隔物灸調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)抑制慢性萎縮性胃炎大鼠糖酵解的機(jī)制研究

李琪 吳夢蝶 劉世敏 蕭有智 王文佳 馬喆 黃艷 李靈杰 李璟 劉慧榮

摘要 目的：觀察慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠胃黏膜組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）及糖酵解關(guān)鍵酶表達(dá)變化，探究隔物灸對CAG的作用及可能機(jī)制。方法：將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組和造模組，自由飲用170 mg/L濃度MNNG聯(lián)合法進(jìn)行CAG大鼠造模。鑒定模型成功后，造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、隔藥餅灸組、隔姜灸組和西藥組，每組6只。隔藥餅灸組、隔姜灸組均取中脘、氣海穴進(jìn)行隔物灸干預(yù)，西藥組給予葉酸懸濁液灌胃。采用HE染色法觀察胃竇組織病理學(xué)變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測胃黏膜組織信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和HIF-1α的mRNA表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)法檢測胃黏膜組織STAT3、HIF-1α蛋白表達(dá)，比色法和ELISA法測定胃黏膜組織LDH、PKM2活性。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜組織固有腺體結(jié)構(gòu)紊亂，腺體減少，出現(xiàn)萎縮、腸化、假幽門腺化生和（或）異型增生。模型組大鼠胃黏膜組織HIF-1α、STAT3、PKM2 mRNA表達(dá)上調(diào)（P<0.05），STAT3、HIF-1α蛋白表達(dá)增加（P<0.05），LDH、PKM2酶活性增加（P<0.05）。與模型組比較，隔藥餅灸組、隔姜灸組、西藥組固有腺體排列較規(guī)整，固有腺體萎縮、腸上皮化生、異型增生程度減輕;隔藥餅灸和隔姜灸均能下調(diào)大鼠胃黏膜組織中HIF-1α、STAT3 mRNA與蛋白表達(dá)（P<0.05），降低LDH、PKM2酶活性（P<0.05）。結(jié)論：隔物灸中脘、氣海穴可改善CAG大鼠胃竇組織形態(tài)學(xué)病變，修復(fù)胃黏膜損傷。抑制HIF-1α介導(dǎo)的異常糖酵解代謝水平可能是隔物灸法治療CAG的效應(yīng)機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞 艾灸療法;隔藥餅灸;隔姜灸;慢性萎縮性胃炎;缺氧誘導(dǎo)因子-1α;糖酵解

Mechanism of Indirect Moxibustion in Inhibition of Glycolysis in Rats with Chronic Atrophic Gastritis by Regulating HIF-1α Expression

LI Qi1，WU Mengdie1，LIU Shimin2，XIAO Youzhi3，WANG Wenjia1，MA Zhe2，HUANG Yan2，LI Lingjie1，2，LI Jing1，LIU Huirong1，2

（1 Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200437，China; 2 Shanghai Research Institute of Acupuncture and Meridian，Shanghai 200030，China; 3 Shanghai Xinqidian Rehabilitation Hospital，Shanghai 201107，China）

