的發(fā)病率僅為1%,而未接種疫苗的對照群發(fā)病率高達(dá)15%?？贵w滴度測定也是評估疫苗效力的重要手段。疫苗接種后,動物體內(nèi)抗體滴度迅速上升。以批次B為例,接種后第21天,動物的抗體滴度達(dá)到1：1 280,充分表明了疫苗有效刺激了免疫反應(yīng)。挑戰(zhàn)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了疫苗的免疫保護(hù)效果。在此例中,接種后的動物在感染源挑戰(zhàn)后無明顯病癥,而對照組則出現(xiàn)嚴(yán)重的口蹄疫癥狀。疫苗效力評估不僅關(guān)注免疫保護(hù)效果,還包括疫苗在實(shí)際養(yǎng)殖環(huán)境中的應(yīng)用效果。例如批次C的疫苗在養(yǎng)殖場推廣后,接種豬群的口蹄疫發(fā)病率降低了80%,有效地控制了疫情蔓延。

2.4 病毒含量測定

通過采用定量RT-PCR技術(shù)等方法,可以準(zhǔn)確測定疫苗中的病毒含量,確保其在應(yīng)用過程中的穩(wěn)定性、一致性和免疫效力。例如在進(jìn)行疫苗生產(chǎn)時,定量RT-PCR可以分析疫苗中的病毒核酸含量,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線將核酸含量與病毒數(shù)量聯(lián)系起來,從而得出疫苗中病毒的數(shù)量。實(shí)際應(yīng)用中,不同批次的疫苗劑量中病毒數(shù)量的變化,如批次X中病毒數(shù)量為4.5×108個、批次Y中為6.2×108個、批次Z中為5.8×108個,有助于評估疫苗的一致性,確保每支疫苗劑量在免疫接種時具備足夠的抗原,從而引發(fā)有效的免疫反應(yīng)。此外,通過設(shè)定適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),可以確保疫苗的病毒含量控制在一定范圍內(nèi),既保障免疫效果,又避免病毒含量過高可能引發(fā)的不良反應(yīng)。

2.5 穩(wěn)定性分析

在存儲溫度為4 ℃的條件下,該疫苗在12個月內(nèi)抗體滴度保持穩(wěn)定,與初始抗體滴度相當(dāng)。對于儲存溫度為25 ℃的情況,經(jīng)過6個月的監(jiān)測,疫苗的外觀未出現(xiàn)異常變化,且其化學(xué)成分保持穩(wěn)定。穩(wěn)定性分析在確保疫苗質(zhì)量和有效性方面起著關(guān)鍵作用。穩(wěn)定性分析不僅可以評估疫苗在儲存和運(yùn)輸過程中的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性變化,還能夠?yàn)橐呙绲拈L期保存提供指導(dǎo)。通過物理穩(wěn)定性評估,確保疫苗在不同溫度下保持均勻懸浮狀態(tài),避免了沉淀和分層現(xiàn)象?；瘜W(xué)穩(wěn)定性分析則通過監(jiān)測活性成分的含量和純度,保證疫苗在儲存期間不發(fā)生不可逆的化學(xué)變化。生物學(xué)穩(wěn)定性研究則通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,驗(yàn)證疫苗在儲存期間的免疫效力,例如接種后抗體滴度的保持穩(wěn)定性。

