一例豬感染PRRSV的診斷

王文佳，王瑞寧，盧婷婷，宋幸輝，安玉甫

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院 制藥工程學(xué)院，河南 鄭州 450046；2.杭州惠通生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310006)

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)引起，以母豬妊娠后期流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)弱仔數(shù)量增加，及新生仔豬與生長豬嚴重呼吸障礙為主要特征[1]。上世紀80年代，該病首次在美國出現(xiàn)，Wenxvoort等首次在歐洲分離到LV(Lentivirus)毒株[2]。我國于1996年首次分離到CH-1a毒株[3]。2006年，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(Highly pathogenic PRRS)在我國爆發(fā)，感染豬發(fā)病后高熱，呼吸困難，耳部、腹部和陰部皮膚發(fā)紺，故該病又稱為“藍耳病”。隨后我國其他地區(qū)也分離到HP-PRRSV類型毒株，如JXA1[1]，HuN4[4]等。該病死亡率高，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重損失[5-7]。筆者就2017年11月浙江嘉興某豬場發(fā)病感染的診斷情況報告如下。

1 發(fā)病情況與臨床癥狀

浙江省嘉興市某規(guī)?；i場，存欄母豬1500多頭，保育豬6000頭左右。2017年11月發(fā)病，發(fā)病率約20%，死亡率10%左右。發(fā)病豬只表現(xiàn)精神沉郁、被毛蓬亂、拉稀、食欲不振、呼吸困難，部分豬只出現(xiàn)腹式呼吸、采食量下降、消瘦、后肢腫脹等癥狀。母豬出現(xiàn)中后期流產(chǎn)，產(chǎn)仔數(shù)下降，一胎及二胎低胎次流產(chǎn)母豬占流產(chǎn)母豬的32.35%。

2 剖檢病變

仔豬于14日齡時注射藍耳疫苗(疫苗株為VR2332)。剖檢三頭40日齡保育豬，可見肺臟尖葉和心葉肉樣變(圖1a)，后肢關(guān)節(jié)一邊清稀積液一邊膿性積液(圖1b和圖1c)，腹股溝淋巴結(jié)鐵銹色腫大，心臟、肝臟、脾臟、腎臟、扁桃體和回盲瓣無明顯病變。

圖1 剖檢眼觀病變注：a，肉眼可見肺及心尖組織肉樣化；b，后肢關(guān)節(jié)積液清稀；c，后肢關(guān)節(jié)膿性積液

3 臨床診斷

根據(jù)發(fā)病史、臨床癥狀和剖檢病變，結(jié)合該豬場的疫情病史，初步診斷為PRRSV感染。隨即采集病料進行實驗室檢查。

4 實驗室檢查

4.1 病毒熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測

肺臟病料經(jīng)qRT-PCR檢測PRRSV的ORF5(M)基因，PRRSV陽性(圖2)。

選取其中一株P(guān)RRSV陽性毒株(1903-1)的ORF5基因序列，利用Lasergene7.0軟件與Genbank中的經(jīng)典毒株ORF5基因序列進行同源性分析。結(jié)果顯示該陽性毒株(1903-1)與美洲型代表毒株NADC30的同源性最高，核酸序列相似性和氨基酸序列相似性同為94.3%，與我國1996年首次分離到的CH-1a的核酸和氨基酸序列相似性分別為85.9%和87.4%，與2007年在我國流行較廣的JXA1核酸和氨基酸序列相似性分別為85.5%和88.5%(表1)。使用Mega 7.0軟件對該陽性毒株(1903-1)ORF5基因的氨基酸序列進行遺傳進化分析，顯示該陽性毒株序列與美洲型毒株NADC30親緣關(guān)系最相近(圖3)。

圖2 1903-1毒株P(guān)RRSV M基因熒光定量圖

CH-1aJXA1VR2332NADC30Lelystad virusMLV1903-1CH-1a—93.091.087.66.090.587.4JXA195.4—87.686.16.087.188.5VR233291.788.9—84.17.098.586.2NADC3087.786.186.4—5.084.194.3Lelystad virus26.526.427.225.2—6.55.2MLV91.788.999.386.127.4—85.61903-185.985.585.194.326.884.5—

注：左下方為核酸序列相似性；右上方為氨基酸序列相似性

圖3 PRRSV ORF5基因氨基酸序列遺傳進化樹

4.2 組織病理學(xué)變化

病理切片顯示肺臟支氣管和細支氣管內(nèi)有大量炎性產(chǎn)物，室管膜和血管周圍有大量炎癥細胞，包括嗜中性粒細胞；肺泡壁增厚，肺泡間質(zhì)增厚，內(nèi)有壞死細胞；同時在小腸中還有隱孢子蟲感染(圖4)。

5 小結(jié)

本文用qRT-PCR方法對浙江省嘉興市某豬場發(fā)病豬只進行了檢測，確定該豬場豬只為PRRSV感染。PRRSV的ORF5序列同源性分析顯示，該毒株與美洲型NADC30親緣關(guān)系最為相近。病理切片顯示，發(fā)病豬只疑似有隱孢子蟲混合感染，可能是患病豬只免疫系統(tǒng)受損，免疫力下降，導(dǎo)致隱孢子蟲感染，臨床表現(xiàn)為感染豬腹瀉、拉稀。

圖4 組織病理學(xué)變化a: 肺組織炎癥和嗜中性粒細胞增多；b: 肺泡壁增厚且內(nèi)有壞死細胞；c: 小腸組織隱孢子蟲感染