灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病診斷中的應(yīng)用

張潤蘭 王何生

【摘要】 目的 探討灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病患者中的診斷價值。方法 選取2020年11月—2022年1月疑似肺結(jié)核患者97例為研究對象，采集入組病例灌洗液，分別采用灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片進行抗酸染色，并在顯微鏡下找到抗酸桿菌為陽性。以羅氏固體培養(yǎng)結(jié)果作為“金標準”，比較灌洗液細胞蠟塊技術(shù)、細胞涂片及二者聯(lián)合在疑似肺結(jié)核患者抗酸桿菌中的檢出率；計算并繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic，ROC），分析不同檢查方法在感染性疾病中的診斷效能。結(jié)果 97例疑似肺結(jié)核患者經(jīng)臨床檢查確診72例，確診率為74.23%。灌洗液細胞蠟塊技術(shù)檢查確診65例，檢查準確度為82.47%（80/97）；灌洗液細胞涂片檢查最終確診60例，檢查準確度為79.38%（77/97）；灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合檢查確診肺結(jié)核70例，檢查準確度為91.75%（89/97）；灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊進技術(shù)聯(lián)合檢查在疑似肺結(jié)核患者中準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預(yù)測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合檢查（P<0.05）。結(jié)論 灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結(jié)核患者中均具有較高的檢出率，且二者聯(lián)合檢查能提高診斷靈敏度與特異度，為臨床診療提供參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 灌洗液細胞蠟塊技術(shù)；灌洗液細胞涂片；肺結(jié)核；診斷價值；感染性疾病

中圖分類號：R363? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）34-0116-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.34.038

肺結(jié)核是一種由結(jié)核分枝桿菌感染引起的呼吸系統(tǒng)傳染病，病灶主要發(fā)生在肺組織、氣管、胸膜部位[1]。常鑫等[2]研究表明，結(jié)核分枝桿菌感染肺部能引起肺結(jié)核，但感染肺結(jié)核患者不一定具備傳染性。同時，多數(shù)患者在結(jié)核分枝桿菌潛伏期無典型的臨床表現(xiàn)，對于活動性肺結(jié)核臨床多表現(xiàn)為咳嗽、咳痰、咯血和乏力等，導(dǎo)致臨床診療難度較大。目前，臨床對于肺結(jié)核的診斷主要依靠患者的癥狀、胸部影像學(xué)檢查、灌洗液細胞涂片、羅氏固體培養(yǎng)等，但是由于患者癥狀及影像學(xué)檢查缺乏特異性，羅氏固體培養(yǎng)耗時較長等，上述方法難以滿足肺結(jié)核的早期、快速診斷要求[3]。灌洗液細胞蠟塊是一種新型的輔助診斷方法，相比于傳統(tǒng)圖片制片技術(shù)更加有效；細胞蠟塊技術(shù)在難以取得組織標本且原發(fā)灶不明患者中，借助細胞蠟塊進行免疫組化染色并完成相應(yīng)抗體的標記，有助于提高細胞學(xué)診斷準確性，但是該技術(shù)在感染性疾病中的診斷效能研究較少[4]。因此，本研究以疑似肺結(jié)核患者為對象，探討灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病患者中的診斷價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年11月—2022年1月疑似肺結(jié)核患者97例為研究對象，其中男性56例，女性41例，年齡19～76歲，平均年齡（59.47±6.32）歲；體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）18～29 kg/m2，平均（22.57±3.41）kg/m2；臨床表現(xiàn)，咳嗽35例，咳痰24例，咯血8例，乏力47例；合并癥，高血壓7例，糖尿病4例，高脂血癥8例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準。

納入標準：參考WS 288—2017《肺結(jié)核診斷標準》[5]中有關(guān)肺結(jié)核相關(guān)標準；羅氏固體培養(yǎng)結(jié)果完整，能配合完成灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片標本采集，患者均可耐受；病情穩(wěn)定，能進行溝通和交流。

排除標準：血液系統(tǒng)疾病、既往結(jié)核病史或中途放棄診斷者；慢性咳嗽或嚴重肝腎功能異常者；器質(zhì)性疾病、血液系統(tǒng)疾病或診斷前使用抗結(jié)核方案治療者。

1.2 方法 羅氏固體培養(yǎng)檢查。（1）檢測方法。將送檢的支氣管灌洗液用相當(dāng)于1～2倍樣本體積的4%NaOH進行處理，羅氏固體培養(yǎng)基和對硝基苯甲酸（p-nitrobenzoic acid，PNB）培養(yǎng)基購自于珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司，操作要嚴格遵循儀器與試劑盒說明書。（2）結(jié)果判定。連續(xù)培養(yǎng)8周無菌生長即報告培養(yǎng)陰性；培養(yǎng)8周后分離到菌株，根據(jù)參考檢驗規(guī)程完成PNB試驗。如果菌株在PNB培養(yǎng)基上生長，則鑒定為非結(jié)核分枝桿菌（nontuberculosis mycobacteria，NTM），反之為結(jié)核分枝桿菌。

