中藥口服液體制劑工藝過程中質(zhì)量標(biāo)志物傳遞規(guī)律及關(guān)鍵環(huán)節(jié)優(yōu)化策略

康朝霞，孫 娥*，姜夢華，楊 擋，汪 晶，黃一平*，李 超，朱法根，邵建國，封 亮，賈曉斌

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇省中醫(yī)藥研究院，國家中醫(yī)藥管理局中藥口服釋藥系統(tǒng)重點研究室，江蘇 南京 210028； 2.濟川藥業(yè)集團有限公司，江蘇省兒科中藥與特色制劑重點實驗室，江蘇 泰興 225400； 3.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198）

中藥口服液體制劑（如合劑、口服液、糖漿劑等）具有吸收快、生物利用度高、服用方便等特點，但其制劑工藝面臨有效成分損失的瓶頸問題。蒲地藍(lán)消炎口服液作為中成藥大品種之一，廣泛用于治療呼吸系統(tǒng)疾?。?-2］，但其前處理階段和制劑工藝也會損失成分，在生產(chǎn)過程中黃芩苷、菊苣酸從飲片到制劑的轉(zhuǎn)移率分別僅為34%、11%［3-4］。因此，本實驗以蒲地藍(lán)消炎口服液為例，考察有效成分含量在工藝過程中的變化，探尋其傳遞規(guī)律、損失的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并提出相應(yīng)的增溶技術(shù)和優(yōu)化策略，以期為提升其他中藥口服液體制劑的有效性、內(nèi)在質(zhì)量奠定基礎(chǔ)［5］。

1 材料

Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國Waters公司）； MT5 型電子分析天平（百萬分之一，瑞士Mettler-Toledo 公司）； BT125D 型電子分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］； DFT-50型粉碎機（上海新諾儀器集團有限公司）； KH-300TDB 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）； TD10002A 型電子分析天平（天津天馬衡基儀器有限公司）； DTL-21B 型電陶爐（合肥榮事達(dá)電子電器集團有限公司）； pH-10 型手持式PH計（上海力辰邦西儀器科技有限公司）； RE52CS-1型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）； 80-2 型電動離心機（金壇醫(yī)療儀器有限公司）； HH-S4 型恒溫水浴鍋（江蘇金怡儀器科技有限公司）； TD5.5型臺式大容量高速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）。

腺苷（批號110879-201703）、菊苣酸（批號111752-201703）、紫堇靈（批號111734-201602）、黃芩苷（批號110715-201821）、漢黃芩素（批號111514-201706）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根、黃芩（批號190112、190118、190201、190201）均由濟川藥業(yè)集團有限公司提供，經(jīng)中國藥科大學(xué)王龍副教授鑒定為正品。甜菊糖苷（批號ASL613，上海源葉生物科技有限公司）； 氫氧化鈉（批號20180601，西隴科學(xué)股份有限公司）； 藥用乙醇 （ 批號200525130B，南京化學(xué)試劑股份有限公司）。甲醇為色譜純（美國Tedia 公司）； 水為娃哈哈純凈水。

2 方法

2.1 對照品溶液制備 精密稱取腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素對照品適量，50%甲醇溶解，制成貯備液（每1 mL 分別含腺苷0.94 mg、菊苣酸2.04 mg、紫堇靈0.50 mg、黃芩苷2.02 mg、漢黃芩素0.40 mg），分別精密吸取適量，置于5 mL 量瓶中，50%甲醇定容，制成每1 mL 分別含腺苷37.68 μg、菊苣酸407.80 μg、紫堇靈19.88 μg、黃芩苷1.21 mg、漢黃芩素7.90 μg 的溶液，即得。

2.2 色譜條件 參考文獻(xiàn) ［6］報道，Agilent XBridge C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相甲醇-0.1%磷酸，梯度洗脫（0～15 min，5% ～15%甲醇； 15 ～30 min，15% 甲醇； 30 ～35 min，15% ～25% 甲醇； 35 ～70 min，25% ～50% 甲醇；70～90 min，50% ～80%甲醇，90 ～100 min，80% ～5%甲醇）； 體積流量1 mL／min； 柱溫30 ℃； 檢測波長280 nm； 進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3 供試品溶液制備

2.3.1 飲片 蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根、黃芩粉碎后過4 號篩，分別稱取1.0 g，置于錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，靜置至室溫，50%甲醇補足減失的質(zhì)量，過0.45 μm 微孔濾膜，即得（編號S0）。

