基于天樞與上巨虛穴經(jīng)皮神經(jīng)電刺激觀察對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸組織TLR9/MyD88/NF-κB蛋白表達(dá)的影響

張冠林 向晶 焦子遠(yuǎn) 卓越 易細(xì)芹 張泓

〔摘要〕 目的 基于“合募配穴”原則觀察經(jīng)皮神經(jīng)電刺激（transcutaneous electrical nerve stimulation， TENS）對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis， UC）模型大鼠結(jié)腸組織Toll樣受體9（toll-like receptor 9， TLR9）/髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88， MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB， NF-κB）信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討TENS治療UC的相關(guān)機(jī)制。方法 從48只SPF級(jí)成年SD大鼠中隨機(jī)抽取12只作為空白組。其余36只通過2-4-6三硝基苯磺酸（2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）/乙醇法制備UC大鼠模型，成模后再次隨機(jī)分為模型組、TENS組、陽性藥物組，每組12 只。成模后第1 天開始干預(yù)：模型組僅行捆綁固定；TENS組捆綁固定后刺激天樞、上巨虛兩穴；陽性藥物組用225 mg/kg劑量的柳氮磺胺吡啶混懸液灌胃。以上各組干預(yù)均每天1 次，共10次。觀察記錄各組大鼠每天食量和體質(zhì)量。干預(yù)結(jié)束后，HE染色觀察各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化；ELISA法檢測(cè)結(jié)腸組織白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）炎性因子的含量；Western blot法檢測(cè)結(jié)腸組織TLR9、MyD88、NF-κB蛋白的表達(dá)量變化。結(jié)果 （1）與空白組相比：模型組大鼠結(jié)腸組織出現(xiàn)明顯潰瘍面，上皮細(xì)胞大面積萎縮，炎性因子大量浸潤(rùn)，IL-6、TNF-α炎性因子含量升高（P<0.05）；TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)量上調(diào)（P<0.05）。（2）與模型組相比：TENS組和陽性藥物組結(jié)腸組織損壞情況較輕，上皮細(xì)胞黏液較充分，腺體分支較少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)面積小；IL-6、TNF-α含量減少（P<0.05）；TLR9、NF-κB蛋白表達(dá)量降低（P<0.05）。（3）與陽性藥物組相比：TENS組TNF-α、IL-1β的含量及TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)量相對(duì)較高（P<0.05）。結(jié)論 TENS能夠保護(hù)腸道上皮細(xì)胞，減輕腸道炎癥，其機(jī)制可能與降低結(jié)腸細(xì)胞促炎因子水平，抑制TLR9/MyD88/NF-κB信號(hào)通路蛋白的過表達(dá)有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 潰瘍性結(jié)腸炎；經(jīng)皮神經(jīng)電刺激；Toll樣受體9；髓樣分化因子88；核因子-κB；炎性因子

〔中圖分類號(hào)〕R245.9? ? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.01.019

Effects of transcutaneous electrical nerve stimulation at "Tianshu"

