云南食用花卉80%甲醇提取物抗氧化活性的比較研究

沈曉靜,周紹琴,王虹,李興玉,黃璐璐,尹田鵬

1(云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 理學(xué)院,云南 昆明,650201)2(云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,云南 昆明,650201) 3(遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū) 生物工程系,廣東 珠海,519041)

食用花卉是指其根、莖、葉、花等各部位可以直接食用的花卉植物,其既可用于觀賞,也可以食用、入藥[1]。食用花卉作為一種無毒、安全的花卉,其外觀、口感等價(jià)值?？捎糜谑称?、醫(yī)藥領(lǐng)域[2]。過去,人們常將食用花卉當(dāng)作填充或調(diào)味的元素應(yīng)用于傳統(tǒng)烹飪中,而對其科學(xué)價(jià)值研究較少[3]。然而,隨著食用花卉獨(dú)特的風(fēng)味和豐富的活性成分研究的不斷深入,其商業(yè)價(jià)值也在不斷增加[4]。另外,食用花卉的健康作用和營養(yǎng)價(jià)值也引起了研究者的極大興趣[5]。

對于翻譯專業(yè)尤其是MTI專業(yè)的學(xué)生來說，翻譯是一門核心課程，它的目的就在于在扎實(shí)的語言基本功基礎(chǔ)上，培養(yǎng)學(xué)生的綜合分析能力和創(chuàng)新能力。但是根據(jù)以上分析卻顯示，由于傳統(tǒng)的教學(xué)過于注重學(xué)生翻譯技能的機(jī)械訓(xùn)練，忽視翻譯過程中的思維活動(dòng)，這才導(dǎo)致了學(xué)生思辨能力的喪失。

腫瘤、心血管疾病、糖尿病被認(rèn)為是人類“三大殺手”。目前認(rèn)為,自由基損傷與大多數(shù)慢性退行性、老年性疾病的發(fā)生有關(guān),如心臟病、老年性癡呆、腫瘤等。自由基通過各種不同的途徑參與心臟疾病的發(fā)生和發(fā)展,因此,抗氧化劑可參與心臟疾病的治療[6-7]?？寡趸瘎┎粌H能控制自由基,還能通過活化或抑制基因來調(diào)控細(xì)胞增殖,因此,其能有效地預(yù)防腫瘤,甚至與其他醫(yī)療方法聯(lián)用治療腫瘤[8]。糖尿病的發(fā)生和發(fā)展與機(jī)體/組織中因自由基產(chǎn)生增多和(或)抗氧化防御功能損害等引起的氧化應(yīng)激有關(guān)。因此,增強(qiáng)機(jī)體或組織的抗氧化能力可降低血糖[9]。此外,氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病的重要發(fā)生機(jī)制之一,有效的抗氧化劑是防治慢性阻塞性肺疾病的重點(diǎn)[10-11]。另外,實(shí)踐還證明,抗氧化劑的補(bǔ)充有助于預(yù)防中風(fēng)的發(fā)生和改善其已發(fā)病癥[12]?？傊?氧化應(yīng)激與多種疾病相關(guān),開發(fā)和尋找有效抗氧化劑是治療這些疾病的重要方式。

食用花卉中含有豐富的天然抗氧化生物活性成分(如酚酸類、黃酮類和花青素[2])。這些抗氧化活性成分對高血糖、癌癥和神經(jīng)退行性疾病有很大影響[13]。研究還發(fā)現(xiàn),與一些普通蔬菜和水果相比,有的食用花卉的抗氧化能力更強(qiáng)[14]。早在公元前3000年,我國就有將花用于烹飪的習(xí)慣。云南具有豐富的植物資源,據(jù)統(tǒng)計(jì),云南省常用于食用的花卉就有303種,分屬于74科178屬[15]。通過對部分云南食用花卉的研究發(fā)現(xiàn),這些食用花具有較高的營養(yǎng)和食用價(jià)值[16]。然而,目前對云南食用花卉的研究報(bào)道是有限的,為進(jìn)一步開發(fā)利用食用花卉資源提供依據(jù),本研究在對采自云南的17種食用花卉提取物中總酚、總黃酮和原花青素含量測定的基礎(chǔ)上,采用DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)和FRAP法對抗氧化能力進(jìn)行評價(jià),并分析活性成分含量與抗氧化效果的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

