幽門螺桿菌導(dǎo)致上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展

寧月，王蒙，邵利華，焦婷紅，李海龍，4

1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730000；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨教科，甘肅蘭州 730000；4.甘肅省中藥新產(chǎn)品創(chuàng)制工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730000

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transi-tion, EMT）是上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為能動(dòng)細(xì)胞的過程。通常，細(xì)胞極性及細(xì)胞之間的黏附連接限制了上皮細(xì)胞隨意移動(dòng)的能力。但在特定生理或病理狀態(tài)下，上皮細(xì)胞極性喪失、黏附能力降低、細(xì)胞骨架發(fā)生變化[1]，使細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移能力增強(qiáng)，這種變化即為EMT[2]。腫瘤中常見EMT 的發(fā)生[3]，而EMT 的激活與炎癥反應(yīng)二者相互支持共同促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[4]。既往研究表明，在幽門螺桿菌（helicobacter pylori, Hp）感染的胃黏膜上皮細(xì)胞中，炎癥會(huì)促進(jìn)EMT 的發(fā)展，繼而誘導(dǎo)胃黏膜內(nèi)致癌改變，導(dǎo)致胃癌發(fā)生[5]。因此，研究Hp 導(dǎo)致EMT 的機(jī)制對于探索胃癌的發(fā)生有重要的作用。

1 EMT 的特征

EMT 是上皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變并失去連接和極性，擺脫細(xì)胞間和細(xì)胞外基質(zhì)黏附狀態(tài)的一個(gè)動(dòng)態(tài)過程[6]。當(dāng)EMT 啟動(dòng)開始，上皮細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)狀態(tài)，并沿上皮（E）軸與間充質(zhì)（M）軸排列，而當(dāng)這一動(dòng)態(tài)程序完成時(shí)，細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)為紡錘狀，具有高度運(yùn)動(dòng)性和侵襲性[7]。與此同時(shí)，一些分子的表達(dá)也發(fā)生變化，如細(xì)胞粘附分子E-鈣黏蛋白（epithelial-cadherins, E-cadherins）、閉合蛋白（occludins）、緊密連接蛋白（claudins）和細(xì)胞角蛋白（cytokeratins）表達(dá)下調(diào)，而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物間充質(zhì)鈣粘蛋白（mesenchymal cadherins）、波形蛋白（vimentin）和基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）表達(dá)協(xié)同上調(diào)[8]。鋅指蛋白（snails）、E-box 結(jié)合蛋白（zinc finger E-box binding proteins, ZEB）、基本螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（twists）、和叉頭盒蛋白（FOXCs）等因子的上調(diào)并激活Vimentin 或N-鈣黏蛋白（neuralcadherin, N-cadherin）直接抑制了E-cadherins 的表達(dá)[9-10]。一些炎癥因子如轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor β, TGF-β）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin 6, IL-6）、白細(xì)胞介素-8（interleukin 8, IL-8）和一些趨化因子如C-C 基趨化因子配體5（Cchemokine ligand 5, CCL5）、C-C 基趨化因子配體18（C-chemokine ligand 18, CCL18）等的表達(dá)也促進(jìn)了EMT 的發(fā)展[11]。EMT 在促進(jìn)癌細(xì)胞遷移的過程中，受到不同信號傳導(dǎo)通路的控制，如PI3K/AKT/mTOR通路、Wnt/β-連環(huán)蛋白、P53 信號通路等，它們共同構(gòu)成了EMT 復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[12]。

