水生動(dòng)物環(huán)境DNA研究概況及其在水生動(dòng)物疫病傳播研究中的應(yīng)用前景

王美鳳，王秀華，李 晨，呂若萱，楊 冰

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青島市海水養(yǎng)殖流行病學(xué)與生物安保重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266071；2.上海海洋大學(xué)，上海 201306）

水生環(huán)境可作為許多病原中間宿主生存的媒介，并能影響人類和動(dòng)物健康[1-2]。水生環(huán)境下的疫病傳播是一個(gè)不容忽視的問題，感染病原的水生動(dòng)物不僅會(huì)從食用安全角度危害人類身體健康，也可制約物種的多樣性發(fā)展，甚至?xí)?dǎo)致外來物種入侵、生物量減少、稀有物種滅絕等毀滅式影響，破壞生態(tài)平衡。從病原傳播風(fēng)險(xiǎn)方面進(jìn)行研究能夠有效預(yù)防疫病傳播。

近些年關(guān)于采用環(huán)境DNA（environmental DNA，eDNA）方法監(jiān)測(cè)水生動(dòng)物的研究日趨增多，目前該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于魚類[3]、甲殼類[4]、哺乳類[5]、兩棲類[6]以及爬行動(dòng)物[4，7]、軟體動(dòng)物[8]和浮游生物[9]等多種水生生物研究。

本文從物種多樣性調(diào)查、生物量評(píng)估，以及稀有物種和外來物種入侵監(jiān)測(cè)、種群遺傳監(jiān)測(cè)和疫病監(jiān)測(cè)等方面，對(duì)水生動(dòng)物eDNA 研究狀況進(jìn)行概述，同時(shí)展望了其與水生動(dòng)物疫病傳播研究相結(jié)合的發(fā)展前景，以期為eDNA 技術(shù)在水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用提供新思路和切入點(diǎn)。

1 eDNA 簡(jiǎn)介

物種與環(huán)境相互作用進(jìn)行物質(zhì)交換時(shí)，會(huì)不斷地在周圍環(huán)境中留下DNA 片段。近年來，一種新的生物監(jiān)測(cè)方法eDNA 技術(shù)獲得了快速發(fā)展。eDNA 是指用非直接接觸生物的方法，從生態(tài)體系的非生命組成部分（沉積物、空氣、水體、土壤等）中提取到的總DNA，包括細(xì)胞內(nèi)DNA（即生物體通過尿液、糞便、黏液或皮膚等釋放到環(huán)境中的遺傳物質(zhì)）和游離DNA（即生物體細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞或者細(xì)胞死亡裂解而產(chǎn)生的遺傳物質(zhì)）[10-11]。

Rondon 等[12]2000年提出了eDNA 技術(shù)的概念。eDNA 技術(shù)是指從環(huán)境樣品中直接提取DNA片段后，利用測(cè)序技術(shù)對(duì)生物進(jìn)行定性或定量檢測(cè)分析的方法[8]。直到2008年，法國(guó)研究人員Ficetola 等[13]才首次應(yīng)用eDNA 方法從自然系統(tǒng)水樣中確認(rèn)了水生入侵物種（野生動(dòng)物）的存在。2010年，Jerde 等[14]在北美地區(qū)通過對(duì)銀魚和大頭亞洲鯉魚的檢測(cè)，證明了eDNA 技術(shù)作為淡水系統(tǒng)中入侵物種檢測(cè)工具的有效性。eDNA 還可以提供已滅絕的大型生物群落信息，因其短的DNA序列可以持續(xù)保留很長(zhǎng)時(shí)間，可用于對(duì)古老沉積物、永久凍土和冰芯等的研究[15]。

近年來，eDNA 技術(shù)得到快速發(fā)展，已被廣泛應(yīng)用于群落生態(tài)學(xué)、古環(huán)境、生物監(jiān)測(cè)、生物保護(hù)學(xué)、入侵生態(tài)學(xué)等多個(gè)研究領(lǐng)域，并在多個(gè)生態(tài)系統(tǒng)中被成功測(cè)試，包括淡水、海洋和河口[10，16]，甚至被應(yīng)用于國(guó)際貿(mào)易關(guān)口的病原體檢測(cè)，其對(duì)于保障水生動(dòng)物貿(mào)易安全意義重大[17]。