采自云南的17種食用花卉,樣品信息詳見表1,室溫下陰干后粉碎備用。

式中:As,樣品溶液的吸光度;Ao,未加樣品溶液的吸光度。

1.2 設(shè)備與儀器

DLSZ-I低溫循環(huán)泵、KQ-250DB超聲波清洗機(jī)、SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵,鞏義市予華儀器有限公司;RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠;722型分光光度計(jì)、FA2104N電子天平,上海菁華科技有限公司;VFD-3000真空冷凍干燥機(jī),北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;旭曼1000Y多功能粉碎機(jī),永康市鉑歐五金制品有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 食用花卉成分提取

采用參考文獻(xiàn)[17]中的提取方法并適當(dāng)修改,具體方法為:稱取粉碎后的食用花卉樣品25 g,加入200 mL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇,50 ℃超聲波30 min后過濾。重復(fù)提取1次,合并濾液,50 ℃下旋蒸除去甲醇,凍干。配制成10 mg/mL的原液,冷藏待用。

1.3.2.1 總酚(total phenolic contents, TPC)含量的測定

通過SET k-cover算法找出多個(gè)對網(wǎng)絡(luò)獨(dú)立覆蓋的集合并進(jìn)行睡眠調(diào)度,可以有效地提升網(wǎng)絡(luò)的生命期,當(dāng)前的SET k-cover算法多針對完全覆蓋展開研究,本文提出了一種針對百分比覆蓋的SET k-cover算法,將連通度作為約束條件,以覆蓋和生命期為目標(biāo),百分比覆蓋下可以讓更多的節(jié)點(diǎn)進(jìn)入休眠狀態(tài),從而達(dá)到節(jié)能、抗干擾的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,算法在保證網(wǎng)絡(luò)覆蓋質(zhì)量時(shí)能夠有效地減少活躍節(jié)點(diǎn)的數(shù)量,使得覆蓋集數(shù)量增大,延長了網(wǎng)絡(luò)的生存時(shí)間。受限于連通度的約束,覆蓋百分比的生命期延長效應(yīng)在覆蓋比率較低的情況下有抑制現(xiàn)象,算法可為需要進(jìn)行覆蓋比選擇的應(yīng)用場景提供理論最佳數(shù)值的參考依據(jù)。

1.3.2 食用花卉活性成分的測定

參考HU等[17]的方法略作修改后測定總酚含量。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算食用花的總酚含量,結(jié)果以mg沒食子酸(GCE)/g提取物(Ex)表示,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=0.010 8C+0.000 7(R2=0.997 8,C為沒食子酸質(zhì)量)。

嚴(yán)和平等[22]采用乙醇熱提取法對云南省紅河州13種食用花進(jìn)行了總酚和總黃酮含量的測定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)總黃酮含量最高3種食用花卉為桂花、密蒙花、棠梨花;最低的3種為菊花、金雀花和苦刺花?？偡雍孔罡叩?種食用花卉為石榴花、桂花和棠梨花;最低的3種則為金雀花、馬?；ê涂啻袒?。本研究采用采集于曲靖的棠梨花80%甲醇提取后,其總黃酮和總酚含量也在17種食用花中均為最高。采集于賓川的石榴花具有高含量的總酚;采集于昭通的密蒙花也富含黃酮類成分。同樣的,金雀花和白刺花中總酚和總黃酮含量較低。

1.3.3 食用花卉抗氧化活性的測定

利用Excel 2017軟件統(tǒng)計(jì)患者的基本信息和伏立康唑片的臨床用藥情況。參照各侵襲性真菌病（invasive fungal disease，IFD）診療“指南”[3-5]、伏立康唑片說明書[6]、《新編藥物學(xué)》[7]、《中國醫(yī)師藥師臨床用藥指南》[2]等，評價(jià)伏立康唑片在腎臟科用藥的合理性。

1.3.2.3 原花青素(total procyanidin contents, TPYC)含量的測定

采用參考文獻(xiàn)[19]的方法測定。以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算食用花中糖含量,結(jié)果以mg兒茶素(CE)/g提取物(Ex)來表示,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=2.477 1C-0.003 2(R2=0.998 9,C為兒茶素的質(zhì)量)。每個(gè)樣品重復(fù)3次,結(jié)果以平均值表示。

參考HE等[18]的方法測定總黃酮含量。以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算食用花的總黃酮含量,結(jié)果以mg蘆丁(RE)/g提取物(Ex)表示,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=0.879C-0.001 4(R2=0.999 4,C為蘆丁質(zhì)量)。