2 幽門螺桿菌的特征

Hp 是一種革蘭陰性微需氧桿菌，具有單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌形態(tài)[13]。Hp 感染是胃十二指腸潰瘍和胃癌的主要致病源[14-15]，其傳播的途徑主要通過糞-口、胃-口以及口-口傳播[15-16]。Hp 不根除將引起終生感染，或可發(fā)展為胃癌[17]。Hp 感染的因素有細(xì)菌毒力、胃環(huán)境和宿主遺傳成分。致病毒力因子有細(xì)菌定植因子血液抗原結(jié)合蛋白A（blood group antigenbinding adhesion,BabA）、唾液酸結(jié)合黏附素（sialic acid-binding adhesion, SabA）、外部炎癥蛋白A（outer inflammatory protein, OipA）和外膜黏附素（HopQ）等，胃致病所需的毒力因子是效應(yīng)蛋白，如細(xì)胞毒素-相關(guān)基因A（cytotoxin-associated gene A, CagA）、空泡型細(xì)胞毒素A（vacuolating cytotoxin A,VacA）等[18]。Hp 感染的前提是：Hp 在進(jìn)入胃后可以借助其脲酶活性中和不利的酸性環(huán)境；隨后，細(xì)胞利用其鞭毛介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)向胃上皮移動(dòng)。之后，Hp 黏附素也進(jìn)一步與宿主細(xì)胞受體相互作用，導(dǎo)致成功定植[19]。BabA 是Hp 釋放的黏附素，能使Hp 免于因蠕動(dòng)和胃排空等力而從胃中移位[20]。OipA 也是Hp 分泌的黏附素的一種。BabA 與OipA 呈現(xiàn)負(fù)選擇關(guān)系，且OipA“on”型幽門螺桿菌較OipA“off”型菌株生長周期更快[21]。同樣地，Hp SabA 的臨床菌株也具有“開/關(guān)”狀態(tài)，具體表現(xiàn)為當(dāng)胃內(nèi)pH 值降低時(shí)，SabA 的表達(dá)增加，這意味著SabA 可以快速調(diào)節(jié)以響應(yīng)胃生態(tài)環(huán)境的變化[22]。

3 幽門螺桿菌導(dǎo)致EMT 的機(jī)制

3.1 細(xì)胞毒素-相關(guān)基因A

CagA 是Hp 菌株攜帶的一個(gè)功能性致病島（CagA-PAI）的效應(yīng)子，CagA+能損害細(xì)胞上皮的緊密連接，降解基底膜并形成偽足，與EMT 的發(fā)生過程高度相似[23]。關(guān)于Hp 的致病機(jī)制，一般說法認(rèn)為是BabA 介導(dǎo)IV 型分泌系統(tǒng)（type IV secretion system, T4SS）的激活并促進(jìn)毒力因子CagA 胃黏膜上皮細(xì)胞的易位；在此過程中，HopQ 可與癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子家族（the carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule family, CEACAMs）N端的IgV 樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合，也促進(jìn)CagA 向宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[22]。

3.2 Hp 誘導(dǎo)的自噬和EMT 的關(guān)系

當(dāng)Hp 暫時(shí)感染胃上皮細(xì)胞時(shí)， VacA 可誘導(dǎo)自噬，從而降解毒素，減輕細(xì)胞損傷，進(jìn)一步維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)；但長期感染后，會(huì)破壞自噬通路，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)自噬功能障礙[24]。在幽門螺桿菌感染期間，胃上皮細(xì)胞中的自噬可以上調(diào)或下調(diào)[25]。首先，Hp能夠通過減少自噬通量激活自噬過程；用自噬抑制劑處理受感染的細(xì)胞后降低了間充質(zhì)表型的出現(xiàn)和與EMT 相關(guān)的遷移能力[26]。其次，在Hp 相關(guān)胃癌的進(jìn)展中，CagA 誘導(dǎo) miR-543 過表達(dá)靶向SIRT1以抑制自噬。隨后可能會(huì)增加EMT 的表達(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞遷移和侵襲[27]。這表明Hp 控制自噬時(shí)，可以由其他因素阻斷，從而改變自噬的表達(dá)，抑制胃上皮細(xì)胞的間充質(zhì)轉(zhuǎn)變或胃癌轉(zhuǎn)變。

3.3 CD44 受Hp 影響誘導(dǎo)EMT

CD44 是一個(gè)非激酶家族，其主要配體是透明質(zhì)酸（hyaluronic acid, HA），它是由基質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）的豐富成分[28]。過表達(dá)CD44 的細(xì)胞具有自我更新和EMT 能力，HA 能結(jié)合CD44 配體并結(jié)合結(jié)構(gòu)域，誘導(dǎo)構(gòu)象變化，使銜接蛋白或細(xì)胞骨架元件與細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而激活各種信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、黏附、遷移和侵襲[29]。

