花椒流膠病拮抗菌的分離鑒定及其生防機(jī)制

趙吉桃,何 靜,*,丁德東,李彥湘,候彩霞,趙 倩

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) a,林學(xué)院;b,甘肅省枸杞無害化栽培工程研究中心,甘肅 蘭州 730070)

花椒(Zanthoxylumbungeanum)屬蕓香科花椒屬落葉小喬木,主要分布于中國甘肅、四川、浙江等地,是我國重要的經(jīng)濟(jì)林樹種之一[1]。花椒不僅是重要的調(diào)味佐料,還是一種常用的中草藥[2],因其具有收益早、用途廣、價(jià)值高與適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),常用作我國一些地區(qū)的主要經(jīng)濟(jì)樹種、抗旱樹種與水土保持樹種[3]。目前,隨著農(nóng)林業(yè)種植面積的不斷擴(kuò)大,花椒病害的發(fā)生愈發(fā)嚴(yán)重,其中花椒流膠病是發(fā)病最為嚴(yán)重的病害,已成為傳播性廣的系統(tǒng)病害[4]。三線鐮刀菌(Fusariumtricinctum)是花椒流膠病的主要病原菌之一[5],由該病原菌引發(fā)的流膠病日趨嚴(yán)重,已成為制約花椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵因素。

目前,花椒流膠病的防治主要集中在農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)防治[6]。椒農(nóng)常采用清理椒園、合理修剪等農(nóng)業(yè)措施,以及使用多菌靈、啶氧菌酯等殺菌劑進(jìn)行化學(xué)防治,但化學(xué)藥劑的大量使用會使植株產(chǎn)生一定的耐藥性并對椒樹周圍環(huán)境造成極大危害。因此,亟待開辟安全、環(huán)保的有效途徑用于花椒流膠病的防治。目前,生物防治是一種綠色新穎的防治方法,具有環(huán)保、危害性小等諸多優(yōu)點(diǎn)[7-8],其中以內(nèi)生真菌作為生防菌株防治植物病害的“以菌治菌”防治手段備受人們青睞。植物內(nèi)生真菌通常存在于健康植株的各種組織和器官中,且不會引起植株的病害。內(nèi)生真菌與植物通過“協(xié)同進(jìn)化”作用[9-11],可產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的次級代謝產(chǎn)物[12-14],這些物質(zhì)具有抗菌、抗腫瘤、抗氧化等作用,且能促進(jìn)植物的生長發(fā)育或增強(qiáng)植物抗病害能力[15-17]。如李磊等[18]研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)生生防菌解淀粉芽孢桿菌BacillusamyloliquefaciensHt-q6能夠有效控制番茄葉霉病和灰霉病的發(fā)生;韓忠明等[19]研究發(fā)現(xiàn),拮抗菌株桃色頂孢霉AcremoniumpersicinumMR-47對防風(fēng)根腐病病原菌木賊鐮刀菌Fusariumequiseti有良好的防治效果。目前,生防菌在花椒流膠病防治方面的相關(guān)研究與應(yīng)用還鮮有報(bào)道。

本試驗(yàn)以三線鐮刀菌為靶標(biāo)菌,通過研究花椒內(nèi)生真菌的抗真菌活性,篩選出具有較強(qiáng)拮抗效果的菌株,為花椒流膠病的生物防治提供一定的理論參考借鑒,該研究結(jié)果對補(bǔ)充或開發(fā)新型植物病害防治藥劑具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試植株

3年生大紅袍花椒植株,由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院經(jīng)濟(jì)林實(shí)驗(yàn)地提供。

1.1.2 供試菌種

花椒流膠病病原真菌:三線鐮刀菌,用于拮抗真菌篩選。4種供試病原真菌:尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、木賊鐮刀菌(Fusariumequiseti)、交鏈格孢菌(Alternariaalternata)、細(xì)極鏈格孢菌(Alternariatenuissima),用于拮抗真菌抑菌譜測定。以上真菌均保存于甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院森林保護(hù)實(shí)驗(yàn)室,經(jīng)活化后備用。

