不同季節(jié)長毛兔部分血清生化指標變化分析

丁海生，王源朗，程廣龍，趙輝玲，黃冬維

（安徽省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點實驗室，合肥 230031）

長毛兔是以產(chǎn)毛為主要用途的家兔，其被毛長厚、體表汗腺少，容易受到季節(jié)變化，特別是夏季高溫高濕的影響而產(chǎn)生應激，輕則采食量下降、生產(chǎn)性能降低，重則健康受損，甚至死亡［1-2］?，F(xiàn)有的研究表明，長毛兔夏季的產(chǎn)毛量均大幅低于非熱應激時的產(chǎn)毛量［3-5］，且死亡率增高，皮膚毛囊萎縮嚴重，毛囊細胞凋亡明顯［6］。通過氣候室模擬季節(jié)氣候變化，發(fā)現(xiàn)不同溫度條件顯著影響德系長毛兔兔毛及其髓腔的直徑，溫度越高，直徑越?。?］。而長毛兔繁殖性能也容易受到季節(jié)性變化的影響，公兔甚至出現(xiàn)“夏季不育”［8-9］。研究表明，長毛兔公兔在夏季高溫條件下精子活力下降、密度降低、有效精子數(shù)減少，畸形率升高，持續(xù)高溫則出現(xiàn)無精期［8］；德系長毛兔公兔無論在自然熱應激還是人工熱應激環(huán)境，其精液量和品質(zhì)均會嚴重下降［10］。長毛兔母兔在高溫季節(jié)采食量會下降，容易造成營養(yǎng)不足。由于毛長散熱困難，25℃以上掉膘消瘦到一定程度就容易發(fā)生流產(chǎn)［11］。

長毛兔的生產(chǎn)性能隨季節(jié)（熱應激）變化的同時，其生理生化指標也發(fā)生相應的變化。環(huán)境高溫可導致長毛兔體溫升高［3］，特別是公兔陰囊和直腸溫度顯著升高，導致精液品質(zhì)下降［8］。而處于夏季熱應激的長毛兔精清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）較高，其中AST 與精子畸形率呈顯著正相關［10］。顧劍［4］研究發(fā)現(xiàn)，熱應激會導致長毛兔全血淋巴細胞明顯降低，嗜中性粒細胞數(shù)增加，血清葡萄糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇和甘油三酯含量顯著增加，抗氧化指標顯著降低。此外，有關長毛兔的研究鮮見報道。血液是動物內(nèi)環(huán)境的重要組成，血液生化水平可反映和影響家畜機體的健康、新陳代謝狀況及生產(chǎn)性能表現(xiàn)［12］。因此，本研究通過對比分析春、夏、秋3 個季節(jié)長毛兔血清生化指標的變化差異，旨在篩選受熱應激影響的潛在血清指標，從而為指導長毛兔生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及采樣

試驗所用成年長毛兔來自安徽省農(nóng)業(yè)科學院長毛兔育種基地（績溪），飼養(yǎng)管理條件一致，水泥籠位，飲水器自由飲水，定量飼喂，飼料為安徽新康飼料有限公司成熟商品全價顆粒料。

于春季（5 月）、夏季（8 月初熱應激初期、8 月中旬熱應激盛期）和秋季（11 月）共3 個季節(jié)4 個時間點，各選擇8 只試驗長毛兔（公母各半），真空采血管采集試驗兔耳緣靜脈血液5 mL，4℃冷藏過夜，然后用1 mL 規(guī)格移液槍小心吸取上層血清分裝到1.5 mL 滅菌離心管，于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 生化指標測定

選擇了8 個血液生化指標，其測定方法如下：堿性磷酸酶（ALP）采用NPP 底物-AMP 緩沖液法；乳酸脫氫酶（LDH）采用乳酸底物法；肌酸激酶（CK）采用磷酸肌酸底物法；尿素（UREA）采用尿素酶-谷氨酸脫氫酶法；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）采用丙氨酸底物法；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）采用天門冬氨酸底物法；總蛋白（TP）采用雙縮脲法；白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法。所有指標測定使用Chemray 800型全自動生化分析儀（雷杜，深圳），具體測定方法按雷杜生命科學股份有限公司相應指標的試劑盒說明進行。

