水溶性番茄濃縮物及復(fù)配紅曲粉降血脂功效研究

◎ 呂道俊，郭秋平，歐慧瑜，余增才，陳錦枝

（廣州醫(yī)藥研究總院有限公司藥物非臨床評(píng)價(jià)研究中心，廣東 廣州 510240）

根據(jù)《中國(guó)成人血脂異常防治指南（2016 年修訂版）》的論述[1]，在治療血脂異常的過程中，飲食管理和積極改善生活方式是最基本、最重要的舉措。臨床上主要通過抑制肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成、加速低密度脂蛋白分解代謝、減少腸道對(duì)膽固醇的吸收等途徑來(lái)降低血脂水平。代表藥物主要包括HMG-CoA 還原酶抑制劑（如他汀類）、膽固醇吸收抑制劑（依折麥布）、膽酸螯合劑（如考來(lái)烯胺）及其他調(diào)脂藥（如普羅布考、脂必泰、多廿烷醇）等。尤其以他汀類的使用最為廣泛，但長(zhǎng)期化學(xué)藥物治療會(huì)產(chǎn)生一定的副作用，因此開發(fā)安全、有效的降血脂產(chǎn)品至關(guān)重要。

水溶性番茄濃縮物物（Fruitflow?）[2]，是歐洲第一個(gè)根據(jù)“關(guān)于食品營(yíng)養(yǎng)和健康聲明的法規(guī)”獲得健康聲明批準(zhǔn)的產(chǎn)品，它能顯著抑制血小板聚集。Fruitflow?除了能降低血小板的反應(yīng)性，還含有抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶及抗炎的因子，是一種有效的、天然的心臟保護(hù)功能性食品。汪玉芳等[3]的研究顯示，水溶性番茄濃縮物對(duì)高脂血癥的大鼠模型有輔助降低血清膽固醇的功效。莫納可林K 作為紅曲的主要活性成分，以內(nèi)酯或羥基酸的形式存在，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與HMG-CoA 相似，通過與HMG-CoA 還原酶競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而降低該酶的活性。這種作用有助于抑制內(nèi)源性膽固醇的合成，并增加載脂蛋白受體的活性，進(jìn)而有效降低血漿中低密度脂蛋白（Low-Density Lipoprotein，LDL）、中密度脂蛋白（Intermediate Density Lipoprotein，IDL）和極低密度脂蛋白（Very Low Density Lipoprotein，VLDL）的濃度。莫納可林K 在降低血漿中膽固醇濃度方面還具備另一個(gè)重要的作用，即通過代償性地增加LDL 受體的活性，促進(jìn)血漿中LDL 的清除過程。因此，除了抑制內(nèi)源性膽固醇合成外，莫納可林K 還能通過提高LDL 受體活性來(lái)進(jìn)一步降低血漿中膽固醇的濃度[4]。

為了進(jìn)一步闡明水溶性番茄濃縮物及其與紅曲粉復(fù)配后對(duì)心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用，以及對(duì)血脂水平的調(diào)節(jié)作用，本研究遵循《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9 個(gè)保健功能評(píng)價(jià)方法的通知》（國(guó)食藥監(jiān)?；?012〕107 號(hào)）文件中的《輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，特意考察該復(fù)合物的降血脂效果，并評(píng)估其對(duì)凝血4 項(xiàng)指標(biāo)的影響，以全面了解其功效和安全性。通過本研究，期望能夠提供更多關(guān)于水溶性番茄濃縮物與紅曲粉復(fù)配的心血管保護(hù)能力及調(diào)節(jié)血脂作用機(jī)制的科學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

血脂4 項(xiàng)，即低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、總膽固醇的試劑由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為201731、211101、211481、211581；血凝4 項(xiàng)，即凝血酶原時(shí)間、活化部分凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間、纖維蛋白原的試劑由德國(guó)美創(chuàng)TECO 公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為30002873、200951、10002936、40002923。

BECKMANAU480 生化分析儀，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司；Coatron1800 全自動(dòng)血凝儀，德國(guó)美創(chuàng)公司；離心機(jī)，德國(guó)sigma 公司；BSA224S 電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；BSA2202S 電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

樣品1 為水溶性番茄濃縮物，為紅棕色粉末，批號(hào)為Y210602-A，有效期至2023 年6 月，人體推薦劑量為150 mg·d-1，由湯臣倍健股份有限公司生產(chǎn)提供。

樣品2 為新絡(luò)素紅曲片（水溶性番茄物復(fù)配紅曲，其中水溶性番茄濃縮物推薦量150 mg，紅曲推薦量500 mg），片劑，內(nèi)容物為淺棕色固體，規(guī)格為480 mg/片、60 片/瓶，生產(chǎn)批號(hào)為202104R，生產(chǎn)日期為2021-05-23，有效期24 個(gè)月，人體推薦劑量為1.92 g·d-1。