1.1.3 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基:200 g馬鈴薯,20 g瓊脂,20 g葡萄糖,1 000 mL蒸餾水;馬鈴薯葡萄糖液體(PDB)培養(yǎng)基:200 g馬鈴薯,20 g葡萄糖,1 000 mL蒸餾水。

1.1.4 主要試劑

22.5%啶氧菌酯懸浮劑(上海科迪華農(nóng)業(yè)科技有限公司);DNA提取試劑盒Universal Genomic DNA Extraction Kit(北京索萊寶科技有限公司)。

1.2 內(nèi)生真菌的分離純化

采用組織分離法[20],取新鮮健康的花椒植株的根、莖、葉和刺,用流水沖洗干凈,自然晾干。在無菌環(huán)境中,將根、莖、葉和刺分別切成約0.5 cm×0.5 cm的小塊,置于質(zhì)量濃度0.1%的HgCl2溶液中浸泡1 min,用無菌水漂洗3～5次,再用體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液浸泡1 min,然后用無菌水漂洗3～5次;在無菌環(huán)境中,將消毒后的材料放于無菌濾紙上晾干;然后將植物材料的組織切口處放置于含有0.1%鏈霉素的PDA平板中培養(yǎng),每個(gè)培養(yǎng)皿放置4塊植物組織,設(shè)置6個(gè)重復(fù)。將植物組織消毒后最后一遍沖洗的無菌水洗滌液涂在PDA培養(yǎng)基上作為對照,25 ℃培養(yǎng)2 d后無菌落長出,表明消毒徹底。將樣品25 ℃培養(yǎng)至出現(xiàn)菌落,從菌落邊緣挑取菌絲分別接種于PDA平板,經(jīng)反復(fù)純化得到單一菌株,4 ℃保存。

1.3 拮抗菌株的篩選

在PDA平板兩側(cè)分別接入供試病原菌菌餅(直徑6 mm)和花椒內(nèi)生真菌菌餅(直徑6 mm)作平板對峙試驗(yàn),兩菌餅相距5 cm,以不接內(nèi)生真菌作空白對照。每試驗(yàn)3次重復(fù),置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d后,測量并記錄病原真菌菌落的徑向生長直徑,計(jì)算抑制率[21]。

r=(dCK-dt)/(dCK-d)。

(1)

式(1)中:r表示抑制率;dCK表示對照菌落直徑;dt表示處理菌落直徑;d表示菌餅直徑。

1.4 花椒內(nèi)生真菌的鑒定

將分離得到的菌種接種至PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng),25 ℃培養(yǎng)5～7 d。培養(yǎng)期間,記錄菌落的生長周期、顏色與菌落形態(tài)等特征,并對菌絲、孢子和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等進(jìn)行顯微觀察。根據(jù)形態(tài)觀察結(jié)果,查閱《真菌鑒定手冊》[22]與相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行初步鑒定。

將長滿培養(yǎng)皿的菌落用蒸餾水沖洗,移至研缽充分研磨,采用DNA提取試劑盒提取DNA,用通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)、ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)[23]進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系:5×FastPfu Buffer 10 μL,2.5 mmol·L-1dNTPs 2 μL,上下游引物(5 μmol·L-1)各1 μL,FastPfu Polymerase 0.5 μL,DNA模板10 ng,超純水補(bǔ)充至50 μL。擴(kuò)增程序:95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,35循環(huán);72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,并委托阿趣生物公司進(jìn)行基因測序,測序結(jié)果用BLAST進(jìn)行同源性比對,通過MEGA 7.0軟件中的NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.5 抑菌譜的測定

將4種供試病原菌與內(nèi)生真菌HJ-18分別做平板對峙試驗(yàn),兩菌餅相距5 cm,以不接內(nèi)生真菌作空白對照,3次重復(fù),置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d后,測量并記錄病原真菌菌落的徑向生長直徑,計(jì)算抑制率。計(jì)算公式同式(1)。

