赤霉素和氯吡脲的體外細(xì)胞及致突變毒性研究

圖爾遜娜依·艾力,吳軍強(qiáng),雒怡倩,王瀟,楊潔,岳海濤

(新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,新疆 烏魯木齊 830046)

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(plant growth regulator, PGR)是人工合成的對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的化學(xué)物質(zhì),具有促進(jìn)坐果、增加產(chǎn)量、提高果實(shí)品質(zhì)、改變果蔬品相等重要作用[1],在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域具有巨大增產(chǎn)潛力和可觀的經(jīng)濟(jì)效益。截至2022年3月,我國(guó)共有有效期內(nèi)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑登記產(chǎn)品1 375個(gè),登記作物涉及紅棗、葡萄、油菜、番茄、小麥、水稻等70余種。與傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)技術(shù)相比,植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用具有毒性低、成本低、收效快、效益高等優(yōu)點(diǎn)[2]。氯吡脲和赤霉酸是2種在葡萄、紅棗、西瓜、獼猴桃等植物中廣泛使用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,通過(guò)調(diào)節(jié)作物內(nèi)各種內(nèi)源激素水平來(lái)促進(jìn)生長(zhǎng),或通過(guò)直接調(diào)節(jié)酶活性從而調(diào)控植株的生理生化過(guò)程來(lái)促進(jìn)細(xì)胞分裂、果實(shí)膨大,提高坐果率,改善品相。

赤霉素(gibberellin,GA,C19H22O6)是四環(huán)雙帖類(lèi)結(jié)構(gòu)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì),調(diào)控著植物許多重要生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程[3],赤霉素目前已在小麥、葡萄、黃瓜等40種農(nóng)作物登記使用,在果蔬種植環(huán)節(jié)中普遍用于膨大果實(shí)、促進(jìn)生長(zhǎng)等,市面上以赤霉素為主要成分的產(chǎn)品有200余種[4]。雖然國(guó)內(nèi)外針對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的最大殘留限量值都制定了嚴(yán)格的限制標(biāo)準(zhǔn),但我國(guó)將赤霉酸列為豁免物質(zhì)之一,而日本制定各類(lèi)果蔬中赤霉素最大殘留限量值范圍為0.05～2.00 mg·kg-1[5]。

氯吡脲(forchlorfenuron,CPPU,C12H10ClN3O)屬于苯脲類(lèi)細(xì)胞分裂素,具有促進(jìn)細(xì)胞分裂、增大細(xì)胞體積、提高光合作用效率等生理功能[6],從而可以起到促進(jìn)果實(shí)增產(chǎn)、提高品質(zhì)等作用,目前已登記的氯吡脲成分產(chǎn)品有34種,使用于西瓜、葡萄、黃瓜等10種作物,氯吡脲常見(jiàn)殘留限量是0.05～0.10 mg·kg-1[4]。

在我國(guó)赤霉素和氯吡脲等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑歸于農(nóng)藥類(lèi)進(jìn)行統(tǒng)一管理,由于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是一類(lèi)調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的激素類(lèi)物質(zhì),且在成熟的瓜果蔬菜中殘留量較低,在烹飪或加工過(guò)程中也會(huì)遭到不同程度的破壞,所以,其毒性一般定義為低毒或微毒。但是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑同其他合成農(nóng)藥一樣,盲目地使用會(huì)造成食品、環(huán)境中的高殘留,引起人畜的急、慢性中毒,導(dǎo)致疾病的發(fā)生[7]。根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道,GA引起腫瘤發(fā)育[8-9],降低肝臟的抗氧化防御功能,損傷其組織結(jié)構(gòu)和生化功能[10]。濫用氯吡脲等植物激素增加蔬果產(chǎn)量和美化蔬果外觀帶來(lái)的食品安全問(wèn)題逐漸受到了社會(huì)的關(guān)注[11]。有研究表明,氯吡脲對(duì)鵪鶉經(jīng)口急性毒性LD50>2 250 mg·kg-1,LC50>5 260 mg·kg-1;對(duì)魚(yú)類(lèi)、水蚤和羊角月牙藻有中等毒性;對(duì)無(wú)脊椎動(dòng)物影響較小。CPPU對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的增殖、遷移和管狀結(jié)構(gòu)的形成具有抑制作用[13]?，F(xiàn)有的赤霉素和氯吡脲體外細(xì)胞毒性進(jìn)而致突變毒性研究較少,大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示赤霉素和氯吡脲具有肝毒性[14-15],因此赤霉素和氯吡脲的體外安全性值得關(guān)注。

