雞源鼠傷寒沙門(mén)菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)與毒力基因檢測(cè)

郭偉娜,陶 晶,何夢(mèng)婷,王紫葦,馬佰賀,趙 磊

(1.安徽科技學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,安徽 鳳陽(yáng) 233100; 2.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽 鳳陽(yáng) 233100)

沙門(mén)菌是能夠引起人類(lèi)食源性傳染性疾病的重要食物致病菌之一[1]。我國(guó)由致病菌引起的食物中毒事件70%～80%是由沙門(mén)菌引起,人和動(dòng)物感染后主要表現(xiàn)為嘔吐、腹瀉、傷寒、副傷寒、敗血癥等病癥。因此,沙門(mén)菌具有重要的醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生學(xué)研究意義[2]。沙門(mén)菌血清型很多,已報(bào)道的有2 600多種,其中研究較多的可引起人獸共患的主要為腸炎沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌兩種血清型[3-5]。研究表明,從零售肉制品中分離的341株腸道沙門(mén)菌中59.5%為腸炎沙門(mén)菌(203/341),腸炎沙門(mén)菌可在奶、肉、蛋類(lèi)生物制品中存活幾個(gè)月,還可通過(guò)糞便威脅公共衛(wèi)生安全,是飼養(yǎng)環(huán)境中主要的致病菌之一。李世楷等[6]從廣東地區(qū)送檢的316份水禽病料樣品中分離鑒定出188株沙門(mén)菌,其中鵝源鼠傷寒沙門(mén)菌占82.97%,并且多數(shù)菌株具有多重耐藥性。鼠傷寒沙門(mén)菌感染雞的臨床表現(xiàn)主要有精神萎靡,食欲降低,閉眼縮頸,羽毛蓬亂,有白色糨糊狀稀糞排出,最終死于全身衰竭或敗血癥。鼠傷寒沙門(mén)菌病既能水平傳播又能垂直傳播,對(duì)畜禽養(yǎng)殖業(yè)危害較大[7]。

鼠傷寒沙門(mén)菌是一種很常見(jiàn)的病原菌,可從禽、豬、牛等多種動(dòng)物及其產(chǎn)品中分離得到[8]。有些菌株除了引起局部胃腸炎,還能引起全身感染,例如菌株ST313和ST19等[9-10]。沙門(mén)菌含有的多種毒力因子與其致病性密切相關(guān),包括菌毛、鞭毛、脂多糖、毒素、毒力島、毒力質(zhì)粒等[11]。這些毒力因子相關(guān)基因多數(shù)位于毒力島SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5上,包括invA、invJ、virK、sipA、sopA、ssaB、misL、orf319、ssa、ssc、sse、pipC、mogA、mgtC、bcfA、araB等基因;少數(shù)毒力基因位于質(zhì)粒上,如spvR、spvA、spvB、spvC、spvD等[12]。沙門(mén)菌的致病性主要是由毒力基因之間的相互作用決定[13,14]。目前,已從不同血清型的沙門(mén)菌中發(fā)現(xiàn)了24個(gè)毒力島[15],其中SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5研究比較深入,例如SPI-1和SPI-2編碼的Ⅲ型分泌系統(tǒng)主要是通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)毒力蛋白而影響宿主細(xì)胞功能[2]。本研究主要是對(duì)疑似沙門(mén)菌感染的病死產(chǎn)蛋雞進(jìn)行病原的分離鑒定和藥敏試驗(yàn),并對(duì)其5個(gè)毒力質(zhì)?；?spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)和23個(gè)毒力島基因(SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5、invA、invJ、virK、sipA、sopA、araB、ssaB、sscA、sseC、sseD、ssE、sseL、mogA、mgtC、misL、orf319、bcfA、pipC)進(jìn)行PCR檢測(cè)及測(cè)序,深入了解沙門(mén)菌中毒力基因的分布和變異情況,從而為研究沙門(mén)菌的致病機(jī)理、減毒菌株的構(gòu)建和弱毒疫苗的研制等奠定基礎(chǔ),為禽源沙門(mén)菌病的防控技術(shù)研究提供重要參考,同時(shí)對(duì)保障人類(lèi)健康和公共衛(wèi)生學(xué)等也具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