1.6 菌株培養(yǎng)濾液的制備

將PDB培養(yǎng)基分別裝于150 mL錐形瓶(每瓶75 mL)中高溫滅菌30 min。待冷卻后,向每個(gè)錐形瓶中分別加入1 mL菌株HJ-18孢子懸浮液(1×106CFU·mL-1),置于25 ℃、轉(zhuǎn)速為160 r·min-1的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)7 d,將培養(yǎng)液于4 ℃、5 595×g條件下離心10 min,取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾3次,得到培養(yǎng)濾液。

1.7 培養(yǎng)濾液穩(wěn)定性測定

1.7.1 自然光穩(wěn)定性

將菌株HJ-18培養(yǎng)濾液置于4 000 lx的培養(yǎng)箱中,濾液距光源20 cm,分別照射2、4、6、8、10、12 h,以未經(jīng)照射的培養(yǎng)濾液為對照,以未經(jīng)處理的等量無菌水為空白對照,置于25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d。每組3次重復(fù)。相對抑制率計(jì)算方法如下:

rR=(dCK-dt)/(dCK-dn)。

(2)

式(2)中:rR表示相對抑制率;dCK表示空白對照菌落直徑;dt表示處理菌落直徑;dn表示未處理菌落直徑。

1.7.2 紫外光穩(wěn)定性

將菌株HJ-18培養(yǎng)濾液置于距30 W紫外燈20 cm處,分別照射30、60、90、120、150 min,測定培養(yǎng)濾液的相對抑制率,方法同1.7.1節(jié)。

1.7.3 熱穩(wěn)定性

將菌株HJ-18培養(yǎng)濾液分別置于20、40、60、80、100 ℃水浴30 min后恢復(fù)室溫,測定培養(yǎng)濾液的相對抑制率,方法同1.7.1節(jié)。

1.7.4 酸堿穩(wěn)定性

用1 mol·L-1HCl和1 mol·L-1NaOH溶液分別將菌株HJ-18培養(yǎng)濾液pH值調(diào)至2、4、6、8、10、12,靜置后調(diào)至自然pH值(6.5),測定培養(yǎng)濾液的相對抑制率,方法同1.7.1節(jié)。

1.8 菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲生長的影響

菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲生長的抑制率。將1.6節(jié)制得的培養(yǎng)濾液按照10%、20%、30%、40%、50%的體積分?jǐn)?shù)加入25 mL PDA培養(yǎng)基中,制成含藥平板,以等量PDA培養(yǎng)基為對照,每組3次重復(fù)。將三線鐮刀菌菌餅接入平板中央,7 d后觀察并記錄菌落生長直徑,并計(jì)算抑制率。

菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲生長影響的顯微結(jié)構(gòu)觀察。參考許樂等[24]的方法,略作修改,進(jìn)行樣品的處理,挑取菌株HJ-18培養(yǎng)濾液處理的三線鐮刀菌菌絲體,經(jīng)過戊二醛固定12 h,然后用磷酸緩沖鹽溶液(PBS,pH值7.4)處理,再用OSO4固定5 h;依次經(jīng)45%(體積分?jǐn)?shù),下同)、55%乙醇溶液梯度脫水處理1 h,用70%乙醇處理過夜;再依次用85%、95%、100%乙醇分別處理30 min;用醋酸異戊酯處理1 h,在CO2臨界點(diǎn)干燥、鍍金,于掃描電子顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)變化。以未經(jīng)培養(yǎng)濾液處理的菌絲為對照。

1.9 盆栽試驗(yàn)

