豬只健康與非洲豬瘟病毒感染的關(guān)系

戈勝強，崔 進，張 慧，徐天剛，尼 博，沙 洲，魏 榮，王志亮

（1.中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032；2.青島市現(xiàn)代生物工程及動物疫病研究重點實驗室，山東青島 266032；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物生物安全風險預(yù)警及防控重點實驗室（南方），山東青島 266032）

2018年非洲豬瘟（African swine fever，ASF）傳入我國并在亞洲持續(xù)蔓延，使得國際社會對ASF 的關(guān)注度大幅提升，相關(guān)研究呈井噴式增加。最早傳入我國的非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）China 2018/1 株[1]（后被重新命名為China/LN/2018/1[2]）及國內(nèi)相近時間分離株pig/HLJ/18[3]和SY18[4]，與2007年傳入格魯吉亞的毒株（Georgia 2007）[5]高度相似，為強毒株，致死率可達100%。為有效防控ASF，特別是突破疫苗研制瓶頸，近幾年國內(nèi)外研究者將主要精力放到了挖掘與ASFV 毒力和先天免疫反應(yīng)相關(guān)的基因功能探索上。這些研究為ASF 疫苗開發(fā)提供了新的方向，最典型的例子是美國研制的ASFVG-ΔI177L 株疫苗（ 商品名NAVET-ASFVAC）和ASFV-G-ΔMGF 株疫苗（ 商品名AVAC ASF LIVE）已在越南成功上市。我國在無疫苗可用的情況下，根據(jù)該病流行特點，創(chuàng)新性發(fā)明了“精準撲殺、定點清除”的防控措施[6]，其在穩(wěn)產(chǎn)保供方面發(fā)揮了巨大作用。但隨著該病的不斷流行，國內(nèi)外都發(fā)現(xiàn)了毒力較弱的流行毒株，如Estonia 2014[7]和HLJ/HRB1/20[8]等，這使得ASF 的“有效防控”變得更加困難，因而迫切需要從更全面的視角去思考ASF 防控的關(guān)鍵點。

關(guān)于豬只健康的定義目前較為混亂。在傳統(tǒng)養(yǎng)豬業(yè)中，“健康”通常被簡明扼要地定義為“機體處于正常運作狀態(tài)，沒有疾病”。但對于復(fù)雜的生產(chǎn)而言，“健康”不僅意味著機體沒有出現(xiàn)疾病或虛弱現(xiàn)象，還要能夠長時間適應(yīng)外在環(huán)境[9]。豬只健康包涵豬只的疾病耐受度，它是對豬或豬群穩(wěn)定性、疾病恢復(fù)力、抗病性和疾病耐受力的綜合表述[10]。

ASFV 主要感染單核巨噬細胞，顯著影響感染動物的免疫力水平，破壞豬只健康，導(dǎo)致“感染存活豬”容易繼發(fā)細菌感染。之前的研究[11]顯示，飼喂噴霧干燥血漿可增強豬只的ASFV 抵抗能力，免疫力低下或有其他病原潛伏感染的豬只在感染ASFV 弱毒株時，表現(xiàn)的癥狀更嚴重。國內(nèi)有研究[12]提出營養(yǎng)冗余（nutritional abundance）對提高豬群的抵抗ASFV 能力具有重要的生產(chǎn)現(xiàn)實意義。上述研究或觀點都指向了提高豬只健康程度或免疫力水平對防控ASF 有積極作用。目前，該領(lǐng)域的國內(nèi)外研究較少，尚缺乏系統(tǒng)的專業(yè)闡述，為此就相關(guān)研究進行總結(jié)歸納，以期為我國ASF 防控提供參考。