陽(yáng)性對(duì)照物為阿托伐他汀鈣片（立普妥），規(guī)格為20 mg/片、7 片/盒，生產(chǎn)批號(hào)為E01458，生產(chǎn)日期為2020-09-18，有效期至2023 年8 月，說明書推薦服用劑量為10 mg·d-1。

樣品1 和樣品2 用無(wú)菌水配制成不同劑量的受試物，供實(shí)驗(yàn)用，以下簡(jiǎn)稱“樣品”；陽(yáng)性對(duì)照物用無(wú)菌水配制。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼料

選用140～160 g健康SPF級(jí)雄性SD大鼠共108只。本研究所使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（京）2017-0038。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵守了相關(guān)法規(guī)和倫理要求，確保動(dòng)物的福利與權(quán)益得到充分尊重和保護(hù)。

本實(shí)驗(yàn)采用的高脂飼料配方為1.2%膽固醇、15%豬油、20%糖和0.2%膽酸鈉。飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn)，許可證號(hào)為SCXK（京）2019-00081。通過高脂飼料可模擬高脂飲食對(duì)動(dòng)物體內(nèi)脂質(zhì)代謝和膽固醇水平的影響，以便更好地研究相關(guān)的生理效應(yīng)和機(jī)制。

1.4 方法

1.4.1 輔助降血脂實(shí)驗(yàn)方法

選取健康合格的雄性SD 大鼠108 只，分為空白對(duì)照組與模型組，其中空白對(duì)照組12 只大鼠給予維持飼料，模型組96 只大鼠給予高脂飼料。兩周后對(duì)空白對(duì)照組和模型組大鼠通過不禁食的方式進(jìn)行采血，采血后制備血清和血漿進(jìn)行甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（High Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）[5]與凝血4 項(xiàng)即凝血酶原時(shí)間（Prothrombin Time，PT）、活化部分凝血酶原時(shí)間（Activated Partial Thromboplastin Time，APTT）、凝血酶時(shí)間（Thrombin Time，TT）、纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)IB）的檢測(cè)。將模型組按總膽固醇水平進(jìn)行隨機(jī)分組，分別為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、樣品1 低劑量組、樣品1 中劑量組、樣品1 高劑量組、樣品2 低劑量組、樣品2 中劑量組和樣品2高劑量組。給予陽(yáng)性對(duì)照組，樣品1 和樣品2 低、中、高7 個(gè)劑量組高脂飼料并通過灌胃給藥的方式給予不同劑量的受試物；模型對(duì)照組給予高脂飼料、空白對(duì)照組給予維持飼料，兩組也以灌胃的方式給予相應(yīng)體積的無(wú)菌水。給予受試物45 d 后在不禁食的情況下取血，對(duì)各組大鼠的血脂4 項(xiàng)指標(biāo)（TG、HDL-C、TC、LDL-C）和血凝4 項(xiàng)指標(biāo)（PT、APTT、TT、FIB）進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 血脂4 項(xiàng)的測(cè)定方法

取靜脈血，按3 333 r·min-1離心10 min 的要求制備血清，通過全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.4.3 血凝4 項(xiàng)的測(cè)定方法

取靜脈血制備血漿，用全自動(dòng)血凝儀進(jìn)行測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，各組均數(shù)間無(wú)顯著性差異；F值≥F0.05，P≤0.05，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組組間比較采用兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)變量轉(zhuǎn)換，若滿足正態(tài)或方差齊要求，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊，用秩和檢驗(yàn)對(duì)原數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般觀察

在開展實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠的外觀體征、分泌物、排泄物、行為活動(dòng)、呼吸和精神狀態(tài)等未發(fā)現(xiàn)異常情況。

2.2 受試物對(duì)SD 大鼠體重的影響

由表1 可見，大鼠給受試物前各組初始體重組間比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），大鼠給受試物后各組體重組間比較也均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），即給予大鼠樣品1 和樣品2 并未觀察到對(duì)其體重產(chǎn)生不良影響的情況。這表明在實(shí)驗(yàn)條件下，這兩個(gè)樣品對(duì)大鼠的體重?zé)o明顯的負(fù)面影響。

表1 受試物對(duì)高脂血癥大鼠體重的影響表（±s）

表1 受試物對(duì)高脂血癥大鼠體重的影響表（±s）

2.3 樣品對(duì)SD 大鼠血脂4 項(xiàng)指標(biāo)的影響

如表2 所示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組動(dòng)物的總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇上升，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01 或0.05），判定模型成立。與模型對(duì)照組比較，樣品1 高劑量組可使高血脂模型大鼠的TC 降低（P＜0.05），各劑量組的TG、LDL-C、HDL-C 均無(wú)顯著變化；樣品2 高劑量組能使高血脂模型組大鼠的TC 含量（P＜0.05）和TG 含量（P＜0.05）降低，各劑量組的LDL-C、HDL-C 均無(wú)顯著變化。因此，高劑量組的樣品1 和樣品2 均有降低高血脂模型大鼠的TC、輔助降低血脂的作用。