Abstract Objective：To observe the expression changes of HIF-1α and glycolysis enzymes in gastric mucosa of rats with chronic atrophic gastritis （CAG） and explore the mechanism of indirect moxibustion on CAG.Methods：Male Wistar rats were randomly divided into a normal group and an experimental group.The CAG model was induced in the experimental group by administration of MNNG （170 mg/L）.The model rats were then randomly divided into a model group，a herb-partitioned moxibustion （HM） group，a ginger-partitioned moxibustion （GM） group，and a western medicine （WM） group，with six rats in each group.“Zhongwan” （CV 12） and “Qihai” （CV 6） were selected for indirect moxibustion in the HM group and the GM group.The folic acid suspension was administered to the rats in the WM group by gavage.The histopathological changes of gastric antrum were observed by HE staining.The mRNA expression of STAT3，PKM2 and HIF-1α in the gastric mucosa was detected by RT-qPCR，and the protein expression of STAT3 and HIF-1α was detected by immunohistochemistry.The activities of LDH and PKM2 were determined by colorimetry and ELISA.Results：Compared with the normal group，the model group showed the structural disorder of inherent glands，reduced glands，atrophy，intestinal metaplasia，pseudopyloric metaplasia，and/or dysplasia in the gastric mucosa.Furthermore，the mRNA expression of HIF-1α，STAT3，and PKM2 in the gastric mucosa was up-regulated （P<0.05），the protein expression of STAT3 and HIF-1α was elevated （P<0.05），and the enzyme activities of LDH and PKM2 were potentiated in the model group （P<0.05）.Compared with the model group，the HM group，the GM group，and the WM group showed the regular arrangement of inherent glands，and relieved inherent gland atrophy，intestinal metaplasia，and dysplasia.Compared with the model group，the HM group and the GM group displayed down-regulated mRNA and protein expression levels of HIF-1α and STAT3 in the gastric mucosa （P<0.05），and weakened enzyme activities of LDH and PKM2 （P<0.05）.Conclusion：Indirect moxibustion at “Zhongwan” （CV 12） and “Qihai” （CV 6） can improve the histological changes of the gastric antrum and repair gastric mucosa damage in rats with CAG，and the mechanism of indirect moxibustion in the treatment of CAG may be related to the inhibition of abnormal glycolysis mediated by HIF-1α.

Keywords Moxibustion; Herb-partitioned moxibustion; Ginger-partitioned moxibustion; Chronic atrophic gastritis; Hypoxia-inducible factor-1α; Glycolysis

中圖分類號：R245.82文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.03.006

慢性萎縮性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis，CAG）以胃脹滿不適、食欲不振、惡心泛酸、嘔吐、乏力、噯氣等臨床表現(xiàn)為特征，隨病情發(fā)展可影響患者心理健康并導(dǎo)致抑郁和焦慮。胃黏膜病理活檢是CAG的主要診斷方法，鏡下病理改變可見胃黏膜上皮腺體萎縮，固有腺體減少或消失，胃黏膜變薄，或伴腸上皮化生及異型增生等[1]。CAG與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，許多患者的最終結(jié)局即為胃癌，因此世界衛(wèi)生組織專家于1978年將其列為胃癌的癌前疾病[2]。是故早期診斷并盡早地介入治療以阻斷CAG進(jìn)一步惡化發(fā)展，對于預(yù)防胃癌發(fā)生具有重要的臨床價(jià)值。

CAG的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，與炎癥及相關(guān)組織異常代謝關(guān)系密切。炎癥是一種保護(hù)性反應(yīng)，可抵御感染或損傷，修復(fù)機(jī)體組織[3]，但在某些情況下，免疫細(xì)胞無法從炎癥狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榭寡谞顟B(tài)，且炎癥會(huì)隨時(shí)間流逝而持續(xù)存在，并轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝装Y。近年來研究表明，細(xì)胞異常代謝對炎癥促進(jìn)或抑制狀態(tài)的調(diào)控至關(guān)重要，細(xì)胞異常代謝及能量供應(yīng)成為研究難點(diǎn)之一[4]。其中糖酵解代謝異常參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展，無論在正常氧分壓還是缺氧狀態(tài)下，胃癌細(xì)胞均能優(yōu)先進(jìn)行有氧糖酵解方式進(jìn)行糖代謝，這一現(xiàn)象也稱為瓦爾堡效應(yīng)[5]。CAG伴隨的胃黏膜腺體萎縮作為胃癌前病變的起始階段，經(jīng)腸上皮化生和異型增生等持續(xù)進(jìn)展的病理改變，最終形成胃癌。在由CAG向胃癌進(jìn)展的過程中同時(shí)伴隨有糖酵解水平異常變化[6]，在此過程中糖酵解通量的增加需要編碼葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和糖酵解酶的基因的轉(zhuǎn)錄激活，這些相關(guān)酶的基因主要由缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia-inducible Factor-1α，HIF-1α）介導(dǎo)，它是糖酵解上游的關(guān)鍵調(diào)控分子[7]，參與有氧糖酵解中關(guān)鍵酶的調(diào)節(jié)。