2.3.2 3 味藥合提 取蒲公英500 g、板藍(lán)根188 g、苦地丁125 g，加水煎煮2 次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.13 ～1.15（60～70 ℃）的清膏，加乙醇使含醇量為75%，靜置48 h，濾過，濾液回收乙醇，加水至500 mL，放置48 h，濾過，濾液用10%NaOH 溶液調(diào)pH 值至6.5，得到流浸膏。按照相關(guān)制備工藝，收集3味藥提取液（S1）、3 味藥濃縮液（S2）、3 味藥醇沉上清液（S3）、3 味藥回收乙醇后流浸膏（S4），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50%甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.3.3 黃芩單提 取黃芩188 g，投入沸水中煎煮2 次，每次先煎煮10 min，用10% NaOH 溶液調(diào)pH 值至6.5，再煎煮1 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.08 ～1.11 （60 ～70 ℃），調(diào)pH 值至6.5，加乙醇使含醇量達(dá)50%，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇，加1 倍量水混勻，濾過，濾液在80 ℃下保溫，鹽酸調(diào)pH 值至1.5，保溫0.5 h，放置24 h，濾過，沉淀物用70% 乙醇洗至中性，得粗品，加500 mL 水，在80 ℃下保溫溶解，10%NaOH 溶液調(diào)pH 值至6.5，得到流浸膏。按照相關(guān)制備過程，收集黃芩提取液（S5）、黃芩濃縮液（S6）、黃芩醇沉并回收乙醇后流浸膏（S7）、黃芩加水稀釋后濾液（S8）、黃芩苷加水溶解（S9）、黃芩苷調(diào)pH 后濾液（S10），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50% 甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.3.4 制劑階段 將“2.3.2” “2.3.3” 項下藥液合并，在2 ～8 ℃下冷藏靜置，濾過，離心，濾過，加入0.5% 甜菊糖苷，濾過，定容至1 000 mL，分裝、滅菌得到成品。按照相關(guān)制備過程，收集兩部分合并藥液 （S11）、冷藏靜置后濾液（S12）、離心后濾液（S13）、加甜菊糖苷后濾液（S14）、滅菌后成品 （S15），分別精密量取0.5 mL，置于10 mL 量瓶中，50% 甲醇定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

3 結(jié)果

3.1 質(zhì)量標(biāo)志物含量測定

3.1.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取貯備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于1.0 mL 量瓶中，50%甲醇定容，濾過，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定。以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進行回歸，結(jié)果見表1，可知各質(zhì)量標(biāo)志物在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 各質(zhì)量標(biāo)志物線性關(guān)系Tab.1 Linear relationships of various quality markers

3.1.2 精密度試驗 取對照品溶液10 μL，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定6 次，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素峰面積RSD分別為0.89%、0.98%、0.78%、0.93%、0.96%，表明儀器精密度良好。

3.1.3 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液（S14）適量，室溫下于0、4、8、12、24 h 在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素峰面積RSD 分別為1.5%、2.1%、0.82%、0.97%、2.6%，表明溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.1.4 重復(fù)性試驗 精密吸取供試品溶液（S14）1.0 mL，共6 份，置于10 mL 量瓶中，50%甲醇定容，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，測得腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素含量RSD 分別為2.1%、1.7%、0.54%、0.43%、1.9%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.1.5 加樣回收率試驗 精密吸取供試品溶液（S14）0.5 mL，共6 份，置于10 mL 量瓶中，精密加入對照品溶液適量，50%甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，在“2.2” 項色譜條件下進樣測定，計算回收率。結(jié)果，腺苷、菊苣酸、紫堇靈、黃芩苷、漢黃芩素平均加樣回收率分別 為 103.9%、102.4%、96.07%、99.81%、101.6%，RSD 分別為 2.1%、0.93%、1.1%、1.6%、2.6%。

3.2 質(zhì)量標(biāo)志物傳遞規(guī)律研究

3.2.1 3 味藥合提 如表2、圖2 所示，提取液到流浸膏過程中腺苷轉(zhuǎn)移率分別為 66.11%、58.68%、44.56%、41.16%，損失率分別為7.42%、14.12%、3.40%； 紫堇靈轉(zhuǎn)移率分別為72.06%、47.97%、30.15%、27.81%，損失率分別為24.09%、17.82%、2.34%； 菊苣酸轉(zhuǎn)移率分別為79.01%、64.39%、47.18%、45.26%，損失率分別為14.62%、17.22%、1.91%，可知各成分主要在濃縮、醇沉環(huán)節(jié)損失，其中菊苣酸、腺苷損失率在醇沉環(huán)節(jié)較高，而紫堇靈損失率在熱處理濃縮環(huán)節(jié)較高。

表2 各質(zhì)量標(biāo)志物含量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of various quality markers