1 健康狀況低下豬只似乎更容易感染ASFV

2015年P(guān)ietschmann 等[13]對家豬和野豬分別進行了低劑量ASFV（Armenia 08，3 HAU）口服接種試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)每個試驗組中，只有健康狀況最差的豬只（表現(xiàn)瘦弱、喜臥等）出現(xiàn)ASFV 感染跡象，其中1 頭在出現(xiàn)ASF 相關(guān)癥狀之前就死于胃腸道感染和全身衰竭。相似研究[14]發(fā)現(xiàn)，ASFV自然弱毒株Lv17/WB/Rie1 大劑量（104TCID50）口服接種野豬后，有1 頭豬出現(xiàn)臨床癥狀，可能原因是野豬圈養(yǎng)同居，增加了野豬之間的相互打斗，對野豬造成一定的壓力，進而使其處于“免疫抑制”或“亞健康”狀態(tài)，導(dǎo)致感染進程加劇。2022年Radulovic 等[15]比較了無特定病原體（SPF）豬和農(nóng)場飼養(yǎng)的長白豬對ASFV 感染的反應(yīng)狀況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：農(nóng)場豬因養(yǎng)殖環(huán)境復(fù)雜（一般具有更多的細菌感染背景，以感染普氏菌科細菌為代表），其健康水平一般低于SPF 豬；感染強毒株（Armenia 2008，6×102TCID50，肌肉注射）時，SPF 豬的臨床癥狀、病毒血癥和促炎細胞因子比農(nóng)場飼養(yǎng)豬出現(xiàn)的更快，但最終兩組豬均死亡；感染弱毒株（Estonia 2014，6×102TCID50，肌肉注射）時，SPF 豬僅表現(xiàn)出較輕和較短的臨床病程，隨后完全康復(fù)，但農(nóng)場飼養(yǎng)的長白豬卻表現(xiàn)出更嚴重的癥狀和更長的病程，死亡率達50%。分析顯示，感染弱毒株時，農(nóng)場豬產(chǎn)生了更多的炎性細胞因子，而SPF 豬產(chǎn)生了更多的抗炎因子IL-1ra 并在恢復(fù)階段表現(xiàn)出更強的白細胞擴增能力。以上數(shù)據(jù)表明，農(nóng)場豬因環(huán)境衛(wèi)生狀況較差而導(dǎo)致健康水平低下，在感染低毒力ASFV 時，預(yù)后更差。因此，改善豬群的健康和衛(wèi)生狀況，可能是預(yù)防和控制ASF 的關(guān)鍵因素之一。此外，健康豬只在感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、圓環(huán)病毒2 型（PCV2）、豬肺炎支原體等病原時，也表現(xiàn)出更高的抗病力和更好的預(yù)后[16-18]。

2 飼喂噴霧干燥豬血漿可增強豬只ASFV 抵抗能力

噴霧干燥豬血漿（spray-dried porcine plasma，SDPP）被廣泛用于豬的起始日糧中，可在改善豬只生長性能，提高飼料效率和動物存活率方面，特別是在壓力環(huán)境下（如病原感染）發(fā)揮一定作用。例如，在加拿大馬尼托巴?。∕anitoba）進行的一項流行病學研究[19]發(fā)現(xiàn)，與PRRSV、PCV-2 和豬肺炎支原體感染相關(guān)肺部病變較少的農(nóng)場，與其在飼料中補充SDPP 密切相關(guān)。2023年有研究通過2個試驗首次證實SDPP 在豬只抵抗ASFV 方面所發(fā)揮的作用。第1 個試驗[11]設(shè)置2 組豬（每組9 頭），一組飼喂添加大豆?jié)饪s蛋白的傳統(tǒng)飼料，一組飼喂添加SDPP 的飼料；每組豬隨機選擇3 頭接種ASFV 強毒株（Georgia 2007/1，103GEC，肌肉注射）作為“排毒豬”（trojan seeders）與剩余的6 頭豬混養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)飼喂組的3 頭“排毒豬”均在接種后第4～7 天死亡，而SDPP 飼喂組的3 頭“排毒豬”在試驗終止時（接種后第12 天）仍有2 頭豬存活（但有明顯ASF 癥狀）。第2 個試驗[20]的同居豬數(shù)據(jù)也顯示，SDPP 飼喂組出現(xiàn)臨床癥狀的時間或血液/組織中的病毒拷貝數(shù)均晚于或低于傳統(tǒng)飼喂組。該試驗設(shè)置3 組，每組8 頭，第1 組和第3 組飼喂傳統(tǒng)飼料，第2 組飼喂添加SDPP 的飼料；飼喂24 d 后，第1 組和第2 組分別鼻內(nèi)接種ASFV 弱毒株（BA71ΔCD2，105PFU）；隨后將第3 組隨機均分到第1 組和第2 組飼養(yǎng)舍內(nèi)（每組4頭，通過柵欄隔離）并保持飼喂飼料不變。弱毒株BA71ΔCD2 接種后第19 天，將第3 組肌肉注射接種強毒株（Georgia 2007/1，103GEC）作為“排毒豬”（trojan seeders），在接種后第2 天將柵欄撤離，允許“排毒豬”和第1 組和第2 組豬自由接觸；“排毒豬”在接種強毒后第3～7 天被處死，試驗在強毒接種后第20 天結(jié)束。結(jié)果顯示，SDPP 飼喂組相比傳統(tǒng)飼喂組，其臨床表現(xiàn)、病毒血癥、排毒水平和組織帶毒情況均表現(xiàn)更輕，特別是SDPP 飼喂組在與“排毒豬”混合后一直未有體溫反應(yīng)，在試驗結(jié)束時其血液、口鼻拭子、組織臟器中均未檢出ASFV。