與傳統(tǒng)方法相比，eDNA 技術(shù)具有較多優(yōu)點(diǎn)。它是一種新型、有效、無創(chuàng)、快速、經(jīng)濟(jì)且易于標(biāo)準(zhǔn)化的方法，其最大優(yōu)勢(shì)在于非侵入性取樣方式，可以作為一種有效的替代組織或標(biāo)本的取樣方法，對(duì)目標(biāo)物種及周圍環(huán)境不會(huì)造成傷害[18]。借助水環(huán)境中懸浮的脫落組織，更便于取樣和檢測(cè)DNA，尤其針對(duì)傳統(tǒng)工具無法觀察到的稀有生物[14]。目前，隨著禁漁政策的落實(shí)，該技術(shù)對(duì)于研究水體中的生物尤為重要。對(duì)于一些物種（例如兩棲動(dòng)物）來說，傳統(tǒng)的調(diào)查在特定季節(jié)或特定天氣條件下非常困難，但不會(huì)妨礙eDNA 的取樣[19]。eDNA 技術(shù)有助于實(shí)現(xiàn)更快捷的現(xiàn)場(chǎng)采樣，且具備較大的時(shí)間和空間靈活度，如早期發(fā)現(xiàn)入侵物種[20]，識(shí)別群落組成隨時(shí)間的變化[21]，跟蹤魚類遷徙模式[22]，亦能同時(shí)監(jiān)測(cè)水中所有物種[23-24]。eDNA 技術(shù)在一定程度上降低了研究成本，減少了研究時(shí)間，對(duì)監(jiān)測(cè)陸地和水生生態(tài)系統(tǒng)中的當(dāng)代生物多樣性具有重大意義[19]。

2 水生動(dòng)物eDNA研究概況

從1988年至今，全球?qū)τ趀DNA 的關(guān)注一直呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，尤其近8年關(guān)注度逐漸增高，在利用eDNA 檢測(cè)水生生物方面的研究報(bào)道迅速增加，主要涉及以下五方面內(nèi)容。

2.1 物種多樣性調(diào)查

傳統(tǒng)的海洋生物多樣性調(diào)查多采用拖網(wǎng)調(diào)查方式[25]。言柯程等[26]基于2020年南黃海西部eDNA 的采樣數(shù)據(jù)和底拖網(wǎng)調(diào)查數(shù)據(jù)，研究表明eDNA 元編碼技術(shù)獲取的魚類種數(shù)高于底拖網(wǎng)調(diào)查。eDNA 元編碼技術(shù)可以作為傳統(tǒng)漁業(yè)資源評(píng)估的一種新思路，有助于監(jiān)測(cè)海洋生物多樣性和空間分布。同時(shí)，eDNA 元編碼可以通過評(píng)估魚類群落功能的多樣性來檢測(cè)人為因素對(duì)魚類群落的影響，有助于確保在多個(gè)地點(diǎn)進(jìn)行持續(xù)性生物多樣性監(jiān)測(cè)，有助于生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)和漁業(yè)資源可持續(xù)利用，實(shí)現(xiàn)聯(lián)合國(guó)2030年可持續(xù)發(fā)展目標(biāo)中的“目標(biāo)14”[27]。在物種豐度鑒定方面，eDNA 條形碼技術(shù)較傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)監(jiān)測(cè)更具優(yōu)勢(shì)。王晨等[28]2022年通過該技術(shù)以秦淮河為研究區(qū)域證實(shí)了這一點(diǎn)，其探究了秦淮河生物多樣性的組成、上下游生物多樣性的差異，以及生物多樣性與環(huán)境因子的關(guān)系，為秦淮河的生物多樣性保護(hù)提供了更多依據(jù)。