灌洗液細胞涂片檢查。（1）細胞涂片抗酸染色。采集入組病例灌洗液進行灌洗液細胞涂片檢查，抗酸染色試劑盒購自于珠海貝索生物技術(shù)有限公司，操作要嚴格遵循儀器與試劑盒說明書。（2）結(jié)果判定。連續(xù)觀察300個不同視野，均未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌視為陰性；連續(xù)觀察300個不同的視野，至少發(fā)現(xiàn)1條抗酸桿菌則為陽性。

灌洗液細胞蠟塊檢查。采用灌洗液細胞蠟塊技術(shù)完成灌洗液檢查，即將采集的灌洗液標本放置在常溫環(huán)境中，靜置30 min，除去上層清液，并將下層液體倒入2支離心管中，如液體為血性液體時，可向液體中加入醋酸乙醇，充分混合均勻；將最終獲得的液體置入離心機中，連續(xù)完成10 min離心，操作完畢后，取出離心管并吸取上層清液。向離心管中加入質(zhì)量分數(shù)為4%的甲醛溶液，充分混合均勻后，將其置于離心機中，連續(xù)進行10 min離心。離心完畢后，吸出上層清液，并濾出管中的沉淀物，經(jīng)脫水處理后，常規(guī)進行石蠟包埋、染色及檢驗，檢測完畢后根據(jù)免疫組化學(xué)技術(shù)完成類別診斷，并在顯微鏡下找到抗酸桿菌為陽性。

以羅氏固體培養(yǎng)結(jié)果作為“金標準”，比較灌洗液細胞蠟塊技術(shù)、細胞涂片及二者聯(lián)合在疑似肺結(jié)核患者抗酸桿菌中的檢出率（檢測準確度）；計算并繪制ROC曲線，分析不同檢查方法在感染性疾病中的診斷效能（靈敏度、特異度、陽性及陰性預(yù)測值）。

1.3 統(tǒng)計分析 采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用百分比表示，行χ2檢驗，計量資料采用x±s表示，行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 灌洗液細胞蠟塊技術(shù)在疑似肺結(jié)核患者中的價值 經(jīng)臨床檢查，97例疑似肺結(jié)核患者中確診72例，確診率為74.23%。灌洗液細胞蠟塊技術(shù)檢查確診65例，檢查準確度為82.47%（80/97），靈敏度為83.33%（60/72），特異度為80.00%（20/25），陽性預(yù)測值為92.31%（60/65），陰性預(yù)測值為62.50%（20/32），見表1。

2.2 灌洗液細胞涂片檢查在疑似肺結(jié)核患者中的價值 灌洗液細胞涂片檢查最終確診肺結(jié)核60例，檢查準確度為79.38%（77/97），靈敏度為77.78%（56/72），特異度為84.00%（21/25），陽性預(yù)測值為93.33%（56/60），陰性預(yù)測值為56.76%（21/37），見表2。

2.3 灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合在疑似肺結(jié)核患者價值 灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合檢查確診肺結(jié)核70例，檢查準確度為91.75%（89/97），靈敏度為93.06%（67/72），特異度為88.00%（22/25）、陽性預(yù)測值為95.71%（67/70），陰性預(yù)測值為81.48%（22/27），見表3。

2.4 不同檢查方法及二者聯(lián)合在疑似肺結(jié)核患者中的效能比較 灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合灌洗液細胞涂片檢查用于疑似肺結(jié)核患者中，檢查準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預(yù)測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)檢查（P<0.05）。灌洗液細胞蠟塊技術(shù)檢查ROC曲線下與坐標軸圍成的面積（area under curve，AUC）為0.783，灌洗液細胞涂片檢查AUC值為0.791，灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合灌洗液細胞涂片檢查AUC值為0.902，不同檢查方法AUC值比較差異具有統(tǒng)計意義（Z=6.492，P<0.05），見表4和圖1。

3 討論

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，能侵及諸多臟器，并以肺部結(jié)核最為常見[6]。ZHONG H等[7]研究表明，肺結(jié)核具有較強的傳染性，且排菌者為重要的傳染源，但人體感染結(jié)核菌后不一定發(fā)病，當(dāng)?shù)挚沽档突蚣毎閷?dǎo)的變態(tài)反應(yīng)增高時才會發(fā)病。羅氏固體培養(yǎng)是疑似肺結(jié)核患者常用的診斷方法，并將其視為“金標準”，能幫助患者早期確診[8]。本研究中，97例疑似肺結(jié)核患者經(jīng)臨床檢查確診72例，確診率為74.23%。從本研究結(jié)果可以看出，羅氏固體培養(yǎng)能提高肺結(jié)核患者檢查確診率，能指導(dǎo)臨床診療，但是該檢查方法所需時間較長，對儀器設(shè)備要求較高。灌洗液細胞蠟塊技術(shù)用于肺結(jié)核診斷中，由于操作簡單在實驗室中廣泛開展。本研究中，灌洗液細胞涂片檢查最終確診肺結(jié)核60例，檢查準確度為79.38%（77/97），說明灌洗液細胞涂片用于肺結(jié)核診斷中具有一定價值，但是該檢查方法用于肺結(jié)核診斷中靈敏度和特異度不足，容易誤診或漏診。

