費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機采集外周血干細胞懸液成分分析

沙立超 天津市第一中心醫(yī)院 （天津 300110）

內(nèi)容提要： 目的：分析某型血細胞分離機在外周血干細胞采集中的應用效果。方法：從2023年3月23日～2023年5月31日在本院接受造血干細胞移植的患者中抽取24例進行研究，所有患者全部使用血細胞分離機獲取外周血干細胞懸液，記錄血小板、紅細胞、白細胞、血紅蛋白以及CD34+等血細胞參數(shù)，而后再采集患者外周血同樣分析上述血細胞參數(shù)，明確相關(guān)設(shè)備的采集效果。結(jié)果：相較于外周血，外周血干細胞懸液CD34+、白細胞計數(shù)、血紅蛋白以及血小板水平更高。結(jié)論：使用費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機對外周血進行處理能夠采集到更符合造血干細胞移植需求的外周血干細胞懸液，應用該設(shè)備可優(yōu)化外周血干細胞參數(shù)，有助于進一步強化造血干細胞移植的整體治療效果。

從性質(zhì)上看造血干細胞分化程度相對較低，其具有分化成不同類型免疫細胞和造血細胞的潛能。造血干細胞移植的本質(zhì)是先通過放療或化療清除患者體內(nèi)異常血細胞，然后移植匹配的造血干細胞來重建患者造血功能和免疫功能。由于造血干細胞分化程度較低，因此其再生能力相對較強，分化潛力也相對較高，成功進行造血干細胞移植后，患者將以移植的造血干細胞為基礎(chǔ)，通過細胞的自我復制和自我更新來逐漸恢復自體造血功能。以往臨床工作中骨髓移植是造血干細胞移植的主要形式，而隨著外周血干細胞培養(yǎng)和血細胞分離技術(shù)的不斷發(fā)展，外周血干細胞移植受到廣泛關(guān)注，相較于骨髓移植，外周血干細胞采集難度相對較低，采集過程中患者承受的痛苦相對較小且無須全身麻醉，各類并發(fā)癥風險也得到較好控制。從受者角度看，外周血干細胞移植后患者自身造血功能恢復速率相對較快，而且整體治療周期短、治療費用低，因此外周血造血干細胞移植應用范圍不斷擴大。根據(jù)當前臨床實踐情況來看，通過細胞動員后采集到的外周血干細胞水平仍舊偏低，這在很大程度上影響了移植效果[1]。血細胞分離機是一種利用血細胞密度差進行分離提取的設(shè)備，使用此類設(shè)備對外周血進行分離采集，能夠進一步優(yōu)化血細胞參數(shù)、獲取更多干細胞。費森尤斯卡比是一家在血液治療領(lǐng)域頗具影響力的多元化醫(yī)療企業(yè)，其所生產(chǎn)的COM.TEC血細胞分離機，其具有功能完備、分離效率高、安全性強等多種優(yōu)勢，該型設(shè)備在國內(nèi)相關(guān)方向臨床工作中應用極為廣泛，設(shè)備品質(zhì)得到一致認可。為進一步明確相關(guān)設(shè)備在外周血干細胞移植中的應用價值，本文將采取分組對照分析的形式進行研究。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

所有患者均取自2023年3月23日～2023年5月31日在本院接受造血干細胞移植的患者，患者數(shù)共計24例，以外周血和設(shè)備采集前患者血細胞參數(shù)作為對照組，以外周血干細胞懸液以及采集后患者血細胞參數(shù)作為觀察組。24例患者中女11例，男13例，患者年齡21～62歲，平均（38.75±7.52）歲。24例患者中包括異基因造血干細胞移植20例以及自體干細胞移植4例，異基因造血干細胞移植患者情況如下：女性患者9例，包括骨髓增生異常綜合征2例，急性髓系白血?。ü撬柙錾惓＞C合征轉(zhuǎn)化）1例，急性髓系白血病3例，原發(fā)性骨髓纖維化1例，急性淋巴細胞白血病2例。男性患者11例，包括再生障礙性貧血1例，急性淋巴細胞白血病2例，急性白血病1例，急性髓系白血病4例，骨髓增生異常綜合征3例。自體干細胞移植患者4例，其中男性患者2例，包括套細胞淋巴瘤1例，惡性淋巴瘤1例。女性患者2例，包括彌漫大B細胞淋巴瘤1例，原發(fā)縱隔大B細胞淋巴瘤1例。所有納入病例均了解且同意參與本次研究，相關(guān)資料呈報倫理委員會獲批，分組情況具有組間比較價值。