臧能瑋等[25]2022年應(yīng)用eDNA 技術(shù)完善了廣東省珠海外伶仃海域國(guó)家級(jí)海洋牧場(chǎng)示范區(qū)的海洋生物多樣性研究報(bào)告，對(duì)于海洋牧場(chǎng)微生物研究極具重要的參考價(jià)值。李曉玲等[29]2022年基于eDNA 技術(shù)，對(duì)東海秋季魚類的物種多樣性進(jìn)行了研究。郭寧寧等[30]2023年采用eDNA 技術(shù)，對(duì)赤水河秋季魚類進(jìn)行了取樣調(diào)查，因赤水河流域正處于禁漁期，采用傳統(tǒng)調(diào)查法可能會(huì)對(duì)魚類產(chǎn)生一定程度的損傷，而采用eDNA 技術(shù)在不影響魚類自然繁殖的情況下，可獲得赤水河秋季魚類的分布及物種組成，為探索禁漁政策下更適應(yīng)禁漁區(qū)域的魚類調(diào)查方法開展了先期研究，有助于赤水河生物多樣性保護(hù)。

2.2 生物量評(píng)估

Teruhiko 等[31]2012年探究了一種在水族館和實(shí)驗(yàn)池塘中估算鯉魚（CyprinuscarpioL.）生物量的eDNA 方法，并利用這種方法估算了一個(gè)天然淡水瀉湖中鯉魚的生物量和分布，反映了普通鯉魚在自然環(huán)境中的潛在分布，為制定生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)管理計(jì)劃提供了信息。研究[32]表明，銀鯉魚（Hypophthalmichthysmolitrix）的數(shù)值密度和生物量密度與環(huán)境DNA 濃度和檢出率呈正、非線性相關(guān)，隨著銀鯉魚密度的增加，eDNA 濃度和檢出率均迅速增加，但在中等密度時(shí)趨于穩(wěn)定。盧珊等[33]在2015年進(jìn)行了泥鰍（Misgurnusanguillicaudatus）和日本沼蝦（Macrobrachiumnipponense）飼養(yǎng)密度與eDNA 豐度的定量分析，利用熒光定量PCR方法進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn)，無論是泥鰍還是日本沼蝦，eDNA 量均隨飼養(yǎng)密度的增加而增加，動(dòng)物密度與其eDNA 之間存在非線性相關(guān)關(guān)系。此研究為建立起一套淡水生態(tài)系統(tǒng)豐富度檢測(cè)的理論及技術(shù)體系提供了相應(yīng)基礎(chǔ)。

為了能夠精確掌握中國(guó)對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）在渤海海域的分布與資源量狀況，以及合理開發(fā)利用其資源，李苗等[34]2019年以渤海中國(guó)對(duì)蝦為研究對(duì)象，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)，建立了一套針對(duì)中國(guó)對(duì)蝦的eDNA 技術(shù)操作流程，為中國(guó)對(duì)蝦分布監(jiān)測(cè)及其資源評(píng)估提供了一種新方法。閆卉果等[35]2021年建立了基于eDNA 的巖原鯉（Procyprisrabaudi）實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）檢測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)其特異性高、時(shí)效性好，可準(zhǔn)確鑒別巖原鯉，然后用該方法探討了eDNA 濃度與其生物量的定量關(guān)系，以反映巖原鯉在不同采樣點(diǎn)的生物量及時(shí)空動(dòng)態(tài)。高天翔等[36]2022年以舟山島礁水域優(yōu)勢(shì)魚種褐菖鲉（Sebastiscusmarmoratus）為研究對(duì)象，建立了褐菖鲉養(yǎng)殖密度與其eDNA濃度之間的相關(guān)性，為基于eDNA 技術(shù)的褐菖鲉生物量評(píng)估奠定了基礎(chǔ)。

2.3 稀有物種和外來物種入侵監(jiān)測(cè)