目前臨床上主要采用對癥藥物治療CAG等癌前病變，但仍沒有特效的治療方案，整體療效有待提高。艾灸療法歷經(jīng)千年歷史，在治療胃病方面具有獨(dú)特優(yōu)勢，可改善CAG患者臨床癥狀[8-9]，但其潛在作用機(jī)制還有待深入探索。本研究擬從隔藥灸調(diào)控HIF-1α及糖酵解代謝角度探究艾灸治療CAG的作用機(jī)制，為臨床艾灸治療CAG提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 44只6周齡清潔級Wistar大鼠（雄性），體質(zhì)量為（150±30）g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。動(dòng)物合格證編號為2015000538649;許可證號為SCXK（滬）2012-0002。飼養(yǎng)環(huán)境設(shè)置為室溫18～22 ℃，室內(nèi)濕度40%～70%，保持12 h晝夜節(jié)律。實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)制定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用及保護(hù)條例操作，并通過動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號：17743）。

1.1.2 藥物 N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍（N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG）（東京化成工業(yè)株式會(huì)社，日本，批號：TCI-M0527）;葉酸片（常州制藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字H32023302）。

1.1.3 試劑與儀器 多聚甲醛（上海國藥集團(tuán)，批號：80096618）;蘇木精-伊紅染液（南京建成，批號：D006-1-1）;BCA蛋白濃度測定試劑盒（司鼎生物，批號：SD0012）;大鼠乳酸脫氫酶檢測試劑盒、腫瘤型M2-PK（M2-PK）ELISA試劑盒（司鼎生物，批號：SDR0067、SDR0068）;RT reagent Kit（TAKARA，日本，批號：RR047A）;TB Green qPCR試劑盒（TAKARA，日本，批號：RR420A）;Trizol（Invitrogen，美國，批號：15596018）;Anti-STAT3抗體（Abcam，英國，批號：ab76315）;Anti-HIF-1 alpha抗體（Abcam，英國，批號：ab216842）。脫水機(jī)（Leica，德國，型號：ASP200）、包埋機(jī)（Leica，德國，型號：EG1160）、切片機(jī)（Leica，德國，型號：RM2235）、展片機(jī)（Leica，德國，型號：HI1210）;分光光度計(jì)（Thermo公司，美國，型號：NanoDrop 2000）;PCR儀（Applied Biosystems，美國，型號：Veriti 96-Well Thermal Cycler）;qPCR儀（Roche，美國，型號：LightCycler 480Ⅱ）;光學(xué)顯微鏡（Olympus公司，日本，型號：BX53）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 實(shí)驗(yàn)大鼠44只，預(yù)適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為正常組（n=8）和造模組（n=36）。正常組大鼠予以常規(guī)飲食。造模組大鼠采用170 mg/L MNNG結(jié)合夾尾與饑飽失常綜合刺激法制備CAG大鼠模型[10]。每日新鮮配制MNNG溶液自由飲用;飽食2 d，禁食1 d，循環(huán)實(shí)施;使用夾尾鉗夾鼠尾夾緊10 min/次，1次/周，使之保持激怒和互相攻擊的狀態(tài);造模34周后隨機(jī)抓取正常組2只、造模組大鼠4只進(jìn)行模型鑒定，取胃竇組織胃黏膜做HE染色病理觀察。鏡下見胃黏膜出現(xiàn)腺體萎縮、和（或）腸上皮化生、異型增生等病理變化，確定模型制作成功。造模期間造模組大鼠共計(jì)死亡8只，模型鑒定后將24只造模組大鼠按體質(zhì)量分級分為4組：模型組、隔藥餅灸組、隔姜灸組和西藥組，每組6只。