近年來(lái),隨著人們安全意識(shí)的提高,對(duì)赤霉素和氯吡脲是否存在潛在的危害成了消費(fèi)者關(guān)注話題,闡明其產(chǎn)生的毒性是否對(duì)人體健康造成危害是非常有必要的。本研究利用人正常肝細(xì)胞(WRL68)對(duì)赤霉素和氯吡脲在細(xì)胞水平的毒性做初步探究,通過(guò)小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變?cè)囼?yàn)、鼠傷寒沙門(mén)氏菌Ames試驗(yàn)對(duì)赤霉素和氯吡脲致突變性進(jìn)行評(píng)價(jià),以期能夠?yàn)槌嗝顾亍⒙冗岭宓戎参锷L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的規(guī)范使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 主要試劑

胎牛血清、馬血清:以色列生物科技公司;青霉素-鏈霉素雙抗、MEM培養(yǎng)基、磷酸緩沖鹽溶液(pH7.2)、0.25%胰蛋白酶、丙酮酸鈉:美國(guó)Hyclone公司;四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜、三氟胸苷、甘氨酸、次黃嘌呤、胸腺嘧啶脫氧核苷、氨甲喋呤、甲磺酸甲酯、輔酶II(NADP)、6-磷酸葡萄糖(G-6-P):美國(guó)Sigma公司;臺(tái)盼藍(lán)、氨芐青霉素、四環(huán)素、赤霉素、氯吡脲:生工生物工程(上海)股份有限公司;S9:美國(guó)MOLTOX公司;RPMI1640培養(yǎng)基:美國(guó) Gibco 公司;L-組氨酸、D-生物素、瓊脂粉、磷酸氫二鉀、磷酸氫銨鈉:上海源葉生物科技有限公司;氯化鈉、牛肉膏、葡萄糖、胰蛋白胨:北京化工有限公司。

1.1.2 主要儀器

試驗(yàn)所用儀器設(shè)備情況見(jiàn)表1。

表1 儀器與設(shè)備

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

人正常肝細(xì)胞(WRL68)由新疆大學(xué)生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供;小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司;鼠傷寒沙門(mén)氏菌購(gòu)自美國(guó)MOLTOX公司。

1.2.1 WRL68細(xì)胞培養(yǎng)

WRL68細(xì)胞培養(yǎng)于10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和100 U·mL-1鏈霉素的MEM培養(yǎng)基中,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%～80%后加入胰酶消化,消化后將細(xì)胞稀釋制成1×105個(gè)·mL-1的細(xì)胞懸液,150 μL·孔-1接種于96板中,待其貼壁后,棄上清,將GA和CPPU用培養(yǎng)基稀釋成不同濃度的GA(0.25 mg·mL-1,0.5 mg·mL-1,1 mg·mL-1,1.5 mg·mL-1,2 mg·mL-1,2.5 mg·mL-1,3 mg·mL-1,3.5 mg·mL-1,4 mg·mL-1,4.56 mg·mL-1)和CPPU(0.19 μg·mL-1、0.375 μg·mL-1、0.75 μg·mL-1、1.5 μg·mL-1、3 μg·mL-1、6.25 μg·mL-1,12.5 μg·mL-1,25 μg·mL-1,50 μg·mL-1,100 μg·mL-1),每孔加入150 μL進(jìn)行24 h染毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,棄去上清液,每孔加入20 μL MTT(終濃度為5 mg·mL-1)培養(yǎng)4 h,后加200 μL DMSO溶解結(jié)晶顆粒(另設(shè)6個(gè)空白孔),于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值。細(xì)胞存活率的計(jì)算參考侯志梅等[16]的方法。

1.2.2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)培養(yǎng)

在進(jìn)行細(xì)胞系培養(yǎng)時(shí),需要的培養(yǎng)液有RPMI-5、RPMI-10和RPMI-20。以上各培養(yǎng)液所用馬血清均經(jīng)56 ℃滅活,并在每毫升培養(yǎng)基中添加200 μg丙酮酸,和1%的青-鏈霉素。

THMG和THG的配制參考《GB 15193.20-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體外哺乳類(lèi)細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)(標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài):現(xiàn)行)》的標(biāo)準(zhǔn)。分別將THMG和THG配成100倍濃度母液,濾膜過(guò)濾除菌后分裝,-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)突變頻率測(cè)定