藥敏試驗(yàn)圓紙片,購(gòu)自天和微生物(杭州)公司;細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒,購(gòu)自北京天根生化科技有限公司;血瓊脂培養(yǎng)基,購(gòu)自常德比克曼生物科技有限公司;亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基(BS),購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司;PCR MasterMix、50×TAE緩沖液、DNA Marker DL2000,購(gòu)自生工生物工程(上海)有限公司;生化培養(yǎng)基由本實(shí)驗(yàn)室配制。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病料來(lái)源

2021年7月,安徽省鳳陽(yáng)縣某養(yǎng)殖戶(hù)共飼養(yǎng)3 000只產(chǎn)蛋雞,270日齡開(kāi)始出現(xiàn)死亡,病雞精神沉郁,采食量下降,排出黃白色或黃綠色稀糞。送檢5只280日齡病死雞,經(jīng)剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟腫大、壞死、出血、質(zhì)地變脆,脾臟腫大、壞死,肺臟充血、出血,胃腸道黏膜也有出血等敗血癥變化。

1.2.2 分離培養(yǎng)

從病死產(chǎn)蛋雞的脾臟組織蘸取病料,分別接種到普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、BS培養(yǎng)基上,37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察分離菌在不同培養(yǎng)基上的菌落特征。然后挑取麥康凱培養(yǎng)基上的無(wú)色單菌落和BS培養(yǎng)基上的黑色菌落進(jìn)一步純化培養(yǎng)。

1.2.3 染色鏡檢

用無(wú)菌接種環(huán)從BS培養(yǎng)基上挑取分離菌純培養(yǎng)物的單個(gè)菌落制備細(xì)菌抹片,進(jìn)行革蘭染色鏡檢,觀察菌體形態(tài)特征。

1.2.4 模板制備

取分離菌純培養(yǎng)物的單個(gè)菌落接種至LB液體培養(yǎng)基中,37 ℃過(guò)夜培養(yǎng),采用離心柱型細(xì)菌基因組提取試劑盒(天根)從菌液中提取核酸作為模板,樣品于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析

利用細(xì)菌16S rRNA基因的通用引物(27-F:AGAGTTTGATCATGGCTCAG,1525-R:AAGGAGGTGATCCAACC),進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析。PCR反應(yīng)體系為50 μL:PCR Mix 25 μL,上下游引物各為2 μL,模板5 μL,滅菌水16 μL。PCR反應(yīng)條件為:95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s,共35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。

取5 μL PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),將有目的條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物送至安徽通用生物有限公司測(cè)序,將16S rRNA基因的測(cè)序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行序列比對(duì)分析,并用DNAStar軟件中的Megalign程序進(jìn)行同源性分析和遺傳進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建。

1.2.6 生化試驗(yàn)

用接種針將分離菌分別接種至不同糖發(fā)酵管中(葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇),37 ℃培養(yǎng)24 h,檢測(cè)分離菌對(duì)糖的發(fā)酵情況;采用接種環(huán)將分離菌分別接種至蛋白胨水和葡萄糖蛋白胨水中,37 ℃培養(yǎng)24 h,檢測(cè)吲哚形成試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、二乙酰試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.7 藥敏試驗(yàn)

用圓紙片擴(kuò)散法測(cè)定分離株對(duì)10大類(lèi)共26種藥物的敏感性,具體包括:青霉素類(lèi)藥物(氨芐西林、苯唑西林、羧芐西林)、氨基糖苷類(lèi)藥物(新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、奈替米星)、頭孢菌素類(lèi)藥物(頭孢哌酮、頭孢西丁、頭孢氨芐、頭孢噻肟、頭孢呋辛、頭孢曲松)、喹諾酮類(lèi)藥物(氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星)、氯霉素類(lèi)藥物(氟苯尼考)、四環(huán)素類(lèi)藥物(多西環(huán)素)、多肽類(lèi)藥物(多黏菌素B、萬(wàn)古霉素)、磺胺類(lèi)藥物(復(fù)方新諾明)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物(紅霉素、麥迪霉素)、林可酰胺類(lèi)藥物(林可霉素、克林霉素)。37 ℃培養(yǎng)24 h后測(cè)定抑菌圈直徑,參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判定藥物敏感性。

1.2.8 毒力基因檢測(cè)