3 安全性評估

3.1 一般反應(yīng)評估

在安全性評估中,一般反應(yīng)評估是關(guān)鍵方面,它涵蓋了疫苗接種后可能出現(xiàn)的常見反應(yīng)及其持續(xù)時間,從而為疫苗的安全性提供可靠的指導(dǎo)。一般反應(yīng)評估主要關(guān)注疫苗接種后可能出現(xiàn)的輕微不適癥狀,如注射部位腫脹、一過性體溫反應(yīng)、食欲減退等。這些反應(yīng)通常是暫時性的,隨著時間的推移逐漸減輕。例如疫苗接種后的1～2 d,部分接種豬可能出現(xiàn)注射部位腫脹,這是正常的免疫反應(yīng),通常在接種后幾天內(nèi)逐漸消退。此外,一過性體溫反應(yīng)是免疫過程中常見的生理反應(yīng),疫苗接種后動物可能在短時間內(nèi)出現(xiàn)輕度體溫升高,隨后逐漸恢復(fù)正常。食欲減退也是一種常見的反應(yīng),通常會在短時間內(nèi)恢復(fù),不會對動物的整體健康產(chǎn)生重大影響。為了全面評估一般反應(yīng),疫苗質(zhì)量控制中通常還會考慮不同個體、不同品種和年齡的免疫動物等因素。對于不同年齡段的豬,一般反應(yīng)可能會有所不同。成年豬可能在疫苗接種后表現(xiàn)出較輕的一般反應(yīng);幼仔豬可能對疫苗接種更為敏感,出現(xiàn)較明顯的反應(yīng)。

3.2 嚴(yán)重反應(yīng)評估

安全性評估中的嚴(yán)重反應(yīng)評估是豬口蹄疫O型滅活疫苗質(zhì)量控制中不可或缺的一部分,旨在全面了解疫苗接種后可能出現(xiàn)的嚴(yán)重不良反應(yīng),以確保疫苗的安全性和適用性。盡管嚴(yán)重反應(yīng)在整體接種群中相對較為罕見,但對于保障免疫動物的健康和生命安全至關(guān)重要[1]。疫苗的嚴(yán)重反應(yīng)評估涵蓋了一系列可能的不良反應(yīng),如急性過敏反應(yīng)、焦躁不安、呼吸急促等。在疫苗接種后的大規(guī)模監(jiān)測中,僅有不到0.5%的免疫動物出現(xiàn)了急性過敏反應(yīng),而這些情況在得到及時處理后都得到了恢復(fù)。對于焦躁不安、呼吸急促等嚴(yán)重反應(yīng),其發(fā)生率更低,甚至在某些情況下未出現(xiàn)。針對不同品種和年齡豬的疫苗接種反應(yīng)進(jìn)行比較分析,不同品種之間嚴(yán)重反應(yīng)的發(fā)生率存在一定差異。特別是在懷孕母豬的疫苗接種中,經(jīng)過嚴(yán)格篩選疫苗后,懷孕母豬的不良反應(yīng)率低于0.2%,未出現(xiàn)嚴(yán)重不良影響。

4 疫苗質(zhì)量管理措施

4.1 運(yùn)輸管理措施

對于豬口蹄疫O型滅活疫苗而言,嚴(yán)格的運(yùn)輸管理措施對保障疫苗的穩(wěn)定性和有效性至關(guān)重要。在運(yùn)輸過程中,應(yīng)采取一系列措施,確保疫苗在途中不受損害,維持其活性[2]。首先,疫苗的運(yùn)輸應(yīng)在恒溫環(huán)境下進(jìn)行,避免溫度波動對疫苗的影響。疫苗在2～8 ℃的溫度中穩(wěn)定性能得到最大程度的保障。因此,在運(yùn)輸過程中應(yīng)設(shè)定合適的溫控條件,確保疫苗始終處于穩(wěn)定的溫度范圍內(nèi)。其次,應(yīng)嚴(yán)格禁止冷凍運(yùn)輸。疫苗在冷凍條件下容易受到冰晶的損害,從而影響其有效性。因此,疫苗運(yùn)輸中絕不能出現(xiàn)冷凍情況,必須確保運(yùn)輸溫度不低于冰點(diǎn)。此外,還需避免疫苗暴露在陽光直射下。陽光中的紫外線和其他輻射可能影響疫苗的活性成分,疫苗在光照下容易發(fā)生蛋白質(zhì)降解和成分失活,因此,運(yùn)輸過程中要將疫苗放置在遮光的容器中,避免陽光直接照射。

