鳳眼果的生藥學研究

DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202306001

彭曉祺， 吳文如， 來慧麗， 等， 2024.

鳳眼果的生藥學研究 ［Ｊ］.

廣西植物， 44（6）： 1028-1041.

PENG XQ， WU WR， LAI HL， et al.， 2024.

Pharmacognostical study of Sterculia monosperma fruit ［J］.

Guihaia， 44（6）： 1028-1041.

摘" 要：" 鳳眼果具有溫胃、殺蟲等功效，其名稱和性狀易與蘋婆屬其他物種混淆，然而其相關研究基礎比較薄弱。該研究對鳳眼果性狀、微性狀、種子橫切面及粉末顯微特征進行觀察；利用雙向測序獲取鳳眼果DNA條形碼序列ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL，計算Kimura 2-Parameter（K2P）遺傳距離，建立鄰接系統(tǒng)進化樹并進行聚類分析。結果表明：（1）鳳眼果性狀特征為外被深紅色果皮，種子表面紅褐色或暗栗色，質硬，內含淺黃色肥厚胚乳2片。（2）微性狀特征為外種皮紅褐色，極薄，質脆；中種皮黑褐色，較厚，質硬；內種皮淺黃色，質軟。（3）顯微特征為外種皮石細胞結構和排列方式、中種皮柵狀細胞結構、內種皮細胞壁呈連珠狀增厚、草酸鈣簇晶。（4）基于ITS2序列可將鳳眼果與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分，matK序列可將假蘋婆與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分。該研究獲取的鳳眼果性狀、微性狀及顯微特征數(shù)據，結合ITS2條形碼序列可有效鑒別鳳眼果，為其資源開發(fā)及質量標準制定提供了科學依據。

關鍵詞： 鳳眼果， 性狀鑒別， 微性狀鑒別， 顯微鑒別， DNA條形碼

中圖分類號：" Q944

文獻標識碼：" A

文章編號：" 1000-3142（2024）06-1028-14

收稿日期：" 2023-11-15

接受日期： 2024-01-24

基金項目：" 中央本級重大增減支項目“名貴中藥資源可持續(xù)利用能力建設項目”（2060302）； 廣州中醫(yī)藥大學大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（202310572342）； 2020年度廣東省科技特派員項目（KTP20200137）。

第一作者： 彭曉祺（1998—），碩士研究生，主要從事中藥品種鑒定與質量標準研究，（E-mail）PengXQ1020@163.com。

*通信作者：" 吳文如，教授，碩士研究生導師，主要從事中藥品種鑒定與質量標準研究，（E-mail）wuwenru@gzucm.edu.cn。

Pharmacognostical study of Sterculia monosperma fruit

PENG Xiaoqi1， WU Wenru1*， LAI Huili2， XING Bingnan1， LU Yaru1， ZOU Heyuan1

（ 1. School of Pharmaceutical Sciences， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006，

China； 2. Guangdong Food and Drug Vocational College， Guangzhou 510006， China ）

Abstract：" Sterculia monosperma fruit is the dried and mature seed of Sterculia monosperma， which belongs to" genus Sterculia. In China， this plant is a widely distributed arbor with a long planting history in Lingnan area. It is mainly cultivated in Guangdong， Guangxi， Fujian， Yunnan and Taiwan of China; it is also distributed in India， Vietnam and Indonesia， mostly cultivated artificially. S. monosperma fruit has many functions like warming the stomach and killing pests， but its name and characteristics are easily confused with other plants of genus Sterculia. However， the relevant research foundation is relatively weak. Pharmacognostical study can provide reference for its resource development and quality standard formulation. This study identifies the morphological and microscopic characteristics of S. monosperma fruit， as well as the microscopic identification of seed cross-section and powder. The DNA barcode sequences ITS2， psbA-trnH， matK and rbcL of S. monosperma were obtained through bidirectional sequencing， Kimura 2-Parameter （K2P） genetic distance was calculated， and the neighbor joining tree was established for clustering analysis. The results were as follows： （1） The morphological characteristics of S. monosperma fruit included dark red fruit shell and reddish brown or dark chestnut surface. It was hard in texture， with two thick yellowish endosperms inside. （2） The micro-morphological characteristics was that the exotesta was reddish brown， extremely thin， and brittle in texture; the mesotesta was black brown， thick， and hard in texture; the endotesta coat was light yellow and soft in texture. （3） The microscopic characteristics included the structure and arrangement of the exotesta stone cell， the grid cell structure of the mesotesta， the bead thickening of the cell wall of the endotesta cells， and the calcium oxalate cluster crystals. （4） Based on the ITS2 sequence， S. monosperma fruit could be effectively distinguished from other plants in genus Sterculia， while the matK sequence could effectively distinguish S. lanceolata from other plants in genus Sterculia. This study obtained the data on the morphological characteristics， micro-morphological characteristics and microscopic characteristics of S. monosperma fruit. Combined with the ITS2 barcode sequence， S. monosperma fruit can be effectively identified， which provides a scientific reference for the development of its germplasm resources and the formulation of relevant quality standards.