3.2.2 黃芩單提 如表2、圖2 所示，黃芩從提取到黃芩苷調(diào)pH 后濾液環(huán)節(jié)黃芩苷轉(zhuǎn)移率分別為95.89%、79.65%、63.65%、60.13%、39.06%、36.38%，損失率分別為 16.23%、16.00%、3.53%、21.07%、2.68%； 漢黃芩素轉(zhuǎn)移率分別為83.11%、67.39%、53.86%、50.99%、37.16%、36.44%，損失率分別為15.72%、13.52%、2.88%、13.83%、0.72%，可知黃芩苷、漢黃芩素在濃縮熱處理環(huán)節(jié)、醇沉精制除雜環(huán)節(jié)，以及黃芩單提獨有的酸沉得到黃芩苷環(huán)節(jié)損失較大，并且黃芩苷在酸沉環(huán)節(jié)損失嚴(yán)重，損失率達(dá)21.07%。

3.2.3 制劑階段 如表2、圖2 所示，腺苷、紫堇靈、菊苣酸、黃芩苷、漢黃芩素轉(zhuǎn)移率分別從40.80% 下降到34.52%，27.57% 下降到24.03%，44.99% 下降到39.08%，36.32% 下降到31.01%，36.11%下降到33.83%，其中冷藏靜置環(huán)節(jié)損失較大，損失率分別為3.40%、1.86%、2.21%、2.22%、1.34%。

4 討論與結(jié)論

本實驗以蒲地藍(lán)消炎口服液為例，系統(tǒng)分析其生產(chǎn)工藝過程中有效成分轉(zhuǎn)移、損失規(guī)律，發(fā)現(xiàn)其損失主要集中在濃縮、醇沉環(huán)節(jié)，同時黃芩在酸沉環(huán)節(jié)也有較大損失，由于冷藏靜置是制劑階段損失相對較多的共性環(huán)節(jié)，故考慮通過篩選濃縮方式、優(yōu)化精制除雜方法、pH 調(diào)節(jié)、包合技術(shù)等手段（圖3）來提高質(zhì)量標(biāo)志物轉(zhuǎn)移率，最終提升制劑有效性。

濃縮是持續(xù)加熱的過程，菊苣酸等熱不穩(wěn)定成分可能會分解，故改變濃縮方式，優(yōu)化濃縮過程中溫度、壓力等參數(shù)有助于保留上述成分。生產(chǎn)中常用的濃縮方式是常壓濃縮、減壓濃縮，前者適用于熱穩(wěn)定成分，而后者適用于熱敏性或揮發(fā)性成分［7-8］。另外，反滲透濃縮、冷凍濃縮是新興濃縮方法，前者優(yōu)化膜種類和結(jié)構(gòu)，可促進中藥溶質(zhì)與溶劑分離，而后者可通過調(diào)節(jié)冷凍溫度、時間來促進不同溶質(zhì)冰晶析出，從而實現(xiàn)濃縮分離［9-11］。

醇沉是當(dāng)前中藥口服液體制劑生產(chǎn)過程中主要的精制除雜方法，但部分活性成分會被除去而導(dǎo)致其轉(zhuǎn)移率下降。醇沉效率受到醇沉物質(zhì)濃縮液密度、溫度、溶液pH、乙醇體積分?jǐn)?shù)、醇沉?xí)r間、靜置溫度、加醇速度，攪拌速度、攪拌時間等因素影響，故優(yōu)化醇沉工藝有助于減少成分損失［12］。

黃芩苷、漢黃芩素是黃芩主要成分，兩者損失集中在濃縮、醇沉、酸沉環(huán)節(jié)，其中酸沉是黃芩純化的重點，藥液濃度、酸沉pH、靜置溫度等參數(shù)均對其保留率有影響［13-17］。另外，黃芩經(jīng)堿提、醇沉后再經(jīng)酸沉得黃芩苷粗品，工藝復(fù)雜，耗時長，操作繁瑣，而由堿提改為直接水提時可減少酸沉工序靜置步驟，節(jié)約時間，提高生產(chǎn)效率。

冷藏靜置是去除雜質(zhì)、保證澄明度而進一步提高中藥口服液體制劑穩(wěn)定性的過程，冷藏靜置環(huán)節(jié)由于溫度降低，可能會影響有效成分溶解度，故需識別因低溫而導(dǎo)致溶解度降低的成分，并對其進行增溶，從而保證制劑的貨架期。另外，中藥口服液體制劑主要通過調(diào)節(jié)pH、原生多糖增溶技術(shù)（黃芩多糖）、增溶劑、表面活性劑、包合等技術(shù)增溶［18-19］。

中藥口服液體制劑成分復(fù)雜，同時存在多種極性化合物，不論是藥液精制除雜還是配液所用增溶方法，均需根據(jù)處方中成分理化性質(zhì)和臨床需求來選擇合適的純化手段，以期提升中藥口服液體制劑轉(zhuǎn)移率。本實驗以蒲地藍(lán)消炎口服液為例，立足中藥口服液體制劑范疇，提出制劑工藝中共性環(huán)節(jié)有效性改善的研究策略，有助于其內(nèi)在質(zhì)量的提升。