（ST25） and "Shangjuxu" （ST37） acupoints on the protein

expressions of TLR9/MyD88/NF-κB signaling pathway in

colonic tissue of model rats with ulcerative colitis

ZHANG Guanlin， XIANG Jing， JIAO Ziyuan， ZHUO Yue， YI Xiqin， ZHANG Hong*

School of Acupuncture-moxibustion， Tuina and Rehabilitation， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of transcutaneous electrical nerve stimulation （TENS） on toll-like receptor 9 （TLR9）/myeloid differentiation factor 88 （MyD88）/nuclear factor-κB （NF-κB） signaling pathway-related protein expressions in colonic tissue of ulcerative colitis （UC） model rats based on the principle of "He-sea and front-Mu point combination"， and to explore the related mechanisms of TENS in treating UC. Methods Twelve of 48 SPF adult SD rats were randomly selected as blank group. The remaining 36 UC rat models were prepared by 2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid （TNBS）/ethanol method， and then randomly divided into model， TENS， and positive drug groups after modeling， with 12 rats in each group. Intervention began on the first day after modeling. Model group was only bound and fixed; TENS group was stimulated at "Tianshu" （ST25） and "Shangjuxu" （ST37） acupoints after being bound and fixed; positive drug group was intragastrically administered with 225 mg/kg of sulfasalazine suspension. All groups were intervened once a day for a total of 10 times. The daily food intake and body weight of rats in each group were observed and recorded. After the intervention， HE staining was used to observe the pathological changes of colonic tissue in each group， ELISA to check the content of inflammatory factors of interleukin-6 （IL-6）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， and interleukin-1β （IL-1β）， and Western blot to examine the changes in the expression levels of TLR9， MyD88， and NF-κB proteins. Results （1） Compared with blank group， the colonic tissue of rats in model group showed obvious ulceration， large-area atrophy of epithelial cells， extensive infiltration of inflammatory factors， and increased content of IL-6 and TNF-α （P<0.05）; the expression levels of TLR9， MyD88， and NF-κB proteins were up-regulated （P<0.05）. （2） Compared with model group， TENS and positive drug groups showed milder colonic tissue damage， more sufficient epithelial cell mucus， fewer glandular branches， and smaller area of inflammatory cell infiltration; the content of IL-6 and TNF-α decreased （P<0.05）; the expression levels of TLR9 and NF-κB proteins were reduced （P<0.05）. （3） Compared with positive drug group， the content of TNF-α and IL-1β and the expression levels of TLR9， MyD88， and NF-κB proteins in TENS group were relatively higher （P<0.05）. Conclusion TENS can protect intestinal epithelial cells and alleviate intestinal inflammation， and its mechanism may be related to reducing the level of pro-inflammatory factors in colonic cells and inhibiting the overexpression of TLR9/MyD88/NF-κB signaling pathway proteins.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 ulcerative colitis; transcutaneous electrical nerve stimulation; toll-like receptor 9; myeloid differentiation factor 88; nuclear factor-κB; inflammatory factors

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis， UC）是臨床上常見的一種慢性炎癥性腸病，其臨床癥狀主要包括腹痛、腹瀉、便血等，同時(shí)出現(xiàn)腸道黏膜不同程度的潰瘍和破損[1-2]。近年來，UC發(fā)病率逐年上升，已然成為一種全球性疾病，且患病人群逐漸年輕化[3]。目前，臨床針對(duì)于UC的治療手段主要有5-氨基水楊酸鹽、皮質(zhì)類固醇、口服抗生素以及各類中藥等[4-5]，但此類治療在具有一定療效的同時(shí)也存在著較明顯的藥物毒副作用和因治療周期長(zhǎng)而產(chǎn)生的機(jī)體耐藥性等問題。隨著我國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，經(jīng)皮神經(jīng)電刺激（transcutaneous electrical nerve stimulation， TENS）已被廣泛應(yīng)用于臨床治療各種疾病，其具有無痛、無創(chuàng)、方便實(shí)用的特點(diǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)患者進(jìn)行自我居家治療，極大地節(jié)省患者的時(shí)間和精力。研究顯示，TENS能夠通過提升迷走神經(jīng)的活性，有效降低炎癥因子的釋放，從而對(duì)炎癥性腸病起到一定的治療作用[6-7]，但對(duì)本病療效尚不清楚。目前有研究表明，合募配穴原則是臨床針灸治療大腸腑病的重要配穴方法，以電針、溫針灸等方式刺激天樞、上巨虛等穴位能夠有效改善UC癥狀，延緩UC的進(jìn)程[8-9]。但存在部分患者因暈針、畏針或治療周期長(zhǎng)而無法堅(jiān)持等因素導(dǎo)致臨床針灸難以大范圍應(yīng)用的問題。故本實(shí)驗(yàn)利用TENS于UC模型大鼠之天樞、上巨虛二穴處進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)UC大鼠Toll樣受體9（toll-like receptor 9，TLR9）/髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路相關(guān)蛋白以及部分炎性因子表達(dá)的影響，并對(duì)其治療效果進(jìn)行分析，以期將TENS方便快捷、安全性高的優(yōu)勢(shì)與UC遷延難愈、治療周期長(zhǎng)的疾病特點(diǎn)相結(jié)合，為臨床治療UC提供一種新的治療思路與方法。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為健康成年SD大鼠（SPF級(jí)），共48只，雌雄各半，體質(zhì)量（180±10） g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理編號(hào)：LL2022022305，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004。大鼠適應(yīng)性分籠飼養(yǎng)于恒溫24～26 ℃、相對(duì)濕度50%～70%、24 h明暗交替的環(huán)境中7 d。7 d后隨機(jī)抽取12只大鼠作為空白組，其余36只大鼠作為造模組。造模結(jié)束后，將36只大鼠再次隨機(jī)分為模型組、TENS組、陽性藥物組，每組12 只。