首先用RPMI-5調(diào)整細(xì)胞密度為 5×105個(gè)·mL-1,每組取20 mL加入50 mL塑料離心管中。按1%體積加入赤霉素和氯吡脲,另設(shè)溶劑對(duì)照(DMSO)、空白對(duì)照組,振搖處理3 h(振蕩頻率為70次·min-1)。處理結(jié)束后,離心(1 000 rpm,5 min),棄上清,用PBS洗滌細(xì)胞1次,重新懸浮于RPMI-10中,并調(diào)整細(xì)胞密度到2×105個(gè)·mL-1。

將處理后的L5178Y細(xì)胞,用RPMI-20梯度稀釋至8個(gè)·mL-1,每組25 mL(對(duì)照組為50 mL)。用八通道加樣槍以200 μL·孔-1接種1塊96孔培養(yǎng)板。置于5% CO2、37 ℃ 飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12 d,計(jì)數(shù)每塊培養(yǎng)板有集落生長(zhǎng)的孔數(shù),記為PE0。隨后將剩余的L5178Y細(xì)胞表達(dá)培養(yǎng)2 d。每天計(jì)數(shù)細(xì)胞密度,調(diào)整細(xì)胞密度到2×105個(gè)·mL-1,并計(jì)算每日細(xì)胞增長(zhǎng)率(DCG),據(jù)此求算兩天內(nèi)相對(duì)懸浮增長(zhǎng)率(RSG)。取一定量細(xì)胞梯度稀釋后接種96孔板,測(cè)定PE2。表達(dá)培養(yǎng)結(jié)束后,取適量細(xì)胞,用RPMI-20培養(yǎng)液調(diào)整密度至1×104個(gè)·mL-1,每組50 mL(陰性對(duì)照為100 mL),加入三氟胸苷(TFT),使其終濃度為3 μg·mL-1。以200 μL·孔-1(2 000個(gè)細(xì)胞/孔)接種2塊96孔培養(yǎng)板(對(duì)照接種4塊),置于5%CO2、37 ℃飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12 d,計(jì)數(shù)各培養(yǎng)板有集落生長(zhǎng)的孔數(shù)。平板接種效率和突變頻率、細(xì)胞毒性指標(biāo)和小集落百分?jǐn)?shù)(%SC)的計(jì)算參考《GB/T 15670.20-2017 農(nóng)藥登記毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法第20部分:體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變實(shí)驗(yàn)》[17]中的方法。

1.2.4 鼠傷寒沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)

所用培養(yǎng)基有頂層瓊脂培養(yǎng)基、Vogel-Bonner (V-B)培養(yǎng)基、底層瓊脂培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的配制參考何珍等[18]的方法。經(jīng)30 ℃培養(yǎng)后,鑒定合格的菌種放在加入1.5 mL的9%色譜級(jí)二甲基亞砜作為冷凍保護(hù)劑的超低溫(-80 ℃)冰箱中保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 赤霉素和氯吡脲對(duì)WRL68細(xì)胞增殖的影響

通過(guò)3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)法檢測(cè)GA和CPPU對(duì)WRL68細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果如圖1所示。利用不同濃度的GA(0.25 mg·mL-1,0.5 mg·mL-1,1 mg·mL-1,1.5 mg·mL-1,2 mg·mL-1,2.5 mg·mL-1,3 mg·mL-1,3.5 mg·mL-1,4 mg·mL-1,4.56 mg·mL-1)對(duì)WRL68細(xì)胞暴露24 h后,MTT結(jié)果顯示隨著赤霉素濃度逐漸增加WRL68細(xì)胞存活率呈下降趨勢(shì),存在明顯劑量依賴(lài)性。GA對(duì)WRL68細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度為1.377 mg·mL-1,赤霉素濃度大于3 mg·mL-1時(shí)明顯抑制了WRL68細(xì)胞增長(zhǎng)(圖1a)。

圖1 GA(a)和CPPU(b)對(duì)WRL68細(xì)胞增殖的影響

不同濃度的CPPU(0.19 μg·mL-1、0.375 μg·mL-1、0.75 μg·mL-1、1.5 μg·mL-1、3 μg·mL-1、6.25 μg·mL-1,12.5 μg·mL-1,25 μg·mL-1,50 μg·mL-1,100 μg·mL-1)對(duì)WRL68染毒24 h后,MTT結(jié)果顯示W(wǎng)RL68細(xì)胞存活率隨著濃度的升高有下降的趨勢(shì)。氯吡脲對(duì)WRL68細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度為57.72 μg·mL-1,濃度大于100 μg·mL-1時(shí)明顯抑制了WRL68細(xì)胞增長(zhǎng)(圖1b)。