灌洗液細胞蠟塊技術(shù)是一種新型的輔助診斷技術(shù)，采用離心固定切片的方式來聚集病原菌，病原菌的結(jié)構(gòu)更加清晰，使得組織的結(jié)構(gòu)與排列方式保持一致，避免細胞人為重疊，從而提高診斷準確性[9-10]。血性灌洗液細胞蠟塊技術(shù)能通過溶解紅細胞的方式清除對紅細胞造成的制片干擾，獲得的制片背景更加整潔、干凈，進而保證病原菌的完整性和核的特異性，有助于提升檢測的陽性檢出率。本研究中，灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術(shù)聯(lián)合檢查確診肺結(jié)核70例，檢查準確度為91.75%（89/97），由此可以看出灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片能提高肺結(jié)核檢查準確度。歐維正等[11]研究表明，運用細胞蠟塊制片技術(shù)對肺結(jié)核患者進行診斷時，有助于提高診斷準確性，且該方法是目前最為有效的檢測方法之一。細胞蠟塊制片重復(fù)性好，能提供更多相似于組織學(xué)和細胞的形態(tài)特點，且與灌洗液細胞涂片相比更加有效、準確。同時，對于細胞蠟塊制片技術(shù)難以取得組織標本和原發(fā)灶不明的患者，能進行免疫組織化學(xué)染色，對相應(yīng)的抗體進行標記，有助于提升細胞學(xué)診斷準確性。臨床上將灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結(jié)核患者中，能發(fā)揮不同檢查方法優(yōu)勢，彌補單一檢查存在的不足，提高臨床檢查陽性率[12]。本研究中，灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片聯(lián)合檢查在疑似肺結(jié)核患者中檢查準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預(yù)測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊聯(lián)合檢查（P<0.05），且聯(lián)合檢查的AUC值大于各單獨檢查。從本研究結(jié)果中可以看出，灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片二者聯(lián)合檢查用于肺結(jié)核患者中，能發(fā)揮不同檢查方法的優(yōu)勢，有助于提高診斷效能。

綜上所述，灌洗液細胞蠟塊技術(shù)和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結(jié)核患者中均具有較高的檢出率，且二者聯(lián)合檢查能提高診斷靈敏度與特異度，為臨床診療提供參考依據(jù)。

參考文獻

[1] 王靜.環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)在感染性疾病病原診斷中的應(yīng)用研究進展[J].國際兒科學(xué)雜志，2022，49（6）：381-384.

[2] 常鑫，袁穎，王明義.Th1/Th2與PCT檢測在感染性疾病診斷中的臨床應(yīng)用[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2020，32（4）：477- 480.

[3] 朱艷，周靈玲，藍俊偉，等.人巨細胞病毒DNA檢測在小兒人巨細胞病毒感染診斷中的應(yīng)用[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2020， 18（3）：460-462，466.

[4] 王傳，顧曉靜，史金英，等.不同量肺泡灌洗液聯(lián)合高通量測序在肺部感染性疾病中的價值[J].河北醫(yī)藥，2022，44（8）：1176-1179.

[5] KHEIRANDISH F，F(xiàn)ALLAHI S，MAHMOUDVAND H，et al.A loop-mediated isothermal amplification （LAMP）assay for detection of toxoplasma gondii infection in women with spontaneous abortion[J].Arch Microbiol，2021，203（2）：763-769.

[6] 孫麗芳，馬東禮，陳虹宇，等.A群鏈球菌抗原快速檢測法在兒童A群鏈球菌感染性疾病診斷中的應(yīng)用[J].中華實用兒科臨床雜志，2021，36（1）：46-49.

[7] ZHONG H，WU H M，YU Z K，et al.Clinical evaluation of the T-SPOT.TB test for detection of tuberculosis infection in northeastern Guangdong Province，China[J].J Int Med Res，2020，48（5）：300060520923534.

[8] 李知慧，吳祥兵.灌洗液結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及脫氧核糖核酸檢測在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值分析[J].中國基層醫(yī)藥，2020，27（12）：1477- 1481.

[9] 高亮，歐勤芳，鄭建，等.肺泡灌洗液Xpert在老年新發(fā)活動性肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用[J].中國老年學(xué)雜志，2020，40（22）：4768-4770.

[10] SOLOMON S S，MCFALL A M，LUCAS G M，et al.Reply to：High prevalence of hepatitis C infection among multidrug-resistant tuberculosis patients[J].J Hepatol，2020，72（5）：1029-1030.

[11] 歐維正，劉海蘭，雷毅娜，等.支氣管肺泡灌洗液涂片抗酸染色、L-J培養(yǎng)、TB-LAMP、XpertMTB/RIF檢測在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用比較[J].山東醫(yī)藥，2020，60（23）：57-60.

[12] 劉亞芹，陳煥民，陳鳴.LAMP技術(shù)檢測支氣管肺泡灌洗液 在疑似肺結(jié)核中的診斷價值[J].標記免疫分析與臨床，2020，27（6）：1037-1039.

（收稿日期：2023-10-09）