1.2? 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

2-4-6三硝基苯磺酸（2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：2297）；柳氮磺胺吡啶片（上海信誼天平藥業(yè)有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H31020840）；大鼠Anti-TLR9兔源多克隆抗體（南京川博生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：53889-1）；MyD88鼠源單克隆抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：67969-1-Ig）；NF-κB p65兔源單克隆抗體（武漢愛博泰克生物科技有限公司，批號(hào)：A19653）；羊抗鼠二抗（伊萊瑞特生物科技有限公司，批號(hào)：E-AB-1001）；大鼠白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）試劑盒（廈門侖昌碩生物科技有限公司，批號(hào)：YD-30219、YD-31063、YD-30206）。

華佗牌經(jīng)皮電刺激治療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，型號(hào)：SDZ-V）；脫毛膏（法國(guó)Veet公司，規(guī)格：100 mL）；NC膜（美國(guó)Millipoer公司，型號(hào)：ISEQ00010）；電泳儀（北京百晶生物技術(shù)有限公司，型號(hào)：BG-subMIDI）；脫色搖床（海門其林貝爾儀器制造公司，型號(hào)：TS-100）；顯影儀（美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)：170-8280）；低溫冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司，型號(hào)：3-30K）；酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)：RT-6100）。

1.3? 造模方法

本實(shí)驗(yàn)采用TNBS/乙醇法建立UC大鼠模型[10-13]。大鼠常規(guī)飼養(yǎng)7 d后，禁食不禁水24 h，稱重，以異氟烷吸入的方式麻醉大鼠，麻醉后固定倒懸位，取10 cm長(zhǎng)聚丙烯管（直徑2 mm），剪側(cè)孔數(shù)處，并由肛門插入8 cm到達(dá)結(jié)腸部位，快速注入藥液（100 mg TNBS/kg+50%乙醇0.25 mL）后，再注入約0.4 mL的空氣，以使聚丙烯管中的藥液全部注入腸腔，繼續(xù)使大鼠保持1 min倒懸位，以防注入液倒流，并使藥液與結(jié)腸充分接觸，待麻醉清醒后正常喂養(yǎng)。造模后第1天，若模型大鼠出現(xiàn)腹瀉、血便、活動(dòng)減少等典型癥狀且糞便隱血試驗(yàn)陽性說明造模成功[14]?？瞻捉M給予等量生理鹽水灌腸。

1.4? 干預(yù)方法

TENS組參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜[15]、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠》定位[16]。上巨虛：雙側(cè)后肢上后三里穴下約5 mm處。天樞：臍中旁開5 mm。將大鼠仰臥位固定于特制鼠板上，皮膚取穴點(diǎn)進(jìn)行脫毛處理后，將自制直徑為5 mm的硅膠電極貼片分別貼敷于UC大鼠上巨虛、天樞兩穴的位置，調(diào)節(jié)電刺激治療儀頻率為100 Hz[17]，強(qiáng)度定于該治療儀“6”檔，以觸及大鼠肌肉輕微抖動(dòng)為宜，每次20 min，模型組僅行固定處理。于成模后第1天開始刺激，每天1次，共10 次。陽性藥物組根據(jù)成人藥物劑量公式等比換算得出大鼠灌胃等效劑量為225 mg/kg，將柳氮磺胺吡啶片利用研缽研磨成粉末狀，加入生理鹽水（10 mL/kg）中充分混合制成灌胃藥液，每天灌胃1次，共10次。

1.5? 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

每天記錄大鼠食量和體質(zhì)量，觀察大鼠精神狀況、毛發(fā)光澤、二便性狀、活動(dòng)情況。治療10 d后進(jìn)行取材，以異氟烷吸入的方式麻醉大鼠，將麻醉后的大鼠固定于鼠板上，沿腹正中線切開皮膚暴露腹腔，于乙狀結(jié)腸部分取3份長(zhǎng)度為1 cm的結(jié)腸組織，沿腸壁縱向剖開，用生理鹽水將腸道內(nèi)容物沖洗干凈以備后續(xù)檢測(cè)。其中1 份多聚甲醛固定保存用于HE染色；其余2 份暫放入凍存管并置于液氮中，待取材結(jié)束后存儲(chǔ)于-80 ℃冰箱用于ELISA檢測(cè)和Western blot檢測(cè)。