參照相關(guān)文獻(xiàn)中沙門(mén)菌的28個(gè)毒力基因引物序列[16-19],由安徽通用生物有限公司合成引物,引物序列及擴(kuò)增目的片段大小見(jiàn)表1。毒力基因的PCR擴(kuò)增體系為50 μL:PCR Mix 25 μL,上下游引物各為2 μL,模板5 μL,滅菌水16 μL。invA、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD、sseE、sseL、mogA、mgtC、bcfA、araB這12個(gè)毒力基因的PCR反應(yīng)條件為:95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s,共35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。其余16個(gè)毒力基因的PCR體系調(diào)整為95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,50 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s,共35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),將有目的條帶的PCR產(chǎn)物送至安徽通用生物有限公司測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在NCBI的GenBank中進(jìn)行序列比對(duì)分析。

表1 引物序列及目的片段大小

2 結(jié)果與分析

2.1 分離培養(yǎng)與鏡檢結(jié)果

分離菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上表現(xiàn)為圓形、邊緣平整,表面光滑、濕潤(rùn)、不透明、輕度隆起的灰白色小菌落;在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上為圓形、表面光滑、濕潤(rùn)的無(wú)色菌落;在血瓊脂培養(yǎng)基上為圓形、表面光滑、濕潤(rùn)的灰白色中等大小的菌落;在BS培養(yǎng)基上表現(xiàn)為光滑、圓形、黑色帶有金屬光澤的中等大小菌落,具體見(jiàn)圖1。分離菌經(jīng)革蘭染色鏡檢表現(xiàn)為革蘭陰性、無(wú)芽孢、紅色的短桿菌,如圖2,形態(tài)染色結(jié)果與沙門(mén)菌相符。

A,普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;B,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基;C,血瓊脂培養(yǎng)基;D,BS培養(yǎng)基。A, The ordinary agar; B, MacConkey agar; C, Blood agar; D, BS medium.

圖2 分離菌革蘭染色鏡檢結(jié)果(1 000×)Fig.2 Microscopic examination of isolated bacteria by Gram staining (1 000×)

2.2 16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖3,擴(kuò)增出1 500 bp大小條帶,與預(yù)期相符。將測(cè)序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行序列比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)分離菌與鼠傷寒沙門(mén)菌OLF-FSR1-WB-Sparrow-ST-87菌株的16S rRNA基因(GenBank登錄號(hào):CP051276)相似性為99.86%。

M,DL2 000 DNA marker;1,陰性對(duì)照;2,分離菌。M, DL2 000DNA marker; 1, Negative control; 2, the isolated bacteria.

2.3 16S rRNA基因的遺傳進(jìn)化分析結(jié)果

將分離菌16S rRNA基因測(cè)序結(jié)果(seq1)與GenBank中10株沙門(mén)菌參考菌株的16S rRNA基因序列(表2),用DNAStar軟件中的Megalign程序進(jìn)行同源性分析,發(fā)現(xiàn)其同源性介于99.5%～100%(圖4)?；?6S rRNA基因序列構(gòu)建的遺傳進(jìn)化樹(shù),7個(gè)鼠傷寒沙門(mén)菌參考菌株均位于同一個(gè)分支,同源性較高(圖5)。因此,分離菌經(jīng)鑒定為鼠傷寒沙門(mén)菌,菌株命名為FY2021,將其16S rRNA基因測(cè)序結(jié)果上傳至GenBank,獲得登錄號(hào)為OM996201。

圖4 16S rRNA基因序列同源性分析Fig.4 Homology analysis of 16S rRNA sequence

圖5 基于16S rRNA基因序列構(gòu)建的遺傳進(jìn)化樹(shù)Fig.5 Construction of genetic evolutionary tree based on 16S rRNA sequences

表2 腸道沙門(mén)菌參考菌株信息

2.4 生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)表明,鼠傷寒沙門(mén)菌分離株能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和甘露醇,但不發(fā)酵乳糖和蔗糖,吲哚形成試驗(yàn)陰性,甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性,二乙酰試驗(yàn)陰性,枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽(yáng)性,生化試驗(yàn)結(jié)果與鼠傷寒沙門(mén)菌的生化特性相符。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

鼠傷寒沙門(mén)菌分離株對(duì)不同抗菌藥物的敏感性結(jié)果見(jiàn)表3,由表可知,對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物、氯霉素類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)均為敏感,除多西環(huán)素的抑菌圈為18 mm以外,其他藥物的抑菌圈均在25 mm以上;對(duì)氨基糖胺類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)藥物部分敏感,例如丁胺卡那霉素、奈替米星、頭孢哌酮、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢曲松,其他為中度敏感;對(duì)多肽類(lèi)、磺胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、林克酰胺類(lèi)藥物多數(shù)為耐藥,僅對(duì)多粘菌素B為中度敏感;另外對(duì)青霉素類(lèi)藥物抑菌效果差異較大,其中苯唑西林耐藥,氨芐西林中度敏感,羧芐西林敏感。