1.2.2 干預(yù)方法 正常組與模型組大鼠不進(jìn)行干預(yù)，只做與3組干預(yù)組相同的抓握和固定操作;隔藥餅灸組、隔姜灸組CAG大鼠干預(yù)均取中脘穴、氣海穴進(jìn)行隔物灸[11]，使用鼠衣及塑料大鼠固定架約束大鼠，將規(guī)格為直徑1 cm、厚度0.5 cm的藥餅（主要成分為制附子、肉桂等，用黃酒調(diào)制而成）或生姜切片置于大鼠的穴區(qū)上，上置艾炷90 mg，每穴灸2壯，1次/d，6次/周，共4周;西藥組按照1 mL/100 g給予葉酸懸濁液灌胃，1次/d，6次/周，共4周。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 大鼠胃竇的組織病理學(xué)觀察 大鼠禁食不禁水24 h后稱重取材：采用2%戊巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉后將大鼠腹部朝上固定，剖開腹腔，快速將全胃取出，于冰上將全胃沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物后切取病變黏膜組織;取1/2胃竇部組織剪碎后存于凍存管內(nèi)，后迅速投入液氮冷凍1 h，及時(shí)轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆?其余胃竇部組織固定于4%多聚甲醛48 h，脫水后石蠟包埋、切片（厚4 μm），進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，于200倍光鏡下觀察拍片。

1.2.3.2 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測胃黏膜HIF-1α、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（Signal Transduction and Activator of Transcription3，STAT3）、丙酮酸激酶M（PKM）的mRNA表達(dá) 取樣各組大鼠胃黏膜組織100 mg進(jìn)行預(yù)處理→加入氯仿→12 000 r/min離心15 min（離心半徑9.5 cm）后取上清液→加入異丙醇混勻后沉淀→離心得到微量白色沉淀→4 ℃環(huán)境下反復(fù)離心→提取總RNA→反轉(zhuǎn)錄→配制反應(yīng)液（冰上）→實(shí)施Real Time檢測→數(shù)據(jù)分析。引物序列見表1。

1.2.3.3 采用免疫組織化學(xué)法檢測STAT3、HIF-1α蛋白在胃黏膜中的定位和表達(dá) 石蠟切片（厚4 μm）→二甲苯脫蠟至水→檸檬酸鹽水抗原修復(fù)→過氧化物酶阻斷→BSA封閉→分別滴加一抗、二抗→PBS洗滌→加入DBS顯色→蘇木精復(fù)染3 min→脫水封片，拍照觀察，統(tǒng)計(jì)每張圖像的積分光密度（IOD）和陽性表達(dá)面積（Area），計(jì)算平均光密度值（AOD）。

1.2.3.4 胃黏膜組織丙酮酸激酶M2（PKM2）和乳酸脫氫酶（LDH）活性測定 采用ELISA法檢測PKM2活性。完成樣本收集與溶液配置后開始檢測：加樣→洗板→加入酶標(biāo)抗體工作液→重復(fù)操作→加入底物工作液→在37 ℃烘箱中反應(yīng)15 min（避光）→加入終止液并充分混勻并測量450 nm吸光度→計(jì)算濃度。LDH活性采用比色法在酶標(biāo)板上反應(yīng)，樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的LDH與底物工作液顯色，測量490 nm處OD值，并通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的LDH濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)的測量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)的數(shù)據(jù)采用M（P25，P75）表示。符合正態(tài)的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析。若方差齊性，則使用最小顯著差異法LSD進(jìn)行兩兩比較;方差不齊性則采用Dunnett′s T3檢驗(yàn)。如果數(shù)據(jù)不符合正態(tài)性則使用秩和檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠胃黏膜組織病理學(xué)觀察

由圖1可見，正常組大鼠胃黏膜固有腺體結(jié)構(gòu)正常、排列規(guī)整，未見腺體萎縮及胃主細(xì)胞、壁細(xì)胞減少，可見少量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞;模型組大鼠固有腺體結(jié)構(gòu)紊亂，腺體減少，成纖維細(xì)胞增殖，可見諸如腺體萎縮、腸上皮化生、假幽門腺化生和（或）異型增生等病理改變。經(jīng)干預(yù)后，隔藥餅灸組、隔姜灸組、西藥組大鼠黏膜層及下層炎癥細(xì)胞相較模型組少，胃黏膜腺體萎縮、腸化生、異型增生等病理變化程度減輕。