根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)中得出的IC50結(jié)果,選取IC50上下兩個(gè)濃度進(jìn)行24 h染毒處理。隨機(jī)選取顯微鏡下不同視野拍照,觀察細(xì)胞形態(tài),將24孔板原有的培養(yǎng)基棄掉,加入100 μL·孔-10.5%臺(tái)盼藍(lán)染液,靜置5 min后,觀察細(xì)胞凋亡情況,結(jié)果如圖2所示。

圖2 GA和CPPU對(duì)WRL68細(xì)胞形態(tài)及凋亡的影響(200×)

高劑量組的受試物可使WRL68細(xì)胞的正常形態(tài)發(fā)生改變,細(xì)胞皺縮;染毒后細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組也明顯減少,在中劑量和低劑量組有不同程度的細(xì)胞凋亡和皺縮;高、中、低劑量組存活的細(xì)胞密度與藥物劑量呈相關(guān)性,隨著劑量越高細(xì)胞凋亡越嚴(yán)重。藥物對(duì)WRL68細(xì)胞產(chǎn)生毒性從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,使細(xì)胞皺縮,形態(tài)改變,甚至細(xì)胞數(shù)量減少,這與MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

2.2 赤霉素、氯吡脲對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變的影響

小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變?cè)囼?yàn)結(jié)果如表2和表3所示,因是短期試驗(yàn)所以需進(jìn)行活化系統(tǒng)(+S9)(表2)和非活化系統(tǒng)(-S9)(表3)兩種試驗(yàn)條件。

表2 TK基因突變測(cè)定(無(wú)活化系統(tǒng))

表3 TK基因突變測(cè)定(活化系統(tǒng))

結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著赤霉素、氯吡脲劑量增加,TK基因突變頻率增加,赤霉素、氯吡脲誘發(fā)的突變頻率與自發(fā)突變率相比未呈現(xiàn)2倍以上的倍數(shù)關(guān)系。在無(wú)活化系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)條件下,赤霉素1.6 mg·mL-1、1.3 mg·mL-1、1 mg·mL-1劑量組與自發(fā)突變率相比呈1.78倍、1.52倍、1.07倍關(guān)系;在活化系統(tǒng)中分別是1.4倍、1.36倍、1.19倍。氯吡脲100 μg·mL-1、50 μg·mL-1、25 μg·mL-1劑量組與自發(fā)突變率相比呈1.89倍、1.09倍、1.01倍關(guān)系;在活化系統(tǒng)中分別是1.50倍、1.38倍、1.14倍。這就說(shuō)明赤霉素、氯吡脲在設(shè)計(jì)的劑量范圍內(nèi)對(duì)L5178Y細(xì)胞TK基因無(wú)致突變毒性。

2.3 赤霉素、氯吡脲對(duì)細(xì)菌回復(fù)突變的影響

測(cè)試菌株的回變特性主要是檢驗(yàn)菌株的敏感性,操作步驟與正式實(shí)驗(yàn)相同,菌株生物學(xué)特性鑒定結(jié)果如表4所示,菌株生物學(xué)特性鑒定結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范要求。部分致突變物需要代謝活化后才能引起回復(fù)突變,故需加入經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的大鼠肝制備的S9 混合液。

表4 菌株回變特性鑒定結(jié)果

Ames試驗(yàn)結(jié)果如表5和表6所示。氯吡脲和赤霉素在測(cè)試范圍內(nèi),無(wú)論是否有代謝活化系統(tǒng)存在(S9),各菌株的平均回變菌落數(shù)均小于陰性對(duì)照組的2倍,說(shuō)明氯吡脲和赤霉素對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌無(wú)致突變性。這進(jìn)一步表明氯吡脲和赤霉素?zé)o致突變毒性。