1.2.2 統(tǒng)計方法

用WPS 表格對測定的試驗數(shù)據(jù)進行整理，每個性別不同季節(jié)間血清水平差異用SPSS 19.0 進行單因素方差分析，多重比較采用Duncan 法；相同季節(jié)不同性別間血清水平差異用非配對t檢驗進行分析；均以P＜0.05 作為差異顯著水平，所有結(jié)果用平均數(shù)±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同季節(jié)長毛兔的酶類指標分析

長毛兔酶類指標血清水平檢測結(jié)果如表1。對于公兔的ALP 水平，春季最高，且顯著高于夏季（P＜0.05），而與秋季無明顯差異（P＞0.05），8月初稍低于秋季（P＞0.05），而稍高于8月中旬（P＞0.05）；對于母兔的ALP水平，秋季最高，且顯著高于其他兩個季節(jié)（P＜0.05），春季次之，但與夏季8月初無顯著差異（P＞0.05），而夏季8月中旬時最低，也與8月初差異不明顯（P＞0.05）；就性別而言，母兔秋季的ALP水平顯著高于公兔（P＜0.05），而且其他季節(jié)公、母兔間差異均不明顯（P＞0.05）。對于公兔的CK 水平，8 月初顯著高于春季（P＜0.05）和8月中旬（P＜0.05），稍高于秋季（P＞0.05），8 月中旬最低，但與春秋兩季無明顯差異（P＞0.05）；母兔CK 水平不存在季節(jié)性差異（P＞0.05）；同一季節(jié)公、母兔間CK水平均差異不顯著（P＞0.05）。對于公兔的LDH 水平，春季最低，且與秋季差異不明顯（P＞0.05），8月初相對春季有較大程度的上升，但差異不顯著（P＞0.05），8月中旬顯著高于春、秋兩季（P＜0.05）；母兔LDH 水平春季最低，8月初升高，且顯著高于春季（P＜0.05），但8月中旬明顯下降，秋季與8 月中旬相近，且兩者均與春季差異不顯著（P＞0.05）；同一季節(jié)公、母兔之間比較，除8 月初母兔LDH 水平顯著高于公兔（P＜0.05）外，其他季節(jié)公兔均高于母兔，其中8月中旬公、母兔的LDH水平差異顯著（P＜0.05）。

表1 不同季節(jié)長毛兔的酶類指標血清水平比較

2.2 不同季節(jié)長毛兔的血清蛋白及含氮代謝物分析

長毛兔血清蛋白及含氮代謝物水平如表2。對于公兔的TP 水平，春季與8 月初相近（P＞0.05），8 月中旬和秋季均顯著高于前兩者（P＜0.05），秋季稍低于8月中旬，但差異不顯著（P＞0.05）；對于母兔的TP 水平，8 月初最低，8 月中旬最高，春秋兩季居中，但均差異不顯著（P＞0.05）；同一季節(jié)公、母兔間的TP 水平差異均不顯著（P＞0.05），春季和8 月初母兔稍高，8月中旬和秋季公兔稍高。對于公兔的ALB 水平，8 月初相對春季有一定的下降，8 月中旬升高，與春季接近，秋季均顯著高于其他季節(jié)（P＜0.05）；母兔的ALB水平季節(jié)變化與公兔類似，相對春季，8 月初有所下降，8 月中旬則顯著上升（P＜0.05），秋季最高，且與春季和8 月初間均差異顯著（P＜0.05）；公、母兔間同一季節(jié)的ALB 水平均無顯著差異（P＞0.05）。對于公兔的UREA 水平，相比春季，8 月初幾乎無變化，8 月中旬則大幅下降，秋季有所回升而居中，但各季節(jié)間均無顯著差異（P＞0.05）；母兔的UREA 變化規(guī)律相異，8月初比春季稍高（P＞0.05），8 月中旬最高，秋季最低，且顯著低于夏季兩個時期（P＜0.05）；公、母兔間春季和8 月初均無顯著差異（P＞0.05），8 月中旬母兔顯著高于公兔（P＜0.05），秋季母兔則較大程度地低于公兔（P＞0.05）。