Key words： Sterculia monosperma fruit， morphological identification， micro-morphological identification， microscopic identification， DNA barcode

鳳眼果為梧桐科（Sterculiaceae）蘋婆屬（Sterculia）植物蘋婆（Sterculia monosperma）的干燥成熟種子，別名為九層皮、蘋婆果、頻婆果、羅望子、羅晃子、七姐果、富貴子等（江蘇新醫(yī)學院編，1985）。鳳眼果始載于宋代范成大（1986）的《桂海虞衡志》中，記曰：“羅晃子，如橄欖，其皮七重?！薄吨腥A本草》第5卷（1998）將鳳眼果列入草藥品種，有溫胃，殺蟲的功效，主治翻胃吐食、蟲積腹痛、疝痛、小兒爛頭瘍等病癥?，F(xiàn)代研究表明，鳳眼果中含有大量抗氧化活性強的多酚類物質（Zhang et al.， 2018），具有抗氧化等藥理作用。鳳眼果體積較大，直徑為2.0～2.5 cm，每蓇葖內含1～5粒，種子可食部分占82%，營養(yǎng)豐富（王達明，2002）。

蘋婆是中國的嶺南地區(qū)分布較多、種植歷史較久的喬木，在廣東、廣西南部、福建東南部、云南南部、臺灣、廣州附近和珠江三角洲多有栽培；印度、越南、印度尼西亞也有分布，多為人工栽培（中國科學院中國植物志編委會，1984）。鳳眼果原植物蘋婆與同科屬的假蘋婆（S. lanceolata）、西蜀蘋婆（S. lanceaefolia）、膜萼蘋婆（S. hymenocalyx）等名稱相似，極易混淆，其中假蘋婆是蘋婆屬中分布最廣和數(shù)量最多的一種（蘇雨苗等，2019），其種子不能入藥。因此，需要一種更加客觀、準確的鑒定方法對傳統(tǒng)鑒定手段進行補充。

DNA條形碼分子鑒定法是利用基因組中一段公認的、相對較短的DNA序列來進行物種鑒定的一種分子生物學技術，是傳統(tǒng)形態(tài)鑒別方法的有效補充（陳士林等，2013）。其中植物類中藥材選用ITS2為主體序列，psbA-trnH為輔助序列（Chen et al.， 2010），符合中藥材鑒定簡單、精確的特點，有明確的判斷標準，能夠實現(xiàn)對中藥材及其基原物種的準確鑒定。目前，國家標準或文獻尚無鳳眼果生藥學特征的描述，亦無鳳眼果相關質量標準。此外，鳳眼果與蘋婆屬近緣種的親緣關系尚不明確，暫未見適用于鳳眼果分子鑒定的DNA條形碼相關報道，不利于實際鑒定工作開展和種質資源的開發(fā)利用。

鑒于此，本研究從生藥學的角度對鳳眼果的性狀、微性狀及組織顯微特征進行系統(tǒng)研究，采用顯微正常光和偏振光對其顯微鑒別特征進行觀察，以補充和完善鳳眼果性狀鑒別特征及顯微鑒別全息彩色影像數(shù)據，并基于4種通用DNA條形碼序列（ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL序列）對7種梧桐科蘋婆屬植物進行聚類分析，探討鳳眼果與蘋婆屬其他植物的親緣關系，篩選適用于鑒定鳳眼果基原物種的DNA條形碼，為建立和完善鳳眼果的質量標準，促進資源開發(fā)提供科學依據。

1" 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材和序列" 樣品分別來自廣東和廣西（表1），經廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定學教研室吳文如教授鑒定分別為梧桐科蘋婆屬植物蘋婆（S. monosperma）的干燥成熟種子和新鮮樹葉、梧桐科蘋婆屬假蘋婆（S. lanceolata）的新鮮樹葉。樣品存放于廣州中醫(yī)藥大學中藥材真?zhèn)舞b定及品質評價實驗室，4 ℃冰箱保存。

