42個草菇栽培菌株對綠色木霉和腐食酪螨的抗性鑒定

李輝平 朱家漘,2 林金盛 姜雅 蔣寧 徐平 侯立娟 馬林 曲紹軒,2*

42個草菇栽培菌株對綠色木霉和腐食酪螨的抗性鑒定

李輝平1朱家漘1,2林金盛1姜雅3蔣寧1徐平1侯立娟1馬林1曲紹軒1,2*

（1. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所 江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點(diǎn)實驗室，江蘇 南京 210014；2. 江蘇大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；3. 江蘇江南生物科技有限公司，江蘇 丹陽 212364）

采用平板對峙法和平板接螨法，初步鑒定了42個草菇栽培菌株對綠色木霉和腐食酪螨的抗性。結(jié)果表明，供試菌株對綠色木霉和腐食酪螨的抗性存在極顯著差異。綠色木霉對42個草菇菌株菌絲的生長抑制率為1.6%～55.0%，其中有12株抑制率低于20%，占比28.6%，以V01、C1和C43個菌株對綠色木霉的抗性最強(qiáng)；有13個菌株在與綠色木霉對峙培養(yǎng)3天后產(chǎn)生了明顯的拮抗線。腐食酪螨對供試菌株的為害級別在3.25～9.0，產(chǎn)生抗、中抗、感和高感反應(yīng)，其中以C1、C3和C4等10個菌株對腐食酪螨的抗性較強(qiáng)，占比23.8%。最終從42個供試菌株中初步篩選出同時具有綠色木霉抗性和螨蟲抗性的菌株2個（C1、C4），為草菇多抗品種選育及病蟲害綠色防治提供了基礎(chǔ)材料。

草菇；綠色木霉；腐食酪螨；對峙培養(yǎng)；抗螨性

草菇（）是一種可食用的大型真菌，隸屬于擔(dān)子菌門、光柄菇科、小包腳菇屬，又名稻草菇、蘭花菇、麻菇、中國蘑菇等，在我國廣泛栽培[1]。草菇是腐生性真菌，其人工栽培起源于我國南方，栽培的原料可為稻草、麥秸、中藥渣、菌渣等農(nóng)業(yè)廢棄物，栽培周期短，僅為13～19天，在循環(huán)經(jīng)濟(jì)上發(fā)揮重要作用，生態(tài)、環(huán)境和經(jīng)濟(jì)效益顯著[2-3]。

草菇適合在高溫高濕的環(huán)境中生長，因此在生產(chǎn)過程中易遭受喜溫喜濕的競爭性雜菌和害蟲為害，影響產(chǎn)品的產(chǎn)量和食品安全[4]。常見的病蟲害包括疣孢霉（）、黃單胞菌（sp.）、鬼傘（sp.）、白色石膏霉（）、褐色石膏霉（）、綠色木霉（）、產(chǎn)黃青霉（）、螨蟲、線蟲、蚤蠅等，其中，綠色木霉和腐食酪螨（）分別是草菇生產(chǎn)上最為常見、危害最嚴(yán)重的雜菌和害蟲的優(yōu)勢種類[4 -5]。

由于綠色木霉和腐食酪螨都具有分布范圍廣、發(fā)生周期短、喜高溫高濕等特性，且目前缺乏具有免疫和高抗的草菇品種，在生產(chǎn)上一旦發(fā)生防治不及時極易造成重大的經(jīng)濟(jì)損失[4-5]。因此，根據(jù)草菇品種間對雜菌和害螨的耐性或抗性差異，挖掘與篩選抗性資源，利用優(yōu)良的抗源，進(jìn)行病蟲害的生物防治具有重要的現(xiàn)實意義。本研究分別采用平板對峙法[6]和平板接螨鑒定法[7]，對我國42個草菇菌株進(jìn)行抗綠色木霉和抗腐食酪螨的鑒定，評選出對二者均有中抗以上抗性的草菇菌株，為抗性品種的選育提供優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源，為生產(chǎn)上多抗品種的選用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試的草菇栽培菌株共42個，其中，V0013、V0022、V0023、V0025、V0032和V0087引自福建省農(nóng)林大學(xué)，V01～V09、VD、V11和V28引自江蘇江南生物科技有限公司，V1259、V1296、V1318、V3553、V3560、V3561、泗聯(lián)草菇(VS1)、V3565和V3570引自上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，C1～C6、D26、V5、V10、V23、V106、V238、V751、V904和V9715引自廣東省微生物所。