1.5.1? HE染色? 將多聚甲醛固定的組織進(jìn)行石蠟包埋、切片，依次進(jìn)行二甲苯脫蠟、無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、蒸餾水處理后進(jìn)行蘇木素染色，染色后用自來水沖洗，最后進(jìn)行脫水、透明、中性樹膠封片觀察。

1.5.2? ELISA檢測(cè)? 將各組大鼠取材得到的結(jié)腸組織在適量生理鹽水中充分研磨，放入離心機(jī)以3 000 r/min半徑8 cm離心10 min后取上清液。按照檢測(cè)試劑盒說明書要求進(jìn)行打板、孵育，放入酶標(biāo)儀中檢測(cè)樣本OD值，最終計(jì)算出各樣本中IL-6、TNF-α、IL-1β的濃度。

1.5.3? Western blot檢測(cè)? 首先提取結(jié)腸組織蛋白，將組織放入裂解液中并加入鋼珠，充分研磨后放入組織破碎儀（8 r，15 min）破碎2～3 次，冰上裂解15 min，取出鋼珠4 ℃、12 000 r半徑8 cm離心20 min，離心后取上清打板測(cè)定蛋白濃度（BCA法），最后計(jì)算蛋白濃度，配上樣液煮沸（100 ℃，20 min），保存于-20 ℃冰箱。制膠結(jié)束后將膠板放入電泳盒，倒入電泳液。在膠板孔道中上樣（5 ？滋L Marker，10 ？滋L上樣液）后進(jìn)行80 V電泳，待蛋白條帶跑至膠板底部結(jié)束電泳進(jìn)行轉(zhuǎn)膜（200 V，90 min），轉(zhuǎn)模結(jié)束將PVDF膜放入5%脫脂奶粉中搖床封閉90 min，孵育一抗過夜。次日回收一抗后用TBST于搖床上洗膜3 次，每次6 min。搖床孵育二抗90 min，結(jié)束后回收二抗加入TBST洗膜3 次，每次6 min，顯影觀察蛋白條帶。

1.6? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料采用“ｘ±s”表示，若符合正態(tài)性和方差齊性，采用單因素方差分析；不符合正態(tài)性或方差齊性采用秩和檢驗(yàn)。設(shè)定檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，P＜0.05認(rèn)為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 造模后大鼠一般情況

空白組大鼠情況穩(wěn)定，無不良事件發(fā)生，12例均完成周期觀察。模型組造模后第1天出現(xiàn)2例死亡，解剖觀察發(fā)現(xiàn)結(jié)腸出現(xiàn)明顯潰瘍面；在干預(yù)第5 天出現(xiàn)2例死亡，觀察發(fā)現(xiàn)均嚴(yán)重腹脹，解剖發(fā)現(xiàn)大鼠腸道出現(xiàn)大面積壞死，糞便堆積在腸道無法排出；其余大鼠均成模且存活，最終8例完成周期觀察。TENS組造模后第1天出現(xiàn)1例死亡，解剖觀察發(fā)現(xiàn)腸道出現(xiàn)穿孔；在干預(yù)第7、9天分別出現(xiàn)1例死亡，均為結(jié)腸壞死大便難以排出所致；其余大鼠均成模且存活，最終9例完成周期觀察。陽性藥物組造模后第2天出現(xiàn)2只未成模大鼠；在干預(yù)第3天出現(xiàn)1例死亡，觀察發(fā)現(xiàn)體質(zhì)量過輕，體溫低；在干預(yù)第9天因灌胃操作不當(dāng)致氣管破裂出現(xiàn)1例意外死亡；其余大鼠均存活，最終8例完成周期觀察。

2.2? 大鼠日常情況變化

空白組大鼠日常精神狀況良好，二便正常，飲食量尚可。模型組大鼠出現(xiàn)不同程度血便，體質(zhì)量降低，飲食量下降，毛發(fā)暗淡粗糙，性情暴躁；TENS組和陽性藥物組均存在上述模型組的情況，但相較有所改善。