2.2 隔物灸對CAG大鼠胃黏膜組織STAT3、HIF-1α、PKM2 mRNA表達(dá)的影響

與正常組比較，模型組CAG大鼠胃黏膜組織中STAT3、HIF-1α、PKM2 mRNA表達(dá)水平上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。與模型組比較，隔藥餅灸組、隔姜灸組、西藥組大鼠胃黏膜組織中STAT3、HIF-1α mRNA表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。與模型組比較，3組干預(yù)組大鼠PKM2 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2～3。

2.3 隔物灸對CAG大鼠胃黏膜組織STAT3、HIF-1α蛋白定位及表達(dá)的影響

正常組大鼠胃黏膜組織STAT3、HIF-1α蛋白有少量表達(dá)，主要表達(dá)在胞漿，著色較淺;模型組胃黏膜組織STAT3、HIF-1α蛋白陽性表達(dá)增多，胃黏膜固有腺體呈大面積胞漿黃染，分布密集，著色較深;與模型組比較，2組隔物灸組及西藥組大鼠胃黏膜組織STAT3、HIF-1α陽性表達(dá)減少，胞漿染色變淺。與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜STAT3、HIF-1α平均光密度顯著升高（均P<0.01）;與模型組比較，2組隔物灸組、西藥組大鼠胃黏膜組織STAT3、HIF-1α平均光密度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。見表4、圖2～3。

2.4 隔物灸對CAG大鼠胃黏膜組織LDH、PKM2濃度的影響

模型組大鼠與正常組大鼠比較，LDH和PKM2濃度顯著升高（均P<0.01）;與模型組比較，兩隔物灸組大鼠胃黏膜中PKM2濃度下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），兩隔物灸組與西藥組大鼠胃黏膜LDH濃度顯著下降（均P<0.01）。見表5、圖4。

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，CAG患病率在不同國家和地區(qū)具有較大差異，主要致病原因與幽門螺桿菌感染、環(huán)境、遺傳、早期診斷等因素有關(guān)。我國屬于CAG高發(fā)地區(qū)，據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)2011年間開展的一項(xiàng)橫斷面調(diào)查結(jié)果顯示[12]，納入的8 892例慢性胃炎患者中有1 573位被診斷為CAG，其中腸上皮化生和異型增生分別占23.6%和7.3%，在慢性胃炎患者病理檢查中較為常見。此外，無論是男性或女性，CAG發(fā)病率及檢出率均隨年齡增長而顯著上升，其患病率與胃癌發(fā)病率正相關(guān)。

CAG主要屬中醫(yī)胃痞、胃脘痛、呃逆等范疇，主證為胃脘部脹滿、痞悶不舒。病因則不外乎飲食不節(jié)、外感六淫、情志不暢、脾胃虛弱等方面。本研究隔物灸所選取中脘、氣海兩穴為臨床胃病治療之要穴。中脘穴別名太倉、胃脘，為胃之募穴，又為腑會(huì)，與胃腑之氣相通;氣海穴為肓之原穴，亦為足三陰交與任脈之交會(huì)穴，主一身上下氣機(jī)。兩穴均屬任脈，臨床主要用于胃痛、腹脹、食不化等癥狀。隔物灸屬傳統(tǒng)灸法間接灸范圍，可根據(jù)所隔介質(zhì)之不同有針對性地加強(qiáng)療效。本研究所選隔藥餅灸與隔姜灸2者在臨床胃病治療中均廣為運(yùn)用，所用藥餅主要成分為附子、肉桂，具有溫陽助火之效，隔姜灸則取生姜辛溫之性，灸之可溫補(bǔ)中土、散寒止嘔。本團(tuán)隊(duì)前期通過臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩方面明確了艾灸對CAG的有效性，可有效緩解CAG患者消化不良等癥狀，促進(jìn)胃黏膜上皮的修復(fù)[13]，逆轉(zhuǎn)腸化，從而預(yù)防癌變的發(fā)生[14]。