從GenBank數(shù)據庫下載蘋婆屬條形碼序列，共整理蘋婆與假蘋婆、短柄蘋婆、非洲麗蘋婆、家麻樹、膜萼蘋婆等易混淆品的92條有效條形碼序列（表2）。

1.1.2 試劑" 水合氯醛（分析純，上海麥克林生化科技股份有限公司）；稀甘油（分析純，天津市致遠化學試劑有限公司）；離心柱型植物基因組DNA提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］；6×DNA上樣緩沖液（北京索萊寶科技有限公司）；DNA分子量標準（100～2 000 bp）［生工生物工程（上海）股份有限公司］；瓊脂糖（北京蘭杰柯科技有限公司）；50×TAE電泳緩沖液（北京莊盟國際生物基因科技有限公司）；DNA Gel Stain（美國GlpBio公司）；Ex Taq（Premix）PCR體系［寶日醫(yī)生物技術（北京）有限公司］；引物由北京六合華大基因科技有限公司合成。

1.1.3儀器" S120佳能數(shù)碼相機（日本Canon公司）；CryoStar NX50冷凍切片機（美國Thermo Scientific公司）；SZ680連續(xù)變倍體視顯微鏡（重慶奧特光學儀器有限責任公司）；OPTEC BK5000生物顯微鏡（重慶奧特光學儀器有限責任公司）；OPTPro3數(shù)碼攝像系統(tǒng)（重慶奧特光學儀器有限責任公司）；XS125A電子分析天平［普利賽斯國際貿易（上海）有限公司］；HH-24數(shù)顯恒溫水浴鍋 ［歐萊德科學儀器（北京）有限公司］；1-14臺式高速離心機（德國Sigma Zentrifugen公司）；RePure-B梯度PCR儀（上海創(chuàng)萌生物科技有限公司）；JS-2012凝膠成像儀（上海培清科技有限公司）；Power Pac Basic水平電泳儀（美國Bio-Rad公司）；D1008E掌上離心機（美國Scilogex公司）；VORTEX 1渦旋振蕩器 ［艾卡（廣州）儀器設備有限公司］。

1.2 方法

1.2.1 性狀鑒別" 取鳳眼果樣品，從形狀、大小、不同部位顏色、表面特征、質地、氣味等方面對其種皮和胚乳進行系統(tǒng)觀察，利用高清數(shù)碼相機記錄影像數(shù)據。將獲得的照片在Adobe Photoshop 2022軟件上作進一步的放大、摳圖、拼接等處理，獲取全息彩色影像數(shù)據。

1.2.2 微性狀鑒別" 取鳳眼果樣品，置于體視顯微鏡下，調節(jié)光源的亮度、粗準焦螺旋直至畫面清晰，觀察記錄鳳眼果的種皮結構以及每層種皮的微性狀特征，獲取全息彩色影像數(shù)據。

1.2.3 顯微鑒別

1.2.3.1 種子橫切面顯微鑒別" 取鳳眼果樣品，用冷凍切片機切取種皮橫切面，進行水合氯醛透化制片，在生物顯微鏡下觀察拍照，獲取全息彩色影像數(shù)據。

1.2.3.2 粉末顯微鑒別" 將適量鳳眼果樣品充分研磨粉碎，過60目篩，取少許粉末，進行水合氯醛透化制片，置于生物顯微鏡中，在正常光明場和偏振光暗場下對比觀察，采用大圖影像拼接結合實時景深擴展成像技術進行拍攝，獲取全息彩色影像數(shù)據。

1.2.4 DNA提取、PCR擴增和測序" 取表1中的4個樣品各約100 mg，加液氮在研缽中充分研磨，置

于1.5 mL離心管中，用離心柱型植物基因組DNA提取試劑盒進行總DNA的提取，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL序列擴增所用引物及PCR反應條件見表3。PCR的反應體系為50 μL擴增反應體系：Ex Taq （Premix）25 μL，正反向引物各1 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 21 μL。擴增程序：95 ℃預變性4 min，94 ℃變性30 s，退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min（退火溫度見表3）?？瞻讓φ找詃dH2O為模板。擴增產物在凝膠成像儀中觀察并拍攝照片，將電泳條帶單一、清晰、明亮的 PCR 擴增產物送至北京六合華大基因科技有限公司廣州測序部進行雙向測序。