表3 抑菌圈直徑測(cè)定結(jié)果

2.6 毒力基因的PCR檢測(cè)結(jié)果

鼠傷寒沙門(mén)菌分離株的28個(gè)毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)圖6,除了sseC基因由于濃度過(guò)低而測(cè)序失敗外,其余27個(gè)毒力基因均擴(kuò)增出目的條帶并成功測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中沙門(mén)菌參考菌株的相應(yīng)基因序列比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)其相似性介于98.58%～100%,具體見(jiàn)表4。

M,DL2 000 DNA marker ;1～12,分別為毒力基因invA、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD、sseE、sseL、mogA、mgtC、bcfA 和araB;13～28,分別為毒力基因invJ、sscA、sseC、sseD、virK、sipA、sopA、ssaB、misL、ofr319、pipC、SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4 和SPI-5。M, DL2 000 DNA marker;1-12, genes of invA, spvR, spvA, spvB, spvC, spvD, sseE, sseL, mogA, mgtC, bcfA and araB respectively.13-28, genes of invJ, sscA, sseC, sseD, virK, sipA, sopA, ssaB, misL, ofr319, pipC, SPI-1, SPI-2, SPI-3, SPI-4 and SPI-5, respectively.

表4 毒力基因相似性比對(duì)結(jié)果

3 討論

鼠傷寒沙門(mén)菌是一種分布于世界多個(gè)地區(qū)的重要食源性病原,已嚴(yán)重威脅到人類(lèi)健康和公共衛(wèi)生安全。人類(lèi)一般是因食用鼠傷寒沙門(mén)菌污染的動(dòng)物產(chǎn)品而感染,因此,鼠傷寒沙門(mén)菌病的主要防治措施是控制養(yǎng)殖生產(chǎn)中的鼠傷寒沙門(mén)菌[20]。研究發(fā)現(xiàn),在澳大利亞鼠傷寒沙門(mén)菌是蛋雞沙門(mén)菌病暴發(fā)的主要原因[21],也是我國(guó)沙門(mén)菌中的主要血清型[22]。目前,沙門(mén)菌的診斷方法有分離培養(yǎng)、血清學(xué)方法、PCR檢測(cè)、基因芯片等技術(shù)[23],其中多重PCR方法有利于不同血清型沙門(mén)菌的快速鑒定。李師瑩等[24]采用四重PCR檢測(cè)方法從臨床病料中分離到63株沙門(mén)菌,其中33株為腸炎沙門(mén)菌,9株為鼠傷寒沙門(mén)菌,2株為雞白痢沙門(mén)菌。蔣小武等[25]從某農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集的920份樣本中檢出159份沙門(mén)菌陽(yáng)性樣品,采用PCR分子分型技術(shù)檢出8株腸炎沙門(mén)菌與1株鼠傷寒沙門(mén)菌。不同血清型沙門(mén)菌的分布可能與養(yǎng)殖環(huán)境、鳥(niǎo)類(lèi)傳播等有關(guān),例如水禽主要在水中活動(dòng),與鳥(niǎo)類(lèi)接觸機(jī)會(huì)更多,也更容易導(dǎo)致沙門(mén)菌散播。因此,需加強(qiáng)養(yǎng)殖業(yè)中沙門(mén)菌病的檢疫和防控,以及畜禽產(chǎn)品中的鼠傷寒沙門(mén)菌病原學(xué)監(jiān)測(cè),減少或避免食源性疾病的發(fā)生。