以上兩篇文獻表明，飼喂SDPP 可降低感染豬的ASFV 載量并延緩病毒傳播[11]，增強ASF 疫苗的攻毒保護效力[20]。這提示在飼料中添加SDPP或許可作為一種營養(yǎng)干預(yù)措施，能促進 Th1 類反應(yīng)和細胞因子誘導(dǎo)[21]，增加CD8+ T 細胞的比例[22]，刺激機體產(chǎn)生更強的免疫反應(yīng)，進而增強ASF 的防控效果。

3 疣豬糞便移植給家豬可增強其ASFV 抵抗力

腸道微生物群可通過先天性免疫系統(tǒng)對機體的多個方面產(chǎn)生影響[23-24]。糞便微生物群移植（fecal microbiota transplantation，F(xiàn)MT）已被證實可在早期斷奶仔豬抵抗腹瀉方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[25]，通過改善或調(diào)節(jié)微生物群還可預(yù)防PRRSV 和PCV-2 的混合感染[26]。此外，使用微生態(tài)制劑或飼料添加劑等調(diào)節(jié)腸道菌群可提高豬群腸道健康水平，而良好的腸道健康有助于提高豬只的免疫系統(tǒng)效率及其整體生長性能[27-30]。2019年Correa-Fiz 等[31]研究發(fā)現(xiàn)，疣豬（對ASF 不易感）相比家豬（對ASF易感），其糞便核心微生物群中，有6 種操作分類單元（operational taxonomic units，OTUs）是獨有的。在此認識基礎(chǔ)上，2020年有研究[32]繼續(xù)挖掘糞便微生物群對ASFV 感染的影響，將斷奶仔豬分別口服移植疣豬糞便微生物群（WF 組，其中提前1 d 飼喂抗生素的為AWF 組）、家豬糞便微生物群（PF 組）和無菌對照組（PBS 組），然后進行ASFV 攻毒驗證。結(jié)果顯示：對于強毒株攻毒（E75，104HAU，肌肉注射），WF 組和PBS 組無顯著差異，均發(fā)病死亡；但使用弱毒株攻毒（E75CV1，102HAU，肌肉注射），AWF 組相比PF 組，其血清病毒滴度、鼻腔排毒水平和臨床癥狀均顯著降低或減輕。這提示口服移植疣豬糞便微生物群可能會提高豬的黏膜免疫力，可在ASFV 弱毒攻擊中發(fā)揮一定作用。