2.3? 大鼠體質(zhì)量及食量變化

空白組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)平穩(wěn)上升的趨勢(shì)，其余各組大鼠于造模后第1天體質(zhì)量明顯降低，持續(xù)降低至第4天開始逐漸增高，于第9—10天體質(zhì)量趨于穩(wěn)定。與空白組比較，模型組大鼠體質(zhì)量在成模后第1天起出現(xiàn)不同程度的降低（P<0.05）；與模型組比較，TENS組大鼠體質(zhì)量降低幅度較小，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與陽性藥物組比較，TENS組大鼠體質(zhì)量降低幅度較小，但在第9—10天體質(zhì)量偏低（P<0.05）。詳見圖1。

造模成功后各組大鼠均以大鼠普通飼料重量（g）為單位記錄每日食量，觀察發(fā)現(xiàn)空白組大鼠食量無明顯變化，其余各組大鼠于造模后第1—2天食量明顯減少，至第3 天食量開始逐漸增加。與空白組比較，模型組大鼠食量較?。≒<0.05）；與模型組相比，TENS組大鼠食量較小，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與陽性藥物組相比，TENS組大鼠食量較大，第1天和第3—5天的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。詳見圖2。

2.4? 大鼠結(jié)腸組織變化

空白組結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)規(guī)則且完整，杯狀細(xì)胞形態(tài)正常，無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與空白組比較，模型組杯狀細(xì)胞明顯萎縮，細(xì)胞內(nèi)黏液減少，淋巴細(xì)胞增多，基底部漿細(xì)胞大量浸潤(rùn)；與模型組比較，TENS組上皮細(xì)胞形態(tài)較完整，炎性浸潤(rùn)程度較輕，出現(xiàn)部分杯狀細(xì)胞膿腫，腺體分支情況較輕；與陽性藥物組比較，TENS組杯狀細(xì)胞萎縮明顯，炎性浸潤(rùn)程度更高。詳見圖3。

2.5? 各組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、TNF-α、IL-1β含量比較

在控制標(biāo)準(zhǔn)品回歸曲線R2值不小于0.990 0的基礎(chǔ)上計(jì)算各樣品炎性因子濃度。與空白組相比，模型組結(jié)腸組織中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量更高（P<0.05）；與模型組相比，TENS組IL-6、TNF-α的含量更低（P<0.05），IL-1β的含量較低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與陽性藥物組相比，TENS組結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β的含量更高（P<0.05），IL-6的含量較高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見圖4。

2.6? 各組大鼠結(jié)腸組織中TLR9、MyD88、NF-κB表達(dá)量比較

與空白組比較，模型組TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)量更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，TENS組TLR9、NF-κB p65蛋白表達(dá)量更低（P<0.05），MyD88蛋白表達(dá)量較低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與陽性藥物組比較，TENS組TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)量更高（P<0.05）。詳見圖5。

3 討論

UC是一種病因復(fù)雜的慢性炎癥性腸病，多是由于長(zhǎng)期飲食不規(guī)律、吸煙、遺傳等多種因素導(dǎo)致腸道內(nèi)微生態(tài)發(fā)生變化，從而引發(fā)的一系列炎癥[18-20]。目前，5-氨基水楊酸鹽類藥物的應(yīng)用是臨床上治療UC最常用的方法[21-22]。但其擁有較好藥效的同時(shí)也具有一定的毒副作用，例如惡心嘔吐、大便干結(jié)、腸道菌群失調(diào)和耐藥性出現(xiàn)等，且藥物對(duì)患者的肝腎功能也會(huì)造成一定的負(fù)擔(dān)，以上情況均會(huì)影響UC的長(zhǎng)期治療效果[23-26]。而針對(duì)UC病程長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作的疾病特點(diǎn)，針灸、理療等補(bǔ)充治療手段療效穩(wěn)定、風(fēng)險(xiǎn)性低的特征使其成為臨床愈加常見的輔助治療方式[27]。TENS是近年逐漸興起的一種康復(fù)理療方式，在臨床上廣泛用于減輕各類炎癥。研究證明，TENS可以顯著降低大鼠體內(nèi)促炎因子的水平，其中TENS頻率為100 Hz時(shí)療效更加明顯[28]。高曉林等[29]研究發(fā)現(xiàn)，TENS能夠促進(jìn)大鼠免疫功能的恢復(fù)，顯著降低患者術(shù)后炎性因子的水平；王藝霏等[30]研究發(fā)現(xiàn)，通過經(jīng)皮耳穴-迷走神經(jīng)刺激能夠有效抑制小鼠神經(jīng)炎性反應(yīng)，下調(diào)MyD88蛋白的表達(dá)；金海峰等[31]研究發(fā)現(xiàn)，骶神經(jīng)電刺激能夠有效改善UC大鼠的每天進(jìn)食量和體質(zhì)量，降低UC大鼠腸道炎性因子的水平，發(fā)揮抑制腸道炎癥的作用。雖然目前關(guān)于TENS治療UC的報(bào)道尚少，但TENS同樣是通過作用于迷走神經(jīng)，下調(diào)大鼠體內(nèi)相關(guān)蛋白表達(dá)和炎癥因子水平，減輕炎癥。同時(shí)其具有安全性高、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，能夠達(dá)到患者自主治療的目標(biāo)，因此，TENS相較于其他電刺激手段具備更加優(yōu)良的治療優(yōu)勢(shì)，容易被更多患者所接受。故探討TENS對(duì)于UC的治療效果具有一定的臨床意義。