表5 TA97a 菌株回復(fù)突變情況

表6 TA102 菌株回復(fù)突變情況

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

GA和CPPU是生物活性最強(qiáng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,在促進(jìn)果實(shí)無(wú)核方面效果顯著,同時(shí)具有促進(jìn)葡萄等果實(shí)膨大的作用[3,5]。在合理的劑量和使用頻次范圍內(nèi)使用GA和CPPU,可以促進(jìn)水果果實(shí)的膨大和無(wú)核化,可以有效提高果品的產(chǎn)量和質(zhì)量。然而,由于過(guò)量使用GA和CPPU,對(duì)果實(shí)的安全性帶來(lái)潛在的風(fēng)險(xiǎn)尚不明確。關(guān)于GA、CPPU的細(xì)胞毒性目前研究較少,現(xiàn)有的研究主要是CPPU對(duì)心肌細(xì)胞(H9c2)、人體靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)[13]的影響。肝細(xì)胞具有多種功能且代謝旺盛,對(duì)外源污染物反應(yīng)靈敏,離體培養(yǎng)的人肝細(xì)胞常用于毒理學(xué)、藥理學(xué)、生物化學(xué)及致癌作用等研究。

肝細(xì)胞的毒性一般從細(xì)胞活性、細(xì)胞形態(tài)等方面作為參考指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)[19]。因此,本研究以人肝細(xì)胞WRL68為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)分析WRL68細(xì)胞增殖來(lái)評(píng)價(jià)膨大劑毒性。細(xì)胞存活率為毒性指標(biāo),檢測(cè)GA、CPPU不同暴露濃度下對(duì)WRL68的細(xì)胞毒性。結(jié)果表明,該細(xì)胞的存活率隨著GA和CPPU暴露濃度的增大而下降,說(shuō)明WRL68細(xì)胞毒性與GA、CPPU的暴露濃度呈正相關(guān)。這一結(jié)果與郭毅煒等[20]研究斷乳至性成熟期間持續(xù)暴露赤霉素對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果相一致,即GA高劑量組中有明顯可見(jiàn)的核固縮和凋亡小體,推測(cè)膨大劑可能加速了細(xì)胞凋亡。小鼠毒性試驗(yàn)證明GA、CPPU對(duì)肝臟有一定的毒性,GA暴露導(dǎo)致小鼠肝臟脂變[8]。這也與本研究中GA和CPPU在劑量范圍內(nèi)不同程度抑制WRL68細(xì)胞增長(zhǎng)的結(jié)果一致。

小鼠淋巴瘤細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)(MLA)和細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)是遺傳毒性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)組合推薦方法之一,在藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)及其他領(lǐng)域經(jīng)常被作為評(píng)價(jià)致突變毒性及遺傳毒性的關(guān)鍵方法[21]。本研究在劑量范圍內(nèi)回變菌落數(shù)均未超過(guò)菌種本身自發(fā)回變落數(shù)的2倍;而陽(yáng)性組回變菌落數(shù)均大于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍,這就說(shuō)明GA和CPPU無(wú)致突變毒性。這一結(jié)果與林利美等[22]關(guān)于小鼠骨髓微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。這就表明膨大劑使用在合理范圍內(nèi)不存在致突變毒性。

目前,GA的遺傳毒性是存在爭(zhēng)議的。本研究結(jié)果表明赤霉素對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌和小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)在設(shè)計(jì)的劑量范圍內(nèi)不存在遺傳毒性。但商桑等[23]通過(guò)蠶豆根尖細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)證明在7.5 g·kg-1劑量下對(duì)植物細(xì)胞、動(dòng)物的體細(xì)胞與生殖細(xì)胞均具有遺傳毒性。這一結(jié)果與前期研究人員的研究結(jié)果出現(xiàn)偏差,可能的原因是所采用的遺傳毒性探究方法和使用劑量不同。因此,有關(guān)赤霉素和氯吡脲的毒性效應(yīng)評(píng)價(jià)還需更加全面的研究。

3.2 結(jié)論

本研究通過(guò)對(duì)兩種代表性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑赤霉素、氯吡脲對(duì)人肝細(xì)胞(WRL68)增殖、小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變以及鼠傷寒沙門(mén)氏菌回復(fù)突變的研究,得出不同濃度的赤霉素、氯吡脲暴露后均能不同程度的抑制WRL68細(xì)胞的存活,且細(xì)胞存活率隨著暴露濃度增大而下降;赤霉素、氯吡脲在劑量范圍內(nèi)不存在致突變毒性。該結(jié)果可為后續(xù)全面評(píng)估植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑使用帶來(lái)的潛在風(fēng)險(xiǎn)性提供參考,也為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上進(jìn)一步規(guī)范使用提供依據(jù)。