本研究從病死產(chǎn)蛋雞的脾臟組織中分離鑒定出一株鼠傷寒沙門(mén)菌,分離株對(duì)喹諾酮類(lèi)、氯霉素類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)藥物均較敏感,其中對(duì)環(huán)丙沙星最為敏感,抑菌圈達(dá)30 mm;對(duì)丁胺卡那霉素、奈替米星、頭孢哌酮、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢曲松敏感;對(duì)多肽類(lèi)、磺胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、林可酰胺類(lèi)藥物多數(shù)為耐藥。張啟龍等[26]分離的1株信鴿源鼠傷寒沙門(mén)菌對(duì)頭孢噻肟、頭孢哌酮、多西環(huán)素、諾氟沙星和氧氟沙星等敏感,對(duì)新霉素中度敏感,與本研究一致,但對(duì)氟苯尼考表現(xiàn)耐藥,與本研究結(jié)果差異較大?？足懙萚27]分離的4株鵝源鼠傷寒沙門(mén)菌對(duì)諾氟沙星、頭孢曲松等敏感,與本研究相符,但不同的是對(duì)多黏菌素B和多西環(huán)素表現(xiàn)耐藥。程旭等[28]分離的1株肉鴿源鼠傷寒沙門(mén)菌對(duì)20種抗菌藥均敏感,僅對(duì)鏈霉素中度敏感。王彥紅等[29]從214份病死鵝分離的50株沙門(mén)菌中有30株為鼠傷寒沙門(mén)菌,其中20株鼠傷寒沙門(mén)菌表現(xiàn)多重耐藥。周榮云等[7]分離的21株禽源鼠傷寒沙門(mén)菌對(duì)新霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素敏感,但對(duì)喹諾酮類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)、多肽類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)等部分耐藥,其中10株菌為多重耐藥。軒慧勇等[30]從不同動(dòng)物中分離到162株鼠傷寒沙門(mén)菌,其中有159株菌表現(xiàn)為多重耐藥。由此可見(jiàn),我國(guó)不同地區(qū)的鼠傷寒沙門(mén)菌分離株耐藥性差異較大,多重耐藥呈現(xiàn)增加趨勢(shì)。耐藥性發(fā)展迅速多是由于濫用或過(guò)度使用抗生素造成[31],因此,養(yǎng)殖場(chǎng)必須合理應(yīng)用抗菌藥,定期進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè),控制耐藥菌的傳播,對(duì)沙門(mén)菌病的防控至關(guān)重要。另外,養(yǎng)殖場(chǎng)還要建立生物安全體系,做好飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生消毒等工作。

本研究對(duì)鼠傷寒沙門(mén)菌分離株28個(gè)毒力基因的PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),除了sseC基因未檢出外,其余27個(gè)毒力基因均被檢出,測(cè)序結(jié)果與參考菌株相應(yīng)基因的相似性介于98.58%～100%之間。楊文文等[11]分離的25株雞源沙門(mén)菌分離株中有9株腸炎沙門(mén)菌、8株雞白痢沙門(mén)菌和8株鼠傷寒沙門(mén)菌,分離菌均攜帶多種毒力基因,而毒力島基因gipA和毒力質(zhì)粒基因spvB只在鼠傷寒沙門(mén)菌中檢出。王德寧等[32]從44株雞源沙門(mén)菌分離株中共檢出invJ、virK、sipA、sopA、ssaB、misL、orf319、pipC這8種毒力基因。張啟龍等[26]從鼠傷寒沙門(mén)菌分離株中檢測(cè)出mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvA、spvB、spvC、spvD、spvR、sopA、virK這12種毒力基因,均與本研究一致。王德寧[32]、張珍等[12]發(fā)現(xiàn),沙門(mén)菌分離株的致病性與其攜帶的毒力基因種類(lèi)呈正相關(guān)。研究表明,沙門(mén)菌可通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)移獲得新的毒力基因,其水平方向的傳遞可使菌株毒力發(fā)生改變,從而改變沙門(mén)菌對(duì)宿主的致病性[33]。李仕楷等[6]通過(guò)構(gòu)建鵝源鼠傷寒沙門(mén)菌crp、hfq基因缺失株并鑒定其生物學(xué)特性,研究這兩個(gè)毒力基因的功能從而為沙門(mén)菌病的疫苗研發(fā)提供參考。研究證實(shí)耐藥基因的轉(zhuǎn)移也可能影響毒力基因的表達(dá)[34],因此,沙門(mén)菌耐藥性、毒力相關(guān)基因的研究,對(duì)沙門(mén)菌的致病機(jī)理闡釋和沙門(mén)菌病的綜合防控意義深遠(yuǎn)。

本研究通過(guò)病原分離鑒定、PCR檢測(cè)等方法從送檢的病死產(chǎn)蛋雞分離鑒定出一株鼠傷寒沙門(mén)菌菌株FY2021,其對(duì)環(huán)丙沙星最為敏感,同時(shí)攜帶27種毒力基因,從而為深入研究鼠傷寒沙門(mén)菌的致病機(jī)理、減毒菌株的構(gòu)建和弱毒疫苗的研制等提供參考依據(jù)。