4 ASF 疫苗評價數(shù)據(jù)與動物健康/基礎(chǔ)免疫狀況存在關(guān)聯(lián)

1962年葡萄牙曾大規(guī)模使用弱毒疫苗防控ASF，結(jié)果最終被緊急叫停。原因之一是葡萄牙部分地區(qū)豬群健康狀況較差，接種豬在接種后一段時間內(nèi)出現(xiàn)了嚴重的肺部細菌感染，導(dǎo)致免疫失敗[33]。這個最早的“疫苗臨床評價”數(shù)據(jù)，首次顯示了當豬群健康狀況較差，特別是存在細菌等潛伏感染時，感染ASFV 弱毒株后可能導(dǎo)致不可接受的臨床表現(xiàn)。隨后部分研究也發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象。2014年Istomin 等[34]研究發(fā)現(xiàn)，細胞傳代致弱株MK-200 株（源自Mozambique-78，基因5 型，血清群3 型）可導(dǎo)致部分懷孕母豬流產(chǎn)或新生仔豬死亡，后研究[35]推測其主要原因是懷孕母豬在妊娠后期常出現(xiàn)免疫缺陷（immunodeficient）。2017年Budarkov 等[36]進一步通過γ-射線（4.0 Gy）建立了免疫缺陷豬模型（具體表現(xiàn)為免疫缺陷豬血液中淋巴細胞數(shù)量顯著減少，呈中度急性放射病狀態(tài)），發(fā)現(xiàn)MK-200 株接種健康豬只，僅使其有輕微的體溫升高和精神沉郁，但接種免疫缺陷豬只，卻使部分豬只死亡。同年，Sanchez-Cordon 等[37]對自然弱毒株OURT88/3 的疫苗潛質(zhì)進行了評價，發(fā)現(xiàn)105TCID50接種組中的3 頭豬在接種后出現(xiàn)了非特異性臨床表現(xiàn)（以肺部病變最明顯），分析認為這3 頭豬之前可能感染過肺炎支原體等病原。2020年Sereda 等[38]對俄羅斯研制的ASFV 弱毒疫苗候選株進行了總結(jié)：細胞傳代致弱株Kc-160 株（基因1 型，血清群1 型）感染健康家豬（107.5TCID50，肌肉注射）時，75%～80%的豬會出現(xiàn)輕微或中等程度的臨床反應(yīng)，病毒血癥滴度為101.3～102.5TCID50/mL；但接種有胃腸炎、支氣管肺炎和關(guān)節(jié)炎且白細胞水平低（免疫機能低下）的豬只時（106.5TCID50，肌肉注射），20%的豬會在第9～14 天死亡。雖然剖檢未發(fā)現(xiàn)急性ASF 的特征性病理變化，但病毒血癥滴度升高為104.0～104.5TCID50/mL。

以上數(shù)據(jù)說明，免疫接種動物的基礎(chǔ)健康/免疫狀況可以顯著影響疫苗的免疫效果。因此，美國研制的ASFV-G-ΔI177L 株（商品名NAVETASFVAC）在越南臨床使用時推薦只能給8～10 周齡的健康家豬使用[39]。同時，在使用之前建議先對接種豬群進行健康狀況評估，在無其他病原潛伏感染的情況下再使用。

5 結(jié)語

2018年ASF 傳入我國，2020年出現(xiàn)弱毒株（如HLJ/HRB1/20 等），2021年出現(xiàn)基因I 型毒株[40]，2022年出現(xiàn)基因I 型和II 型重組毒株[41]。我國ASFV 流行毒株的“不斷迭代”，特別是變異株（基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株）[42]的出現(xiàn)，使得我國ASF 防控面臨著巨大挑戰(zhàn)。面對這種趨勢，唯有回歸本質(zhì)，深刻思考ASF 防控乃至豬病防控的關(guān)鍵點，深入挖掘養(yǎng)豬行業(yè)存在的短板，才能更全面有效地防控ASF。獸醫(yī)行業(yè)需要從疾病管理轉(zhuǎn)向健康維護，而維護豬只健康遠比疾病治療更為困難[43]。文中多角度、多層次的數(shù)據(jù)顯示，豬只健康/免疫力水平可在一定程度上影響其ASFV 抵抗力，兩者緊密聯(lián)系。在以上數(shù)據(jù)支持下，結(jié)合ASF 在臨床中“若隱若現(xiàn)”的一些特點，越發(fā)證明豬只健康的重要意義。豬只健康可影響其生長性能、生產(chǎn)性能，它也是動物福利的基本保障，更是養(yǎng)豬獲利的關(guān)鍵。豬只健康不能靠藥物維系，更不等同于生物安全。提升豬只健康水平，將是有效防控ASF 的根本，也是產(chǎn)業(yè)升級競爭的致勝關(guān)鍵，更是我國養(yǎng)豬行業(yè)崛起的根基所在。