1.3.3.1 DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)

按照參考文獻(xiàn)[20]的方法進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)。以蘆丁為陽性對照,樣品的DPPH抗氧化活性以50%抑制率(IC50)表示,DPPH自由基清除率的計(jì)算如公式(1)所示:

DPPH自由基清除率/%=[(Ao-As)/Ao]×100

觀光農(nóng)業(yè)作為新興的行業(yè)，既能促進(jìn)傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)向現(xiàn)代農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)型，解決農(nóng)業(yè)發(fā)展的部分問題，也能提供大量的就業(yè)機(jī)會，為農(nóng)村剩余勞動(dòng)力解決就業(yè)問題，還能夠帶動(dòng)農(nóng)村教育、衛(wèi)生、交通的發(fā)展，改變農(nóng)村面貌，是為解決中國“三農(nóng)問題”提供新的思路。墾區(qū)具有良好的國土資源條件和農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，森林及動(dòng)植物資源豐富多彩，保存有傳統(tǒng)而古樸的民風(fēng)民俗，同時(shí)具有明顯的地緣優(yōu)勢，因此應(yīng)因地制宜，突出自身資源特色，確定符合本地實(shí)際的發(fā)展對策，集中力量建設(shè)一批能代表黑龍江墾區(qū)地方特色、競爭力強(qiáng)、配套完善的大型觀光農(nóng)業(yè)旅游產(chǎn)品。

(1)

蘆丁、DPPH、2,4,6-三吡啶基三嗪(2, 4, 6-tripyridyl triazine,TPTZ),上海瑞永生物科技有限公司;福林酚,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;葡萄糖,天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司;Na2CO3、KH2PO4、FeCl3·6H2O、FeSO4·7H2O、亞硝酸鈉,西隴科學(xué)股份有限公司;AlCl3,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;沒食子酸,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;以上試劑均為分析純。

汶上縣核桃栽培歷史悠久，縣域內(nèi)土壤、氣候、水利等諸項(xiàng)自然因子均適宜核桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，北部山區(qū)為低山丘陵，土壤以褐土、棕壤為主，土層較厚，質(zhì)地疏松，ph值介于6.7—7.5之間，是核桃生長的適生區(qū)和豐產(chǎn)區(qū)，歷史上北部山區(qū)的梅山核桃溝、寨子山核桃?guī)X遠(yuǎn)近聞名。近年來，汶上縣堅(jiān)持把發(fā)展核桃產(chǎn)業(yè)作為改善生態(tài)環(huán)境、優(yōu)化產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)、增加民生福祉的重要內(nèi)容，出臺了一系列扶持核桃發(fā)展的政策措施，核桃產(chǎn)業(yè)得到快速發(fā)展，全縣核桃栽植面積達(dá)到7.2萬畝，總產(chǎn)值達(dá)2.55億元，多次在中國核桃節(jié)、中國林產(chǎn)品交易會上榮獲金獎(jiǎng)，先后被評為山東省核桃產(chǎn)業(yè)示范縣、中國核桃之鄉(xiāng)、中國核桃名縣。

1.3.3.2 FRAP法

其實(shí)，他哪里知道我的心意。我是他想象中的那種狗男人嗎？他錯(cuò)了，確確實(shí)實(shí)錯(cuò)了。我是喜歡他母親那樣的女人，但僅僅是尊重，卻絕沒有要欺辱他們母子的絲毫惡意。他一定是聽信了某些人的閑言碎語。這世界的人真是都他媽的把眼裝在了屁股上了。他們壓根就不喜歡你去做一丁點(diǎn)兒有利于別人的好事。我想幫助小六子母子做點(diǎn)事，這難道有什么不對嗎？去他媽的那些狗日的爛舌頭！

表1 云南食用花卉樣品信息Table 1 Edible flowers samples from Yunnan province

續(xù)表1

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均測定3次,以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。運(yùn)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行相關(guān)性分析(相關(guān)系數(shù)為Pearson)。

2 結(jié)果與分析

2.1 食用花卉活性成分含量的分析

酚類、黃酮類和原花青素類化合物作為有效的抗氧化活性成分,具有顯著的自由基清除能力。為了區(qū)分不同食用花卉中主要有效成分,根據(jù)17種食用花卉的成分含量測定結(jié)果進(jìn)行熱圖分析,結(jié)果如圖1所示。