選用生長狀況大致相同的1年生健康花椒幼苗,每盆1株。采用接種針和注射器,每枝注射10 mL三線鐮刀菌孢子懸浮液(1.0×106CFU·mL-1),發(fā)病后將培養(yǎng)7 d的培養(yǎng)液噴施在枝干表面,第0、30天各處理1次,每盆每次噴施200 mL,以等量無菌水為對照,以22.5%啶氧菌酯處理為陽性對照。試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理,每個(gè)處理10盆,重復(fù)3次,分別為:(1)只接種病原菌;(2)病原菌接種后噴施培養(yǎng)液;(3)病原菌接種后噴施無菌水;(4)病原菌接種后噴施22.5%啶氧菌酯100倍液50 mL;(5)培養(yǎng)液處理后再接種病原菌。試驗(yàn)期間進(jìn)行正常水肥管理,于處理后每隔15 d調(diào)查發(fā)病情況,第60 d統(tǒng)計(jì)發(fā)病率,用病情指數(shù)計(jì)算相對防效。分級標(biāo)準(zhǔn)[25]:0級,全株正常,無流膠點(diǎn),無病斑;1級,有散生流膠點(diǎn),只滲出琥珀色膠體;2級,有流膠點(diǎn),病斑部位變黑,直徑≤2 mm;3級,有散生流膠點(diǎn),病斑部位變黑,直徑<5 mm;4級,有散生流膠點(diǎn),病斑部位變黑,直徑≥5 mm。病情指數(shù)和相對防效計(jì)算方法如下:

I=[∑(n×i)/(N×imax)]×100;

(3)

E=(ICK-It)/ICK。

(4)

式(3)、(4)中:I表示病情指數(shù);n表示各級病株數(shù);i表示該病級值;N表示調(diào)查總株數(shù);imax表示最高級值;E表示相對防效;ICK表示空白對照組病情指數(shù);It表示處理組病情指數(shù)。

1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用Origin 2021軟件繪圖,用新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 花椒內(nèi)生真菌的分離和純化

采用組織分離法從花椒根、莖、葉和刺中共分離得到108株內(nèi)生真菌菌株,篩選出對F.tricinctum具拮抗作用的菌株24株。其中,拮抗效果最強(qiáng)的菌株為HJ-18,培養(yǎng)7 d后,其對F.tricinctum的抑制率達(dá)58.85%(圖1)。

A,對照(正面);B,對照(反面);C,對峙效果(正面);D,對峙效果(反面)。培養(yǎng)時(shí)間為7 d。A, Control (front); B, Control (reverse); C, Confrontation effect (front); D, Confrontation effect (reverse). Culture time was 7 days.

2.2 拮抗菌的鑒定

2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

拮抗菌株HJ-18形態(tài)如圖2所示,培養(yǎng)7 d之內(nèi),菌落呈現(xiàn)乳白色,菌絲蓬松稀疏,呈雪白色絨毛狀;培養(yǎng)10 d,菌落呈現(xiàn)淡黃色,中間區(qū)域長出傘狀物,有特殊性氣味產(chǎn)生(圖2-A、2-B)。菌絲有隔(圖2-C),可產(chǎn)生孢子,呈球形或橢圓形(圖2-D)。

A,菌落形態(tài)(正面);B,菌落形態(tài)(反面),C,菌絲;D,孢子。A, Colony morphology (front); B, Colony morphology (reverse); C, Mycelium; D, Spore.

2.2.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果(圖3)表明,菌株HJ-18與裂褶菌(Schizophyllumcommune)(登錄號MN218205.1)具有高度相似性,同源性達(dá)100%,初步鑒定其為裂褶菌,GenBank登錄號為OP502072。

圖3 菌株HJ-18基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 The phylogenetic tree of strain HJ-18 based on ITS sequence

2.3 抑菌譜

抑菌譜結(jié)果(圖4)表明,菌株HJ-18對4種病原菌都有一定的抑制作用,其中對尖孢鐮孢菌抑制效果最好,抑制率達(dá)45.80%,對細(xì)極鏈格孢菌抑制效果最差,抑制率為30.58%。

柱上無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。The bars marked without the same lowercase letter indicated significant differences at P<0.05. The same as below.