1.2.5 序列分析及物種鑒定" 測序峰圖采用SeqMan軟件進行拼接校對，去除引物區(qū)和低質量區(qū)，剪切獲得完整序列，結合GenBank數(shù)據庫中獲得的序列，采用MEGA 11軟件進行ClustalW多序列比對，分析種內和種間遺傳變異，計算Kimura 2-Parameter （K2P）遺傳距離，建立鄰接系統(tǒng)進化樹（neighbor joining tree， NJ樹），同時以Bootstrap自展支持率（1 000次）重復檢驗各分支的支持率。

2" 結果與分析

2.1 性狀鑒別

鳳眼果外被深紅色果皮（圖1：A、B）；種子呈橢圓形或紡錘形，長2～3 cm，直徑1～2 cm，其先端鈍圓，基部略尖（圖1：E）；具黃白色的類圓形種臍（圖1：C）；表面紅褐色或暗栗色，微具光澤，有不規(guī)則干縮皺紋，質硬（圖1：D）。將鳳眼果橫剖后可見胚乳肥厚，2片，淺黃色，廣卵形，表面帶有黏液（圖1：F）。氣微，味淡。

2.2 微性狀鑒別

鳳眼果種皮可分為外種皮（圖2：A）、中種皮（圖2：B）和內種皮（圖2：C）3層（圖2）：外種皮紅褐色，極薄，質脆，易脫落，表面有不規(guī)則干縮皺紋，微具光澤（圖3：A、B）；中種皮黑褐色，較厚，質硬，表面有細密的不規(guī)則皺紋，不具光澤（圖3：C、D）；內種皮淺黃色，質軟，與中種皮易剝離，表面有一層透明薄膜（圖3：E、F）。

2.3 顯微鑒別

2.3.1 種子橫切面顯微鑒別" 獲取鳳眼果種子橫切面顯微圖（圖4：A、B）鳳眼果外種皮石細胞一列，類方形，排列緊密，外壁極厚，胞腔偏于內側，內含棕色物，胞腔直徑20～30 μm；下皮細胞2～3列，黃棕色，排列不規(guī)則（圖4：C）；外種皮薄壁細胞數(shù)列，淡黃色，類圓形、類方形或不規(guī)則多角形，壁加厚不明顯，胞腔較大，有的內含棕色物，橫向長50～60 μm，徑向長30～40 μm（圖4：D）；中種皮柵狀細胞層由2列細胞鑲嵌組成，淺黃色，胞腔含棕色物，徑向長280～300 μm（圖4：E）；色素層細胞數(shù)列，排列不規(guī)則，細胞形狀不規(guī)則，黃棕色，壁極厚（圖4：F）；內種皮細胞類方形或多邊形，壁呈連珠狀增厚，徑向長10～15 μm（圖4：G）；內種皮薄壁細胞數(shù)列，淡黃色，類方形、不規(guī)則多角形、類圓形，胞腔較大，偶見棕色物，橫向長60～80 μm，徑向長40～50 μm（圖4：H）。

2.3.2 粉末顯微鑒別" 鳳眼果粉末呈棕褐色。正常光明場下，中種皮柵狀細胞表面觀淡黃色，壁增厚，呈多角形，胞腔較小，類圓形或扁圓形（圖5：A）；側面觀淡黃色，呈長柱形，柵欄狀，長280～300 μm，胞腔內含黃棕色物（圖5：B）。外種皮石細胞表面觀紡錘形、長方形或多角形，胞腔含棕色物，直徑12～18 μm，壁不甚厚，排列緊密（圖5：D）。草酸鈣簇晶直徑30～40 μm（圖5：E）。內種皮細胞類方形或多邊形，壁呈連珠狀增厚，直徑10～15 μm（圖5：G）。纖維細長，梭形，直徑約20 μm，長約400 μm，常交錯、鑲嵌狀排列（圖5：H）。非腺毛單細胞，長梭形，基部稍膨大，常破碎，完整者長約150 μm，胞腔含棕色物（圖5：J）。螺紋導管微木化，直徑12～16 μm，長140～160 μm（圖5：K）。梯紋導管微木化，直徑12～15 μm，長150～160 μm（圖5：L）。