3.3.1 CD44 通過調(diào)控細(xì)胞信號通路對EMT 的促進(jìn)作用 當(dāng)Hippo 途徑失活時(shí)，Hippo 通路效應(yīng)子yes相關(guān)蛋白（yes-associated protein, YAP）和具有PDZ結(jié)合基序的轉(zhuǎn)錄共激活因子（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif, TAZ）不會(huì)被LATS1/2 磷酸化，減少在細(xì)胞核中積累并與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的機(jī)會(huì)。Hp 感染則增加了TAZ 核表達(dá)和轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子TEA 結(jié)構(gòu)域（transcriptional enhancer TEA domain, TEAD）的轉(zhuǎn)錄活性，而TAZ 沉默抑制EMT表型并降低了相關(guān)標(biāo)志物ZEB1 表達(dá)[30]。Yong X等[31]發(fā)現(xiàn)，用細(xì)菌株11637（CagA-Hp）或缺乏CagA的11637 基因突變株感染胃癌細(xì)胞，使CD44 表達(dá)增加后，Hp 將以CagA 依賴性方式激活Wnt/β-catenin信號通路，使細(xì)胞中上皮標(biāo)志物 E-cadherin 的表達(dá)出現(xiàn)降低，同時(shí)間充質(zhì)標(biāo)志物 N-cadherin、Vimentin等表達(dá)增加。同理，Tipα 在SGC7901 細(xì)胞中激活Wnt/β-catenin 信號誘導(dǎo) EMT 并增加該信號傳導(dǎo)的下游靶基因的表達(dá)；然而，XAV939（Tipα 的抑制劑）預(yù)處理能抑制Tipα 誘導(dǎo)的EMT[32]。另外，Hp 感染可能還會(huì)觸發(fā)TGF-β1 誘導(dǎo)的EMT 通路的出現(xiàn)。根除它可能通過抑制此途徑來預(yù)防胃癌的發(fā)生[33]。

3.3.2 CD44 通過骨髓源干細(xì)胞向癌癥干細(xì)胞轉(zhuǎn)變促進(jìn)EMT Hp 的慢性感染會(huì)引起胃上皮黏膜的慢性炎癥和隨后的損傷，從而導(dǎo)致骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMDSCs）募集。慢性感染和炎癥導(dǎo)致EMT、改變的組織再生、局部上皮干細(xì)胞和BMDSCs 的分化。EMT 誘導(dǎo)具有間充質(zhì)和干細(xì)胞特性的CD44+細(xì)胞的出現(xiàn)，導(dǎo)致化生和發(fā)育異常病變，在可能出現(xiàn)的額外的表觀遺傳和突變事件后，最終引起CSC 和腺癌病變[34]。另外，此機(jī)制也間接說明Hp 通過CagA 通過誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞中的 EMT 樣變化來揭示癌癥干細(xì)胞（cancer stem cells, CSC）樣特性[35]。相關(guān)學(xué)者證明只有培養(yǎng)的人胃上皮細(xì)胞的CD44+細(xì)胞可以被Hp 感染誘導(dǎo)呈現(xiàn)間充質(zhì)表型。并且在小鼠異種移植模型中更具致瘤性[36]。

3.3.3 CD44 通過CSC 促進(jìn)EMT 含有磷酸化功能EPIYA 基序的CagA 可以導(dǎo)致胃癌細(xì)胞間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、Snail 和ZEB1 以及干細(xì)胞標(biāo)志物CD44的轉(zhuǎn)錄活性顯著增加，表明EMT 被CagA 蛋白通過EPIYA 磷酸化誘導(dǎo)[37]。CagA+Hp 感染HFE-145 細(xì)胞后，CDX1 以及EMT 標(biāo)志物Snail 和Slug 的表達(dá)增加，但在感染 CagA-Hp 的 HFE-145 細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)這些影響。因此，CagA+是影響胃癌細(xì)胞EMT 的主要元兇之一[38]。此外，Snail、Twist 和ZEB 等EMT 相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)屬于癌癥轉(zhuǎn)移在疾病發(fā)展的早期階段的表現(xiàn)，應(yīng)該重視這些指標(biāo)檢測的重要性[39]。

3.4 腫瘤抑制因子、轉(zhuǎn)錄因子及微小RNA

3.4.1 程序性細(xì)胞死亡因子4 程序性細(xì)胞死亡因子4（programmed cell death 4, PDCD4）是一種腫瘤抑制因子，與胃癌組織惡性程度有關(guān)[40]。在Hp 感染所致的胃癌中，CagA 作為潛在的EMT 誘導(dǎo)分子，使PDCD4 和上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-鈣粘蛋白在癌癥標(biāo)本中的表達(dá)降低[41]。南蛇藤莖中提取物（the extract of Celastrus orbiculatus, COE）抑制PDCD4 啟動(dòng)子的甲基化水平，使PDCD4 表達(dá)增加并調(diào)節(jié)EMT 過程，抑制Hp 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[42]。