2.4 培養(yǎng)濾液穩(wěn)定性

2.4.1 自然光穩(wěn)定性

如圖5-A所示,強(qiáng)光處理2 h后,菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對F.tricinctum的相對抑制率為93.82%,而強(qiáng)光處理4、6、8、10、12 h后,其抑制率逐漸降低,但仍在80%以上,差異不顯著,表明菌株HJ-18的抑菌活性物質(zhì)對自然光不敏感。

圖5 不同條件下菌株HJ-18培養(yǎng)濾液的穩(wěn)定性Fig.5 Stability of the culture filtrate of strain HJ-18 under different conditions

2.4.2 紫外光穩(wěn)定性

由圖5-B可知,菌株HJ-18培養(yǎng)濾液經(jīng)紫外燈照射不同時(shí)間后,相對抑制率顯著(P<0.05)下降。照射30 min后,其對F.tricinctum的相對抑制率為99.86%,而在照射150 min后,相對抑制率僅為50.57%,表明該活性物質(zhì)不耐紫外光照射。

2.4.3 熱穩(wěn)定性

由圖5-C可知,不同溫度處理后,菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對F.tricinctum的相對抑制率存在顯著差異(P<0.05)。20 ℃處理下,其相對抑制率為96.35%,120 ℃處理下的相對抑制率為65.65%,但仍保持較高的抑制效果,說明菌株HJ-18培養(yǎng)濾液的活性物質(zhì)對溫度具有較強(qiáng)的耐受性。

2.4.4 酸堿穩(wěn)定性

如圖5-D所示,不同pH下,菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對F.tricinctum的相對抑制率差異顯著(P<0.05)。當(dāng)pH值為7.0時(shí),其相對抑制率達(dá)82.59%;在酸性環(huán)境(pH值3.0)和堿性環(huán)境(pH值11.0)下,菌株HJ-18培養(yǎng)濾液的相對抑制率均顯著下降,但仍保持較高的抑制效果,相對抑制率分別為55.78%和49.43%,說明菌株HJ-18培養(yǎng)濾液的抑菌活性物質(zhì)對酸堿具有一定的耐受性。

2.5 菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲生長的影響

由圖6可知,不同體積分?jǐn)?shù)的菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲生長的抑制率有顯著差異(P<0.05),且隨著菌株HJ-18培養(yǎng)濾液體積分?jǐn)?shù)的增大,抑制率逐漸升高。當(dāng)HJ-18培養(yǎng)濾液體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí),其抑制率達(dá)到66.40%。

A,菌落直徑;B,抑制率。A, Colony diameter; B, Inhibition ratio.

由圖7可知:對照組的菌絲生長狀態(tài)良好,菌絲均勻,光滑,形狀完整,呈現(xiàn)正常的管狀結(jié)構(gòu)(圖7-A、7-B);處理組菌絲粗細(xì)不一,出現(xiàn)彎曲,褶皺現(xiàn)象,且表面有碎屑產(chǎn)生(圖7-C、7-D)。說明菌株HJ-18培養(yǎng)濾液對三線鐮刀菌菌絲產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響,導(dǎo)致菌絲彎曲、褶皺。

A,對照(×1 000);B,對照(×4 000);C,HJ-18培養(yǎng)濾液處理(×1 000);D,HJ-18培養(yǎng)濾液處理(×4 000)。A, Control (×1 000); B, Control (×4 000); C, Treated by HJ-18 culture filtrate (×1 000); D, Treated by HJ-18 culture filtrate (×4 000).

2.6 菌株HJ-18培養(yǎng)液對花椒流膠病的防治效果

不同處理均對花椒流膠病有一定的防治效果,先接種病原菌后用菌株HJ-18培養(yǎng)液處理的相對防效達(dá)到52.65%,略高于22.5%啶氧菌酯處理的相對防效(48.48%),顯著高于無菌水處理(18.56%);先用菌株HJ-18培養(yǎng)液預(yù)處理,再接種病原菌的植株,僅出現(xiàn)小面積膠狀物,大部分正常生長,其相對防效達(dá)到56.82%(圖8、表1)。綜上,裂褶菌HJ-18對花椒流膠病有較好的防治效果。