供試綠色木霉由本實驗室2020年采集于香菇菌棒，經(jīng)分離純化鑒定。

1.2 供試螨蟲

腐食酪螨為本實驗組2012年采集于毛木耳上，試驗種群在25 ℃室內(nèi)環(huán)境中以含食用菌菌絲的麥粒飼養(yǎng)，方法參照參考文獻(xiàn)[8]。

1.3 草菇菌株對綠色木霉抗性的鑒定

采用平板對峙法[6]，分別將綠色木霉與草菇栽培菌株進(jìn)行一一對峙培養(yǎng)試驗。所用平板為直徑90 mm的有機(jī)玻璃培養(yǎng)皿，每個平板倒入PDA培養(yǎng)基（購自臺灣生工生物公司）約20 mL，分別在平板一端距離邊緣20 mm處先接種直徑4 mm草菇菌絲塊。28 ℃條件下培養(yǎng)3天后，在同一平板的另一端距離邊緣20 mm處接種直徑4 mm的綠色木霉菌絲塊，與草菇菌絲塊保持一條直線，封口膜封口后在28 ℃下共培養(yǎng)3天。觀察記錄綠色木霉對草菇菌絲的抑制率、是否有拮抗線和色素產(chǎn)生、木霉菌絲能否覆蓋草菇菌絲繼續(xù)生長等情況，以未接種綠色木霉的平皿為對照。

菌絲的抑制率（%）=（未接種綠色木霉的草菇菌絲第5天的生長速度－接種綠色木霉對峙2天后的草菇菌絲生長速度）/未接種綠色木霉的草菇菌絲第5天的生長速度×100%[9]。

1.4 草菇菌株對腐食酪螨抗性的鑒定

參照李輝平等[7]有關(guān)糙皮側(cè)耳對腐食酪螨的抗性鑒定方法進(jìn)行抗性鑒定。將直徑4 mm草菇菌絲塊分別接種于抗螨性鑒定平板（直徑90 mm），28 ℃培養(yǎng)至長滿平板。用80目的過濾篩收集腐食酪螨成螨，雙蒸水清洗4次后用濾紙吸干水分，放入空白的瓶中饑餓24 h后進(jìn)行取食試驗。每個草菇平板上蓋放置1 000頭左右成螨（約0.07 g），將含菌絲的培養(yǎng)皿倒扣在上蓋上，用封口膜封口以免螨蟲逃逸。每個菌株重復(fù)4次。48 h后觀察并記錄螨蟲取食后形成的孔洞數(shù)量和直徑大小，用于判斷為害級別，為害級別劃分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[7]。根據(jù)為害級別確定抗性等級，平均值在0～0.9為免疫，1.0～2.9為高抗，3.0～4.9為抗，5.0～6.9為中抗，7.0～8.9為感和9.0為高感。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，SPSS 19.0軟件計算差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 草菇菌株對綠色木霉的抗性分析

綠色木霉對所有供試草菇菌株都有一定的抑制性（圖1，表1）。接種綠色木霉2天后，草菇菌絲的生長均受到影響，生長抑制率為1.6%～55.0%，不同菌株間存在極顯著性差異。其中，V01、C3和C4等3個菌株的抑制率低于10%，對綠色木霉的抗性最強(qiáng)。有13個菌株與綠色木霉對峙培養(yǎng)3天后產(chǎn)生明顯的拮抗線，表明綠色木霉對這些菌株的生長具有一定抑制作用。

從表1可知，綠色木霉對供試菌株的抑制率，有30個菌株在21%～55%，菌絲基本被綠色木霉覆蓋，其中V0023、V03、V10、V28、V3561、V3565、V904、V9715、VD、C5和C6（圖1）等11個菌株對綠色木霉最為敏感，抑制率達(dá)到46%以上，與雜菌對峙培養(yǎng)僅3天菌絲幾乎全被綠色木霉覆蓋住，表明綠色木霉對草菇大部分菌株具有較強(qiáng)的抑制作用。抑制率低于21%，對綠色木霉表現(xiàn)有一定抗性的菌株有12株，占比28.6%。

2.2 草菇菌株對腐食酪螨的抗性分析

腐食酪螨取食草菇菌絲48 h后，根據(jù)取食留下的孔洞直徑大小和數(shù)量來判斷螨蟲的為害級別。結(jié)果表明，腐食酪螨對42個菌株為害級別在3.25～9.0（表2）。V05、V06（圖2）、V07、V09、V904、C2、C5、C6等8個菌株的菌絲幾乎被取食殆盡，為害級別為9.0，抗性等級劃為高感。V3561、V0087（圖2）等13個菌株形成了較大的孔洞，造成大面積的菌絲損失，為害級別為7.0～8.5，等級劃為“感”。方差分析表明，螨蟲對不同菌株間的為害級別有極顯著差異（<0.0001），有21個（50%）菌株表現(xiàn)為感和高感的，對螨蟲沒有顯著抗性，在栽培中遇到腐食酪螨為害，易造成較大的產(chǎn)量損失。螨蟲取食較輕、抗性等級為抗的菌株有C1、C3和C4等10個，占比23.8%，這些菌株在螨蟲取食后僅在菌落上留下小于2 mm的孔洞（圖2），是重要的抗性菌株。