3.4.2 腫瘤壞死因子α 誘導(dǎo)蛋白 TNF-α 誘導(dǎo)蛋白（TNF-α-inducing protein, Tipα）是幽門螺桿菌特有的致癌因子，能特異性地與細(xì)胞表面核仁蛋白結(jié)合，然后進(jìn)入癌細(xì)胞[43]，已被確定為腫瘤啟動(dòng)子[44]。Tipα 能誘導(dǎo)較低的細(xì)胞硬度并導(dǎo)致較高的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性，誘導(dǎo)了MKN-1 細(xì)胞中Vimentin 的表達(dá)[44]。關(guān)于Tipα 與EMT 的討論，有以下論點(diǎn)。首先，Tipα 與EMT 直接相關(guān)，以時(shí)間劑量依賴的方式調(diào)控Ecadherins、N-cadherins、Vimentin 表達(dá)，刺激細(xì)胞絲狀伸長；同時(shí)，Tipα 可通過刺激炎癥因子IL-6 產(chǎn)生，自分泌的IL-6 激活p-STAT3 信號，Tipα 通過IL-6/STAT3 通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞的EMT 和侵襲[45]。表面核仁素在Tipα 誘導(dǎo)MKN-1 細(xì)胞遷移能力中的影響也被提及，除Tipα 本身可成劑量依賴性誘導(dǎo)降低細(xì)胞硬度，誘導(dǎo)絲狀偽足外， Tipα 誘導(dǎo)的細(xì)胞伸長受到了表面核仁素的調(diào)控；另外，核仁素能夠激活MEK-ERK1/2 通路誘導(dǎo)EMT， Tipα 也能刺激MEK1 和ERK1/2 的磷酸化，使細(xì)胞產(chǎn)生EMT 表型變化[46]。 Tipα 誘導(dǎo)的ERK1/2 磷酸化也可以被BTG2/TIS21表達(dá)下調(diào)，但BTG2/TIS21能否抑制Tipα 進(jìn)而抑制EMT，目前缺乏相關(guān)研究，還需要進(jìn)一步深入探討[47]。在Hp 中蛋白質(zhì)Lpp20（Hp1456）部分結(jié)構(gòu)與Tipα 相似，可以通過形成二聚體的方式降低Ecadherin 表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移[48]。此外，研究表明，Hp 中Hp0953 蛋白和Tipα 功能相似，且為胃部定植的Hp 特有，可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)[49]。

3.4.3 含IQ 基元GTP 酶激活蛋白1 含IQ 基元GTP

酶激活蛋白1（IQ motif-containing GTPase-activating protein 1, IQGAP1）是一種與E-cadherin 相互作用的粘附連接的支架蛋白，可調(diào)節(jié)細(xì)胞可塑性和增殖。將轉(zhuǎn)基因小鼠感染Hp 后， IQGAP1 表達(dá)量降低，將會(huì)促進(jìn)間充質(zhì)表型表達(dá)和CSC 樣特性[50]，可能是Hp感染會(huì)誘導(dǎo)IQGAP1 和E-cadherin 從細(xì)胞-細(xì)胞連接處離域?qū)е碌?。Hp 感染后顯示E-cadherin 和重新分布到細(xì)胞內(nèi)的位置，E-cadherin 在膜上的水平持續(xù)降低，減少了連結(jié)，會(huì)增加上皮的通透性，表明Hp 會(huì)降低黏附連接結(jié)構(gòu)的功能[51]。雖然IQGAP1 mRNA 在膜上出現(xiàn)代償性增高，但并未改變黏附持續(xù)減少的結(jié)果。

有理數(shù)一般通過整數(shù)、分?jǐn)?shù)、有限小數(shù)、無限循環(huán)小數(shù)4種形式來考查．以下對兩版教科書有理數(shù)例題中這4種形式例題的數(shù)量進(jìn)行比較分析．

3.4.4 胃動(dòng)蛋白1 胃動(dòng)蛋白1（gastrokine 1, GKN1）是由胃上皮細(xì)胞分泌的抗炎蛋白，其表達(dá)的異常與惡性腫瘤前期炎癥和胃癌有因果關(guān)系[52]。在感染Hp 的人或者鼠的胃上皮細(xì)胞和黏膜組織中轉(zhuǎn)染了CagA 或GKN1 后， GKN1 過表達(dá)可以與CagA 結(jié)合成功地抑制CagA+明顯誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲作用[53]。Koper-Lenkiewicz OM 等[54]人使小鼠腸黏膜損害后注射GKN1，發(fā)現(xiàn)在GKN1 的影響下，Occludins 的免疫反應(yīng)性增加，形成緊密連接，增強(qiáng)結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的附著。