納入標準：結(jié)合臨床診斷擬采取外周血干細胞移植的患者。排除標準：基礎(chǔ)疾病嚴重且控制不佳者、原發(fā)疾病緩解程度不滿足移植需求者。

1.2 方法

所有患者均在外周血采集前先行細胞動員，過程中對基礎(chǔ)血細胞參數(shù)進行監(jiān)控，達標后使用費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機對外周血進行采集分離處理。選擇MNC程序（半自動采集程序）并準備相關(guān)耗材，其中包括PIYA、抗凝劑、生理鹽水以及穿刺針。采集外周血前分析患者血細胞壓積，≥25%時可正常采集，低于這一數(shù)值應先輸入紅細胞予以改善。設(shè)備開機后按“繼續(xù)”按鈕選擇程序，使用操作鍵盤上的方向鍵將選擇光標移至Leukocyte-Apheresis并確定，次級程序選擇MNC。根據(jù)系統(tǒng)提示安裝分離套件，過程中不灌注鹽水溶液，也不連接ACD，操作界面顯示Install set后依次關(guān)閉白色夾子（4個）和紅色夾子（1個），而后對管路進行調(diào)整，以6號夾為基準，滴室管路在右、濃縮物袋管路在左。在進行管路預沖前連接鹽水和抗凝劑，按下準備完成按鍵進行報警系統(tǒng)測試，排除報警系統(tǒng)故障后執(zhí)行預沖作業(yè)[2]。系統(tǒng)提示預充完畢后檢查耗材管路內(nèi)的氣體殘留量，正常則按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序，過多則進行二次預充。完成預沖后進行分離設(shè)置，檢查回輸管路情況，關(guān)閉該管路上的藍色夾子并將鹽水控制閥調(diào)至50%并按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序。打開回輸管路上的藍色接頭（位于兩藍色夾子中間），連接采血針并排除管路中的空氣，打開鹽水管線上的夾子檢查鹽水灌注情況，確認無異常情況后按繼續(xù)鍵執(zhí)行下一程序。根據(jù)系統(tǒng)提示輸入患者基礎(chǔ)信息，包括性別、身高、體重、術(shù)前白細胞濃度、紅細胞壓積以及CD34+計數(shù)，按確定鍵繼續(xù)輸入下一項參數(shù)。每循環(huán)血量、白膜泵出量以及白膜收集量可使用系統(tǒng)默認值也可通過觀察白膜具體情況在一定程度上進行加減調(diào)節(jié)，設(shè)置完成后，按確定鍵進入過程參數(shù)菜單，此部分需要設(shè)置的參數(shù)主要包括全血流速、離心機轉(zhuǎn)速以及抗凝劑比例三項，全血流速一般設(shè)置為60mL/min，離心機轉(zhuǎn)速一般設(shè)置為1400r/min（注意觀察白膜形成情況前期可適當調(diào)低），抗凝劑比例需根據(jù)處理全血量與患者總血容量比例進行調(diào)節(jié)，確認參數(shù)設(shè)置無誤后按確認鍵保存設(shè)置。進入分離程序后，按下開始按鈕執(zhí)行分離程序，分離完畢后根據(jù)分離需求和實際分離情況選擇完成分離或繼續(xù)分離，如需繼續(xù)分離則按“選項”按鍵，在其中找到繼續(xù)分離選項再次執(zhí)行分離程序。完成分離后進行回輸，在切斷采血管路后將紅色滾輪開度調(diào)至100%，檢查鹽水管路并使其復原，確認鹽水量充足后，按下回輸開始按鈕，程序執(zhí)行完畢后，根據(jù)實際情況選擇進一步回輸或停止回輸。最后斷開患者連接，取下分離好的外周血干細胞懸液以及耗材，記錄系統(tǒng)匯總參數(shù)后執(zhí)行關(guān)機操作（如需執(zhí)行下一次操作可在記錄完各項數(shù)據(jù)后按下復位鍵）。以常規(guī)方法少量采集患者外周血，使用流式細胞儀分析外周血干細胞懸液和外周血各項數(shù)據(jù)，包括CD34+、單核細胞、紅細胞、白細胞及血小板相關(guān)參數(shù)[3]。

1.3 觀察指標與判定標準

對比分析外周血和外周血干細胞懸液中CD34+、單核細胞、紅細胞、白細胞以及血小板參數(shù)。同時對采集前后患者血小板計數(shù)、紅細胞壓積、血紅蛋白水平以及白細胞計數(shù)進行分析。根據(jù)造血干細胞移植需求和采集前后患者血細胞參數(shù)變化情況對費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機外周血干細胞采集效果進行分析，外周血與外周血干細胞懸液對比時CD34+絕對計數(shù)、CD34+細胞占比、單核細胞占比、白細胞及血小板絕對計數(shù)越高代表其與造血干細胞移植需求契合度越高。此外對比采集前后患者血小板、血紅蛋白、白細胞幾項參數(shù)，如采集后參數(shù)下降則代表設(shè)備分離效果較好。

1.4 統(tǒng)計學分析

2.結(jié)果

常規(guī)采集的外周血血細胞參數(shù)與血細胞分離機采集的外周血干細胞懸液血細胞參數(shù)對比情況如表1所示。

表1.患者兩組樣本血細胞參數(shù)對比(n=24,±s)

表1.患者兩組樣本血細胞參數(shù)對比(n=24,±s)