表2 給藥后樣品1 和樣品2 對(duì)高脂血癥大鼠血清各項(xiàng)指標(biāo)的影響表（±s）

表2 給藥后樣品1 和樣品2 對(duì)高脂血癥大鼠血清各項(xiàng)指標(biāo)的影響表（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，“#”表示P ＜0.05，“##”表示P ＜0.01；與模型對(duì)照組比較，“*”表示P ＜0.05，“**”表示P ＜0.01。下同。

2.4 樣品對(duì)SD 大鼠凝血4 項(xiàng)指標(biāo)的影響

如表3 所示，經(jīng)口給予大鼠不同劑量的樣品1 與樣品2 在45 d 后與空白對(duì)照組比較，各劑量組血凝4 項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），即樣品1 和樣品2 對(duì)高血脂模型大鼠血凝4 項(xiàng)指標(biāo)無(wú)影響。

表3 給藥后樣品1 和樣品2 對(duì)高脂血癥大鼠凝血4 項(xiàng)指標(biāo)的影響表（±s）

表3 給藥后樣品1 和樣品2 對(duì)高脂血癥大鼠凝血4 項(xiàng)指標(biāo)的影響表（±s）

3 結(jié)論與討論

隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，人們的生活方式與生活水平發(fā)生了明顯變化。當(dāng)前，人口老齡化越來(lái)越嚴(yán)重導(dǎo)致居民生活方式不健康問題日益突出，心血管疾?。–ardiovascular Disease，CVD）危險(xiǎn)因素對(duì)居民健康的影響變得更加明顯，CVD 患病率和發(fā)病率不斷增長(zhǎng)。根據(jù)2019 年的數(shù)據(jù)[6]，城市地區(qū)和農(nóng)村地區(qū)CVD 導(dǎo)致的死亡人數(shù)分別占總死亡人數(shù)的44.26%和46.74%。根據(jù)歐洲食品安全局在2018 年發(fā)布的科學(xué)意見[7]，心血管健康功能聲明涵蓋了多個(gè)方面，包括降低血脂、降低血壓、改善內(nèi)皮功能以及減少血小板聚集效應(yīng)等。其中，降血脂和減少血小板聚集都是維護(hù)心血管健康的有效手段。

人體內(nèi)大約1/3 的總膽固醇來(lái)自食物，剩下的2/3則分別由肝臟和小腸合成。膽固醇的合成過程有25 種酶的參與，其中羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶催化生成甲羥戊酸（MVA）被認(rèn)為是最為關(guān)鍵的一步。該步驟在膽固醇生物合成途徑中發(fā)揮著重要的作用，并且對(duì)維持膽固醇的正常水平具有重要意義。經(jīng)一系列步驟，甲羥戊酸可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為膽固醇以及其他相關(guān)產(chǎn)物，此過程中的酶催化反應(yīng)起著至關(guān)重要的作用。莫納可林可通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制體內(nèi)膽固醇合成途徑中的限速酶HMG-CoA 還原酶，達(dá)到降低膽固醇含量的效果。紅曲中所含的天然莫納可林K 無(wú)須依賴體內(nèi)的羥基酸酯酶進(jìn)行水解，可以直接發(fā)揮降脂作用。這種特點(diǎn)使得莫納可林具有良好的降脂效果，并且不會(huì)增加肝臟和腎臟的負(fù)擔(dān)，副作用較小。多項(xiàng)臨床研究證明[8-10]，攝入水溶性番茄濃縮物后，可以減少血小板的聚集，從而使血液保持流動(dòng)且不易凝結(jié)。這有助于預(yù)防血液中微小凝塊的形成，并防止血小板黏附在血管壁或脂肪斑上。此外，番茄濃縮物中含有綠原酸和黃酮等物質(zhì)，可以抑制低密度脂蛋白的氧化過程，進(jìn)而降低膽固醇水平。紅曲和番茄濃縮物復(fù)配既能輔助降低血脂水平，又能抑制血小板聚集，因此可降低心血管風(fēng)險(xiǎn)。不影響正常的血小板凝血功能是血小板聚集功能的重要安全性指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)中觀察了水溶性番茄濃縮物及其與紅曲復(fù)配對(duì)凝血功能的影響，結(jié)果表明，水溶性番茄濃縮物及其與紅曲復(fù)配均對(duì)凝血功能沒有影響，進(jìn)一步驗(yàn)證了其具有輔助降血脂的功效且對(duì)凝血功能無(wú)影響。