表1 菌株HJ-18對花椒流膠病的生防效果

A,接種三線鐮刀菌;B,三線鐮刀菌+菌株HJ-18處理;C,22.5%啶氧菌酯100倍液處理;D,無菌水處理;E,先接種菌株HJ-18再接種三線鐮刀菌。A, Inoculation with Fusarium tricinctum; B, Fusarium tricinctum+HJ-18 treatment; C, 100-fold dilution of 22.5% picoxystrobin treatment; D, Sterile water treatment; E, Inoculation with strain HJ-18 before the Fusarium tricinctum.

3 結(jié)論與討論

植物內(nèi)生真菌資源豐富,在促進(jìn)植物生長、抗逆、抗病等方面發(fā)揮著重要的作用[26-28]?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的植物內(nèi)生真菌中,約有三分之一對病原真菌具有一定的拮抗作用[29],其拮抗機(jī)制主要有競爭、重寄生、抗生作用等[30-31]。

近年來,裂褶菌逐漸作為生防菌株應(yīng)用于植物病害的防治。張富美等[32]篩選出的裂褶菌G18可抑制尖鐮孢菌的生長;宋曉宇[33]從楊樹中篩選出的裂褶菌ROHY8225b2,其揮發(fā)性有機(jī)化合物對炭疽菌等幾種植物病原菌有一定的抑制作用。本研究從花椒植株中分離的裂褶菌HJ-18對三線鐮刀菌的抑制率為58.85%,且對其他4種供試植物病原真菌均具有一定的抑制效果,表明其具有生防菌株的潛力。掃描電鏡結(jié)果顯示,經(jīng)過培養(yǎng)濾液處理的菌絲粗細(xì)不一,表面出現(xiàn)碎屑等現(xiàn)象,推測菌株HJ-18可能產(chǎn)生某種活性物質(zhì)[34],其破壞病原菌菌絲體結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)發(fā)生泄露,從而起到抑制效果。

菌株在培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生一些活性物質(zhì),如多糖、蘋果酸、β-蒎烯等,這些活性物質(zhì)受外界影響較大[35-37]。王恒煦等[38]研究發(fā)現(xiàn),芽孢桿菌WD培養(yǎng)濾液經(jīng)過不同溫度處理后,抑制率基本保持不變,表明該培養(yǎng)液對溫度有一定的耐受力,本研究結(jié)果與此一致。芽孢桿菌WD培養(yǎng)液經(jīng)不同時(shí)間紫外燈處理后,活性基本保持不變;本研究中裂褶菌培養(yǎng)濾液經(jīng)紫外燈照射之后,抑菌物質(zhì)的活性下降,但抑制率仍達(dá)50%以上,這可能是因?yàn)椴煌昱囵B(yǎng)濾液對于外界環(huán)境具有不同的耐受力。裂褶菌培養(yǎng)濾液對酸堿有一定抗性,說明該培養(yǎng)濾液穩(wěn)定性較好,具備一定的生產(chǎn)潛力,可作為一種良好的生物資源應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,菌株HJ-18對花椒流膠病的防治效果為52.65%,與22.5%啶氧菌酯100倍液的48.48%相比無顯著差異,說明其有一定的應(yīng)用前景。本研究還發(fā)現(xiàn),先接種菌株HJ-18再接種三線鐮刀菌處理組花椒的病情指數(shù)較小,相對防效略高于先接種三線鐮刀菌再接種菌株HJ-18處理組,表明菌株HJ-18對花椒流膠病的預(yù)防作用優(yōu)于治療作用。陳思杰等[39]也發(fā)現(xiàn),深色有隔內(nèi)生真菌預(yù)處理對枸杞根腐病害的防治效果優(yōu)于同時(shí)接菌。綜上表明,裂褶菌HJ-18對三線鐮刀菌引起的花椒流膠病具有良好的生物防治效果,可作為生防菌劑進(jìn)一步開發(fā)與利用。