組別CD34+絕對計數(shù)(個/μL)CD34+占比(%)單核細胞占比(%)白細胞計數(shù)(×1012/L) 血小板計數(shù)(×109/L)觀察組453.71±99.57 0.32±0.08 21.07±1.51 186.75±29.77 237.57±38.79對照組39.59±30.77 0.13±0.04 5.88±1.32 42.55±10.98 129.74±31.32 t 19.4669 10.4067 37.1035 22.2358 10.5956 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

患者使用費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機采集外周血干細胞懸液前后血細胞參數(shù)情況如表2所示。

表2.患者使用血細胞分離及采集外周血干細胞懸液前后血細胞參數(shù)對比情況(n=24,±s)

表2.患者使用血細胞分離及采集外周血干細胞懸液前后血細胞參數(shù)對比情況(n=24,±s)

組別血小板(×109/L) 血紅蛋白(g/L) 白細胞計數(shù)(×109/L)觀察組114.79±8.01 100.03±7.79 3.07±0.66對照組128.27±15.94 115.57±11.88 3.99±0.89 t 3.7018 5.3589 4.0676 P＜0.01＜0.01＜0.01

3.討論

我國血液病患者基數(shù)大、患者分布和患者病情都相對復雜，從當前實際情況看，我國血液病患者中相當一部分有造血干細胞移植需求，已經(jīng)實施造血干細胞移植術(shù)和等待實施手術(shù)的患者數(shù)量相對較多。造血干細胞是造血細胞和免疫細胞的始祖細胞，其分化程度相對較低，可以根據(jù)實際需求進一步發(fā)展為各種不同類型的造血細胞或免疫細胞，由于其具有強大的自我復制和再生能力，因此相當一部分因血液疾病導致自身造血功能和免疫功能受損的患者可通過自體或異體造血干細胞移植的形式進行治療[4]。

所有患者在接受造血干細胞移植前均需根據(jù)病情接受較高劑量的放化療處理，在確保全面清除患者體內(nèi)異常細胞的基礎(chǔ)上移植正常的造血干細胞并使其在患者體內(nèi)不斷復制再生進而達到恢復患者造血功能和免疫功能的效果[5]。造血干細胞主要存在于骨髓之中，因此骨髓移植是既往較長一段時間內(nèi)造血干細胞移植的主要形式[6]。人體外周血內(nèi)造血干細胞數(shù)量很少，因此無法直接從外周血中提取干細胞進行移植，但研究發(fā)現(xiàn)可以通過藥物刺激的形式來提升外周血造血干細胞數(shù)量，這為外周血干細胞移植奠定了實施基礎(chǔ)。相較于骨髓移植，外周血干細胞移植具有多方面優(yōu)勢，即采集過程痛苦少而且整體治療費用也相對較低，但外周血干細胞移植也面臨一些問題，常規(guī)細胞動員后獲取的外周血中CD34+參數(shù)相對較低，單核細胞占比、血小板計數(shù)、血紅蛋白以及白細胞等基礎(chǔ)參數(shù)也相對一般，而這些都在一定程度上限制了移植治療效果，因此當前臨床工作中常采用血細胞分離機來對外周血進行分離，處理優(yōu)化外周血干細胞成分[7]。

費森尤斯卡比COM.TEC血細胞分離機屬該公司第3代血液技術(shù)產(chǎn)品，從技術(shù)參數(shù)上看，其具有細胞采集效率高、體外循環(huán)血量低、體外循環(huán)全血流速慢以及安全系統(tǒng)完備等優(yōu)勢。CD34+是重要的干細胞評價指標，單從這一指標上看COM.TEC的采集率達92%，而同類產(chǎn)品此方向細胞采集效率僅為60%左右，這說明該設(shè)備在外周血干細胞采集方面具有顯著的技術(shù)優(yōu)勢[8]。而且從整個操作流程上看該設(shè)備具有自動化程度高、人工參數(shù)設(shè)置需求相對較低的特點，在細胞分裂過程中，其采取連續(xù)式處理技術(shù)和全封閉式一次性管路，不僅自動化水平高，而且在需要人為干預的步驟上，還有全面的信息提示[9]。體外循環(huán)血量是評價血細胞分離機安全性的重要參數(shù)，COM.TEC能夠?qū)Ⅲw外循環(huán)血量控制在180mL以內(nèi)，而同類型產(chǎn)品普遍在190～300mL，這也凸顯了該設(shè)備的安全優(yōu)勢。從本文研究結(jié)果上看，應用血細胞分離機采集外周血干細胞效果顯著，各項血細胞參數(shù)均優(yōu)于直接采集外周血，其采外周血干細胞懸液CD34+兩項參數(shù)明顯高于外周血，單核細胞占比、紅細胞計數(shù)、血小板計數(shù)等也優(yōu)于外周血，且采集前后患者多項血細胞參數(shù)有明顯變化，這說明該設(shè)備能夠顯著優(yōu)化外周血干細胞成分，其在外周血干細胞移植方面的應用價值值得肯定。