表1 綠色木霉對42個草菇菌株菌絲生長的影響

注：同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異極顯著（＜0.0001），下同。

從抗螨性的分布來看，42個菌株表現(xiàn)抗、中抗、感和高感，而無高抗和免疫表現(xiàn)。其中，“抗”菌株10個，“中抗”菌株11個，“感”菌株13個，“高感”菌株8個，中抗以上菌株和敏感性菌株各占比50%，表明草菇栽培種中存在一定的抗螨性資源。

綜合抗綠色木霉和抗螨性分析結(jié)果，草菇菌株C3和C4對綠色木霉和腐食酪螨的抗性均表現(xiàn)為強(qiáng)，是進(jìn)行多抗品種選育的重要種質(zhì)資源。

3 結(jié)論與討論

中國食用菌產(chǎn)量占全球70%以上，食用菌已成為繼糧、油、果、蔬后的中國第五大農(nóng)業(yè)種植業(yè)，是“點(diǎn)草成金、變廢為寶”的綠色產(chǎn)業(yè)。由于食用菌種類繁多、栽培模式多樣，病蟲害的發(fā)生規(guī)律與其他作物相比更為復(fù)雜多樣，危害多發(fā)、頻發(fā)[10-11]。通過培育抗性品種提高食用菌對有害生物的抗性是實現(xiàn)病蟲害綠色防控的重要措施。但目前食用菌尚未見廣譜、持久、多抗的品種，需要不斷挖掘新的抗性種質(zhì)資源加以培育利用。

表2 42個草菇栽培菌株對腐食酪螨的抗性等級

本研究對42個草菇栽培菌株對綠色木霉和腐食酪螨的抗性進(jìn)行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)對綠色木霉有較強(qiáng)抗性的菌株有3個，為V01、C3和C4；對腐食酪螨具有較強(qiáng)抗性菌株有10個，分別為C1、C3、C4、V0013、V0025、V08、V751、V9715、VS1和V3560。其中，C3和C4同時具有抗綠色木霉和抗螨性狀，是寶貴的多抗種質(zhì)資源。從供試的42個菌株抗綠色木霉和抗螨性分布來看，中抗菌株分別為9個和11個，抗性菌株分別為3個和10個，達(dá)到28.6%和50%，本研究結(jié)果僅是通過室內(nèi)菌絲對峙培養(yǎng)和取食試驗所得，有待通過多次田間試驗進(jìn)一步驗證。

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Resistance identification of 42strains toand

LI Huiping1ZHU Jiachun1,2LIN Jinsheng1JIANG Ya3JIANG Ning1XU Ping1HOU Lijuan1MA Lin1QU Shaoxuan1,2*

（1. Jiangsu Key Laboratory for Horticultural Crop Genetic Improvement, Institute of Vegetable Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. College of Life Science, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China; 3. Jiangsu Jiangnan Biotechnology Co., Ltd., Danyang 212364, China）

The resistance of 42 strains ofwas identified by the confrontation culture method and plate mite feeding method. The results showed that the resistance toandwas significantly different. The inhibition rate before contact (IRBC) of 42 strains ranged from 1.6% to 55.0%, and those of 12 strains were less than 20% with the proportion of 28.6%. The three strains (V01, C1 and C4) were the most resistant to; Thirteen strains produced significant antagonistic lines after 3 days of confrontation with. The damage levels ofto the test trains ranged from 3.25 to 9.0, with resistance, medium resistance, sensitivity and high sensitivity. Among them, 10 strains (the proportion of 23.8%) including C1, C3 and C4 showed more resistant to the mite. In this study, 2 of 42 strains (C1 and C4) were identified with both resistance toand, which provided basic materials for the breeding of multi-resistant varieties and green control of diseases and pests.

straw mushroom;e;; confrontation culture; mite resistance

S646

A

2095-0934（2024）01-047-05

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目[CX(21)2021]；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-20）；江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院亞夫科技服務(wù)項目[KF（23）1212]

李輝平（1982—），男，碩士，副研究員，主要從事菌物遺傳育種與高效利用研究。E-mail：lhp211@163.com。

曲紹軒（1982—），女，博士，研究員，主要從事菌物高效栽培與病蟲害綜合防控研究。E-mail：qusx@jaas.ac.cn。