偏振光暗場下，中種皮柵狀細胞側面觀、草酸鈣簇晶和纖維在暗視野中形態(tài)特征清晰，具有彩色光澤（圖5：C、F、I）。

2.4 Barcoding gap檢驗

Barcoding gap是指物種間DNA條形碼序列的種間遺傳變異明顯大于種內變異，并在兩者之間形成一個明顯的間隔區(qū)（Meyer amp; Paulay， 2005）。ITS2序列種內平均遺傳距離為0.012，種間平均遺傳距離為0.037；psbA-trnH序列種內平均遺傳距離為0.138，種間平均遺傳距離為0.066；rbcL序列種內平均遺傳距離為0.001，種間平均遺傳距離為0.015。由圖6可知，這3個條形碼序列種內和種間變異均有重疊，沒有明顯的Barcoding gap，不適合用于鳳眼果與易混淆品的鑒別。而matK序列種內平均遺傳距離為0.000 3，種間平均遺傳距離為0.528，種內遺傳距離明顯小于種間遺傳距離，種間和種內變異沒有重疊，明顯分為兩大部分，有顯著的Barcoding gap，有利于鳳眼果與易混淆品的鑒別。計算4種序列的Kimura 2-Parameter （K2P）遺傳距離（表4）。

2.5 序列信息分析

表1中4個樣品的4個條形碼序列擴增成功率均為100%，2個樣品的ITS2序列測序失敗，測序成功率為50%，psbA-trnH、matK和rbcL序列的測序成功率均為100%。將最終得到的14條序列， 與從GenBank數(shù)據庫下載的92條序列分組進

行多序列比對分析，獲得序列特征信息（表5）。4組序列比對后的長度為248～745 bp，由高到低依次為matK、rbcL、psbA-trnH、ITS2，GC平均量為25.8%～74.4%，由高到低依次為ITS2、rbcL、matK、psbA-trnH。序列變異位點比例由高到低依次為matK、psbA-trnH、ITS2、rbcL。變異位點和簡約信息位點含量分別為9.0%～57.4%和0.4%～57.3%，其中matK序列長度最長且變異和信息位點含量均為最高。

2.6 聚類分析

運用MEGA 11構建NJ系統(tǒng)發(fā)育樹，以Bootstrap自展支持率（1 000次）重復檢驗各分支的支持率，枝上數(shù)值僅顯示自展支持率≥50%。基于ITS2序列構建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7：A）中，PP2樣品與蘋婆序列單獨聚為一個分支，可以與蘋婆屬其他植物區(qū)分，JPP1樣品與蘋婆屬其他植物聚為一個分支，無法區(qū)分；基于psbA-trnH序列構建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7：B）中，4個樣品單獨聚為一個分支，不能與蘋婆屬其他植物區(qū)分；基于matK序列構建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7：C）中，JPP1樣品與假蘋婆序列單獨聚為一個小分支，蘋婆屬其他植物聚為一個分支；基于rbcL序列構建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7：D）中，4個樣品單獨聚為一個分支，不能與蘋婆屬其他植物區(qū)分。本研究結果表明，ITS2序列可將鳳眼果與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分；matK序列可將假蘋婆與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分；而psbA-trnH和rbcL序列中，鳳眼果與假蘋婆樣品均聚為一個分支，無法與蘋婆屬其他植物區(qū)分開。

3" 討論與結論

3.1 鳳眼果生藥學研究

性狀和顯微鑒別方法在果實種子類中藥的鑒別中具有重要意義。梁之桃等（2021）將高清數(shù)碼成像、大圖影像拼接和實時景深擴展成像等技術應用于中藥鑒定，將中藥的性狀顯微特征數(shù)碼圖像化，提升中藥鑒別的準確性，有助于保障中藥質量。本研究基于傳統(tǒng)鑒別方法，結合以上技術，獲取了鳳眼果性狀、微性狀及顯微鑒別特征的全息彩色影像數(shù)據，總結出具有鑒別意義的鑒別特征：以鳳眼果表面紅褐色或暗栗色，內含淺黃色肥厚胚乳2片為性狀鑒別要點；以外種皮紅褐色質脆、中種皮黑褐色質硬、內種皮淺黃色質軟為微性狀鑒別要點。確定了鳳眼果粉末的顯微鑒別特征，即外種皮石細胞、中種皮柵狀細胞、內種皮細胞、草酸鈣簇晶，可作為鳳眼果粉末鑒別的重要依據。其中，中種皮柵狀細胞和草酸鈣簇晶在偏振光下具有彩色光澤，利用偏光鏡可實現(xiàn)快速鑒別。

