調(diào)脾增食顆粒對幼齡厭食大鼠血漿β-EP及CCK-8的影響

梁 雪,李會影,于映霞

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院·吉林 長春 130021)

小兒厭食癥是兒科常見的脾胃系統(tǒng)疾病,指小兒較長時間見食不貪、食欲不振、甚至拒食的一種病癥[1]。調(diào)脾增食顆粒是本院兒科治療小兒厭食癥的臨床經(jīng)驗方,臨床應(yīng)用療效確切。本研究旨在探討調(diào)脾增食顆粒對幼齡厭食模型大鼠血漿β-內(nèi)腓肽(β-EP)及膽囊收縮素(CCK-8)的影響,為將其開發(fā)為中藥新藥提供實驗數(shù)據(jù)。

1 實驗材料

1.1 藥物 調(diào)脾增食顆粒由雞內(nèi)金、藿香、神曲、麥芽、山楂、砂仁等中藥組成;性狀：棕褐色顆粒,味微苦;批號：20221024;由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室生產(chǎn);每g藥膏相當于3.02 g生藥。健胃消食片：江中藥業(yè)股份有限公司;批號：23052072。

1.2 實驗動物 封閉群,35～40日齡健康幼齡SD大鼠,SPF級,雌雄各半,體質(zhì)量60～80 g,由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供;實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK-(遼)2020-0001,實驗動物使用許可證號：SYXK(吉)2022-0004。

1.3 試劑和儀器 β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒及CCK-8細胞活力檢測試劑盒：南京建成生物工程研究所。ST-360酶標儀：上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司。

2 實驗方法

2.1 動物分組、造模及給藥 選取60 只幼齡SD大鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,根據(jù)體質(zhì)量,隨機分為6 組,正常對照組、模型對照組、調(diào)脾增食顆粒高、中、低劑量組及陽性對照組,每組10只。正常對照組喂常規(guī)鼠飼料,其余各組采用南京中醫(yī)藥大學(xué)汪受傳等的造模方法[2],用特制高蛋白高脂飼料(魚松、奶粉、玉米粉、黃豆粉、白糖、鮮雞蛋、鮮肥豬肉按1∶1∶2∶1∶1∶1.8∶2 比例配制),喂飼幼齡大鼠7 d,建立厭食癥大鼠模型。攝食量低于正常對照組大鼠攝食量的 20%～30%、平均體質(zhì)量低于正常對照組大鼠體質(zhì)量的10%～15%,表示造模成功。從造模第8 天開始灌胃給藥,正常對照組和模型對照組給予蒸餾水,調(diào)脾增食顆粒高、中、低劑量組分別以33.86、16.93、8.47 g/(kg·d)灌胃,分別為2 倍臨床等效劑量、臨床等效劑量及1/2臨床等效劑量,陽性對照組大鼠給予健胃消食片0.675 g/(kg·d)灌胃,均連續(xù)給藥4 周。

2.2 觀察指標

2.2.1 進食量 記錄大鼠每周進食量。

2.2.2 血漿β-EP及CCK-8檢測 給藥結(jié)束24 h后,采用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠。采血前每管加抑肽酶 30 uL和10%EDTA-Na30 μL。腹主動脈取血后注入上述管內(nèi),充分搖勻并置于-4 ℃的冰箱,3 h內(nèi) 4 000 r/min 低溫離心 10 min,分離血漿,于-70℃保存待測。按照試劑盒說明方法檢測大鼠血漿β-EP及CCK-8的含量。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理和分析,計量資料以(均數(shù)±標準差)表示,多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠進食量比較 見表1。

表1 各組大鼠每周進食量比較周)

3.2 各組大鼠血漿β-EP及CCK-8含量比較 見表2。

表2 各組大鼠血漿β-EP及CCK-8含量比較

4 討論

小兒厭食癥是一種慢性消化功能紊亂綜合征,厭食日久,對兒童的生長發(fā)育有嚴重影響。兒童攝食行為與多種肽類激素直接相關(guān);其中,β-內(nèi)啡肽(β-EP)作為肽類激素,在參與攝食調(diào)控的過程中發(fā)揮著重要作用[3];膽囊收縮素(CCK-8)也是一種參與胃腸功能調(diào)節(jié)的重要激素,具有明顯的抑制食欲的作用,直接導(dǎo)致病理性的攝食減少[4]。調(diào)脾增食顆粒是本院兒科基于化積醒脾法治療小兒厭食癥的臨床經(jīng)驗方,方中雞內(nèi)金和藿香同為君藥,雞內(nèi)金味甘,性平,能消食化積,健運脾胃,擅治各種食積;藿香辛,微溫,歸脾、胃、肺經(jīng),醒脾開胃,增進飲食。神曲味甘辛,行散消食,健胃和中;麥芽味甘,性平,行氣消食,健脾開胃;山楂酸甘,微溫,可消食化積,三者合用,可化谷、面、肉諸積,并助君藥以增消食化積、健脾開胃之功。砂仁味辛,性溫,氣味芳香,可暖肺醒脾,養(yǎng)胃益腎,行氣和中;石菖蒲辛苦而溫,芳香而散,擅化濕濁、醒脾胃、行氣滯、消脹滿;陳皮味辛苦,性溫,理氣醒脾,疏利中、上二焦氣機;此三者亦為臣藥,共助醒脾開胃之效。當歸補血活血,以消瘀滯;佛手入脾胃經(jīng),理氣和胃;石斛可養(yǎng)脾胃陰津,使諸藥辛而不燥;連翹清熱散結(jié)以消食積之熱;共為佐藥。諸藥合用,使食積去,脾胃復(fù),標本兼治,共奏化積醒脾之功效。該方治療小兒厭食癥療效確切,受到廣大患兒和家長的普遍認可。

本文研究結(jié)果表明,調(diào)脾增食顆粒高劑量組第3 周和第4 周的進食量明顯高于模型對照組,差異具有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。調(diào)脾增食顆粒中劑量組第3周和第4周的進食量略高于模型對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較,調(diào)脾增食顆粒高劑量組大鼠的血漿β-EP含量明顯升高,CCK-8含量明顯降低,差異具有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);調(diào)脾增食顆粒中劑量組大鼠的血漿β-EP含量升高及CCK-8含量降低,與模型組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。由此可見,調(diào)脾增食顆粒治療厭食癥與調(diào)節(jié)血漿β-EP及CCK-8的分泌與釋放的有關(guān)。