CAG發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，糖酵解代謝異常參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展[6]，其在癌前病變中的重要性也逐漸得到重視。Liu等[15]研究證實(shí)，在胃癌前病變中既已存在糖酵解水平的異常。胃黏膜組織的局部缺氧可導(dǎo)致CAG大鼠胃黏膜血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，HIF-1α在缺氧刺激下活性增加，刺激局部微血管新生，并在炎癥反應(yīng)、腫瘤浸潤生長及各種基因的轉(zhuǎn)錄等方面起重要作用[16-17]。同時(shí)，HIF-1α是糖酵解的關(guān)鍵上游調(diào)節(jié)因子，HIF-1α的過表達(dá)可通過上調(diào)糖酵解酶的表達(dá)來促進(jìn)糖酵解活性，改變細(xì)胞糖酵解水平[18-20]。STAT3可調(diào)節(jié)HIF-1α的穩(wěn)定性和活性，激活的STAT3可通過阻斷HIF-1α的降解，加速其從頭合成，從而增加HIF-1α穩(wěn)定性，上調(diào)HIF-1α蛋白水平[21]。PKM2和LDH是糖酵解代謝中的重要調(diào)節(jié)酶。前者是催化磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸的限速酶，為糖酵解途徑的最后環(huán)節(jié)[22]。此外，PKM2可通過磷酸化STAT3來激活HIF-1α的轉(zhuǎn)錄[23]，當(dāng)它易位到細(xì)胞核時(shí)，與HIF-1α發(fā)生相互作用從而調(diào)節(jié)諸多糖酵解酶的表達(dá)。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)PKM2在癌細(xì)胞中伴有著更高的葡萄糖消耗與乳酸水平[24]。LDH則可使丙酮酸生產(chǎn)乳酸，當(dāng)乳酸過度堆積時(shí)使微環(huán)境酸化，有利于腫瘤的發(fā)生發(fā)展[25]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CAG大鼠胃黏膜組織中STAT3、HIF-1α mRNA表達(dá)上調(diào)，STAT3、HIF-1α蛋白表達(dá)顯著升高，提示慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜存在缺氧情況。研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠胃黏膜組織中PKM2 mRNA表達(dá)上調(diào)，PKM2、LDH活性顯著升高，提示CAG大鼠糖酵解水平異常升高。經(jīng)隔物灸干預(yù)后，2組隔物灸組CAG大鼠STAT3、HIF-1α mRNA及蛋白表達(dá)均下調(diào)，糖酵解調(diào)節(jié)酶PKM2、LDH活性下降，而隔物灸對PKM2 mRNA的表達(dá)影響僅有下調(diào)趨勢。以上結(jié)果提示，隔物灸可通過下調(diào)糖酵解上游調(diào)節(jié)因子HIF-1α及其調(diào)控因子STAT3的表達(dá)，降低糖酵解調(diào)節(jié)酶PKM2、LDH活性，抑制CAG大鼠胃黏膜組織的有氧糖酵解，起到改善胃黏膜組織異常糖代謝的作用，以阻斷萎縮性胃炎惡化，進(jìn)一步趨向癌癥的發(fā)展。

本研究從隔物灸對CAG大鼠HIF-1α表達(dá)及相關(guān)糖酵解調(diào)節(jié)酶的影響進(jìn)行闡述和分析，從新的角度闡釋艾灸對CAG的效應(yīng)機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)抑制HIF-1α介導(dǎo)的異常糖酵解代謝水平可能是隔物灸法治療CAG的效應(yīng)機(jī)制之一。然而本實(shí)驗(yàn)僅檢測了2個(gè)糖酵解調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶，且2種隔物灸灸法之間的差異未進(jìn)行深入挖掘，后續(xù)研究中將進(jìn)一步開展相關(guān)檢測，擬更全面闡述艾灸對糖酵解代謝的影響。其次，關(guān)于CAG大鼠胃黏膜組織有氧糖酵解的啟動(dòng)機(jī)制仍不明確，對艾灸調(diào)控HIF-1α的機(jī)制與相關(guān)通路并未做深入探索，未來將結(jié)合基因敲除動(dòng)物進(jìn)行深入的研究。

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（2022-01-06收稿 本文編輯：吳珊）