表2 不同季節(jié)長毛兔的血清蛋白及含氮代謝物水平

2.3 不同季節(jié)長毛兔的肝功能相關血清指標水平分析

長毛兔肝功能相關血清指標水平如表3。對于公兔的ALT 水平，8 月初有所提高，而8 月中旬則大幅下降，且低于春季（P＞0.05）和8 月初（P＞0.05），秋季繼續(xù)下降到最低水平，各季節(jié)均無明顯差異（P＞0.05）；母兔8月初相對春季大幅下降，8月中旬下降至最低，且顯著低于春季（P＜0.05），秋季提高水平僅低于春季；春季公母兔間的ALT水平相近（P＞0.05），夏季兩時期母兔均較大程度地低于公兔，且8月初公母間差異顯著（P＜0.05），秋季公兔稍高于母兔（P＞0.05）。對于公兔的AST水平，8月初稍高于春季，8月中旬最高，秋季低于8中旬而高于春季和8 月初，但各季節(jié)間均差異不顯著（P＞0.05）；母兔的AST 水平，8 月初最高，8 月中旬最低，且兩者差異顯著（P＜0.05），秋季稍高于春季，但差異不顯著（P＞0.05）；公、母兔間比較，母兔在春季、8月中旬和秋季的AST水平均低于公兔，但僅與8月中旬差異顯著（P＜0.05）。對于公兔的AST/ALT，8 月中旬顯著高于春季（P＜0.05），其他各季節(jié)無顯著差異（P＞0.05）；母兔的AST/ALT 水平先顯著上升（P＜0.05），而后下降（P＞0.05），秋季相對8 月中旬變化很?。≒＞0.05）；春季公母兔間AST/ALT差異很?。≒＞0.05），8月初母兔顯著高于公兔（P＜0.05），8 月中旬母兔稍低于公兔（P＞0.05），秋季母兔稍高于公兔（P＞0.05）。

表3 不同季節(jié)長毛兔的肝功能相關血清指標水平

3 討論

研究表明，ALP廣泛分布于骨骼、肝、腎等組織，主要反映肝臟功能和骨組織生長代謝狀況［13］。不同生產(chǎn)類型、不同品種的家兔血清ALP水平有明顯差異［14-15］，而且血清ALP 水平高低與肉兔100 日齡體重和日增重［16］以及皖系長毛兔1 歲成年剪毛量呈顯著相關［17］。本研究中公兔和母兔的血清ALP水平均隨著夏季應激持續(xù)而大幅下降，而秋季則顯著上升，說明ALP受季節(jié)影響且對熱應激敏感，秋季氣溫適宜，ALP水平升高恢復正常，此結(jié)果與周明亮等［18］對白藏羊的研究結(jié)果一致。黃冬維等［19］研究發(fā)現(xiàn)，長毛兔血清ALP 水平受采毛應激影響而顯著下降，且48 h 內(nèi)不能恢復。而從本研究推測，ALP 也是熱應激的潛在血清指標。CK 主要反映骨骼肌和心肌功能。本研究中公、母兔的血清CK水平變化規(guī)律一致，其中公兔變化顯著，8 月初大幅上升。孫宏濤等［20］研究發(fā)現(xiàn)，急性熱休克可導致新西蘭白兔心肌勻漿上清CK 升高［20］。而持續(xù)熱應激時牛血清CK 大幅下降到春季水平，秋季又大幅上升，呈波浪式變化，可能剛應激時肌肉代謝增加，而后持續(xù)應激造成不應性［21-23］。高溫夏季生豬血清CK 顯著高于秋冬兩季［24］。本研究中兔秋季CK 大幅上升的原因需要進一步研究［25］。LDH 廣泛分布于細胞和體液中，臨床上主要用于心肌、肝臟和腫瘤疾病的診斷［26］。兔出血癥病在高熱期和瀕死期，其血清LDH 水平顯著升高［27］。本試驗公兔的LDH 隨熱應激時間持續(xù)逐漸升高，應激盛期時顯著高于其他3 個時期；而母兔剛熱應激時，相對其他3 個時期顯著升高，而持續(xù)應激時卻基本恢復正常，稍高于春季，與秋季相近，但此三者無顯著差異，可能母兔的抗應激能力較強并未發(fā)生免疫抑制［28］