結(jié)果表明,總酚含量最高的為棠梨花,其次是石榴花,含量分別為(229.00±1.67) mg GCE/g Ex和(216.41±2.41) mg GCE/g Ex;最低的食用花則為金雀花和三七花,含量分別為(25.36±3.15) mg GCE/g Ex和(13.64±1.67) mg GCE/g Ex。總黃酮含量則以棠梨花和密蒙花最高,分別為(586.20±22.75)RE/g Ex和(442.32±52.33) RE/g Ex;最少的為白刺花和木棉花,含量分別僅為(16.40±0.40) mg RE/g Ex和(14.91±0.51) mg RE/g Ex。此外,棕櫚花和木棉花中原花青素含量達(dá)(295±5.00) mg CE/g Ex和(244.33±4.00) mg CE/g Ex。三七花則最低,僅為(3.50±0.50) mg CE/g Ex,白刺花也僅含(5.33±0.30) mg CE/g Ex。

按照參考文獻(xiàn)[21]的方法進(jìn)行FRAP抗氧化能力測定。蘆丁為陽性對照,以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.632 5C(R2=0.999 2),計(jì)算還原能力,樣品的FRAP法抗氧化活性表示為mmol FeSO4/g提取物。

1.3.2.2 總黃酮(total flavonoid contents, TFC)含量的測定

圖1 不同食用花卉成分含量的熱圖和聚類分析Fig.1 Heat map and cluster analysis of the main active ingredient contents of different edible flowers

根據(jù)上述結(jié)果,發(fā)現(xiàn)棠梨花、棕櫚花、密蒙花富含黃酮類活性成分;棠梨花、石榴花、棕櫚花富含多酚類成分;木棉花、棕櫚花和棠梨花富含原花青素。因此,棠梨花、棕櫚花、石榴花、密蒙花、木棉花活性成分較為豐富。根據(jù)圖1,將17種食用花卉分為了2個(gè)主集群和3個(gè)子集群。在主簇Ⅰ中,包含棕櫚花、棠梨花和密蒙花3種食用花卉。另外14種食用花卉組成主簇Ⅱ,該主簇包含2個(gè)子簇,其中木棉花、大白杜鵑花和地涌金蓮3種食用花為同一亞簇,其余11種食用花卉則組成另一個(gè)子簇。此外,豆科屬金雀花、白刺花和槐花3種豆科食用花卉同屬一個(gè)亞簇。

2.2 食用花卉抗氧化活性的分析

為了區(qū)分不同食用花卉的抗氧化活性,根據(jù)17種食用花卉的抗氧化測定結(jié)果進(jìn)行熱圖分析,結(jié)果如圖2所示。DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)是一種靈敏、有效的評價(jià)抗氧化能力的方法,根據(jù)DPPH自由基實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),石榴花具有最強(qiáng)的DPPH自由基清除能力,其IC50值達(dá)(0.22±0.007) mg/mL,其次為棕櫚花,清除能力分別為(0.42±0.041) mg/mL。白刺花和三七花2種食用花的DPPH自由基清除能力最弱,IC50值分別為(20.96±0.92) mg/mL和(16.56±0.26)mg/mL。

圖2 不同食用花卉抗氧化能力的熱圖和聚類分析Fig.2 Heat map and cluster analysis of the antioxidant activity from different edible flowers Yunnan

FRAP法是通過將Fe3+-TPTZ還原為Fe2+-TPTZ的方式評價(jià)抗氧化能力。結(jié)果顯示,棠梨花具有最強(qiáng)的鐵還原能力,達(dá)(2.94±0.32) mmol Fe2+/g Ex;石榴花次之,為(2.91±0.20) mmol Fe2+/g Ex。另外,茉莉花、三七花和白刺花最弱,分別為(0.022±0.017)、(0.063±0.027)、(0.065±0.012) mmol Fe2+/g Ex。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)是臨床常見的睡眠呼吸障礙性疾病。有報(bào)研究指出OSAHS與人類心血管疾病的發(fā)生具有有較密切的關(guān)系,臨床可導(dǎo)致高血壓、冠心病等心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生[2]。

另外,根據(jù)17種食用花卉的抗氧化活性測定結(jié)果對其進(jìn)行熱圖分析,結(jié)果顯示17種食用花分為了2個(gè)主集群和3個(gè)子集群。具有最弱抗氧化能力的白刺花和三七花為同一主群。15種食用花卉構(gòu)成了主簇Ⅱ,并分成了2個(gè)子簇,其中槐花、雞蛋花、金雀花和南瓜花為同一子群,棠梨花和石榴花構(gòu)成一個(gè)子群;其余9種食用花卉則構(gòu)成另一個(gè)子群,并又可分為4個(gè)不同的群。