TLR9作為細(xì)胞內(nèi)天然的識(shí)別受體，能夠精確地識(shí)別細(xì)菌和病毒的CpG DNA[32]。MyD88是TLR9的下游接頭蛋白，能夠接受上游信號(hào)并激活下游NF-κB分泌大量炎性因子，從而引起炎癥的發(fā)生[33-34]。IL-6、TNF-α和IL-1β是由體內(nèi)巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞所分泌的炎性因子，其主要功能是參與免疫的激活和介導(dǎo)過程，促進(jìn)炎癥的發(fā)生[35-36]。TLR9/MyD88/NF-κB信號(hào)通路是存在于腸道上皮細(xì)胞中的經(jīng)典通路，此通路表達(dá)上調(diào)后調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎因子的含量顯著升高，在UC的致病過程中發(fā)揮了重要作用[37]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為UC屬于“泄瀉”“腸澼”等范疇，該疾病發(fā)病于脾，遷延難愈，反復(fù)發(fā)作[38]。天樞與上巨虛兩穴均屬足陽明胃經(jīng)，其中天樞屬于大腸募穴，上巨虛屬于大腸下合穴，此兩穴均有疏經(jīng)活絡(luò)、通腑理腸的功效，故選取此穴組治療UC能夠取得良好的效果。其次，針對(duì)治療UC選用此穴組屬于合募配穴的配伍方式。本課題組前期研究證明，電針合募配穴對(duì)于治療UC改善腸道炎癥具有明顯的效果，并且廣泛應(yīng)用于臨床[39-40]。相較于電針，TENS在操作上更加簡(jiǎn)便、更加安全，所以探討TENS通過刺激天樞、上巨虛對(duì)于UC的治療效果，具有一定的臨床意義。最終通過本實(shí)驗(yàn)證明，TENS組大鼠的結(jié)腸組織形態(tài)變化明顯優(yōu)于模型組，且TLR9、NF-κB、MyD88的蛋白表達(dá)量及IL-6、TNF-α、IL-1β的含量均低于模型組。由此說明，TENS可能是通過抑制TLR9/MyD88/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，下調(diào)了IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎因子的含量，減輕了腸道炎癥；但與陽性藥物組相比，TENS組蛋白表達(dá)量及炎性因子的含量更高?？傊?，于天樞、上巨虛二穴施加TENS對(duì)于UC具有一定的治療作用，其作用機(jī)制可能是抑制了TLR9/MyD88/NF-κB信號(hào)通路上相關(guān)蛋白的表達(dá)，降低了體內(nèi)IL-6、TNF-α、IL-1β炎性因子的含量，從而達(dá)到減輕腸道炎癥的效果。本實(shí)驗(yàn)先嘗試證明TENS治療本病的有效性，在此基礎(chǔ)上將有必要再進(jìn)一步探討TENS作為一種輔助治療方法治療UC是否有望達(dá)到降低西藥使用劑量、縮短治療時(shí)間、增加臨床療效等目標(biāo)等。

參考文獻(xiàn)

[1] PORTER R J， KALLA R， HO G T. Ulcerative colitis： Recent advances in the understanding of disease pathogenesis[J]. F1000Research， 2020， 9： F1000FacultyRev-F1000Faculty294.

