綿羊胚胎移植技術

費椿堯

（甘肅省定西市安定區(qū)畜牧技術推廣站，甘肅 定西 743000）

1 移植前準備

1.1 供體母羊與受體母羊 選擇供體母羊應考慮其健康狀況、妊娠史、遺傳性狀等，要求母羊在2～4 周歲內(nèi)，具有較大的群體基數(shù)，以提升觀察發(fā)情期的準確性。供體母羊膘情在70%左右，不宜過瘦，也不宜過肥。如果供體母羊處于哺乳期，必須提前斷奶30 d，期間加強飼養(yǎng)管理，促進身體恢復。

受體母羊不需考慮遺傳性狀因素，只需要保證健康，繁殖性能良好即可。

1.2 胚胎移植季節(jié) 羊的發(fā)情周期會受外界環(huán)境的影響，尤其是氣候條件的影響，氣溫、光照等條件的變化都會擾亂羊的發(fā)情周期。綿羊的發(fā)情周期具有明顯的季節(jié)性，秋季是綿羊的發(fā)情季節(jié)，此時綿羊卵巢機能活躍度不斷上升，卵泡發(fā)育成熟，會表現(xiàn)出發(fā)情的特征。其他季節(jié)綿羊卵巢機能下降，卵泡不發(fā)育，不會表現(xiàn)出發(fā)情狀態(tài)。胚胎移植選擇在綿羊發(fā)情季節(jié)進行效率更高。

1.3 供體羊授精 種公羊撤拴后隔離12 h再放入母羊群。此時處于發(fā)情期的母羊會與其進行交配，記錄人員只需要記錄交配羊的信息即可。完成一次交配后8 h 左右，再放入種公羊進行一次交配，直到母羊不再接受爬跨，以提升母羊受孕率。除采用自然交配方法，還可采用人工授精方法,如應用腹腔鏡授精，直接將種公羊的精液輸入母羊子宮角內(nèi)，使母羊受孕率更高。保險起見，間隔12 h后可重新進行一次人工授精。

1.4 藥品與手術工具 進行綿羊胚胎移植前準備好各種藥品以及手術工具。藥物的生產(chǎn)廠家應可靠，有效成分、含量準確合理。經(jīng)過了實驗驗證的藥品，整體性能更加穩(wěn)定。相關藥品包括腎上腺素、普魯卡因、FSH（垂體促卵泡素）、PMSG（孕馬血清促性腺激素）及常規(guī)的消毒液、止血藥等。手術工具用前進行消毒，相關的手術工具包括外科手術剪、止血鉗、鑷子、縫合針及保定架等。

1.5 超數(shù)排卵 綿羊發(fā)情期內(nèi)，通過注射一些激素藥物，如上述FSH、PMSG，搭配陰道孕酮栓，降低羊發(fā)育卵泡的閉鎖率，增加發(fā)育成熟卵泡的數(shù)量，讓羊在發(fā)情周期內(nèi)排出更多的成熟卵子。

1.6 同期發(fā)情 綿羊胚胎移植需要供體羊與受體羊身體情況保持一致，二者能夠同期發(fā)情。一般情況下，二者發(fā)情時間越接近，胚胎移植成功率越高。胚胎移植后，所處的子宮環(huán)境與原子宮環(huán)境盡可能一致，胚胎才能更好地適應新的子宮環(huán)境，并繼續(xù)生長發(fā)育，最終順利產(chǎn)出。應用同期發(fā)情方法目前有兩種形式，一種是延長黃體期，常用的方法包括孕酮直接注射法、小管埋植法等，二是縮短黃體期，可以采用氯前列烯醇等藥物。

2 手術

2.1 準備工作 術前供體母羊、受體母羊禁食24 h，術前2 h禁止飲水。采用保定手術架對羊進行保定，羊處于仰臥體位，頭傾斜向下45°～60°，將四肢捆綁牢固，避免手術時劇烈晃動。完成保定后備皮，備皮位置在羊乳房周圍的腹部區(qū)域，先用肥皂水清洗，再將羊毛刮凈，最后噴灑酒精進行消毒。備皮位置覆蓋手術創(chuàng)巾，創(chuàng)巾用專用創(chuàng)巾鉗固定。

在羊的乳靜脈與腹中線區(qū)域切開皮膚以及連帶的筋膜，然后用手術刀鈍頭一端將羊的腹直肌分離，露出腹股溝管位置。從該位置剖開羊的腹腔，注意切口不宜過大，否則不僅影響后續(xù)的傷口縫合，還會延長傷口愈合時間，增加術后感染風險。打開腹腔后，用食指與中指在羊的骨盆腔、膀胱周圍進行摸索，找出子宮的位置，然后輕輕勾住子宮體，將子宮連帶卵巢拉出，檢查黃體的位置以及卵泡的大小，并做好信息記錄。