血清TP 和ALB 含量反映了動物體對蛋白質(zhì)消化吸收和合成代謝的狀況［29］。本研究中長毛兔公兔的總蛋白在應激盛期和秋季均顯著高于春季和應激之初，而母兔各季節(jié)變化不顯著；公兔的白蛋白春季居中，夏季應激之初、盛夏應激和秋季逐漸顯著升高，母兔的白蛋白水平和變化趨勢與公兔相似，可見白蛋白是長毛兔熱應激早期的反映指標，而應激持續(xù)對其無影響。周明亮等［18］研究表明，白藏羊夏季和秋季的血清總蛋白顯著高于春季，白蛋白隨春—夏—秋季節(jié)變化逐漸上升，秋季顯著高于春季，與本研究結(jié)果一致。周明亮等［30］研究表明，藏綿羊的血清總蛋白和白蛋白水平均為夏季和秋季高于春季，與本研究總蛋白結(jié)果相似，而與白蛋白結(jié)果不一致，可能原因是本研究設計了熱應激初期這一時間，也因此揭示了白蛋白隨應激時間長短所表現(xiàn)的變化規(guī)律。血清UREA 是動物體蛋白氮代謝的主要終產(chǎn)物，反映了機體蛋白代謝水平和肝腎功能。本研究公、母兔的UREA 均為春季高、秋季低，夏季公兔的UREA 水平變化不顯著，而母兔則持續(xù)升高且均顯著高于秋季，推斷母兔腎臟功能可能受到熱應激的影響，同時也有可能與夏季飼料采食量下降有關［31］。當然也有研究表明，尿素氮與冷應激［21］和飼料蛋白含量［32］有關，因本研究不涉及故不作討論。

ALT和AST是反映肝臟功能的重要指標［33］。本研究中公兔不同季節(jié)的ALT 和AST 水平有一定變化，但差異不顯著；夏季母兔的ALT 水平低于春、秋兩個季節(jié)，特別是熱應激盛期顯著低于春季，與劉亞娟等［34］報道一致。從春季到8 月初，母兔的AST 水平稍有升高，這與對新西蘭白兔的研究結(jié)果相似［35］，夏季熱應激盛期相對8 月初顯著下降，而春、秋兩季水平接近。顧劍［4］的研究結(jié)果表明，高溫環(huán)境下長毛兔的血清AST和ALT 水平均顯著高于常溫條件的長毛兔，并且其產(chǎn)毛量顯著減少。AST/ALT 比值是肝臟功能的重要衡量指標，比值異常說明肝臟可能受到了損傷［36］。本研究中公兔在應激盛期顯著高于春季，且同樣高于應激初和秋季，說明公兔受到了持續(xù)應激的顯著影響，母兔在應激之初即較大幅度上升，到應激盛期反倒大幅降低到春秋兩季水平，說明母兔可能對應激反應敏感，但其熱應激耐受力強，抗應激性更好。

4 結(jié)論

本文研究了長毛兔的酶類、蛋白及代謝物血清水平的季節(jié)性差異，篩選到主要變化指標有ALP、ALB、LDH、AST/ALT 比值等，前兩者因應激下降，特別是ALP變化顯著或幅度較大，而后兩者受應激而升高，其中LDH 變化顯著。其他指標也有部分不同程度的變化。從性別反應來看，公兔的應激反應相對較小或較慢（LDH、AST/ALT 比值），但是影響持久；母兔的應激反應敏感（LDH、AST/ALT 比值）但恢復較快，可能抗應激能力稍強于公兔。因此，在生產(chǎn)實際如繁殖管理過程中，夏季要特別關注公兔的應激，同時注意做好春夏應激前預防和夏季應激處理，以便減少損失，同時順利開展秋繁工作。