[2] FEUERSTEIN J D， MOSS A C， FARRAYE F A. Ulcerative colitis[J]. Mayo Clinic Proceedings， 2019， 94（7）： 1357-1373.

[3] DU L， HA C. Epidemiology and pathogenesis of ulcerative colitis[J]. Gastroenterology Clinics of North America， 2020， 49（4）： 643-654.

[4] BURRI E， MAILLARD M H， SCHOEPFER A M， et al. Treatment algorithm for mild and moderate-to-severe ulcerative colitis： An update[J]. Digestion， 2020， 101（Suppl 1）： 2-15.

[5] 徐靜雯， 奚? 燕. 中醫(yī)辯（辨）證治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效觀察[J]. 中國(guó)全科醫(yī)學(xué)， 2023， 26（S1）： 41-43.

[6] 馬晶晶. 迷走神經(jīng)功能異常在炎癥性腸病發(fā)病中的作用研究[D]. 南京： 南京醫(yī)科大學(xué)， 2018.

[7] 郭志遠(yuǎn). 經(jīng)皮穴位電刺激對(duì)膿毒癥患者腸屏障的影響[D]. 蕪湖：皖南醫(yī)學(xué)院， 2021.

[8] 劉? 朝， 楊金生， 吳? 遠(yuǎn)， 等. 基于數(shù)據(jù)挖掘的針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的診療現(xiàn)狀與特點(diǎn)[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2015， 30（11）： 3893-3897.

[9] CAO Q R， LING C， LIU M J， et al. Electroacupuncture of “Shangjuxu” （ST37） and “Tianshu” （ST25） reduces colonic injury by suppressing NF-κB/NLRP3 signaling in rats with ulcerative colitis[J]. Acupuncture Research， 2022， 47（4）： 314-320.

[10] 馬秀蘭， 王秀萍， 王佳林， 等. 大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立[J]. 中醫(yī)藥臨床雜志， 2021， 33（9）： 1754-1759.

[11] 王文豪， 張? 欣， 孫振民， 等. 潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型不同建立方式比較[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志， 2023， 43（16）： 4008-4011.

[12] 張冰冰， 齊? 越， 賈? 冬， 等. 2，4，6-三硝基苯磺酸誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的建立及評(píng)價(jià)[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2015， 33（8）： 1834-1836， 2050.

[13] 賀海輝， 沈? 洪， 朱宣宣， 等. 2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇法誘導(dǎo)建立潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志， 2015， 35（15）： 4138-4140.

[14] SILVA I， PINTO R， MATEUS V. Preclinical study in vivo for new pharmacological approaches in inflammatory bowel disease： A systematic review of chronic model of TNBS-induced colitis[J]. Journal of Clinical Medicine， 2019， 8（10）： 1574.

[15] 唐? 勇. 實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M]. 3版. 上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2021： 146.

[16] 中國(guó)針灸學(xué)會(huì). 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠[J]. 針刺研究， 2021， 46（4）： 351-352.

[17] 蔣袁絮， 王? 韻， 劉紅香， 等. 2 Hz和100 Hz經(jīng)皮神經(jīng)電刺激對(duì)大鼠慢性炎癥痛治療作用的比較[J]. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2001， 21（12）： 923-925.

[18] 王銘慧， 李玉華， 曹曉煥， 等. 潰瘍性結(jié)腸炎的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育， 2011， 9（24）： 170-175.

[19] KOBAYASHI T， SIEGMUND B， LE BERRE C， et al. Ulcerative colitis[J]. Nature Reviews Disease Primers， 2020， 6（1）： 74.

[20] KESHTELI A H， MADSEN K L， DIELEMAN L A. Diet in the pathogenesis and management of ulcerative colitis： A review of randomized controlled dietary interventions[J]. Nutrients， 2019， 11（7）： 1498.

[21] MURRAY A， NGUYEN T M， PARKER C E， et al. Oral 5-aminosalicylic acid for maintenance of remission in ulcerative colitis[J]. The Cochrane Database of Systematic Reviews， 2020， 8（8）： CD000544.