2.3 食用花卉成分與抗氧化活性的相關(guān)性分析

為了進(jìn)一步分析17種食用花卉成分與抗氧化活性之間的關(guān)系,采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果如圖3所示。通常,相關(guān)性系數(shù)為0.8～1.0時(shí),認(rèn)為顯著相關(guān)性極強(qiáng),相關(guān)性系數(shù)越接近于1相關(guān)性越強(qiáng);相關(guān)性系數(shù)為0.0～0.2時(shí),則認(rèn)為相關(guān)較弱或不相關(guān)。因此,根據(jù)相關(guān)性分析結(jié)果表明,DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力與總酚、原花青素含量正相關(guān)。其中,總酚含量與FRAP法抗氧化能力相關(guān)性最強(qiáng),達(dá)到0.95?？傸S酮?jiǎng)t與抗氧化活性呈弱相關(guān),甚至不相關(guān)。

圖3 不同食用花卉活性成分與抗氧化能力之間的 相關(guān)性分析Fig.3 The correlation between main ingredient contents and antioxidant activity of different edible flowers 注:*表示P<0.05;**表示P<0.01。

飲食對壽命和衰老產(chǎn)生重要的影響。因此,開發(fā)和利用具有潛在抗衰老作用的資源十分重要[23]。研究已證實(shí),花卉具有潛在的抗衰老作用?？寡趸c抗衰老之間存在著密切的關(guān)系。食品的抗氧化性被認(rèn)為是評價(jià)食品營養(yǎng)與功能的重要參數(shù)之一[24-25]。食用花卉作為天然活性成分和抗氧化活性的物質(zhì)的重要來源,對進(jìn)一步開發(fā)和利用花卉資源和尋求天然活性物質(zhì)具有重要的作用[23,26]。通過研究發(fā)現(xiàn),棠梨花和石榴花不僅總酚、總黃酮含量高,而且具有較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力和鐵還原能力。這些食用花卉具有進(jìn)一步深入研究和開發(fā)的重要潛質(zhì)。例如,可利用食用花卉對抗氧化應(yīng)激的效力,用于相關(guān)慢性疾病的食療。因此,食用花卉作為生物活性化合物的潛在來源,在人類飲食中有廣闊的應(yīng)用前景。

對注冊數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，注冊在藥品零售企業(yè)的執(zhí)業(yè)藥師變更注冊的情況較為頻繁，主要有兩種情況：一是執(zhí)業(yè)藥師變動(dòng)率（指變更注冊和再次注冊中執(zhí)業(yè)單位發(fā)生變更的人數(shù)之和與全部注冊人數(shù)的占比）較大；二是變動(dòng)頻次較高。在2011年全年，執(zhí)業(yè)藥師變動(dòng)率接近35%，變動(dòng)頻次也較高，有些執(zhí)業(yè)藥師1年內(nèi)要變更2～3個(gè)執(zhí)業(yè)單位[10]。尤其是發(fā)生變動(dòng)后，部分企業(yè)不再補(bǔ)充執(zhí)業(yè)藥師，原執(zhí)業(yè)單位出現(xiàn)執(zhí)業(yè)藥師空缺。因此，執(zhí)業(yè)藥師變動(dòng)后的補(bǔ)充是問題的關(guān)鍵，只有掌握補(bǔ)充情況才能在管理上采取相應(yīng)對策。所以，我們從2011年開始統(tǒng)計(jì)執(zhí)業(yè)藥師變動(dòng)及補(bǔ)充情況，并進(jìn)行分析。

償債能力分析，是指對企業(yè)償還各種債務(wù)的能力和保障程度所作的分析，通過這種分析可以有效地揭示出企業(yè)存在的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。分析和評價(jià)企業(yè)短期償債能力的財(cái)務(wù)指標(biāo)主要有流動(dòng)比率、速動(dòng)比率等。

3 結(jié)語

本文通過對采自云南不同地區(qū)的17種食用花卉進(jìn)行活性成分及其抗氧化性能的比較,發(fā)現(xiàn)這些食用花卉含有一定的酚類、黃酮類等成分,且呈現(xiàn)出了一定的抗氧化性,可以作為天然抗氧化劑的來源在日常飲食中發(fā)揮其食用價(jià)值。鑒于,云南具有豐富的食用花卉資源,目前對其深入的研究報(bào)道較少,為了進(jìn)一步地開發(fā)和利用這些豐富的資源,充分利用其有效成分及提升其價(jià)值,對其進(jìn)行必要的成分和活性功能的深入研究是非常重要的。