3.4.5 基本螺旋-環(huán)-螺旋蛋白1/核轉(zhuǎn)錄激活蛋白家族1 主導(dǎo)控制樣蛋白1（mastermind like transcriptional coactivator 1, MAML1）是Notch 信號通路的主要轉(zhuǎn)錄共激活因子，Twist 相關(guān)蛋白基因1（twistrelated protein 1, Twist1）是EMT 的調(diào)節(jié)因子，二者在腫瘤中常伴隨表達(dá)[55]。在一項(xiàng)meta 分析中，73 個(gè)胃部腫瘤中有34 個(gè)（46.6%）檢測出Hp 陽性。在這些Hp 陽性樣本中，MAML1 和Twist1 的mRNA 表達(dá)水平之間存在明顯的正相關(guān)（P＜0.001），且Hp 可通過破壞 Twist1/MAML1 表達(dá)模式和相關(guān)途徑來增強(qiáng)胃癌生長和轉(zhuǎn)移[56]。Hp 感染的胃腺癌樣本中發(fā)現(xiàn)ETS2、Twist1、Siah2 表達(dá)上調(diào)，這可能是因?yàn)楸磉_(dá)升高的ETS2、Twist 介導(dǎo)了Siah2 的轉(zhuǎn)錄， Siah2 表達(dá)量升高則促進(jìn)了Hp 感染的胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[57]。在胃癌惡性組織中，由于PDCD4 和Twist1 的表達(dá)量成反比，因此Hp 感染的胃癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)CagA 是通過抑制PCCD4 增加Twist1 的表達(dá)量調(diào)節(jié)EMT 的發(fā)生[41]。

3.4.6 CagA 與腫瘤抑制蛋白p53 的細(xì)胞凋亡刺激蛋白間相互作用 CagA 與腫瘤抑制蛋白p53 的細(xì)胞凋亡刺激蛋白（CagA-ASPP2）的相互作用是Hp感染后細(xì)胞極性缺陷的前提之一。通過ASPP2 的聚集作用，緊密連接的頂端Par 復(fù)合物ASPP2-Par3-aPKC 和基底外側(cè)復(fù)合物Par1b 形成了異常連接，此時(shí)CagA 實(shí)現(xiàn)了使受到Hp 感染的上皮細(xì)胞失去極性，而干擾CagA-ASPP2 的相互作用可以通過抑制RTK/PI3K/AKT 通路給下游傳導(dǎo)的信號來實(shí)現(xiàn)，抑制EMT 并降低Hp 在胃中的存活率[58]。

3.4.7 孕激素和脂肪Q 受體家族成員3 孕激素和脂肪Q 受體家族成員3（progestin and adipoQ receptor 3, PAQR3）是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子，其下調(diào)與胃癌患者的轉(zhuǎn)移加速和預(yù)后不良密切相關(guān)[59]。PAQR3 過表達(dá)能夠直接抑制胃癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖、遷移和EMT[60]。通過調(diào)節(jié)TGF-β/Smad 信號通路，PAQR3 還顯著抑制Hp 感染的HGC-27 細(xì)胞遷移和侵襲[61]。

3.4.8 微小RNA miRNA 在胃癌中的作用至關(guān)重要。在感染Hp 的人群中發(fā)現(xiàn)miR-29a-3p 可以調(diào)控胃上皮細(xì)胞的變化，這可能是通過直接靶向胃上皮細(xì)胞中的A20 基因?qū)崿F(xiàn)的，此過程促進(jìn)了Snail、Vimentin 和N-cadherin 的表達(dá)，同時(shí)抑制E-cadherin的表達(dá)[62]。抑制胃上皮細(xì)胞miR-21/PDCD4 信號通路后，可以使COE 通過調(diào)節(jié)EMT 進(jìn)而抑制Hp 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[42]。另外，miR-134 可能通過靶向FoxM1 抑制受Hp 感染的SGC-7901 細(xì)胞的侵襲和EMT[63]。