eDNA 技術(shù)在低密度下檢測(cè)物種具有極高的靈敏度，特別針對(duì)稀有、隱蔽、瀕危和入侵物種的早期識(shí)別和監(jiān)測(cè)。Jerde 等[14]在美國(guó)芝加哥、伊利諾斯州等地區(qū)的運(yùn)河和水道上劃定了兩種亞洲鯉魚的入侵前沿，展示了eDNA 技術(shù)作為一種檢測(cè)工具在淡水環(huán)境中的有效性。Rein 等[37]2020年開發(fā)并驗(yàn)證了一種基于數(shù)字液滴PCR（ddPCR）的eDNA新方法，可用于對(duì)多個(gè)棲息地化石的精確檢測(cè)和定量。Blattner 等[38]2021年開發(fā)了一種針對(duì)具有代表性的淡水大型無脊椎動(dòng)物物種的靶向生物指標(biāo)物種eDNA 檢測(cè)方法，有助于促進(jìn)高山淡水環(huán)境的完整性監(jiān)測(cè)和評(píng)估。楊嘉琪等[39]2022年從水體環(huán)境中提取eDNA 應(yīng)用于中華白海豚的分布調(diào)查，建立了中華白海豚eDNA檢測(cè)方法，同時(shí)優(yōu)化檢測(cè)條件，獲得了中華白海豚eDNA 檢測(cè)的最佳方案，為中華白海豚的野外監(jiān)測(cè)提供了新的數(shù)據(jù)信息，為近岸海域漁業(yè)資源的評(píng)估和管理提供了新的參考和切入點(diǎn)。Yongkai 等[40]使用基于eDNA 的方法在肉眼可觀察到及未直接觀察到江豚的位置均成功檢測(cè)到其DNA，進(jìn)一步證實(shí)eDNA 技術(shù)比傳統(tǒng)的目視調(diào)查具有更高的靈敏度。

Sepulveda 等[41]2020年提出了eDNA 方法是否可以用于水生入侵物種管理這一問題。徐夢(mèng)珍等[42]2021年研究了eDNA 技術(shù)在貽貝入侵監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用，明晰了eDNA 濃度與貽貝種群規(guī)?；蛎芏戎g的定量關(guān)系，這對(duì)貽貝入侵的有效防控和生態(tài)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)與保護(hù)具有重要意義。在北美地區(qū)的許多河流中，有多種非本地鯉科魚類的種群在密西西比河流域被發(fā)現(xiàn)，但追蹤其入侵很困難。當(dāng)種群數(shù)量較低時(shí)，了解入侵前沿的位置對(duì)自然資源管理者很有價(jià)值，這可以最有效防止未來的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)損害[43]。楊力鳳等[44]2022年從入侵物種監(jiān)測(cè)、入侵途徑、分布與危害程度以及與其他物種的相互關(guān)系等方面，介紹了eDNA 技術(shù)在生物入侵研究中的應(yīng)用進(jìn)展。韓德科等[45]2022年研究了eDNA 技術(shù)在監(jiān)測(cè)草?？耸显r分布應(yīng)用中的最適條件，為進(jìn)一步分析克氏原螯蝦的引入或擴(kuò)散初期的監(jiān)測(cè)、預(yù)警和應(yīng)急處理提供了有效依據(jù)，保護(hù)了生物的多樣性。

2.4 種群遺傳監(jiān)測(cè)

遺傳數(shù)據(jù)為監(jiān)測(cè)海洋哺乳動(dòng)物種群提供了一個(gè)強(qiáng)有力的工具，但從一些較小的鯨類動(dòng)物物種中收集必要的組織樣本存在一定的困難。Scott等[46]2018年研究探索了使用eDNA 技術(shù)取樣進(jìn)行鯨類種群的遺傳監(jiān)測(cè)。這項(xiàng)研究是設(shè)計(jì)一種通過eDNA 方法生成小型和受威脅的海洋脊椎動(dòng)物種群遺傳數(shù)據(jù)方法的重要一步[47]。

定期進(jìn)行經(jīng)濟(jì)高效的遺傳監(jiān)測(cè)被認(rèn)為是兩棲動(dòng)物保護(hù)策略的一個(gè)基本方面。Lucia 等[48]2023年建立了一種基于eDNA 的池塘繁殖兩棲動(dòng)物物種內(nèi)遺傳多樣性監(jiān)測(cè)的有效方案，這是監(jiān)測(cè)物種種群遺傳多樣性的可靠工具，對(duì)兩棲動(dòng)物保護(hù)和濕地管理具有極大價(jià)值。

2.5 疫病監(jiān)測(cè)