4.2 注射管理措施

使用合適的注射器械,根據(jù)豬只的體重和疫苗劑量精確計(jì)算每頭豬只的接種劑量,具體接種劑量應(yīng)詳見使用說明。該疫苗的最佳注射部位是耳根后肌肉,須確保注射針頭準(zhǔn)確地插入耳根后肌肉,推薦注射深度為2～3 cm,這個深度可以確保疫苗在肌肉內(nèi)被充分吸收,從而產(chǎn)生免疫效果。培訓(xùn)有助于確保注射的準(zhǔn)確性和安全性,可避免誤操作導(dǎo)致不良反應(yīng)[3]。注射操作應(yīng)由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的操作人員進(jìn)行。操作人員需要嚴(yán)格遵循操作規(guī)程,包括疫苗瓶的檢查、豬只的體態(tài)檢查、消毒措施等。注射過程中需要注意避免交叉感染,選擇清潔消毒的注射器械,確保每頭豬只使用一次性針頭,避免感染的傳播。注射前須進(jìn)行體態(tài)檢查,排除患病、體弱、臨產(chǎn)懷孕母豬和長途運(yùn)輸后處于應(yīng)激狀態(tài)的豬只。在豬疫苗接種中,遵循“四打”原則,即選擇健康狀態(tài)的牲畜、非應(yīng)激狀態(tài)下進(jìn)行、適宜的氣溫時段安排、以及長途運(yùn)輸后休息24 h后再接種。同時,應(yīng)遵循“四不打”原則,即不在宰殺前20 d內(nèi)接種,不在特殊時期接種,患病、瘦弱、斷奶前的牲畜不予接種,以及配種20 d左右的母畜或即將臨產(chǎn)的母畜不可接種。

4.3 環(huán)境管理措施

疫苗應(yīng)存放在2～8 ℃環(huán)境中,以防止活性成分的降解,過高或過低的溫度都可能對疫苗質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響。紫外線和光照可能對疫苗的穩(wěn)定性和有效性產(chǎn)生不利影響。在疫苗存儲過程中,應(yīng)避免直接的日光暴露,應(yīng)存放在遮光的環(huán)境中,過高的濕度可能導(dǎo)致疫苗成分的降解。適宜的相對濕度范圍(通常為30%～50%)可以有效防止水分滲入疫苗瓶中,從而保持疫苗成分的完整性。疫苗應(yīng)與可能引起污染的物質(zhì)隔離存放,適當(dāng)?shù)囊呙绱鎯Σ季趾透綦x管理可以降低疫苗受到外界物質(zhì)污染的風(fēng)險(xiǎn),通過定期對存放疫苗的設(shè)施、工具和容器進(jìn)行清潔和消毒,可以減少污染的風(fēng)險(xiǎn),確保疫苗的穩(wěn)定性和免疫效果。詳細(xì)的登記記錄有利于監(jiān)控疫苗的質(zhì)量,及時發(fā)現(xiàn)問題并采取相應(yīng)的糾正措施。記錄疫苗的存儲溫度、使用日期、疫苗批號等信息對于質(zhì)量控制至關(guān)重要。

5 結(jié)束語

豬口蹄疫O型滅活疫苗的質(zhì)量控制與安全性評估是確保疫苗有效性和動物健康的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過病毒含量的測定、病毒滅活效果的檢測以及疫苗效力的評估,可以明確疫苗的免疫保護(hù)效果;安全性評估闡明了在免疫過程中可能出現(xiàn)的一般和嚴(yán)重反應(yīng),為免疫實(shí)施提供了基本指導(dǎo)。而運(yùn)輸、注射和環(huán)境管理措施在疫苗質(zhì)量維護(hù)中起著重要作用,適宜的運(yùn)輸溫度、注射深度與方式,以及疫苗在儲存和使用過程中的環(huán)境管理,直接關(guān)系到疫苗的活性和穩(wěn)定性。要合理地遵循“四打”和“四不打”原則,優(yōu)化接種時機(jī),提高接種效果。