3.4.9 Hp 60190 株及其等基因突變株 在 MKN-45 細(xì)胞中， CagA 能夠增強(qiáng)雌二醇對HOTAIR 的促進(jìn)作用，進(jìn)一步促進(jìn)EMT，但通過與選擇性ER 降解劑氟維司群共同處理可逆轉(zhuǎn)[64]。與非致病菌株相比，Hp 致病菌株顯著上調(diào)所有3 種胃細(xì)胞系中的EMT 相關(guān)基因Snail、Slug 和Vimentin。胃泌素和MMP-7 siRNA 和MMP-7 中和抗體顯著抑制了Hp感染的胃細(xì)胞系中可溶性肝素結(jié)合表皮生長因子（soluble heparin-binding epidermal growth factor, HBEGF）表達(dá)減少，并降低了EMT 基因表達(dá)。胃泌素siRNA 也逆轉(zhuǎn)了Hp 對 EMT 的影響[65]。

4 幽門螺桿菌感染后相關(guān)信號通路的激活與EMT

在一些報(bào)告中，Hp 能通過T4SS 激活NF-κB，而CagA 本身也能依靠RAS-MAP 激酶信號通路激活NF-κB，由此誘導(dǎo)了IL-8 的上調(diào)表達(dá)，引發(fā)炎癥反應(yīng)與EMT[23,34]；另一方面，在進(jìn)入宿主細(xì)胞后，磷酸化的CagA 能夠與宿主細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的酪氨酸磷酸酶SHp-2 產(chǎn)生相互作用，產(chǎn)生不同于前的炎癥反應(yīng)，并促進(jìn)胃癌發(fā)展[66]。

4.1 NF-κB 通路

Hp 菌株和間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)產(chǎn)生的上清液不僅具有促EMT 作用， 其中NF-κB-p65 磷酸化、IL-6 的表達(dá)水平也顯著升高[67]，表明Hp 能通過NF-κB 通路誘導(dǎo)GC 細(xì)胞EMT、侵襲和轉(zhuǎn)移。一項(xiàng)關(guān)于Hp 的芯片數(shù)據(jù)和IκB 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了在受感染的胃AGS 細(xì)胞系中，NF-κB 被Cag-PAI+Hp 激活后，激活了ZEB1，NF-κB 又反式激活細(xì)胞中包含Vimentin 和Snail1 在內(nèi)的EMT 效應(yīng)器[68]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，大鼠的成纖維細(xì)胞的活化可以直接通過Hp 產(chǎn)生的CagA 發(fā)生，間接通過TLR2 和TLR4 發(fā)生，并導(dǎo)致EMT 標(biāo)志物Snail 的快速表達(dá)，這是通過轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 和STAT3 信號傳導(dǎo)介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的[69]。

4.2 TGF-β/Smad 通路

4.3 PI3K/AKT 信號通路

多數(shù)研究表明，發(fā)生了EMT 的腫瘤細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)，其主要機(jī)制與PI3K/AKT 信號通路活化引起的細(xì)胞黏附能力下降密切相關(guān)[72]。生信分析與實(shí)驗(yàn)證明，TREM2 與胃癌中的Hp 感染狀態(tài)密切相關(guān)，TREM2 可能通過抑制PI3K 和AKT 的磷酸化，調(diào)控PI3K/AKT 信號通路促進(jìn)GC 細(xì)胞EMT 進(jìn)展[73]。另外，Yoon JH 等[53]人證明CagA 誘導(dǎo)了AGS 和HFE-145 細(xì)胞以及CagA 陽性人黏膜中的p-AKT 上調(diào)，這種現(xiàn)象與EMT 密切相關(guān)。蝦青素通過阻止Hp 刺激的細(xì)胞中PI3K/AKT/mTOR/NF-κB 的激活，抑制了MMP-7 和MMP-10 的表達(dá)，以劑量依賴性阻滯EMT 的進(jìn)程[74]。Wang Z 等[75]發(fā)現(xiàn)，Hp 的毒力因子γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶通過消耗胃中的谷氨酰胺，減少三羧酸代謝物α-酮戊二酸，使間充質(zhì)干細(xì)胞遷移到胃部，激活PI3K-AKT 信號通路，促進(jìn)了間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移、自我更新和多能性。感染Hp 后，GSK-3β 通過Ser9 位點(diǎn)的發(fā)生磷酸化而失活，然而，通過PI3K/AKT 通路抑制其磷酸化，即可抑制Snail表達(dá)[76]。