[22] SEGAL J P， LEBLANC J F， HART A L. Ulcerative colitis： An update[J]. Clinical Medicine， 2021， 21（2）： 135-139.

[23] GUILLO L， D'AMICO F， ACHIT H， et al. Kidney function monitoring to prevent 5-aminosalicylic acid nephrotoxicity： What the gastroenterologist should know[J]. Digestive and Liver Disease， 2021， 53（6）： 691-696.

[24] V？魱LCHEZ A， ORTS J A， FRéDéRIQUE SCHEIRS S， et al. Mesalazine renal lithiasis[J]. Archivos Espanoles De Urologia， 2020， 73（6）： 561-564.

[25] SEHGAL P， COLOMBEL J F， ABOUBAKR A， et al. Systematic review： Safety of mesalazine in ulcerative colitis[J]. Alimentary Pharmacology & Therapeutics， 2018， 47（12）： 1597-1609.

[26] 宋先梅. 美沙拉嗪聯(lián)合雙歧三聯(lián)活菌治療重度潰瘍性結(jié)腸炎藥物副作用分析[J]. 中國(guó)冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志， 2018， 35（1）： 62-63.

[27] 沈翠翠. 近5年針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的研究進(jìn)展[J]. 江西中醫(yī)藥， 2022， 53（9）： 74-77， 80.

[28] DO CARMO ALMEIDA T C， DOS SANTOS FIGUEIREDO F W， BARBOSA FILHO V C， et al. Effects of transcutaneous electrical nerve stimulation on proinflammatory cytokines： Systematic review and meta-analysis[J]. Mediators of Inflammation， 2018， 2018： 1094352.

[29] 高曉林， 謝? 晨， 楊文佳， 等. 經(jīng)皮穴位電刺激對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)因子的影響[J]. 上海針灸雜志， 2018， 37（9）： 1088-1095.

[30] 王藝霏， 王? 瑜， 張? 悅， 等. 經(jīng)皮耳穴-迷走神經(jīng)刺激對(duì)抑郁癥模型大鼠前額葉皮質(zhì)Toll樣受體4/髓樣分化因子88信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 針刺研究， 2021， 46（7）： 580-585.

[31] 金海峰， 葉? 挺， 劉杰民， 等. 骶神經(jīng)電刺激對(duì)大鼠腸道炎癥的抑制作用及機(jī)制[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2019， 34（8）： 3705-3710.

[32] 譚? 琰， 鄒開芳， 錢? 偉， 等. 潰瘍性結(jié)腸炎患者TLR9表達(dá)變化的研究[J]. 華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2014， 43（5）： 520-527.

[33] BAYER A L， ALCAIDE P. MyD88： At the heart of inflammatory signaling and cardiovascular disease[J]. Journal of Molecular and Cellular Cardiology， 2021， 161： 75-85.

[34] WU J， NIU J K， LI M J， et al. Keratin 1 maintains the intestinal barrier in ulcerative colitis[J]. Genes & Genomics， 2021， 43（12）： 1389-1402.

[35] TATIYA-APHIRADEE N， CHATUPHONPRASERT W，? JARUKA？鄄MJORN K. Immune response and inflammatory pathway of ulcerative colitis[J]. Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology， 2018， 30（1）： 1-10.

[36] KAMINSKY L W， AL-SADI R， MA T Y. IL-1β and the intestinal epithelial tight junction barrier[J]. Frontiers in Immunology， 2021， 12： 767456.

[37] 劉夢(mèng)瑩， 王啟之. TLR9/NF-κBp65信號(hào)通路與潰瘍性結(jié)腸炎[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志， 2015， 24（9）： 1149-1151.

[38] 劉俊紅， 楊會(huì)舉， 雷麗亞. 槐榆炭方保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎臨床觀察[J]. 河南中醫(yī)， 2020， 40（3）： 427-430.

[39] 曹倩茹， 凌? 晨， 劉夢(mèng)君， 等. 電針“上巨虛”和“天樞”對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠核轉(zhuǎn)錄因子-κB/NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 針刺研究， 2022， 47（4）： 314-320.

[40] 易細(xì)芹， 張? 泓， 凌? 希， 等. 電針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸IL-1β及nAchRα7mRNA的影響[J]. 上海針灸雜志， 2016， 35（10）： 1251-1255.