前人對于鳳眼果原植物蘋婆的生藥學研究主要針對其非藥用部位，蘇雨苗等（2019）對蘋婆和假蘋婆2種植物的莖、葉進行原植物外觀形態(tài)和顯微特征的比較， 發(fā)現(xiàn)它們在葉、花、莖橫切面、葉表皮特征以及葉粉末上均有較大的不同之處。本研究對象鳳眼果為蘋婆種子，對其進行系統(tǒng)生藥學研究，獲取性狀、微性狀及顯微鑒別特征，與前人研究結果互為補充。在進行種子橫切面顯微鑒別時，由于鳳眼果體積比較大，其種皮層數(shù)較多且結構松散易分離，使用傳統(tǒng)的徒手切片和石蠟切片法難以得到完整的、較薄的標本。因此本研究采用冷凍切片法，樣品進行固定脫水后，固定于包埋劑在冰凍切片機進行切片。鳳眼果新鮮樣品可以直接取材后，迅速置于包埋托上，涂包埋劑后進行速凍，立即切片，可得到約5 μm厚度的完整種子橫切面。此方法避免了石蠟包埋浸蠟不完全導致樣品破碎的缺點，簡化了切片的流程，從而獲得完整清晰的種子橫切面微性狀和顯微特征圖片，觀察到各層種皮的完整結構。同時，此實驗方法也可用于其他體積較大的果實種子類中藥的顯微觀察。

鳳眼果別名“九層皮”，該名最早見于明代王濟（1936）的《君子堂日詢手鏡》，書中寫道：又有

名九層皮者，脫至九層方見肉，熟而食之，其味類栗。而宋代范成大（1986）則認為鳳眼果種皮有七層：“羅晃子，如橄欖，其皮七重?！笨梢娗叭穗m然觀察到鳳眼果種皮有多層，但歷代本草中關于鳳眼果性狀特征的記載并不統(tǒng)一，使后人在性狀鑒定方面存在一定困惑。由于鳳眼果種皮質硬、難以分離，因此至今其種皮層數(shù)一直未得到驗證。本文對鳳眼果進行系統(tǒng)生藥學研究，采用冷凍切片技術，結合生物顯微鏡觀察到完整的種皮結構，發(fā)現(xiàn)鳳眼果種皮實際可分為七層，為探討本草記載中稱鳳眼果為“九層皮”的科學性提供參考。

3.2 鳳眼果的DNA條形碼分析

DNA條形碼鑒定方法與其他傳統(tǒng)鑒定方法相比具有準確、客觀、通用等優(yōu)點，已應用于多種中藥材的鑒定，包括系統(tǒng)進化（任瑤瑤等，2023）、分類鑒定（涂國章和張顯強，2023）、親緣關系（烏仁吉如拉等，2022）和遺傳多樣性（尹光耀等，2023）等方面。由于同一株植物不同取樣部位的DNA條形碼基因并無差異，因此DNA條形碼研究使取樣難度大大降低，即使同一株植物未能采集不同部位的樣品（陳文強等，2021；蔡一鳴等，2022），仍能保證實驗的科學性。本研究對7種蘋婆屬植物的ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL序列進行了比較分析，并在此基礎上對7種植物進行了聚類分析，探討了7種植物的親緣關系。本研究結果表明，單一使用ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL序列并不能將

7種植物全部鑒別出來，但能鑒別出部分植物。ITS2序列可將鳳眼果與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分，matK序列可將假蘋婆與蘋婆屬其他植物有效區(qū)分，而psbA-trnH和rbcL序列中，鳳眼果與假蘋婆樣品均聚為一個分支，無法與蘋婆屬其他植物區(qū)分開。ITS2序列作為物種鑒定和系統(tǒng)發(fā)育研究中一種常用的標記物（Chen et al.， 2010），該序列較短，在物種水平的變異較快，有更多的突變位點用于區(qū)分不同物種。綜合研究結果，建議把ITS2序列作為鳳眼果最適的DNA條形碼用于分子鑒定。

本文通過對鳳眼果進行系統(tǒng)的生藥學研究，總結出鳳眼果的性狀、顯微鑒別要點，篩選出ITS2序列為鳳眼果分子鑒定的最佳DNA條形碼，為建立和完善鳳眼果的質量標準及促進資源開發(fā)提供了科學依據。

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（責任編輯" 李" 莉" 王登惠）