4.4 Hippo 信號通路

Hippo 通路在器官大小控制以及組織的生理和病理過程中起著關(guān)鍵作用。其下游效應(yīng)器YAP1 和TAZ 接收上游刺激并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性[77]。原因可能是TAZ 通過Hippo 通路調(diào)節(jié)ZEB1 表達(dá)，同時(shí)也誘導(dǎo)了CagA 陽性Hp 的EMT 程序，且后續(xù)實(shí)驗(yàn)證明，Ecadherin 的下調(diào)使細(xì)胞更易于過度表達(dá)ZEB1 并產(chǎn)生EMT 變化[30]。Molina-Castro SE 等[78]也證明了在CagA 的刺激下，LATS2 及其底物YAP1 激活了Hippo通路，具體表現(xiàn)為LATS2 的表達(dá)能促進(jìn)胃上皮細(xì)胞系表達(dá)基底上皮表型并抑制Hp 促EMT 作用。另一文獻(xiàn)也表明，CagA 的敲除減弱了Hp 對YAP 的激活作用，使Hp 誘導(dǎo)的EMT 受到抑制[79]。

4.5 JAK/STAT 信號通路

Hp 釋放的CagA 可以促成大鼠胃成纖維細(xì)胞的激活或者分化，這些作用由轉(zhuǎn)錄因子也可以通過STAT3 信號介導(dǎo)，導(dǎo)致Snail1 蛋白快速表達(dá)[69]。Tipα 能顯著上調(diào)SGC7901 細(xì)胞中EMT 相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，同時(shí)激活I(lǐng)L-6/STAT3 信號通路促進(jìn)EMT，從而加速胃癌的腫瘤侵襲性[45]。

4.6 Wnt2/β-catenin 信號通路

MNNG 和慢性Hp 感染協(xié)同作用促進(jìn)了GES-1細(xì)胞和小鼠胃黏膜侵襲和遷移的增強(qiáng)、EMT/間充質(zhì)表型的增加，同時(shí)，Hp 感染或MNNG 誘導(dǎo)作用還引起Wnt2 和β-catenin 的表達(dá)和激活增強(qiáng)。總之，這些發(fā)現(xiàn)表明慢性CagA+幽門螺桿菌感染與MNNG 刺激可以協(xié)同并誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞的間充質(zhì)樣特性[80]。

5 其他

Afadin 蛋白水平在幽門螺桿菌感染的兩種不同細(xì)胞系中出現(xiàn)降低，而EMT 的指標(biāo)（如ZEB1、Vimentin 等）表達(dá)增加。RNAi 對Afadin 的沉默促進(jìn)了EMT 進(jìn)程，這可能導(dǎo)致胃癌的發(fā)生[81]。 Hp CagA+VacA+菌株通過上調(diào)ZEB1 轉(zhuǎn)錄Claudin-2、CDX2表達(dá)促進(jìn)AGS 細(xì)胞侵襲，姜黃素正丁醇提取物可以通過抑制以上標(biāo)志物的表達(dá)來抑制其對AGS 細(xì)胞的影響[82]。溶酶體相關(guān)蛋白跨膜4β（lysosomalassociated protein transmembrane 4β, LAPTM4B）的下調(diào)也可抑制胃癌細(xì)胞的侵襲EMT[83]。非受體酪氨酸激酶c-Abl 在pAblT735 與14-3-3 蛋白相互作用下，在細(xì)胞之中出現(xiàn)了滯留，從而增強(qiáng)了Hp 介導(dǎo)的細(xì)胞伸長和遷移[53,84]。

6 小結(jié)與展望

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，而EMT促進(jìn)了這一重要過程。在對幽門螺桿菌的研究中，目前已發(fā)現(xiàn)Hp 參與了EMT 并具有促進(jìn)EMT的作用。Hp 感染宿主后，會(huì)通過T4SS 的激活引發(fā)CagA 的易位，并進(jìn)一步推動(dòng)EMT 進(jìn)展。此過程關(guān)系到多個(gè)通路和因子，本文主要從自噬及信號通路方面總結(jié)了Hp 對于EMT 的作用，但仍有一些機(jī)制尚未明確。在今后的研究中可以在c-Abl、LAPTM4B 等方面進(jìn)一步深入研究以更確切地了解其機(jī)制，相信隨著對其深入探討，這一機(jī)制可為胃癌發(fā)生、發(fā)展以及對胃癌的臨床治療提供新的思路和藥物靶點(diǎn)。