Natividad 等[49]2008年建立了一種高靈敏度的二步巢式PCR 方法，用于檢測(cè)池塘土壤中的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）DNA，這是第一個(gè)關(guān)于在土壤樣品中檢測(cè)WSSV DNA 的報(bào)告，首次記錄了池塘土壤中WSSV 的存在。鯉科皰疹病毒3（CyHV-3）是一種致命的DNA 病毒，可感染普通鯉魚和錦鯉。Honjo 等[50]2012年測(cè)試了從湖泊和池塘沉積物中提取CyHV-3 DNA 的方法，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法測(cè)得CyHV-3 DNA 在沉積物中的濃度高于其在水中的濃度，表明沉積物在自然淡水生態(tài)系統(tǒng)中是CyHV-3 的潛在儲(chǔ)蓄池，這是第一個(gè)在自然沉積物中檢測(cè)CyHV-3 的報(bào)告，有助于更好地了解CyHV-3 在自然生態(tài)系統(tǒng)中的傳播機(jī)制。雷納病毒屬病毒可感染兩棲動(dòng)物，但不會(huì)導(dǎo)致其死亡或表現(xiàn)臨床癥狀。Miaud 等[18]2019年使用eDNA技術(shù)對(duì)法國(guó)南阿爾卑斯山感染雷納病毒的普通蛙類（顳蛙）進(jìn)行了測(cè)試，在6月繁殖季節(jié)和7月底這兩個(gè)時(shí)間段的蝌蚪和水樣中均檢測(cè)到病毒DNA，證實(shí)eDNA 技術(shù)可以提高野生動(dòng)物健康狀況監(jiān)測(cè)的性能和準(zhǔn)確性，有助于更有效地開展監(jiān)測(cè)和保護(hù)目標(biāo)對(duì)象。J?rgensen 等[51]2020年提出了一種通過從養(yǎng)殖牡蠣或其種群的生活環(huán)境中采集水樣來檢測(cè)寄生性牡蠣包納米蟲（Bonamiaostreae）的eDNA方法。這種非致死性的eDNA 檢測(cè)方法將有助于牡蠣的健康養(yǎng)殖。

2022年世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）水生動(dòng)物委員會(huì)（AAC）在討論性文件中提出：eDNA 方法的檢測(cè)陽性結(jié)果可作為可疑病例的適當(dāng)判定標(biāo)準(zhǔn)，該技術(shù)未來可發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)，有望用于出入境檢疫，以及養(yǎng)殖場(chǎng)、隔離場(chǎng)的食用、種用和觀賞用等水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)[52]；eDNA 技術(shù)雖然仍存在一定局限性，但可適用于不同情形下的水生動(dòng)物采樣，有助于增強(qiáng)水生動(dòng)物疫病的主動(dòng)監(jiān)測(cè)[53]。

3 基于eDNA 的水生動(dòng)物疫病傳播風(fēng)險(xiǎn)研究前景

近年來，有關(guān)eDNA 方面的研究報(bào)道從每年4篇（2012年）逐漸增加到28 篇（2018年），隨后在2021年迅速增長(zhǎng)到124 篇。eDNA 技術(shù)的發(fā)展被描述為一場(chǎng)“改變保護(hù)的安靜革命”，在過去的十年中為生物監(jiān)測(cè)及其所有衍生學(xué)科帶來了巨大利益。eDNA 生物檢測(cè)技術(shù)有可能成為評(píng)估地球所面臨的眾多人為和非人為壓力源影響的最有效基礎(chǔ)挖掘工具之一[54]。

水生動(dòng)物一旦感染高致病性病原甚至是致死性病原，自然環(huán)境就會(huì)遭受嚴(yán)重破環(huán)，生態(tài)體系平衡就會(huì)被打破，這對(duì)于密集的大規(guī)模養(yǎng)殖模式，無疑將是沉重的打擊。eDNA 技術(shù)是水環(huán)境疫病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要手段，然而目前將其用于水生動(dòng)物疫病傳播風(fēng)險(xiǎn)的研究很少。