2.2 沖胚 沖胚常用輸卵管法和子宮角沖胚法。采用輸卵管法時，從輸卵管傘部喇叭口入手，插入頭皮針，插入深度為2～3 cm，然后用鈍圓夾子進行固定。沖卵管的一端連接頭皮針，另一端與集卵器連接，然后用消毒注射器吸取5～10 mL左右的沖卵液，一只手捏緊羊的子宮角，另一只手推動注射器，將沖卵液注入集卵器。這種沖胚方法的優(yōu)點是可提升卵的回收率，需要的沖卵液也較少，缺點是易出現(xiàn)輸卵管傘部粘連問題。

應用第二種方法時，需用腸鉗將羊的子宮角分叉位置夾住，然后用注射器吸入15～30 mL 沖卵液，再將沖卵針頭插入子宮角尖端，并將針頭與注射器進行連接，最后完成沖卵液的注入。隨著沖卵液注入量增加，子宮角逐步撐大、膨脹，然后用沖卵針頭插入腸鉗上方，將沖卵液輸入集卵杯內(nèi)。采用同法對另一側子宮進行沖卵。這種沖胚方法的優(yōu)點是可減少對輸卵管的損傷，缺點是胚胎回收率較低。

2.3 胚胎鑒別 完成沖胚后需要鑒別胚胎是否可以正常發(fā)育。如果發(fā)現(xiàn)胚卵裂球輪廓清晰，球體飽滿、自然，表面光滑，表明是優(yōu)質可用胚胎。如果胚卵裂球輪廓模糊，球體干癟，表面有毛邊，表明是劣質胚胎，不適合進行胚胎移植。

2.4 胚胎移植 綿羊胚胎移植有兩種方法可供選擇。

2.4.1 常規(guī)手術法 打開綿羊腹腔，掏出子宮與卵巢后，檢查黃體發(fā)育狀況，采用鈍形針頭對受體綿羊子宮角進行穿孔處理，然后將移植管通過子宮角的孔洞插入宮腔，通過移植管向受體羊子宮內(nèi)注射胚胎，最后將子宮復位，并進行縫合。

2.4.2 腹腔鏡法 即在腹腔鏡的幫助下找到子宮后，從另一側入手，將移植針插入腹腔直達子宮，完成胚胎注射。與第一種方法相比，其操作更簡單，但要求操作人員具備豐富的經(jīng)驗，可以準確找出子宮的位置，并選擇恰當?shù)奈恢貌迦胍浦册槨?/p>

完成胚胎移植后進行縫合，縫合要仔細，加強對子宮的保護?？p合前做好檢查工作，然后采用2 層縫合法進行縫合，即縫合肌肉層后在縫合創(chuàng)口處撒一些青霉素、鏈霉素粉預防感染，再縫合皮膚層，最后用碘酒對縫合處進行消毒。如發(fā)生術后感染，需要重新縫合。重新縫合時，先用消毒紗布擦掉感染后產(chǎn)生的膿液，再用生理鹽水對感染部位進行沖洗，最后進行全層間斷縫合。完成縫合后，在感染處注入用蒸餾水稀釋的青霉素、鏈霉素防重復感染，后續(xù)加強觀察，做好抗感染工作，直到傷口愈合。

3 術后管理

3.1 術后飼養(yǎng)管理 供體羊與受體羊術后加強飼養(yǎng)管理，初期給予溫飲水，并提供易消化的飼料，隨著羊體逐漸恢復，可逐步補充一些全價飼料。飼料循序漸進添加，避免造成過食現(xiàn)象。術后可驅趕羊只適當運動，并加強觀察，以及時發(fā)現(xiàn)異常情況。術后羊飼料中加入維生素，提升免疫能力，促進傷口愈合。只有保障羊只體況良好，移植的胚胎才能繼續(xù)發(fā)育成活。

此外，還應加強返情觀察。返情羊需重新進行移植，防止空懷。如果羊沒有返情，需加強補飼，除飼喂全價優(yōu)質飼料外，可在飼料中加入蛋白質、礦物質等，滿足胚胎成長發(fā)育需求。羊妊娠前期防發(fā)生應激，應營造安靜、舒適的環(huán)境，避免母羊發(fā)生流產(chǎn)，羊舍應寬敞，避免擁擠。

3.2 術后護理 供體羊排卵后，進行消除黃體處理，如進行手術縫合時，可注射前列腺素，預防供體羊卵巢上黃體過多，下一輪發(fā)情受到影響。此外，應等待供體羊自然發(fā)情后再進行下一次配種，如此更有利于供體羊身體恢復。

受體羊手術后，可以注射黃體酮，加強飼喂，以利胚胎著床發(fā)育。

防術后感染必須加強飼養(yǎng)環(huán)境的清理、消毒，可每天給羊注射抗生素，降低術后感染概率。如發(fā)現(xiàn)感染病例，可以延長用藥期，加大用藥量。