張娜等[55]2021年采用eDNA 方法對(duì)進(jìn)口凡納濱對(duì)蝦攜帶的海水進(jìn)行蝦肝腸胞蟲（EHP）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)進(jìn)口凡納濱對(duì)蝦親蝦攜帶病原的水體具有傳播EHP 的可能性。Bernhardt 等[56]2021年開發(fā)并優(yōu)化了健康蛙魚與感染蛙魚甲病毒（SAV）鮭魚共居的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，模擬了病毒傳播，利用eDNA 技術(shù)檢測(cè)海水中SAV 的攜帶情況，結(jié)果在水中和共居的健康魚類器官組織樣本中被先后檢測(cè)到SAV，說明環(huán)境水可能是SAV 傳播的感染源，且此方法可以作為檢測(cè)大西洋鮭養(yǎng)殖場(chǎng)SAV 的一種替代方法，是一種更經(jīng)濟(jì)、直接、快速、可靠、可重復(fù)和對(duì)動(dòng)物福利友好的方法。Yasuhiko 等[57]通過對(duì)海水進(jìn)行eDNA 檢測(cè)，對(duì)以真鯛（Pagrusmajor）幼魚和親魚為主要養(yǎng)殖對(duì)象的養(yǎng)殖場(chǎng)開展了為期3年（2016—2018）的真鯛虹彩病毒（RSIV）傳播風(fēng)險(xiǎn)研究，證實(shí)從感染RSIV 的無癥狀親魚身上脫落的病毒會(huì)水平傳播給幼魚，并導(dǎo)致養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)一步暴發(fā)RSIV 感染疫情。Yasuhiko 等[58]2023年通過檢測(cè)養(yǎng)魚場(chǎng)的eDNA 來檢測(cè)RSIV 病毒載量，評(píng)估養(yǎng)殖場(chǎng)間環(huán)境水傳播RSIV 的風(fēng)險(xiǎn)，發(fā)現(xiàn)RSIV 在養(yǎng)殖場(chǎng)之間的傳播與網(wǎng)箱之間的距離密切相關(guān)，環(huán)境水并非是RSIV 在養(yǎng)殖場(chǎng)之間傳播的關(guān)鍵感染源。

基于eDNA 技術(shù)有效、無創(chuàng)、快速、經(jīng)濟(jì)且易于標(biāo)準(zhǔn)化的眾多優(yōu)勢(shì)，將其與水生動(dòng)物疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)研究相結(jié)合，探索基于eDNA 的生物與生物、環(huán)境與生物之間的水生動(dòng)物疫病傳播機(jī)制，尤其針對(duì)感染后無明顯致病性的水生動(dòng)物將具有非常好的應(yīng)用前景。早期研究[56，59-60]都是在體積小、海水相對(duì)干凈的容器中進(jìn)行的，未來可以做以池塘為基礎(chǔ)的研究，以確定諸如池塘體積、池塘水質(zhì)和養(yǎng)殖動(dòng)物及環(huán)境生物行為等因素是否會(huì)影響eDNA 技術(shù)下的病原轉(zhuǎn)移速率和成功率，為將eDNA 技術(shù)用于養(yǎng)殖環(huán)境下的水生動(dòng)物疫病傳播提供新的切入點(diǎn)。eDNA 技術(shù)的便捷可以更快速有效地檢測(cè)并確定感染源，從源頭有效遏制病原感染，切斷其傳播途徑。同時(shí)也可開展水生動(dòng)物疾病傳播下的多病原分析，為eDNA 技術(shù)發(fā)展和疫病傳播提供新的參考信息。

eDNA 技術(shù)也存在一定的局限性，會(huì)給實(shí)際應(yīng)用帶來挑戰(zhàn)。eDNA 技術(shù)的靈敏度及定量效果會(huì)受到諸多因素影響，eDNA 樣本的采集、提取和檢測(cè)存在人為誤差的干擾，且病原感染研究中必須防止外界環(huán)境污染或者樣本間的交叉污染。與傳統(tǒng)方式相比，該技術(shù)不能直接獲取物種的死亡個(gè)體及性別比例等信息，因此制定通用的、標(biāo)準(zhǔn)化的eDNA技術(shù)操作流程是十分必要的，應(yīng)在高度認(rèn)識(shí)和掌握eDNA 技術(shù)的前提下開展更多的研究，為水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)提供更加可靠的技術(shù)支持。